RNAi介导的脾酪氨酸激酶相关炎性病症的抑制的制作方法

专利名称：：RNAi介导的脾酪氨酸激酶相关炎性病症的抑制的制作方法
技术领域：
：本发明涉及干扰RNA组合物的领域，所述干扰RNA组合物用于沉默脾酪氨酸激酶(Syk)和用于治疗Syk相关炎性病症(Syk-relatedinflammatorycondition)。所述病症例如包括变应性结膜炎、眼部炎症(ocularinflammation)、皮炎、鼻炎、津喘、变态反应或肥大细胞病。
背景技术：
：变应性结膜炎、眼部炎症、皮炎、鼻炎、哮喘、变态反应和肥大细胞病历史上是以下述方法治疗口服、鼻内或局部施用抗组胺剂，或者口服或鼻内施用类固醇，或者在变态反应情况下注射变应原治疗。全身疗法通常需要施用更高浓度的药物化合物，以提供到达所需治疗位点的有效浓度。抗组胺类化合物已知具有中枢神经系统的活性；困倦和粘膜干燥通常是抗组胺剂使用的副作用。通过免疫受体例如IgE受体(FcsRI)的信号传导包括募集和激活信号传导级联的多个组分，包括非受体酪氨酸激酶，S沐。Syk激活导致PLCY和PI3K途径的激活并且最终导致肥大细胞脱颗粒作用和激活。靶向SykmRNA会降低Syk蛋白水平并且中断FcsRI途径。这种作用会千扰IgE介导的肥大细胞脱颗粒作用并且释放组胺和其他的促炎介质。在气道内使用气溶胶化反义Syk激酶来抑制过敏性炎症由Stenton,G.R.等报道(J/mmw朋/.169:1028-1036(2002))。通过在支气管上皮细胞系HS-24中和卯清蛋白(OA)诱导哮喘的大鼠模型中的短千扰RNA的方法来抑制Syk表达，据报道其抑制了所诱导的炎性应答的标志的表达(在国际专利申请第WO2005007623号中公布)。使用靶向FCsRlA的短发夹RNA抑制包括在IgE产生中的基因表达，和治疗IgE介导的疾病例如哮喘和过敏性鼻炎在公布的国际专利申请第WO2005085443号中才艮道。这些文献中没有一个公开了本发明的干扰RNA。22219v.l45263/P022WO2关于靶向Syk酪氨酸激酶需要额外试剂和治疗方法，以此阻断内源性肥大细胞脱颗粒作用，并且释放组胺和其他的促炎介质而避免全身性抗组胺剂治疗的副作用。本发明的实施方式解决了本领域对这种试剂和治疗方法的需求。
发明内容通过提供强有力的和高效的治疗、预防或介入Syk相关炎性病症，本发明的实施方式克服了现有技术的这些和其他缺点。在一方面，本发明的的患者，所述方法是通过施用沉默SykmRNA表达的干扰RNA，因而干扰PLCy和PI3K的信号传导途径、并且预防与肥大细胞脱颗粒作用相关的级联事件，而且在Syk相关炎性病症中释放组胺和其他的促炎介质。本发明是直接关于靶向SykmRNA并且因此千扰SykmRNA表达的干扰RNA。本发明的干扰RNA用于治疗患有Syk相关炎性病症或具有形成Syk相关炎性病症的危险的患者。本发明的一个实施方式是一种在受治疗者中弱化SykmRNA表达的方法，所述方法包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的千扰RNA、以及药学上可"^妄受的载体。SykmRNA表达由此而弱化。本发明的另一个实施方式是一种在需要对其治疗的受治疗者中治疗Syk相关炎性病症的方法。所述方法包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA、以及药学上可接受的载体。Syk相关炎性病症由此而治疗。在一个实施方式中受治疗者是人并且所述人患有Syk相关炎性病症以及，在另一个实施方式中，受治疗者是人并且所述人具有形成Syk相关炎性病症的危险。对于上述引用的实施方式，所述的干扰RNA包括一个至少13个连续核香酸的区域，所述13个连续核苷酸与mRNA3，端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性，或至少90%的序列同一性，所述mRNA相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13—40和SEQIDNO:44—47中4壬一个。上述引用方法的另外的实施方式中，所述组合物进一步包括具有19至49个核香酸长度以及包括至少13个连续核苷酸的区域的第二种干扰RNA，所述13个连续核苷酸具有与第二种mRNA3'端次末端的13个核苷酸至少90%的序列互补性，或至少90%的序列同一性，所述第二种mRNA相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一个。在本发明的另一个实施方式中，提供一种在受治疗者中弱化SykmRNA表达的方法，所述方法包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA、以及药学上可接受的载体，并且所述干扰RNA包括有义核苷酸链，反义核苷酸链，和具有至少是近乎完全的连续互补性(contiguouscomplementarity)的至少19个核苷酸的区域，其中所述反义链在生理条件下与mRNA的一部分杂交，所述mRNA与SEQIDNO:1相应，包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸。所述SykmRNA的表达由此而弱化。在另一个实施方式中，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA，其中所述反义链在生理条件下与mRNA的一部分杂交，所述mRNA与SEQIDNO:l相应，包括第1007、1698或1769位核苷酸。在一个实施方式中，所述反义链与mRNA的一部分杂交，所述mRNA与SEQIDNO:1相应，以第1007、1698或1769位核苷酸起始，并且所述反义链具有19或20个核普酸长度。本发明的一个实施方式是在需要对其治疗的受治疗者中治疗Syk相关炎性病症的方法，所述方法包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA、以及药学上可接受的载体，所述干扰RNA包括有义核苷酸链，反义核苷酸链，和具有至少是近乎完全的连续互补性的至少19个核苷酸的区域；其中所述反义链在生理条件下与mRNA的一部分杂交，所述mRNA与SEQIDNO:1相应，包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸。所述Syk相关炎性病症由此而治疗。在另一个实施方式中，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA,其中所述反义链在生理条件下与mRNA的一部分杂交，所述mRNA与SEQIDNO:l相应，包括第1007、1698或1769位核苷酸。在一个实施方式中，所述反义链与mRNA的一部分杂交，所述mRNA与SEQTDNO:1相应，以第1007、1698或1769位核苷酸起始，并且所述反义链具有19或20个核香酸长度。具有19至49个核苷酸长度的第二种干扰RNA也能^皮施用到受治疗者；所述第二种干扰RNA包括有义核香酸链，反义核普酸链，和具有至少是近乎完全的连续互补性的至少19个核苷酸的区域，其中所述第二种干扰RNA的反义链在生理条件下与mRNA的第二个部分杂交，所述mRNA与SEQIDNO:1相应，包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸。具有19至49个核香酸长度的第二种干扰RNA能施用到受治疗者，其中所述反义链在生理条件下与mRNA的一部分杂交，所述mRNA与SEQIDNO:1相应，包括第1007、1698或1769位核苷酸。在一个实施方式中，所述反义链与mRNA的一部分杂交，所述mRNA与SEQIDNO:1相应，以第1007、1698或1769位核苷酸起始，并且所述反义链具有19或20个核香酸长度。本发明的另一个实施方式是弱化受治疗者的SykmRNA表达的方法，所述方法包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的单链干扰RNA、以及药学上可接受的载体，其中所述单链千扰RNA在生理条件下与mRNA的一部分杂交，所述mRNA与SEQIDNO:1相应，包括上述鉴定的核苷酸。作为另一个实施方式本发明包括一种组合物，所述组合物包括具有19至49个核苷酸长度以及包括相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一个的核苷酸序列或其互补序列的千扰RNA;和药学上可接受的载体。本发明另一个实施方式是一种组合物，所述组合物包括具有19至49个核苷酸长度并且包括相应于SEQIDNO:41-47中任一个的核香酸序列或其互补序列的干扰RNA;和药学上可接受的载体。本发明的一个实施方式是一种在需要对其治疗的受治疗者中治疗眼部炎症或结膜炎的方法，所述方法包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括双链siRNA分子，其经由RNA千扰而下调Syk基因的表达，其中siRNA分子的每条链独立具有大约19至大约27个核苷酸的长度；以及siRNA分子的一条链包括与相应于Syk基因的mRNA大致互补的核苦酸序列，使得所述siRNA分子经由RNA干扰直接切割所述mRNA。