以基本不依赖pH的方式结合血清蛋白的氨基酸序列、包括其的化合物、及其用途的制作方法

专利名称：：以基本不依赖pH的方式结合血清蛋白的氨基酸序列、包括其的化合物、及其用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及能够结合血清蛋白诸如血清白蛋白的氨基酸序列；包括或基本由所述氨基酸序列组成的化合物、蛋白质和多肽；编码所述氨基酸序列、蛋白质或多肽的核酸；包括所述氨基酸序列、蛋白质和多肽的组合物，且特别是药物组合物；和所述氨基酸序列、蛋白质和多肽的用途。具体地，本发明涉及以这样的方式结合血清蛋白的氨基酸序列(和包括所述氨基酸序列的化合物)，所述方式是当处于生理pH值时，基本不依赖于pH(如本文中定义)。按照本发明，已经发现所述氨基酸序列(以及包括至少一种所述氨基酸序列的化合物，如本文中进一步所述)与不基本独立于pH的方式结合相同血清蛋白的氨基酸序列相比，在循环中具有有利(即，更长)的半衰期。由本文中进一步的描述，本发明的其他方面、实施方案、优势和应用将变得清晰。
背景技术：
：能够结合人血清蛋白诸如人血清白蛋白的氨基酸及其在多肽构建体中增长治疗相关蛋白质和多肽半衰期的用途是本领域中已知的。例如，WO91/01743、WO01/45746和WO02/076489描述了与血清白蛋白结合的肽部分，所述血清白蛋白能够与治疗蛋白质和其他治疗化合物和实体相融合，从而增长其半衰期。然而，这些肽部分是细菌或合成来源的，其对于用在治疗中是较不优选的。埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的WO04/041865描述了针对血清白蛋白(和特别是针对人血清白蛋白)的纳米体②(Nanobodies),它能够与其他蛋白质(诸如一种或多种针对理想靶标的其他纳米体⑧)相连，从而增长所述蛋白质的半衰期。新生Fc受体(FcRn)，也称为"Brambell受体"，与延长白蛋白在循环中的寿命有关(见Chaudhury等，实验医学杂志(TheJournalofExperimentalMedicine),第3巻，第197号，315-322(2003))。FcRn受体是由可溶性轻链、跨膜区和约50个氨基酸的细胞质尾部组成的完整膜糖蛋白，所述可溶性轻链由P2-微球蛋白组成，所述(32-微球蛋白通过三个细胞外结构域与43kDa链非共价结合。所述细胞质尾部包含参与受体内在化的基于二核苷酸基序的胞吞作用信号。所述a链是蛋白质非经典MHCI家族的成员。f32m与a链的缔合对FcRn的正确折叠和离开内质网定向到内体和细胞表面非常关键。RcRn的整体结构类似于I类分子的整体结构。a-1和oc-2区类似由8个反向平行P链组成的平台，所述反向平行|3链形成以2个反平行a-螺旋为顶端的单P-折叠，所述a-螺旋非常类似于MHCI分子中的肽裂口。由于a-l螺旋的全面重新定位和a-2螺旋由于存在Prol62而在该螺旋中引入断裂导致的C-末端部分弯曲，FcRn螺旋彼此相当靠近，从而阻断肽结合。FcRn的Argl64侧链也阻断肽N-末端与MHC口袋的潜在的相互作用。另外，a-1和a-2螺旋间的盐桥和疏水性相互作用也对沟关闭作出贡献。因此，FcRn不参与抗原呈递，且所述肽裂口是空的。FcRn结合并运输IgG由母体循环穿过胎盘合胞滋养层到达胎儿循环，并保护成人中IgG免于被降解。除体内稳态外，FcRn控制组织中IgG的胞转作用。FcRn位于上皮细胞、内皮细胞和肝细胞中。按照Chaudhury等(见上)，白蛋白结合FcRn从而形成具有IgG的三-分子复合物。白蛋白和IgG非协作地结合于FcRn上的不同位点。人FcRn与琼脂糖-HSA和琼脂糖-hlgG的结合是pH依赖性的，其在pH5.0时达到最大，并在pH7.0-pH8时接近零。关于FcRn以与其结合IgG相同的pH依赖性方式结合白蛋白的观察提示白蛋白与FcRn相互作用并由此受到保护免于被降解的机理与IgG的相同，并通过与FcRn类似的pH-灵敏性相互作用受到介导。利用SPR测量各个HSA结构域结合固定的可溶性hFcRn的能力，Chaudhury显示FcRn和白蛋白通过白蛋白的D-III结构域，以pH-依赖性方式，在与IgG结合位点不同的位点上相互作用(Chaudhury,PhD论文，见http:〃www.andersonlab.com/biosketchCC.htm;Chaudhury等，生物化学(Biochemistry),ASAP文章10.1021/bi052628yS0006-2960(05)02628-0(网页公开日期2006年3月22日)；还参见Chaudhury，生物化学(Biochemistry),2006，第45巻，4983-49%)。本领域中已知的白蛋白结合剂的主要缺点是它们在灵长类动物中有限的体内半衰期。