专利名称：葡萄内酯的制备工艺及其在质量控制过程中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及葡萄内酯的制备工艺及其在质量控制过程中的应用。其应用范围可作为国家标准品/种植期 间的质量监控/药材、饮片的质量监控/中成药质量监控。
背景技术：
枳实、枳壳、青皮、陈皮、柚皮、绿衣枳壳是中医临床上常用的中药品种，其功效为行气、破气、宽 中、理气、化痰、消积等；亦是中药材种植、饮片加工、中成药生产中较为常用的品种。其主要成分为黄 酮苷类、多甲氧基黄酮类、香豆素类等成分。现代药理实验证实其在促进胃肠动力、治疗胃及十二指肠溃 疡等方面有较好的疗效。葡萄内酯(aur即tene)是一种从上述药材中提取分离出来无色针晶化合物,mp52 54°C;(正己垸/丙酮)，紫外灯(365 nm)下显蓝色荧光。化学分子式C,9H2203;分子量298.38。结构式
如卜
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葡萄内酯具有能抑制乙酰胆碱酯酶(Ache)的活性(INHIBITION OF ACETYLCHOLINESTERASE ACTIVITY BY ESSENTIAL OIL FROM CITRUS PARADISI. M. MIYAZAWA et al., NuturalProduct Letters, 2001, 15(3):205-210)的作用， 能促使乙酰胆碱释放，产生胃肠道动力的作用，增强胃肠平滑肌收縮力，协调胃肠运动，促进胃肠排空和 转运，从而达到治疗的效果；体内乙酰胆碱水平的降低可能是老年痴呆(AD)发生的机制之一，刺激乙酰 胆碱系统可能改善病人的认知、学习和记忆。抗胆碱酯酶药物用于治疗AD病人取得了良好的疗效。葡萄 内酯能够抑制胆碱脂酶，具有分子量小，脂溶性强，易透过血脑屏障，这为治疗阿尔茨海默病带来了新的 希望。随着对上述药材的种植、收购、饮片加工、中成药的生产过程的质量控制以及相关新药的研发的需 要，市场上迫切需要葡萄内酯含量大于98%的对照品。鉴于此，我们在对葡萄内酯提取分离纯化试验的基 础上，摸索了一套完整的、成熟的、简捷的技术路线从枳实、枳壳、青皮、陈皮、柚皮、绿衣枳壳中提取 葡萄内酯，使其纯度达到国家标准品的要求，其含量大于9战，从而填补了该产品标准品方面的空白，同 时又能为企业今后种植、收购、生产含有葡萄内酯成分的药品提供一个很好的质量评价指标，并为进一步 开发相关各类药物提供帮助。
发明内容
本发明是通过以下步骤来实现的。
1、 可作为原料的药材为枳实、枳壳、青皮、陈皮、柚皮、绿衣枳壳。
2、 工艺步骤
(1) 药材粉碎枳实/枳壳/青皮/陈皮/柚皮/绿衣枳壳粉碎成10 40目，最佳为15 30目。
(2) 醇提粉碎后的药材以40 95%乙醇作溶剂用渗漉法/回流提取法/浸渍法进行提取，收集提取液 后，用减压/薄膜浓縮使浸膏无醇味。
(3) 萃取醇提后的浸膏用水溶解制成水溶液后用低极性有机溶剂萃取，萃取次数2-7次。
(4) 层析回收石油醚后，干燥，上硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯混合液进行洗脱、浓縮、粗结晶、 反复重结晶得到高纯度(含量大于98W葡萄内酯结晶体。
醇提工艺的最佳浓度为70 95%。
萃取用低极性有机溶剂为60 9(TC石油醚，乙酸乙酯，最佳萃取次数5-7次。 层析硅胶用100 300目的硅胶。