这种方法的另一个实施方式中，siRNA分子的每条链独立具有大约19至大约25个核苷酸的长度，或大约19至大约21个核苷酸的长度。如本文描述的任何实施方式在制备用于弱化本文所示SykmRNA表达的药物的用途也是本发明的一个实施方式。图1提供了293FT细胞的SYK蛋白质印迹，所述293FT细胞用弁2、#5、#6和#8的SYKsiRNA,和无RISC的对照siRNA进行转染，每种以10nM、1nM和0.1nM;用10nM的非耙向对照siRNA(NTC2)进行转染；以及用緩冲液对照(-siRNA)进行转染。箭头指示72-kDaSYK和42-kDa肌动蛋白条带的位置。具体实施例方式本文引用的参考资料通过引用结合入本文，引用程度至它们提供对于本文所阐述内容具有补充性的示例性程序或其他细节。本领域技术人员在本发明公开内容的启发下，应理解在不偏离本发明的精神和范围情况下可以对本文公开的实施方式进行显而易见的修改。在本发明公开内容的启发下，在无过多实验情况下能进行和执行本文公开的所有实施方式。在公开的内容和其等同的实施方式中陈述了本发明的全部范围。本说明书不应被解释为不当地缩小了本发明给予保护的全部范围。除非另有说明如本文使用的术语"一(a)"和"一个(an)"用来指"一个"，"至少一个"或"一个或更多"。如本文使用的术语"Syk相关炎性病症"，包括涉及组胺和其他卩足炎症介导的应答的病症，例如变应性结膜炎、眼部炎症、皮炎、鼻炎、哞喘、变态反应和肥大细胞病；并且包括源于SykmRNA表达形成的那些细胞变化，所述SykmRNA表达直接或间接导致Syk相关炎性病症。本文提供的干扰RNA提供这种沉默，同时避免由非特异性试剂造成的不期望的副作用。如本文使用的术语"变应性结膜炎"指结膜的炎症，所述结膜是分布在眼睑和覆盖巩膜的暴露面的脆弱的膜。术语"变应性结膜炎"包括例如特应性角膜结膜炎、巨乳头性结膜炎、枯草热性结膜炎、常年性过敏性结膜炎、和春季角膜结膜炎。如本文使用的术语"皮炎"指皮肤的炎症并且包括，例如过敏性接触性皮炎、皮脂缺乏性皮炎(小腿上的干性皮肤)、特应性皮炎、尾蝴性皮炎、接触性皮炎包括剌激性接触性皮炎和漆酚诱导的接触性皮炎、疱渗样皮炎、出汗障碍性皮炎、湿疹、重力性皮炎、感染性皮炎、钱币状皮炎、外耳炎、口周皮炎、假单胞菌皮炎(hottubrash)和脂溢性皮炎。如本文使用的术语"鼻炎"是指鼻粘膜的炎症，并且包括例如，过敏性鼻炎、特应性鼻炎、传染性鼻炎、刺激性鼻炎、嗜酸细胞性非变应性鼻炎、药物性鼻炎和嗜中性鼻窦炎(neutrophilicrhinosinusitis)。如本文使用的术语"哮喘"指气道的炎症，导致气道狭窄，所述气道从鼻和口传递空气到肺，所述哮喘包括例如过敏性哮喘、特应性译喘、特应性支气管IgE介导的哮喘、支气管哮喘、支气管溶解(bronchiolytis)、肺气肿哮喘、神经性哮喘、运动诱发性哮喘、由环境因素引起的外源性哮喘、初期嗜喘(incipientasthma)、由病理生理扰乱引起的内源性哞喘、非过敏性哞喘、非特应性哮喘和嬰儿哮喘综合征(wheezyinfantsyndrome)。如本文使用的术语"变态反应，，指对于通常不具有有害性的物质的免疫系统的异常应答，并且包括例如皮肤变态反应例如特应性皮炎、荨麻渗和血管性水肺；呼吸性变态反应例如过敏性鼻炎和对粉尘或霉菌的反应；食物变态反应例如对于牛奶、蛋清、花生、小麦、大豆、浆果、贝类、玉米、豆类、黄色食用色素5号(yellowfooddyeNo.5)和阿拉伯胶中的蛋白质的反应；药物变态反应例如对于青霉素、磺胺、巴比妥类、抗惊厥药、胰岛素、局部麻醉药和造影剂的反应；以及昆虫咬伤变态反应例如对蜜蜂、黄蜂、大胡蜂、胡蜂和火蚁螫伤的毒液的反应。如本文使用的术语"肥大细胞病"指系统性肥大细胞增多症，其特征在于肥大细胞在组织中聚集。所述聚集能影响器官例如骨髓、皮肤、胃肠道、肝脏和脾。医师通过发现除皮肤之外身体其他部位的肥大细胞来诊断系统性肥大细胞增多症，并且通常用抗组胺剂治疗。短语"与对应于任何一个(序列鉴定子)的mRNA3'端次末端的13个核香酸具有至少90%的序列互补性或至少90%的序列同一性的至少13个连续核苷酸的区域"允许一个核苷酸取代。两个核香酸取代(即，11/13=85%同一性/互补性)不包括在该短语中。"杂交"指一种过程，其中单链核酸与互补性或近乎互补性的碱基序列相互作用形成氢键连接的复合体，称为杂化物。杂交反应具有敏感性和选择性。在体外，杂交的特异性(即严格性)例如通过预杂交和杂交液中盐或甲酰胺浓度控制，以及通过杂交温度控制；这种试验方案在本领域是已知的。具体而言，通过降低盐浓度、增加甲酰胺浓度或提高杂交温度可增加严格性。如本文使用的术语"同一性百分比"描述了，第一个核酸分子中的连续核苷酸，与在第二个核酸分子中相同长度的一组连续核苷酸相同的百分比。术语"互补性百分比"描述了，第一个核酸分子中的连续核苷酸，以Watson-Crick原理(sense)能与第二个核酸分子中一组连续核苷酸、》咸基配只十的百分比。裔化miM4如本文使用的术语"弱化mRNA的表达"指施用或表达一定量的干扰RNA(例如siRNA)以减少革巴mRNA至蛋白质的翻译，通过mRNA切割或通过直接抑制翻译实现。耙mRNA或相应蛋白表达的减少通常一皮称为"敲低(Knock-down)"，并且相对于施用或表达的非靶向RNA对照(例如非靶向siRNA对照)后存在的水平而被才艮道。本文实施方式涵盖了包括而且处于50%和100%之间的量的表达的敲低。然而，达到这种沉默水平不是为本发明的目的所必须的。在一个实施方式中，施用单个靶向SykmRNA的千扰RNA。在其他实施方式中，施用二个或更多个輩巴向SykmRNA的干护CRNA。"杂交"指一种过程，其中单链核酸与互补性或近乎互补性的减基序列相互作用形成氢键连接的复合体称为杂化物。杂交反应具有敏感性和选择性。在体外，杂交的特异性(即严格性)例如通过预杂交和杂交液中盐或甲酰胺浓度控制，以及通过杂交温度控制；这种试验方案在本领域是已知的。具体而言，通过降低盐浓度、增加曱酰胺浓度或提高杂交温度可增加严格性。例如，高严格性条件能以37。C至42°C、含50%甲酰胺条件发生。降低的严格条件能以30。C至35°C、含35%至25%甲酰胺条件发生。用于杂交的严格条件的例子在Sambrook,丄，1989,Mo/ecw/wC/o"/wg:爿丄flZ)orato^她w認/,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.中提供。严格杂交条件的进一步的例子包括400mMNaCl、40mMPIPESpH6.4、和lmMEDTA,50。C或70。C维持12-16小时，然后洗涤；或者含50%甲酰胺、在1XSSC中70。C或在1XSSC中50。C杂交，然后在0.3XSSC中了0。C洗涤；或者含50%甲酰胺、在4XSSC中70。C或在4XSSC中50。C杂交，然后在1XSSC中67。C洗涤。杂交温度比杂化物的解链温度(Tm)低大约5-10°C,其中在19至49个碱基对长度的杂化物的Tm的确定是^f吏用下列计算Tm°C=81.5+16.6(logl0[Na+])+0.41(%G+C)-(600/N),其中N是杂化物中碱基数目，并且[Na+]是杂交緩沖液中钠离子浓度。敲低通常使用定量多聚酶链式反应(qPCR)扩增、通过测量mRNA水平来评估，或使用蛋白质印迹或酶联免疫吸附测定法(ELISA)、通过测量蛋白水平评估。分析蛋白水平提供了mRNA切割以及翻译抑制的评估。用于测量敲低的更多的技术包括RNA溶液杂交、核酸酶保护、Northern杂交、以微点阵监控的基因表达、抗体结合、放射免疫测定和荧光激发细胞分析(fluorescenceactivatedcellanalysis)。RNA千扰(RNAi)是双链RNA(dsRNA)藉以用于沉默基因表达的方法。不想受缚于理论，RNAi开始于通过RNA酶III-类酶(切丁酶)切割长dsRNA成短干扰RNA(siRNA)。siRNA是dsRNA并且通常具有大约19至28个核苷酸、或20至25个核苷酸或者21至22个核苷酸的长度，并且通常含有2个核苷酸的3'突出端、以及5'磷S吏基和3'羟基末端。siRNA的一条链引入到核糖核蛋白复合体，其已知为RNA诱导的沉默复合体(RISC)。RISC使用这个siRNA链鉴定mRNA分子，所述mRNA分子与引入的siRNA链具有至少部分的互补性，并且然后切割这些靶mRNA或者抑制它们的翻译。因此，引入到RISC中的siRNA链已知为引导链或反义链。另一条siRNA链，其已知为过客链或有义链，其从siRNA中除去并且至少部分的与靶mRNA同源。本领域技术人员应能认识到，原则上siRNA中任一链均能引入到RISC中并且作为引导链行使功能。然而，siRNA设计(例如在反义链的5'端降低siRNA双链体稳定性)能有益于引入反义链到RISC中。RISC介导切割至少部分的与引导链具有互补性的mRNA,这导致了mRNA和这种mRNA编码的相应蛋白稳态水平的下降。