在小鼠中，血清白蛋白的天然半衰期是大约2天，且已经表明不同的血清白蛋白结合剂表现出相似的半衰期，即大约2天。然而，就已在灵长类动物(即，猕猴(iWacaca)属的，诸如恒河猴和食蟹猴(cynomologusmonkeys))中测试的已知的血清白蛋白结合剂来说，它们表现出大约3天的半衰期。参考Domantis有限公司的LucyHolt博士在2006年6月1日的IBC会议"抗体及更多"("AntibodiesandBeyond")期间在2006年6月1日提出的"为了最佳实践修整人结构域抗体"("r"//on'"g/z膽(2"Z)o附m'"j"幼o血:y)的演讲中关于所谓的"AlbudAb's"(AlbudAbTM是英国剑桥Domantis有限公司的商标)的数据。换言之，本领域中已知其在灵长类动物中半衰期数据的血清白蛋白结合剂是有缺陷的，因为它们在灵长类动物中，在体内表现出短血清半衰期。这些半衰期比这些动物中血清白蛋白的天然半衰期明显更短，例如，是其25%。许多治疗剂，特别是生物学剂(即，肽或多肽药物、多核苷酸，等)在体内经历不充分的血清半衰期。这使得以高频率和/或更高剂量施用所述治疗剂，或使用持续不变释放制剂成为必需，以维持治疗功效所需的血清水平。药物的频繁全身性施用与大量有害副作用相关。例如，频繁的，例如每日的，全身性注射对受试者显示出相当大的不适，并引起与施药有关的高危险性感染，且可能需要住院或频繁去医院，特别是在静脉内施用治疗剂时。而且，在长期治疗中，每日静脉内注射还可以引起大量由重复刺破血管引起的组织结疤和血管病理学副作用。已知对于所有频繁的全身性施用治疗剂，如例如，向糖尿病患者施用胰岛素，或向患有多发性硬化的患者施用干扰素药物存在类似的问题。所有这些因素对保健系统引起降低的患者顺应性和增高的成本。因此，存在对增长治疗剂在灵长类动物，特别是在人中的血清半衰期的方法的需要。发明概述本发明通过提供以这样的方式结合血清蛋白的氨基酸序列(和包括所述氨基酸序列的化合物)解决该需要，所述方式是当处于生理pH值时基本不依赖于pH(如本文中所述)。本发明氨基酸序列结合(或在生理条件下能够结合)的血清蛋白具体可以是在天然存在所述血清蛋白的人或动物体内进行再循环或再循环机制的任意血清蛋白。所述血清蛋白的实例对于技术人员应该是清楚的。更具体地，本发明氨基酸结合(或在生理条件下能够结合)的血清蛋白可以选自由下列各项组成的组血清白蛋白、免疫球蛋白诸如IgG和运铁蛋白。按照优选但非限制性实施方案，本发明的氨基酸序列结合血清白蛋白。血清蛋白优选地是人血清蛋白。然而，应该理解按照本发明的一些特定但非限制性方面，本发明的氨基酸序列可以与来自至少另一种哺乳动物物种，诸如小鼠、大鼠、兔、狗或灵长类动物的相应(即直向同源)血清蛋白交叉反应。具体地，按照这些方面，本发明的氨基酸序列可以与来自至少另一种灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白交叉反应，如本文中进一步所述。"基本不依赖于pH的"结合在本文中通常意指在动物或人体细胞内存在的pH值下氨基酸序列关于血清蛋白(诸如血清白蛋白)的缔合常数(KA)是该氨基酸序列在所述细胞外存在的该pH值下关于相同血清蛋白缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%，更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%,诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%，诸如超过110%,超过120°/。或甚至130%或更高，或甚至超过150%,或甚至超过200%)。备选地，"基本不依赖于pH的"结合在本文中通常意指在动物或人体细胞内存在的pH值(如例如本文中进一步所述，例如pH5.5左右，例如5.3-5.7)下氨基酸序列关于血清蛋白(诸如血清白蛋白)的k。ff速率(通过Biacore测量-见例如实验2)是该氨基酸序列在所述细胞外存在的pH值，例如pH7.2-7.4下关于少5%,诸如至少10%,优选地至少25%，更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%，诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高，或甚至超过150%，或甚至超过200%)。"动物或人体细胞内存在的pH值"意指可能在细胞内部，和具体地在参与血清蛋白再循环的细胞内部存在的pH值。具体地，"动物或人体细胞内存在的pH值"意指参与血清蛋白再循环(例如，作为胞饮作用、胞吞作用、胞转作用，胞吐作用和吞噬作用或类似机理的吸收或内在化进入所述细胞)的(亚)细胞区室或小泡，诸如内体、溶酶体或胞饮泡内部存在的pH值。