石油醚-乙酸乙酯混合液进行洗脱，洗脱比例从10: l梯度到l: 1。 重结晶所用试剂为石油醚/丙酮，比例2 9: 1 10。
3、其应用范围可作为国家标准品/种植期间的质量监控/药材、饮片的质量监控/中成药质量监控。为进一 步开发葡萄内酯纯化合物产品提供了良好的基础工作。
该发明与现有技术相比，具有工艺流程简单、实用、成本低、纯度高、得率高，适用于工业化生产， 可以为种植、加工、生产企业提供一种可靠的质量检测手段和检测用参照物(标准品)。
具体实施例方式
利用40 95%乙醇从枳实粗粉采用回流提取法进行提取，收集提取液后，用减压浓縮使浸膏无醇味； 醇提后的浸膏用水溶解制成水溶液后用石油醚(60 90°C) 1: l萃取，萃取次数2-7次；回收石油醚后， 干燥，上硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯混合液进行洗脱(洗脱比例从10: l梯度到l: 1)、浓縮、粗结晶、 反复重结晶(重结晶所用试剂为石油醚/丙酮，比例2 9: 1 10)得到高纯度(含量大于98%)葡萄内酯
结晶体。
权利要求
1、一种葡萄内酯的制备工艺及其在质量控制过程中的应用，其特征在于(1)原料以枳实、枳壳、青皮、陈皮、柚皮、绿衣枳壳为原料和应用对象。(2)醇提工艺过程中以枳实/枳壳/青皮/陈皮/柚皮/绿衣枳壳粉碎成粗粉，以40～95％乙醇作溶剂用渗漉法/回流提取法/浸渍法进行提取，收集提取液后浓缩。(3)萃取醇提后的浸膏用有机溶剂萃取。(4)层析回收石油醚后，干燥，上硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯混合液进行洗脱、浓缩、粗结晶、反复重结晶得到高纯度葡萄内酯结晶体。(5)其应用范围可作为国家标准品/种植期间的质量监控/药材、饮片的质量监控/中成药质量监控。
2、 根据权利要求1所述葡萄内酯的制备工艺及其在质量控制过程中的应用，其特征为醇提步骤系用渗漉法/冋流提取法/浸渍法中的一种，醇提工艺的最佳浓度为70 95%。
3、 根据权利要求l所述葡萄内酯的制备工艺及其在质量控制过程中的应用，其特征为萃取步骤系用60 9(TC石油醚萃取，或用乙酸乙酯萃取，萃取次数2-7次。
4、 根据权利要求1所述葡萄内酯的制备工艺及其在质量控制过程中的应用，其特征为层析步骤系用100 300目的硅胶。
5、 根据权利要求l所述葡萄内酯的制备工艺及其在质量控制过程中的应用，其特征为层析步骤系石油醚-乙酸乙酯混合液进行洗脱，洗脱比例从10: l梯度到l: 1。
6、 根据权利要求1所述葡萄内酯的制备工艺及其在质量控制过程中的应用，重结晶所用试剂为石油醚/丙 酮，比例2 9: 1 10。
全文摘要
本发明公开了一种葡萄内酯的制备工艺及其在质量控制过程中的应用。其特点是从枳实、枳壳、青皮、陈皮、柚皮、绿衣枳壳中经乙醇提取、石油醚萃取、硅胶柱分离、洗脱、浓缩、粗结晶、反复重结晶得到高纯度葡萄内酯结晶体。该技术产品可应用于国家标准品、种植期间的质量监控、药材、饮片的质量监控、中成药质量监控等多领域。为产品安全有效、质量可控提供可靠保证，并为进一步开发相关各类药物提供帮助。
文档编号C07D311/00GK101463023SQ20071030551
公开日2009年6月24日 申请日期2007年12月22日 优先权日2007年12月22日
发明者严志宏, 磊 介, 余宝金, 刘建群, 张普照, 欢 徐, 明 杨, 杨世林, 杨武亮, 欧阳胜, 王少军, 罗小泉, 蒋以号, 陈海芳, 龚千锋 申请人:江西中医学院