可选择地，RISC也可经由不需切割靶mRNA的翻译抑制来减少相应蛋白的表达。其他RNA分子和RNA-类分子也能与RISC相互作用并且沉默基因表达。能与RISC,、单链siRNA、樣吏小RNA(miRNA)和切丁酶-底物27-mer双链体(dicer-substrate27-merduplexes)。如本文使用的术语"s'RNA"除非另有说明是指双链干扰RNA。能与RISC相互作用的RNA-类分子的例子包括含有一个或更多的化学修饰的核普酸、一个或更多的脱氧核糖核苷酸和/或一个或更多的磷酸二酯键的RNA分子。至于本发明讨论的目的，能与RISC相互作用、以及参与RISC介导的基因表达改变的所有RNA或RNA-类分子，被称为"干扰RNA"。因此，siRNA、shRNA、miRNA和切丁酶-底物27-mer双链体是"干扰RNA"的亚类。本发明实施方式的千扰RNA显现出以催化方式作用来切割靶mRNA，即干扰RNA能够在亚化学计量上影响靶mRNA的抑制。当与反义疗法相比时，在这种切割条件下需要明显较少的干扰RNA来提供疗效。本发明涉及干扰RNA抑制SykmRNA表达的用途，所述SykmRNA是非受体酪氨酸激酶的mRNA。通过免疫受体例如IgE受体(FceRI)的信号传导包括募集和激活信号传导级联的多个组分，包括Syk。Syk激活导致PLCy和P13K途径的激活并且最终导致肥大细胞脱颗粒作用和激活。靶向如本文所提供的SykmRNA，会降低Syk蛋白水平并且中断FcsRI途径。这种作用会干扰IgE介导的肥大细胞脱颗粒作用并且释放组胺和其他的促炎介质。依照本发明，外源提供或内源表达的干扰RNA对于沉默SykmRNA特别有效。除非另有说明，本文引用的核酸序列是以5'至3'方向书写。如本文使用的术语"核酸"指DNA或RNA或其修饰形式，包括存在于DNA(腺嘌呤"A"、胞嘧啶"C"、鸟嘌呤"G"和胸腺嘧啶"T")或RNA(腺噪呤"A"、胞嘧啶"C"、鸟嘌呤"G"和尿嘧啶"U")中的噪呤或嘧咬碱基。本文提供的干扰RNA可以包括"T"碱基，特别是在3'端，尽管"T"碱基不天然存在于RNA内。"核酸"包括术语"寡核苷酸，，和"多核苷酸"并且能够指单链分子或双链分子。双链分子是通过在A和T磁基之间、C和G磁基之间和A和U碱基之间的Watson-Crick碱基配对形成。双链分子彼此间具有部分的、主要的或完全的互补性，并且会形成双链体杂化物，其结合的强度取决于碱基序列的性质和互补程度。mRNA容易从相应的DNA序列推导出。例如，SEQIDNO:1提供了相应于SykmRNA的DNA的有义链序列。除了"T，，碱基被"U"碱基替代，mRNA序列与DNA的有义链序列一致。因此，Syk的mRNA序列是从SEQIDNO:1得知。席潜虑凝浚^S:;^w/M4:GenBank数据库以登录号NM—003177提供了Syk的DNA序列，在"序列表"中作为SEQIDNO:1提供。SEQIDNO:1提供了相应于编码Syk的mRNA的、DNA的有义链序列(除了"T"碱基对于"U"碱基之外)。Syk的编码序列来自于第148-2055位核苷酸。等同于上迷引用的SykmRNA序列的是替代的剪接形式、等位形式、同工酶或其关联物(cognate)。一种关联物是来自于另一种哺乳动物的脾酪氨酸激酶mRNA，其与SEQIDNO:]同源(即直向同源物)。涉及SEQIDNO:1的Syk核酸序列包括那些GenBank库中登录号BC001645、BC002962、L28824、X73568、BC011399和Z29630的序列。^口下述通过监4空免疫-文击(immunologically-challenged)的月巴大细月包中组胺的释放，Syk的抑制也可以体外测定。单个分散的人肥大细胞制剂在免疫激活时释放促炎介质。通过以抗原或抗-人IgE刺激细胞后、释放到培养物上清液中组胺的量来测定激活程度(参阅Miller等Ocm/w/附mwwo〃"/Zamw.4:39-49,2006)。以乾向Syk的干扰RNA转染的肥大细胞的免疫攻击，与观察到的用非转染的肥大细胞、或用非靶向千扰RNA对照转染的肥大细胞的免疫攻击相比，形成明显较少的组胺释放。Syk的抑制也可以在体外通过使用人结膜组织肥大细胞或在LAD2肥大细胞中，检测IgE介导的组胺释放来测定。人结膜组织肥大细胞例如使用美国专利第5,360,720号概述的方法获得。LAD2肥大细胞由美国国立卫生研究院、变应性疾病实验室，Bethesda,MD批准(丄ewAi"2003年8月27(8):677-82)。简要的说，人结膜组织肥大细胞从人结膜组织酶促释放，并且随后通过在PERCOLL⑧垫层上的密度梯度离心部分地富集。从产生的沉淀获得单个分散的细胞混悬液，并且将这些细胞用于组胺释^:测定。细胞用Syk千扰RNA或干扰RNA对照转染72h后用抗-人IgE刺激，这促发了J巴大细胞脱颗粒作用并且组胺释;^丈到上清液中。然后通过RIA(BeckmanCoulter)、EIA(BeckmanCoulter)或本领域才支术人员已知的其他方法测量上清液中的组胺。相对于对照转染的细胞或非转染的细胞，Syk干扰RNA转染的细胞中组胺释放的下降，指示千扰RNA在弱化Syk和阻断FceRI信号传导途径方面有效。LAD2肥大细胞很大程度上以相同的方法使用，除了细胞被动地以人IgE骨髓瘤致敏，然后用抗-人IgE刺激，以交联受体结合的IgE并且促发脱颗粒作用。通过》见察Syk相关性病症症状的改善，也可以/人人和哺乳动物中推断Syk的抑制，所述Syk相关性病症症状的改善例如与变应性结膜炎、眼部炎症、皮炎、鼻炎、哮喘、变态反应或肥大细胞病相关的症状改善。例如任何水肿、搔痒和炎症的改善，或对环境攻击(environmentalchallenge)的耐受，对于Syk的抑制具有指示性。干挽7WX:在本发明的一个实施方式中，干扰RNA(例如siRNA)具有有义链和反义链，并且所述有义和反义链包括含有至少19个核苷酸、具有至少是近乎完全的连续互补性的区域。在本发明的另一个实施方式中，干扰RNA(例如siRNA)具有有义链和反义链，并且所述反义链包括含有至少19个核苷酸、具有与SykmRNA的靶序列至少是近乎完全的连续互补性的区域，并且所述有义链包括含有至少19个核苷酸、具有与SykmRNA的靶序列至少是近乎完全的连续同一性(contiguousidentity)的区域。在本发明的另一个实施方式中，所述干扰RNA包括一个至少13、14、15、16、17或18个连续核苷酸的区域，所述13、14、15、16、17或18个连续核苷酸分别与mRNA内相应靶序列的3'端次末端的13、14、15、16、17或18个核普酸，具有序列互补性的百分比或序列同一性的百分比。干扰RNA的每条链的长度包括19至49个核苷酸，并且可以包括含有19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个核苷酸的长度。siRNA的反义链是siRNA中的有活性的引导剂，因为反义链被引入RISC，因而允许RISC鉴定与siRNA反义链至少部分的互补性的靶mRNA，所述互补性用于切割或翻译抑制。在本发明的实施方式中，使用可获得的设计工具选择在靶mRNA序列内的干扰RNA靶序列(例如siRNA靶序列)。然后通过转染表达靶mRNA的细胞而后以上文描述评估敲低，测试相应于Syk靶序列的干扰RNA。选择siRNA靶序列的技术在下述方面提供Tuschl,T.等，"ThesiRNAUserGuide(siRNA使用者指南),"2004年5月6日修订,可在RockefellerUniversity网3占获4寻；TechnicalBulletin#506,"siRNADesignGuidelines(siRNA设计指导方针)，"AmbionInc.在Ambion的网站；以及其他基于网络i殳i十工具，例i口在Invitrogen、Dharmacon、IntegratedDNATechnologies、Genscript或Proligo网站上的。初始搜索参数可包括在35%至55%之间的G/C含量，以及siRNA长度在19至27个核苷酸之间。靶序列可以位于编码区域或mRNA的5'或3'未翻译区域。关于SykmRNA的19个核苷酸DNA靶序列的一个实施方式出现在SEQIDNO:1的第789至807位核苷酸5'-GCACTATCGCATCGACAAA-3'SEQIDNO:2。用于靶向SEQIDNO:2的相应mRNA序列、并且具有21个核苷酸的链和2个核苷酸的3'突出端的本发明的siRNA是5'-GCACUAUCGCAUCGACAAA丽-3'SEQIDNO:33'-丽CGUGAUAGCGUAGCUGUUU-5'SEQIDNO:4。每个"N"残基可以是任何的核苷酸(A、C、G、U和T)或修饰核苷酸。3'端可有许多"N"残基，包括和在l、2、3、4、5和6个之间。任一条链上的"N，，残基可以是相同的残基(例如UU、AA、CC、GG或TT)或者它们可以是不同的(例如AC、AG、AU、CA、CG、CU、GA、GC、GU、UA、UC或UG)。3'突出端可以是相同的或者它们可以是不同的。在一个实施方式中，两条链均有3'UU突出端。