例如，所述细胞可以是包含或表达FcRn受体的细胞，特别是当本发明的氨基酸序列针对与FcRn结合的血清蛋白时。如从本文进一步的说明中应该变得清楚地，所述细胞参与能够与FcRn结合的某些血清蛋白，诸如血清白蛋白和免疫球蛋白诸如IgG的再循环。备选地，例如且不限于，所述细胞可以是包括或表达运铁蛋白-受体的细胞，特别是当本发明的氨基酸序列针对运铁蛋白时。"所述细胞外存在的pH值"通常意指在存在所述细胞的人或动物体内，但在所述细胞外，诸如在细胞表面上或在所述细胞紧邻的周围环境或在其附近中可能存在的pH值。具体地，"所述细胞外存在的pH值"通常意指在存在所述细胞的人或动物体环境中，诸如血液(流)中或淋巴系统中可能存在的pH值。具体地，所述氨基酸序列是这样的，即它们在低于6.7的至少一种生理pH值下，以这样的缔合常数(KA)结合血清蛋白(诸如血清白蛋白)，所述这样的缔合常数(KA)是该氨基酸序列在高于7.0的至少一种生理pH值下关于相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%,更优选地至少50%，甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80°/。或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%，超过120%或甚至130%或更高)。"生理pH值"通常意指在人或动物体内天然存在的(即，健康动物或人或患有疾病或病症的动物或人的)任何pH值。所述生理pH值对于技术人员应该是清楚的。技术人员还应该清楚，不同的部分、组织、体液(诸如血液或淋巴液)、细胞、亚细胞区室等中可以存在不同的生理pH值。更具体地，所述氨基酸序列是这样的，即它们在6.5-5.5范围内的pH值(诸如6.5,6.4,6.3,6.2,6.1,6.0，5.9,5.8,5.7或5.6)下，以这样的缔合常数(KA)结合血清蛋白(诸如血清白蛋白)，所述这样的缔合常数(KA)是该氨基酸序列在7.2-7.4范围内的pH值(诸如7.2,7.3或7.4)下关于相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5。/。，诸如至少10%,优选地至少25%,更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)。在另一个实施方案中，本发明的氨基酸序列是这样的，即它们在5.5-4.5范围内的pH值(诸如5.5，5.4,5.3，5.2,5.1，5.0，4.9,4.8，4.7或4.6)下，以这样的缔合常数(KA)结合血清蛋白(诸如血清白蛋白)，所述这样的缔合常数(KA)是该氨基酸序列在6.8-7.4范围内的pH值(诸如6.8,6.9,7.0,7.1,7.2,7.3或7.4)下关于相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%,更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)。在另一个实施方案中，本发明的氨基酸序列是这样的，即它们在5.5-4.5范围内的pH值(诸如5.5,5.4,5.3,5.2,5.1,5.0，4.9,4.8，4.7或4.6)下，以这样的0ff-速率(k。ff速率)结合血清蛋白(诸如血清白蛋白)，所述这样的off-速率(k。ff速率)是该氨基酸序列在6.8-7.4范围内的pH值(诸如6.8,6.9,7.0,7.1,7.2,7.3或7,4)下关于相同血清蛋白的k。ff速率的至少5%，诸如至少10%,优选地至少25%，更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%，超过120%，超过150%，超过170%，超过200%或甚至250%或更高)。在另一个实施方案中，本发明的氨基酸序列是这样的，即所述氨基酸序列在5.5-4.5范围内的pH值(诸如5.5，5.4,5.3,5.2，5.1，5.0,4.9,4.8,4,7或4.6)下，以这样的off-速率(k。ff速率)结合血清蛋白(诸如血清白蛋白)，所述这样的off-速率(k。ff速率)是该氨基酸序列在6.8-7.4范围内的pH值(诸如6.8,6.9，7.0，7.1,7.2,7.3或7.4)下关于相同血清蛋白的U速率的至少50%或更少(即，50-150%)。更优选地，所述氨基酸序列(例如，本发明的多价纳米体，例如单价结合血清白蛋白，例如人血清白蛋白，和单价或多价结合靶蛋白的本发明纳米体)在6.8-7.4范围内的pH值(诸如6.8，6.9,7.0，7.1，7.2，7.3或7.4)下的k。ff速率是该氨基酸序列在5:5-4.5范围内的pH值(诸如5.5，5.4,5.3,5.2,5.1，5.0,4.9，4.8,4.7或4.6)下的速率的约40%。