用于耙向SEQIDNO:2的相应mRNA序列、并且具有21个核苷酸的链和每条链上均有3'UU突出端的本发明的siRNA是5'-GCACUAUCGCAUCGACAAAUU-3'SEQIDNO:53'-UUCGUGAUAGCGUAGCUGUUU-5'SEQIDNO:6。干扰RNA也可以具有5'突出端的核苷酸或其可以具有平端。用于輩巴向SEQIDNO:2的相应mRNA序列、并且具有19个核苷酸的链和平端的本发明的siRNA是5'画GCACUAUCGCAUCGACAAA-3'SEQIDNO:73'誦CGUGAUAGCGUAGCUGUUU-5'SEQIDNO:8。双链干扰RNA(例如siRNA)的链可以连接起来形成发夹或茎环结构(例如shRNA)。靶向SEQIDNO:2的相应mRNA序列、并且具有19bp双链茎区和3'UU突出端的本发明的shRNA是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>N是A、T、C、G和U核苷酸或者本领域技术人员已知的修饰形式。环中N核苷酸的数目是包括和在3至23个之间、或5至15个之间、或7至13个之间、或4至9个之间、或9至11个之间，或者N核苷酸的数目是9。环中的一些核普酸能参与与环中其他核苷酸发生磁基配对的相互作用。用于形成环的寡核苷酸序列的例子包括5'-UUCAAGAGA-3'(Brummelkamp,T.R.等(2002)S"ewce296:550)和5'-UUUGUGUAG-3'(Castanotto,D.等(2002)iM48:1454)。本领域技术人员应能识别产生的单链寡核苷酸形成茎环或发夹结构，所述茎环或发夹结构包括能与RNAi结构相互作用的双链区域。上述鉴定的siRNA靶序列可以在3'端延伸，便于切丁酶-底物27-mer双链体的设计。SykDNA序列中(SEQIDNO:1)中鉴定的19个核苷酸DNA靶序列(SEQIDNO:2)延伸6个核苷酸，产生25个核苷酸DNA靶序列，所述25个核苷酸DNA靶序列出现在SEQIDNO:1的第789至813位核香酸。5'-GCACTATCGCATCGACAAAGACAAG-3'SEQIDNO:10。用于靶向SEQIDNO:10的相应mRNA序列的本发明的切丁酶-底物27-mer双链体是5'-GCACUAUCGCAUCGACAAAGACAAG-3'SEQIDNO:113'-UUCGUGAUAGCGUAGCUGUUUCUGUUC-5'SEQIDNO:12。为增强加工，有义链的3'端2个核苷酸(即SEQIDNO:11的AG核苷酸)可以是脱氧核苦酸。例如本文提供的从19至21个核苦酸靶序列设计的切丁酶-底物27-mer双链体，在IntegratedDNATechnologies(IDT)网站、以及Kim,D.-11等,(2005年2月)7Vaft^e说0fec/2"0/0gv23:2;222-226.中有进一步讨论。当通过化学合成的方法生产干扰RNA时，在一条或二条链(当存在时)的5'端的核苷酸的5'位置磷酸化，能加强siRNA的效力和所结合的RISC复合体的特异性，但这不是必需的因为磷酸化能在细胞内出现。本文也公开了一种在受治疗者中弱化SykmRNA表达的方法，包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA(iRNA)、以及药学上可接受的载体，所述干扰RNA包括选自由下述组的区域一个至少13个连续核苷酸的区域，所述13个连续核苷酸与相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44—47中任一个的mRNA3，端次末端的13个核普酸具有至少90%的序列互补性，或至少90%的序列同一性；一个至少14个连续核香酸的区域，所述14个连续核苷酸与相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13—40和SEQIDNO:44—47中任一个的mRNA3，端次末端的14个核香酸具有至少85%的序列互补性，或至少85%的序列同一性；以及一个至少15、16、17或18个连续核苷酸的区域，所述15、16、17或18个连续核香酸分别与相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一个的mRNA3，端次末端的15、16、17或18个核苷酸具有至少80%的序列互补性，或至少80%的序列同一性，其中所述SykmRNA的表达由此而弱化。也公开了一种在需要对其治疗的受治疗者中治疗Syk相关炎性病症的方法，包4舌施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA、以及药学上可接受的载体，其中所述干扰RNA包括区域选自下述组的区域一个至少13个连续核苷酸的区域，所述13个连续核苷酸与相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13—40和SEQIDNO:44-47中寸壬一个的mRNA3端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性，或至少90%的序列同一性；一个至少14个连续核香酸的区域，所述14个连续核普酸与相应于SEQIDNO:2和SEQIDNO:13-40中任一个的mRNA3'端次末端的14个核苷酸具有至少85%的序列互补性，或至少85%的序列同一性；以及一个至少15、16、17或18个连续核苷酸的区域，所述15、16、17或18个连续核苷酸分别与相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一个的mRNA3'端次末端的15、16、17或18个核苷酸具有至少80%的序列互补性，或至少80%的序列同一性，其中所述Syk相关炎性病症由此而治疗。另外的实施方式包括一种弱化受治疗者的SykmRNA表达的方法，包括施用一种組合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA、以及药学上可接受的载体，所述干扰RNA包括有义核苷酸链，反义核苷酸链，和具有至少是近乎完全的连续互补性的至少19个核苷酸的区域；其中所述反义链在生理条件下与mRNA的一部分杂交，所述mRNA选自由下述mRNA组成的组与SEQIDNO:1相应的mRNA，其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苦酸，以及，与SEQIDNO:1相应的mRNA,其包括第1007、1698或1769位核苷酸，其中所述SykmRNA的表达由此而弱化。本文也公开了在需要对其治疗的受治疗者中治疗Syk相关炎性病症的方法，包4舌施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA、以及药学上可接受的载体，所述干扰RNA包括有义核苷酸链，反义核普酸链，和具有至少是近乎完全的连续互补性的至少19个核苷酸的区域；其中所述反义链在生理条件下与mRNA的一部分杂交，所述mRNA选自由下述mRNA组成的组与SEQIDNO:1相应的mRNA，其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸，以及，与SEQIDNO:1相应的mRNA，其包括第1007、1698或1769位核香酸，其中所述Syk相关炎性病症由此而治疗。另外的实施方式包括一种弱化受治疗者的SykmRNA表达的方法，包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的单链干扰RNA、以及药学上可接受的载体，其中所述单链干扰RNA在生理条件下与mRNA的一部分杂交，所述mRNA选自由下述mRNA组成的组与SEQIDNO:1相应的mRNA,其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸，以及，与SEQIDNO:1相应的mRNA,其包括第1007、1698或1769位核苷酸，并且所述干扰RNA含有与相应于SEQIDNO:1的mRNA的杂交部分至少是近乎完全的连续互补性的区域，其中所述SykmRNA的表达由此而弱化。也公开了在需要对其治疗的受治疗者中治疗眼部炎症或结膜炎的方法，包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括双链siRNA分子，其经由RNA干扰而下调Syk基因的表达，其中siRNA分子的每条链独立具有大约19至大约27个核香酸的长度；以及siRNA分子的一条链包括与相应于Syk基因的mRNA大致互补的核苷酸序列，使得所述siRNA分子经由RNA干扰直接切割所述mRNA。也公开了各种组合物，所述组合物包括具有19至49个核苷酸长度并且包括相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一个的核苷酸序列或其互补序列的干扰RNA;和药学上可接受的载体。也公开了各种其他的组合物，所述组合物包括具有19至49个核苷酸长度，并且主要由相应于SEQIDNO:41-47中任一个的核苷酸序列或其互补序列组成的干扰RNA;和药学上可接受的载体。虽然已显示和描述了本发明的特定实施方式，本领域技术人员可想到各种变更和替代实施方式。相应地，本发明预期仅通过所附权利要求来限定。在不偏离本发明的精神和必要特征下，本发明可以其他特定形式实因此本发明的范围不是由上述描述内容而是由所附权利要求指示。在等同于权利要求意义和范围内的、对于权利要求的任何改变均包括在其范围内。此外，本文提及的所有公开的文献、专利和申请，在此通过引用结合入本文，如同以其整体"l是出。实施例表1列出了SEQIDNO:1的SykDNA靶序列的实施例，从其中以上文阐述的方式设计本发明的siRNA。如上述记录Syk编码脾酪氨酸激酶。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>或删除与SEQIDNO:1具有互补性或近乎互补性的核苷酸，本领域技术人员能使用表1提供的靶序列信息来设计千扰RNA,所述干扰RNA具有短于或长于表1提供序列的长度。由siRNA和其他形式的干扰RNA指导的靶RNA切割反应具有高度序列特异性。通常，siRNA是抑制本文所引用mRNA的siRNA实施方式，所述siRNA含有与耙mRNA的一部分在序列相同的有义核苷酸链，以及恰好与輩巴mRNA的一部分互补的反义核香酸链。然而，在反义siRNA链和靶mRNA之间，或在反义siRNA链和有义siRNA链之间的100%序列互补性，并不是实践本发明所必需的。因此，例如，本发明允许有序列变异，所述序列变异可能由于基因突变、林多态性(strainpolymorphism)或进化趋异造成。在本发明的一个实施方式中，siRNA的反义链具有与乾mRNA至少是近乎完全的连续互补性的至少19个核苷酸。如本文使用的"近乎完全的"指siRNA的反义链与耙mRNA的至少一部分"大致互补"，并且siRNA的有义链与輩巴mRNA的至少一部分"大致同一"。"同一性"如本领域技术人员所已知的，是通过匹配序列之间的核苷酸顺序和同一性而确定的核苷酸序列之间的序列亲缘关系程度。在一个实施方式中，具有与靶mRNA序列80%和在80%至100%之间的互补性(例如85%、90%或95%的互补性)的siRNA反义链被认为具有近乎完全的互补性，并且可以用于本发明中。"完全的"连续互补性是连续碱基对的标准Watson-Crick碱基配对。"至少是近乎完全的"连续互补性包括如本文使用的"完全的"互补性。用于测定同一性或互补性的计算机方法例如BLASTN(Altschul,S.F.,等(1990)丄JUfo/.说o/.215:403-410)，被设计用于鉴定核苷酸序列匹配的最大程度。靶mRNA(有义链)与siRNA的一条链(有义链)之间的关系是同一性关系。如果出现的话，siRNA的有义链也称作过客链。靶mRNA(有义链)和siRNA的另一条链(反义链)之间的关系是互补性关系。siRNA的反义链也称作引导链。以5'至3'方向书写的核酸序列中的次末端减基是，紧靠着最后的碱基的，即紧靠3'碱基的碱基。以5'至3'方向书写的核酸序列中的次末端13个碱基，是紧靠3'碱基的序列中的最后13个tt并且不包括3'碱基。相似地，以5'至3'方向书写的核苷酸序列中的次末端14、15、16、17或18个石威基，分别是紧靠3'减羞的序列中的最后14、15、16、17或18个威基并且不包括3'碱基。在本发明的一个实施方式中，连续核苷酸区域是，与mRNA3'端次末端的14个核苷酸具有至少85%的序列互补性、或至少85%的序列同一性的14个连续核苷酸的区域，所述mRNA相应于由每个序列鉴定子(sequenceidentifier)鉴定的序列。两个核香酸的置换(即12/14=86%同一性/互补性)包括在该短语中。在本发明另一个实施方式中，连续核苷酸区域是与mRNA3'端次末端的14个核苷酸具有至少80%的序列互补性、或至少80%的序列同一性的至少15、16、17或18个连续核苷酸的区域，所述mRNA相应于由每个序列鉴定子的序列。三个核香酸的置换包括在该短语中。相应于SEQIDNO:1的mRNA中的靶序列，可以在mRNA5'或3'未翻译区域中，以及在mRNA的编码区域中。双链干扰RNA的一条或两条链可以含有1至6个核苷酸的3'突出端，其可以是核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或其混合物。突出端的核苷酸不是碱基配对的。在本发明一个实施方式中，干扰RNA包括TT或UU的3'突出端。在本发明的另一个实施方式中，干扰RNA包括至少一个平端。末端通常具有5'磷酸基或3'羟基。在其他的实施方式中，反义链具有5'磷酸基并且有义链具有5'羟基。仍然在其他的实施方式中，通过共价加入其他分子或官能团进一步》务饰末端。双链siRNA的有义和反义链可以是如上文描述的两条单链的双链体结构，或可以是单分子，其中互补性区域是碱基配对的并且通过发夹环共价连接以形成单链。据信发夹通过称为切丁酶的蛋白在细胞内切割，形成两个单独碱基配对RNA分子的干扰RNA。通过添加、删除、置换或修饰一个或更多的核普酸，干扰RNA可不同于天然存在的RNA。非核苷酸物质可以结合到干扰RNA的5'端、3'端或中间。所述修饰通常设计用于增加千扰RNA的核酸酶抵抗性、改善细胞吸收、增强细胞靶向、协助追踪干扰RNA、进一步改善稳定性或降低千扰素途径激活的可能性。例如，在突出端的末端千扰RNA可以包括嘌呤核苦酸。例如通过吡咯烷连接体连接胆固醇到siRNA有义链3'端，对于siRNA也提供了稳定性。另外的修饰例如包括3'端生物素分子、已知具有细胞渗透性质的肽、纳米粒子、拟肽(peptidomimetic)、荧光染料或树状聚体。核苷酸可以在分子的碱基部分、在糖基部分或在磷酸部分上修饰并且在本发明的实施方式中行使功能。修饰例如包括用烷基、烷氧基、氨基、脱氮物(deaza)、卣素、羟基、巯基或其组合来置换。例如，核苷酸可以被具有更高稳定性的类似物来置换、例如用脱氧核糖核香酸替代核糖核苷酸，或可以被具有糖基修饰的类似物置换、例如用2'氨基、2'甲氧基、2'甲氧乙基或2'-0,4'-C亚甲基桥替代2'OH。核苷酸的噤呤或嘧啶类似物例子包括黄嘌呤、次黄嘌呤、氮杂嘌呤(azapurine)、甲^i腺嘌呤、7-脱氮-腺香以及O-和N-修饰核苷酸。通过用氮或用硫(磷硫酰)置换磷酸基团的一个或更多氧，可以修饰核苷酸的磷酸基团。例如对于增强功能、对于提高稳定性或渗透性或者对于直接定位或靶向，修饰具有有用性。可以有与SEQIDNO:1的部分不具有互补性的反义干扰RNA链的区域。非互补性区域可以在互补性区域的3'端、5'端或两端，或者在两个互补性区域之间。通过化学合成、通过体外转录、或者通过用切丁酶或具有相似活性的另一种适当的核酸酶切割较长的双链RNA，可以外源性产生干扰RNA。使用传统的DNA/RNA合成仪，从受保护的核糖核普亚磷酰胺生产的化学合成的干扰RNA，可以从商业供应厂商例如AmbionInc.(Austin,TX)、Invitrogen(Carlsbad,CA)或Dharmacon(Lafayette,CO)获4寻。通过例如用溶剂或树脂、沉淀作用、电泳、层析或它们的联合进行提取，纯化干扰RNA。可选择地，可以使用具有很少(如果有)纯化的干扰RNA以避免由于样品加工带来的损失。31从质粒或病毒表达载体、或从最小表达盒也可以内源性表达千扰RNA，所述最小表达盒例如PCR产生的片段，其包括一个或更多的启动子和千扰RNA的适当模板。用于shRNA的商业上可获得的基于质粒的表达载体的例子包括，pSilencer系列的成员(Ambion,Austin,TX)和pCpG-siRNA(InvivoGen,SanDiego，CA)。用于表达干扰RNA的病毒载体可以得自多种病毒，所述病毒包括腺病毒、腺伴随病毒、慢病毒属(例如HIV、FIV、和EIAV)和疱療病毒。用于shRNA表达的商业上可获得的病毒载体的例子包4舌pSilenceradeno(Ambion,Austin,TX)和pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST(Invitrogen,Carlsbad,CA)。病毒载体的选择、从载体表达干扰RNA的方法以及递送病毒载体的方法，是本领域普通技术人员已知的。试剂盒的例子包括SilencerExpress(Ambion,Austin,TX)和siXpress(Minis,Madison,WI),所述试剂盒用于产生、PCR产生的shRNA表达盒。经由能够表达第一个千扰RNA的、第一个表达载体的体内表达，可以施用第一个干扰RNA;并且经由能够表达第二个干扰RNA的、第二个表达载体的体内表达，可以施用第二个干扰RNA;或者经由能够表达二种干扰RNA的、单个表达载体的体内表达，可以施用二种干扰RNA。千扰RNA可以从多种本领域技术人员已知的真核细胞的启动子表达，包括polIII启动子(例如U6或HI启动子)或polII启动子(例如巨细胞病毒启动子)。本领域技术人员应认识到这些启动子也能适应于允许干扰RNA的诱导性表达。