更优选地，所述氨基酸序列(例如，本发明的多价纳米体，例如单价结合血清白蛋白，例如人血清白蛋白，和单价或多价结合靶蛋白的本发明纳米体)在6.8-7.4范围内的pH值(诸如6.8，6.9,7.0,7.1，7.2，7.3或7.4)下的koff速率是该氨基酸序列在5.5-4.5范围内的pH值(诸如5.5,5.4,5.3,5.2,5.1，5.0,4.9,4.8,4.7或4.6)下的k。ff速率的约30%，更优选地20%,更优选地10%。如技术人员所清楚地，缔合常数可以是实际或表观缔合常数。用于确定在特定pH值下缔合常数的方法对技术人员应该是清楚的，且例如包括本文中提到的技术。任选地，技术人员还应该清楚，可以基于(实际或表观)解离常数，通过关系[KA-1/KD]，计算(实际或表观)缔合常数。为了该目的，用于确定在特定pH值下的解离常数的方法对技术人员应该是清楚的，且例如包括本文中提到的技术。亲和性表示分子相互作用的强度或稳定性。通常通过Kd，或解离常数表示亲和性，其具有单位摩尔/升，简单表示为M。还可以将亲和性表示为缔合常数，Ka，其等于1/Kd，且具有单位(摩尔/升)"，简单表示为M"。贯穿本文献，我们将通过其Kd值表示分子相互作用的稳定性。但是应该理解，由于关系Ka-l/Kd，通过其Kd值指定分子相互作用的强度，也自动指定Ka值。Kd也表征热力学意义中的分子相互作用的强度，因为它通过众所周知的关系DG-RT.ln(Kd)(等价地，DG--RT.ln(Ka))与结合自由能相关，其中R等于气体常数，T等于绝对温度且ln表示自然对数。有意义的生物学复合物的Kd典型地在10—1()M(O.lnM)-10—5M(10000nM)的范围内。相互作用越强，其Kd越低。还可以将Kd表示为复合物解离率常数(表示为k。ff)与其结合速率(表示为koJ的比。换言之，Kd-kofi/k。n。0ff-速率k。ff具有单位S"(其中S是秒的SI单位符号)。on-速率k。n具有单位M-V1。on-速率可以在1(^M"s"一约1(TM"s"之间变化，接近双分子相互作用的扩散-限制性结合率常数。off-速率通过关系t1/2=ln(2)/koff，与给定分子相互作用的半衰期有关。off-速率可以在l(T6s"(接近具有数日的t1/2的不可逆复合物)一Is"(t1/2=0.69s)的范围内变化。两分子之间分子相互作用的亲和性可以通过不同的技术，诸如众所周知的表面等离振子共振(SPR)生物传感器技术(例如，Ober等，国际免疫学(Intern.Immunology),13，1551-1559,2001使用了Biacore3000SPR生物传感器研究不同pH条件下白蛋白与FcRn的亲和性)测量，其中将一个分子固定在生物传感器芯片上，并在流动条件下使另一个分子经过该固定的分子，从而产生kon、koff测量值和由此产生Kd(或Ka)值。应该注意到，如果测量过程以某种方式影响所示分子固有结合亲和性，例如通过与包被一个分子的生物传感器相关的矫作物(artifact)影响，则测量的Kd对应于表观Kd。而且，如果一个分子包含多于一个关于另一个分子的识别位点，则可以测量表观Kd。在所述情形中，测量的亲和性可能受到两分子相互作用亲和力的影响。例如，关于固定的人FcRn的SPR实验对人IgG显示出比FcRn和固定的IgG相互作用亲和性显著更高的亲和性(亲和力)，相似于FcRn-IgG相互作用的2:l的化学定量关系(Sanchez等，生物化学(Biochemistry),38,9471-9476,1999)。可以用于评估亲和性的另一种方法是Priguet等的2-步ELISA(酶联免疫吸附测定)程序(免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)，77,305-19,1985)。该方法创建溶液相结合平衡测量法，并避免将所述分子之一吸附到支持物诸如塑料上可能涉及的矫作物。例如，Nguyen等(蛋白质工程设计和选择(ProteinEngDesSel),19,291-297,2006)近期利用Friguet测定测量了Fab构建体对白蛋白的亲和性。然而，精确测量Kd可能需要大量劳动，并且作为结果，通常确定表观Kd值来评估两分子的结合强度。应该注意到只要以一致的方式进行所有测量(例如，保持测定条件不变)，则表观Kd测量值可以用作真实Kd的近似值，且因此在本文件中，应该认为Kd和表观Kd是同等重要或相关的。最后，应该注意到在许多情形中，有经验的科学家判断相对于一些参考分子来确定结合亲和性是方便的。例如，为了评估分子A和B之间的结合强度，人们可以例如使用参考分子C，已知所述参考分子C结合B并由荧光团或发色团或其他化学部分，诸如用于在ELISA或FACS中简单检测(荧光活化细胞分类)或其他形式(关于荧光检测的荧光团、关于光吸收检测的发色团、关于链霉抗生物素-介导的ELISA检测)适当标记。