^^理务伊7"染艾在本发明的某些实施方式中，在体内千扰RNA的反义链与mRNA杂交而作为RISC复合体的部分。上文描述的在体外的杂交测定，提供了预测候选siRNA和乾之间的结合是否具有特异性的方法。然而，在RISC复合体情况下，特异性靶切割也能发生在反义链，其在体外没有证明杂交的高严格性。卓链f挽^A^:如上文引用，干扰RNA最终以单链行使功能。单链(ss)干扰RNA已发现影响mRNA沉默，虽然与双链千扰RNA相比具有较少的有效性。因此本发明的实施方式也提供单链干扰RNA的施用，所述单链干扰RNA在生理条件下与SEQIDNO:1的一部分杂交，并且与SEQIDNO:1的杂交部分具有至少近乎完全互补性的至少19个核苷酸。如上文引用的双链干扰RNA，表1的单链干扰RNA具有19至49个核苷酸的长度。单链干扰RNA具有5'磷酸或在5'位置原位或在体内磷酸化。术语"5'磷酸化"用于描述例如具有磷酸基的多核苷酸或寡核苷酸，所述磷酸基经由酯键连接到多核苷酸或寡核苷酸5'端糖基(例如核糖、脱氧核糖或同样的类似物)的C5羟基上。单链干扰RNA通过化学合成，或者通过体外转录、或者从关于双链干扰RNA的载体或表达盒内源性表达。5'磷酸基可以经由激酶加入，或者5'磷酸可以是核酸酶切割RNA的结果。递送如同双链干扰RNA。在一个实施方式中，施用具有保护性末端和核酸酶抵抗性修饰的单链干扰RNA用于沉默。单链干扰RNA可千燥用于储存或溶解在水溶液中。所述溶液可以含有緩冲液或盐以抑制退火或用于稳定作用。发关于说WVy4:发夹干扰RNA是单个分子(例如单个寡核香酸链)，其包括茎环和发夹结构的干扰RNA(例如shRNA)的有义和反义链。例如，shRNA可从DNA载体表达，其中编码有义干扰RNA链的DNA寡核香酸通过短的间隔区连接到，编码相反的互补性反义干扰RNA链的DNA寡核苷酸。如果选择表达载体需要，可以加入3'末端T的(T's)和核苷酸形成限制位点。产生的RNA转录物回折到自身上形成茎环结构。干扰RNA可以经由，例如气雾剂、含服、皮肤、皮内、吸入、肌内、鼻内、目艮内、肺内、静脉内、腹膜内、鼻、眼、口、耳、胃肠外、贴片(patch)、皮下、舌下、局部或透皮(transdermal)施用递送。可以通过如下方式直接施用到眼通过眼部组织施用，例如眼周的、结膜的、嚢下(subtenon)、前眼房内的(intracameral)、玻璃体内的、眼内的、视网膜下的、结膜下的、眼球后的、小管内的或脉络膜上的施用；通过注射，通过使用导管或其他敷设装置(placementdevice)直接应用到眼，所述导管或其他敷设装置例如视黄醛片(retinalpellet)、眼内插入物(intraocularinsert)、栓剂或植入物，所述才直入物包括多孔的、无孔的或胶_状的物质；通过局部的眼的滴剂或软膏剂；或者通过在结膜常窿中的緩释装置，或者邻近巩膜(透巩膜的)植入的或者眼内的緩释装置。前眼房内注射可以通过角膜进入前房，以允许试剂到达小梁网。小管内注射可以到达静月永集合管引；充施累姆管(venouscollectorchannelsdrainingSchlemm'scanal)或到达施累姆管。进一步的施用模式包括片剂、丸剂和胶嚢剂。经由例如局部耳的滴剂或软膏剂、在耳内或植入到邻近耳的缓释装置，施用可以直接到达耳。局部施用包括耳肌内的、鼓室内的(intratympaniccavity)和耳蜗内的注射途径施用。此外，试剂可以施用到内耳，其通过敷设明胶海绵或相似的吸收剂和附着物并用干扰RNA浸润，所述干扰RNA对抗中耳/内耳或邻近结构的窗膜(windowmembrane)。经由例如气雾剂(aerosolizedpreparation)，以及例如通过经由吸入器或雾化器的吸入，施用可以直接到达肺。f治《,需要治疗Syk相关炎性病症或具有形成Syk相关炎性病症的危险的受治疗者是，患有Syk相关炎性病症或具有形成Syk相关炎性病症的危险的人或其他哺乳动物，所述Syk相关炎性病症例如变应性结膜炎、眼部炎症、皮炎、鼻炎、哮喘、变态反应或肥大细胞病，例如其与本文引用的Syk的所不希望的或不适当的表达或活性有关。与这种疾病相关的眼的结构例如可以包括眼、视网膜、脉络膜、晶状体、角膜、小梁网、虹膜、视神经、视神经乳头、巩膜、眼房、玻璃体房、睫状体或后段。与这种疾病相关的耳的结构例如可以包括内耳、中耳、外耳、鼓室或鼓膜、耳蜗或欧氏管。与这种疾病相关的肺结构例如可以包括鼻、口、咽、喉、小支气管、气管、隆凸(分开右和左主支气管的洞的脊)和肺，尤其是下肺例如细支气管和肺泡。受治疗者也可以是耳细胞、肺细胞、目艮细胞、细胞培养物、器官或者活体外器官或组织。药物制剂包括本发明的干扰RNA或其盐，其以高达99%的重量比例与生理学上可接受的载体介质混合，所述生理学上可接受的载体介质例如水、緩冲液、生理盐水、甘氨酸、透明质酸、甘露醇及类似物。本发明的干扰RNA可作为固体、溶液、混悬液和乳剂施用。下面内容是本发明实现的可能的制剂的实例。<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>通常，本发明实施方式的有效量的干扰RNA，在靶细胞表面形成的细胞外浓度是从100pM至100nM、或从1nM至50nM、或从5nM至大约10nM、或者大约25nM。获得这种局部浓度的所需剂量会取决于许多因素而变化，所述因素包括递送方法、递送的位点、在递送位点和靶细胞或组织之间的细胞层的数目，递送是局部性的还是全身性，等。递送位点的浓度可以相当大地高于在靶细胞或组织表面的浓度。每天一至四次递送局部的组合物到靶器官表面，或者以延长的递送时间表例如每天、每周、每两周、每月或更长的时间表，这根据临床医师的常规判断。制剂的pH值是大约pH4-9、或者pH4.5至pH7.4。用siRNA的患者的治疗性治疗，其通过增加作用的持续时间、而预期具有超过小分子治疗的有益性，所述siRNA直接对抗SykmRNA，因而允许较低频率的给药和较高的患者依从性。制剂的有效量可以取决于下列因素，例如受治疗者的年龄、种族和性别，例如Syk相关炎性病症的严重度、耙基因转录/蛋白质周转的速率、干扰RNA的效力和干扰RNA的稳定性。在一个实施方式中，干扰RNA被局部递送到靶器官，并且以治疗的剂量到达含有脾酪氨酸激酶的组织，因而改善了Syk相关性病变。T凝f戎谬可接受载体指那些载体，所述那些载体最多导致几乎没有至没有眼部刺激、而且如果需要的话提供适合的保护，并且递送均匀剂量的本发明的一个或更多的干扰RNA。本发明实施方式的、用于施用干扰RNA的可接受载体包括基于阳离子脂质的转染试剂TmnsIT-TKO(MinisCorporation,Madison,WI)、LIPOFECTIN、Lipofectamine、OLIGOFECTAMINE(Invitrogen,Carlsbad,CA)或DHARMAFECT(Dharmacon,Lafayette,CO);多聚阳离子例如聚乙烯亚胺；阳离子肽例如Tat、多聚精氨酸或者Penetratin(Antp肽)；或者脂质体。脂质体是从标准的形成泡嚢(vesicle)的脂质或固醇(例如胆固醇)形成，并且可以包括靶向分子例如单克隆抗体，例如所述耙分子具有对于上皮细胞表面抗原的亲合力。此外，脂质体可以是聚乙二醇化脂质体。干护ORNA可以以溶液、混悬液、生物蚀解性或非生物蚀解性的递送装置递送。千扰RNA可以单独递送或者作为确定的共价的共轭物的组分递送。干扰RNA也可以与阳离子脂质、阳离子肽或者阳离子聚合物络合；与蛋白质、融合蛋白或者具有核酸结合性质的蛋白质区域(例如鱼精蛋白)络合；或者包裹在纳米粒子中。通过包括适当的耙向部分例如抗体或抗体片段，能完成组织特异性或细胞特异性递送。关于眼、耳或肺的递送，千扰RNA可以与下述物质结合眼科、光学或肺可接受的防腐剂，共溶剂，表面活性剂，粘性增强剂，渗透促进剂，纟爰冲液，氯化钠，或者水，以形成水溶液，灭菌混悬液或'溶液。通过用生理学上可接受的等渗水性緩冲液(isotonicaqueousbuffer)溶解干扰RNA，可以制备溶液制剂。此外，所述溶液可以包括可接受的表面活性剂以协助溶解抑制剂。粘性建立试剂(Viscositybuildingagent)例如羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、曱基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或者类似物可以加入到本发明的组合物中以改善化合物的滞留(retention)。为了制备无菌软膏制剂，可将干扰RNA在适当的载体中与防腐剂结合，所述防腐剂例如矿物油、液体羊毛脂或白凡士林。通过在亲水性碱中悬浮干扰RNA，可以制备无菌凝胶制剂，所述亲水性碱依照本领域已知的方法，例如由CARBOPOL-940(BFGoodrich,Charlotte,NC)或类似物的联合体制备。例如VISCOAT(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)可以用于眼内注射。