典型地，将所述参考分子C保持为固定浓度，且B的浓度由于给定的B浓度或量而变化。作为结果，对应于A浓度获得IC50值，在所述浓度时，在缺乏A的条件下，对C测量的信号减半。倘若Kd#,，即参考分子的Kd，以及参考分子的总浓度c"是已知的，则可以由下列公式Kd=IC50/(l+c参考/Kd参考)获得关于相互作用A-B的表观Kd。注意，如果c参考--Kd参考，则Kd-IC50。倘若人们以一致的方式(例如，保持c参考固定)进行IC50测量，则可以通过IC50评估分子相互作用的强度或稳定性，并且贯穿本文将该测量判定为等价于Kd或表观Kd。按照本发明，发现以基本不依赖于pH的方式结合血清蛋白的氨基酸序列(以及包括至少一种所述氨基酸序列的化合物，如本文中进一步所述)，在循环中具有比以不基本独立于pH的方式结合于所述血清蛋白的氨基酸序列有利(即更长)的半衰期。在不受限于任何机制或解释的条件下，推定pH的独立性应该基本提供最大量的氨基酸序列被再循环，这归因于这样的事实，即在再循环过程中的pH变化过程中，所述氨基酸序列保持其对血清蛋白的结合活性。如果氨基酸序列与血清蛋白的相互作用易受pH的影响，则这将导致减少或损失的相互作用，并且因此，所述氨基酸序列会与再循环血清蛋白分离，并在内体和溶酶体区室中成为被降解的目标。具体地，本发明的氨基酸序列(以及包括所述氨基酸序列的化合物，如本文中定义)可以是这样的，即它们以这样的方式与血清蛋白(诸如血清白蛋白)结合或另外缔合，所迷方式是当所述氨基酸序列与灵长类动物中的所述血清蛋白分子(诸如血清白蛋白)结合或另外缔合时，它表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是在所述灵长类动物中血清蛋白诸如血清白蛋白天然半衰期的至少约50%(诸如约50%-70%)，优选地至少60%(诸如约60%-80%)或优选地至少70%(诸如约70%-90%),更优选地至少约80%(诸如约80%-90%)或优选地至少约90%。例如，本发明的氨基酸序列可以以这样的方式与人血清蛋白诸如血清白蛋白结合或另外缔合，所述方式是当所述氨基酸序列与人血清蛋白分子诸如血清白蛋白结合或另外缔合时，所述氨基酸序列在人中表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述血清蛋白(诸如人血清白蛋白)天然半衰期的至少约50%(诸如约50%-70%),优选地至少60%(诸如约60%-80%)或优选地至少70%(诸如约70%-90%),更优选地至少约80%(诸如约80%-90%)或优选地至少约90%。而且，优选地，本发明的氨基酸序列以如本文中定义的解离常数(KD)和/或以结合亲和性(KA)，结合所述血清蛋白(诸如人血清白蛋白)。在人中，血清白蛋白的半衰期是约19天(PetersT(1996)关于清蛋白的一切(AllAboutAlbumin).学术出版社，圣地亚哥)。灵长类动物中的这种体内半衰期使本发明的氨基酸序列成为延长与之附着的治疗剂血清半衰期的理想候选者。组合的按照本发明的氨基酸序列和治疗剂的长血清半衰期又容许降低施药频率和/或减少施药量，从而对待治疗的患者引起显著的益处。因此，本发明还涉及本发明的化合物，所述化合物包括氨基酸序列，并在人中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在人中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更长或基本相同。在一个特殊的方面，本发明的氨基酸序列可以是这样的，即它们与来自至少一种其他灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白交叉反应，且具体地，与来自至少一种这样的灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白交叉反应，所述这样的灵长类动物物种选自由下列各项组成的组来自弥猴(M^ca)属的猴(诸如，和具体地，食蟹猴(食蟹猴(M^ac^/osdc^an;s))和/或恒河猴(恒河猴(Macacamw/a"a)))和狒狒(豚尾狒狒wm'rn^))。优选地，所述交叉反应的氨基酸序列还是这样的，即它们在所述灵长类动物中表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述灵长类动物中相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)天然半衰期的至少约50%(诸如约50%-70%)，优选地至少60%(诸如约60°/。-80%)或优选地至少70%(诸如约70%-90%)，更优选地至少约80%(诸如约80%-90%)或优选地至少约90%。