在干扰RNA较少渗透进所感兴趣的器官或组织的情况下，本发明的其他组合物可以含有渗透增强剂例如Cremephor和TWEEN80(聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯，SigmaAldrich,St.Louis,MO)。试教J^:本发明的实施方式提供了一种试剂盒，其包括如本文所引用的在细胞中用于弱化mRNA表达的试剂。试剂盒含有siRNA或shRNA表达载体。对于siRNA和非病毒shRNA表达载体，试剂盒也可以含有转染试剂和其他适合的递送载体。对于病毒shRNA表达载体，试剂盒可以含有病毒载体和/或病毒载体产生的必要元件(例如包装细胞系以及一种载体，所迷载体包括病毒载体才莫板和用于包装的额外辅助性载体)。试剂盒也可以含有siRNA或shRNA表达载体的阳性和阴性对照(例如非靶向siRNA对照或者靶向不相关mRNA的siRNA)。试剂盒也可以含有用于评估预期靶基因敲低的试剂(例如引物和探针，其用于定量PCR以检测靶mRNA和/或抗体，所述靶mRNA和/或抗体对抗用于蛋白质印迹的相关蛋白)。可选择地，试剂盒可以包括siRNA序列或shRNA序列，以及用于通过体外转录产生siRNA、或者用于构建shRNA表达载体所必需的说明书和材料。进一步提供了在试剂盒形式中的药物联合体，所述药物联合体包括在包装的联合体中的载体工具和第一容器工具，所述载体工具适应于以与其紧密限制的方式接受容器工具，所述第一容器工具包括干扰RNA组合物和可接受的载体。如果需要这种试剂盒能进一步包括，例如一个或更多的不同的传统的药物试剂盒组分，例如含有一个或更多的药学上可接受载体的容器以及另外的容器等，这些对于本领域技术人员应该容易理解。印刷的技术说明书也能包括在试剂盒中，所述技术说明书作为插件或作为标签，指示施用组分的量、施用的指导方针、和/或混合组分的指导方针。如下述在体外评估了Syk千扰RNA的能力，所述能力是Syk干扰RNA敲低例如在人角膜上皮细胞中内源性Syk表达的水平。转化的人角膜上皮细胞，例如CEPI-17细胞系(Offord等(1999)/"ve^(9//^/w/mo/Pfe40:1091-1101)，平板培养24h后在KGM角质形成细胞培养基中(Cambrex,EastRutherford,NJ)转染。依照制造商的技术说明书使用DharmaFECTTM1(Dharmacon,Lafayette,CO)进行转染，Syk干扰RNA的浓度范围处于O.lnM-lOOnM之间。非靶向干扰RNA对照和核纤层蛋白A/C千扰RNA(Dharmacon)用作对照。靶mRNA水平转染后24h通过qPCR评估，使用例如TAQMAN⑧正向和反向引物和包括耙位点的^笨针组合(AppliedBiosystems,FosterCity,CA)进行。大约转染后72h(准确时间取决于蛋白质周转率)例如通过蛋白质印迹可以评估靶蛋白水平。从所培养的细胞中分离RNA和/或蛋白质的标准技术对于本领域的技术人员是广泛知晓的。为减少非特异性和脱靶效应(off-targeteffect)的可能性，使用Syk干扰RNA的最低可行浓度以产生靶基因表达中期望水平的敲低。本文引用的参考资料通过引用结合入本文，引用程度至它们提供对于本文所阐述内容具有补充性的示例性程序或其他细节。本领域技术人员在本发明公开内容的启发下，应理解在不偏离本发明的精神和范围情况下可以对本文公开的实施方式进行显而易见的修改。在本发明公开内容的启发下，在无过多实验情况下能进行和执行本文公开的所有实施方式。在公开的内容和其等同的实施方式中陈述了本发明的全部范围。本说明书不应被解释为不当地缩小了本发明给予保护的全部范围。在293FT细胞中特异性沉默SYK的干扰RNA本研究检测了SYK干扰RNA的能力，所述能力是在所培养的293FT细胞中沉默内源性SYK蛋白表达的水平。使用SYKsiRNA、无RISCsiRNA#1si对照、或者非耙向siRNA弁2(NTC2)si对照和DHARMAFECT⑧#1转染试剂(Dharmacon,Lafayette,CO)的标准体外浓度(0.1-10nM)，完成293FT细胞(Invitrogen,Carlsbad,CA)转染。所有的siRNA溶解在IXsiRNA緩冲液中，所述缓沖液是20mMKC1、6mMHEPES(pH7.5)和0.2mMMgCl2的水溶液。对照样品包括緩沖液对照，其中siRNA的体积被同等体积的IXsiRNA缓沖液(-siRNA)替代。使用抗-SYK抗体(SantaCruzBiotechnology,SantaCruz,CA)进行蛋白质印迹以评估SYK蛋白表达。SYKsiRNA是双链干扰RNA,其具有对于下述靶序列的特异性siSYK#2靶向序列AAUGCCUUGGUUCCAUGGAIDNO:45);siSYK#6耙向序列GAACUGGGCUCUGGUAAUU(SEQIDNO:46);siSYK#8靶向序列GAACAGACAUGUCAAGGAU(SEQIDNO:47)。如图1中数据显示，相对于siRNA对照，siSYK#5、siSYK#6和siSYK#8在10nM和1nM浓度时明显降低了SYK蛋白表达，但在O.lnM时显示降低的效力。siSYK#6和siSYK#8siRNA尤其有效。在所有三种浓度时siSYK#2siRNA是无效的。权利要求1.一种弱化受治疗者的SykmRNA表达的方法，其包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA(iRNA)、以及药学上可接受的载体，所述干扰RNA包括选自下述组的区域一个至少13个连续核苷酸的区域，所述13个连续核苷酸与相应于SEQIDNO2、SEQIDNO13-40和SEQIDNO44-47中任一个的mRNA3’端次末端的13个核苷酸具有至少90％的序列互补性，或至少90％的序列同一性；一个至少14个连续核苷酸的区域，所述14个连续核苷酸与相应于SEQIDNO2、SEQIDNO13-40和SEQIDNO44-47中任一个的mRNA3’端次末端的14个核苷酸具有至少85％的序列互补性，或至少85％的序列同一性；以及一个至少15、16、17或18个连续核苷酸的区域，所述15、16、17或18个连续核苷酸分别与相应于SEQIDNO2、SEQIDNO13-40和SEQIDNO44-47中任一个的mRNA3’端次末端的15、16、17或18个核苷酸具有至少80％的序列互补性，或至少80％的序列同一性，其中所述SykmRNA的表达由此而弱化。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物进一步包括具有19至49个核苷酸长度并包括一个至少13个连续核苷酸的区域的第二种干扰RNA，所述13个连续核苷酸具有与相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一个的第二种mRNA3'端次末端的13个核苷酸至少90%的序列互补性，或至少90%的序列同一性。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述干扰RNA是shRNA。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述的组合物经由气雾剂、含服、皮肤、皮内、吸入、肌内、鼻内、眼内、肺内、静脉内、腹膜内、鼻、眼、口、耳、胃肠外、贴片、皮下、舌下、局部或透皮途径施用。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述干扰RNA通过能够表达所述干扰RNA的表达载体的体内表达而被施用。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述干扰RNA是miRNA或siRNA中的至少一种。7.—种在需要对其治疗的受治疗者中治疗Syk相关炎性病症的方法，其包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA、以及药学上可接受的载体，其中所述千扰RNA包括选自下述组的区域一个至少13个连续核苷酸的区域，所述13个连续核苷酸与相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44—47中任一个的mRNA3，端次末端的13个核苷酸具有至少90%的序列互补性，或至少90%的序列同一性；一个至少14个连续核苷酸的区域，所述14个连续核苷酸与相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44—47中任一个的mRNA3，端次末端的14个核普酸具有至少85%的序列互补性，或至少85%的序列同一性；以及一个至少15、16、17或18个连续核苷酸的区域，所述15、16、17或18个连续核普酸分别与相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一个的mRNA3，端次末端的15、16、17或18个核苷酸具有至少80%的序列互补性，或至少80%的序列同一性，其中所述Syk相关炎性病症由此而治疗。