本发明的所述氨基酸序列还优选地以如本文中所定义的解离常数(KD)和/或结合亲和性(KA)，结合来自所述灵长类动物的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)。本发明还涉及本发明的化合物，所述化合物包括至少一种本发明的氨基酸序列，并在人和/或所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的本发明氨基酸序列分别在人和/或所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更长或基本相同。按照本发明的另一个优选但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列是这样的，即它们以这样的方式与人血清蛋白(诸如人血清白蛋白)结合或另外缔合，所述方式是当氨基酸序列与所述血清蛋白结合或另外缔合时，所述氨基酸在人中表现出的血清半衰期是至少约9天(诸如约9-14天)，优选地至少约10天(诸如约10-15天)或至少11天(诸如约11-16天)，更优选地至少约12天(诸如约12-18天或更长)或超过14天(诸如约14-19天)。本发明的所述氨基酸序列还优选地以如本文中所定义的解离常数(KD)和/或结合亲和性(KA)，结合所述人血清蛋白(诸如人血清白蛋白)。本发明还涉及本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在人中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在人中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更长或基本相同。按照本发明的一个特殊但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列是这样的，即它们与来自至少一种其他灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)交叉反应，且具体地，与来自至少一种这样的灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)交叉反应，所述这样的灵长类动物物种选自由下列各项组成的组来自猕猴属的猴(诸如恒河猴或食蟹猴)和狒狒。优选地，所述交叉反应的氨基酸序列在所述灵长类动物中表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述灵长类动物中相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)天然半衰期的至少约50%(诸如约50%-70%)，优选地至少60%(诸如约60%-80%)或优选地至少70%(诸如约70%-90%)，更优选地至少约80%(诸如约80%-90%)或优选地至少约90%。本发明的所述氨基酸序列还优选地以如本文中所定义的解离常数(Kd)和/或结合亲和性(KA)，结合来自所述灵长类动物的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)。本发明还涉及本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在人和/或所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列分别在人和/或所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更长或基本相同。在另一个特殊但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列是这样的，即它们与来自至少一种灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)结合或另外缔合，且当所述相应(即直向同源)血清蛋白在灵长类动物中半衰期是至少约10天，诸如10-15天，例如约11-13天(通过举例，在恒河猴中，预期的血清白蛋白半衰期是约11-13天，具体地约11-12天)时，所述氨基酸序列在所述灵长类动物中具有的血清半衰期为至少约5天(诸如约5-9天)，优选地至少约6天(诸如约6-10天)或至少7天(诸如约7-ll天)，更优选地至少约8天(诸如8-12天)或超过9天(诸如约9-12天或更长)。本发明的所述氨基酸序列还优选地是这样的，即它们以如本文中所定义的解离常数(Kd)和/或结合亲和性(KA)，结合来所述灵长类动物物种的血清白蛋白。