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述组合物进一步包括具有19至49个核苷酸长度并且包括一个至少13个连续核苷酸的区域的第二种干扰RNA，所述13个连续核苷酸具有与相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一个的第二种mRNA3'端次末端的13个核苷酸至少90%的序列互补性，或至少90%的序列同一性。9.根据权利要求7所述的方法，其中所述千扰RNA是shRNA。10.根据权利要求7所述的方法，其中所述的组合物经由气雾剂、含服、皮肤、皮内、吸入、肌内、鼻内、目艮内、肺内、静脉内、腹膜内、鼻、眼、口、耳、胃肠外、贴片、皮下、舌下、局部或透皮途径施用。11.根据权利要求7所述的方法，其中所述干扰RNA通过能够表达所述干扰RNA的表达载体的体内表达而被施用。12.根据权利要求7所述的方法，其中所述千扰RNA是miRNA或siRNA中的至少一种。13.根据权利要求7所述的方法，其中所述受治疗者是人并且所述人14.一种弱化受治疗者的SykmRNA表达的方法，其包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA、以及药学上可接受的载体，所述干扰RNA包括有义核苷酸链，反义核苷酸链，和具有至少是近乎完全的连续互补性的至少19个核普酸的区域；其中所述反义链在生理条件下与选自下述组的mRNA的一部分杂交与SEQIDNO:1相应的mRNA,其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核香酸，以及，与SEQIDNO:1相应的mRNA,其包括第1007、1698或1769位核苷酸，其中所述SykmRNA的表达由此而弱化。15.根据权利要求14所迷的方法，其中所述受治疗者是人并且所述人患有Syk相关炎性病症或具有形成Syk相关炎性病症的危险。16.根据权利要求14所述的方法，其中受治疗者是人并且所迷人患17.根据权利要求14所述的方法，其进一步包括向受治疗者施用第二种干扰RNA,所述干扰RNA具有19至49个核苷酸的长度并且包括有义核苷酸链，反义核苷酸链，和具有至少是近乎完全的连续互补性的至少19个核苷酸的区域；其中所述第二种干扰RNA的反义链在生理条件下与选自下述组的mRNA的第二个部分杂交与SEQIDNO:1相应的mRNA，其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸，以及，与SEQIDNO:1相应的mRNA,其包括第1007、1698或1769位核苦酸。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述的有义核苷酸链和所述反义核普酸链通过环状核苦酸链连接。19.根据权利要求17所述的方法，其中所述的组合物经由气雾剂、含服、皮肤、皮内、吸入、肌内、鼻内、目艮内、肺内、静脉内、腹膜内、鼻、眼、口、耳、胃肠外、贴片、皮下、舌下、局部或透皮途径施用。20.根据权利要求17所述的方法，其中所述干扰RNA通过能够表达所述千扰RNA的表达载体的体内表达而被施用。21.—种在需要对其治疗的受治疗者中治疗Syk相关炎性病症的方法，其包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的干扰RNA、以及药学上可接受的载体，所述干扰RNA包括有义核苷酸链，反义核苷酸链，和具有至少是近乎完全的连续互补性的至少19个核苷酸的区域；其中所述反义4连在生理条件下与选自下述组的mRNA的一部分杂交与SEQIDNO:1相应的mRNA,其包括第642、789、791、860、861、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>位核苷酸，以及，与SEQIDNO:1相应的mRNA，其包括第1007、1698或1769位核苷酸，其中所述Syk相关炎性病症由此而治疗。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述受治疗者是人并且所述23.根据权利要求35所述的方法，其进一步包括向受治疗者施用第二种干扰RNA，所述第二种干扰RNA具有19至49个核普酸的长度并且包括有义核苷酸链，反义核苷酸链，和具有至少是近乎完全的连续互补性的至少19个核苷酸的区域；其中所述第二种千扰RNA的反义链在生理条件下与选自下述组的mRNA的第二个部分杂交与SEQIDNO:1相应的mRNA,其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸，以及，与SEQIDNO:1相应的mRNA，其包括第1007、1698或1769位核香酸。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述的有义核苷酸链和所述反义核普酸链通过环状核苷酸链连接。25.根据权利要求23所述的方法，其中所述的组合物经由气雾剂、含服、皮肤、皮内、吸入、肌内、鼻内、目艮内、肺内、静脉内、腹膜内、鼻、眼、口、耳、胃肠外、贴片、皮下、舌下、局部或透皮途径施用。26.根据权利要求23所述的方法，其中所述干扰RNA通过能够表达所述干扰RNA的表达载体的体内表达而被施用。27.—种弱化受治疗者的SykmRNA表达的方法，其包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括有效量的具有19至49个核苷酸长度的单链干扰RNA、以及药学上可接受的载体，分杂交""'与SEQIDNO:1相应的mRNA,其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核香酸，以及，与SEQIDNO:1相应的mRNA，其包括第1007、1698或1769位核苷酸，并且所述干扰RNA含有与相应于SEQIDNO:1的mRNA的杂交部分至少是近乎完全的连续互补的区域，其中所述SykmRNA的表达由此而弱化。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述的组合物经由气雾剂、含服、皮肤、皮内、吸入、肌内、鼻内、目艮内、肺内、静脉内、腹膜内、鼻、目艮、口、耳、胃肠外、贴片、皮下、舌下、局部或透皮途径施用。29.根据权利要求27所述的方法，其中所述千扰RNA通过能够表达所述干扰RNA的表达载体的体内表达施用所述干扰RNA。30.根据权利要求27所述的方法，其中所述干扰RNA是miRNA或siRNA中的至少一种。31.—种在需要对其治疗的受治疗者中治疗眼部炎症或结膜炎的方法，其包括施用一种组合物到受治疗者，所述组合物包括双链siRNA分子，其经由RNA干扰而下调Syk基因的表达，其中所述siRNA分子的每条链独立具有大约19至大约27个核苷酸的长度；以及所述siRNA分子的一条链包括与相应于Syk基因的mRNA大致互补的核苷酸序列，使得所述siRNA分子经由RNA千扰直接切割所述mRNA。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述的组合物经由气雾剂、含服、皮肤、皮内、吸入、肌内、鼻内、目艮内、肺内、静脉内、腹膜内、鼻、眼、口、耳、胃肠外、贴片、皮下、舌下、局部或透皮途径施用。33.根据权利要求31所述的方法，其中所述干扰RNA通过能够表达所述干扰RNA的表达载体的体内表达而被施用。34.根据权利要求31所述的方法，其中所述干扰RNA是miRNA。35.根据权利要求31所述的方法，其中siRNA分子的每条链独立具有大约19至大约25个核普酸的长度，或独立具有大约19至大约21个核苷酸的长度。36.—种组合物，其包括具有19至49个核苷酸长度并且包括相应于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一个的核苷酸序列或其互补序列的千扰RNA;和药学上可接受的载体。37.—种组合物，其包括具有19至49个核苷酸长度并且主要由相应于SEQIDNO:41-47中任一个的核香酸序列或其互补序列组成的干扰RNA;和药学上可4妻受的载体。38.根据权利要求36所迷的组合物，其中所述干扰RNA是shRNA、siRNA或miRNA中的至少一种。39.根据权利要求37所述的组合物，其中所述干扰RNA是shRNA、siRNA或miRNA中的至少一种。全文摘要提供用于抑制脾酪氨酸激酶(Syk)mRNA表达的RNA干扰，具体而言，用于治疗患有Syk相关炎性病症(Syk-relatedinflammatorycondition)或具有形成Syk相关炎性病症的危险的患者，所述Syk相关炎性病症例如变应性结膜炎、眼部炎症(ocularinflammation)、皮炎、鼻炎、哮喘、变态反应或肥大细胞病。文档编号C07H21/04GK101443020SQ200780013188公开日2009年5月27日申请日期2007年4月13日优先权日2006年4月13日发明者丹尼尔·A·葛玛奇,乔恩·E·查特顿,史蒂文·T·米勒,约翰·M·雅尼申请人:爱尔康研究有限公司