在一个特别优选的方面，所述氨基酸序列与人血清白蛋白交叉反应，且更优选地，以如本文中所定义的解离常数(KD)和/或结合亲和性(KA)结合相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)。本发明还涉及本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更长或基本相同。在另一个特殊但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列还可以是这样的，即它们与来自至少一种灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)结合或另外缔合，且当所述相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)在所述灵长类动物中半衰期是至少约13天，诸如13-18天(通过举例，在狒狒中，血清白蛋白的半衰期是至少约13天，且通常是约16-18天)时，所述氨基酸序列在所述灵长类动物中具有至少约7天(诸如约7-13天)，优选地至少约8天(诸如约8-15天)或至少9天(诸如约9-16天)，更优选地至少约10天(诸如约10-16天或更长)或超过13天(诸如约13-18天)的血清半衰期。本发明的所述氨基酸序列还优选地是这样的，即它们以如本文中所定义的解离常数(KD)和/或结合亲和性(KA)，结合来自所述灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)。本发明还涉及本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更长或基本相同。在另一个特殊但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列可以是这样的，即它们a)以这样的方式与人血清蛋白(诸如血清白蛋白)结合或另外缔合，所述方式是当氨基酸序列与所述人血清蛋白结合或另外缔合时，所述氨基酸在人中表现出的血清半衰期是至少约9天(诸如约9-14天)，优选地至少约10天(诸如约10-15天)或至少11天(诸如约11-16天)，更优选地至少约12天(诸如约12-18天或更长)或超过14天(诸如约14-19天)；和b)与来自至少一种选自弥猴属物种的灵长类动物的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)(且具体地，与来自食蟹猴和/或来自恒河猴的相应(即直向同源)血清蛋白)交叉反应；和c)在所述灵长类动物中具有的半衰期为至少约5天(诸如约5-9天)，优选地至少约6天(诸如约6-10天)或至少7天(诸如约7-11天)，更优选地至少约8天(诸如约8-12天)或超过9天(诸如约9-12天或更长)。优选地，所述氨基酸序列以如本文中所定义的解离常数(Kd)和/或结合亲和性(KA)结合人蛋白质(诸如人血清白蛋白)和/或来自所述灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)。本发明还涉及本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在人和/或所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列分别在人和/或所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更长或基本相同。在另一个特殊但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列可以是这样的，即它们a)以这样的方式与人血清蛋白(诸如血清白蛋白)结合或另外缔合，所述方式是当氨基酸序列与所述人血清蛋白结合或另外缔合时，所述氨基酸在人中表现出的血清半衰期是至少约9天(诸如约9-14天)，优选地至少约10天(诸如约10-15天)或至少11天(诸如约11-16天)，更优选地至少约12天(诸如约12-18天或更长)或超过14天(诸如约14-19天)；和b)与来自狒狒的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)交叉反应；和c)在狒狒中具有的半衰期为至少约7天(诸如约7-13天)，优选地至少约8天(诸如约8-15天)或至少9天(诸如约9-16天)，更优选地至少约10天(诸如约10-16天或更长)或超过13天(诸如约13-18天)。优选地，所述氨基酸序列以如本文中所定义的解离常数(Kd)和/或结合亲和性(KA)结合人血清蛋白(诸如人血清白蛋白)和/或来自狒狒的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清白蛋白)。本发明还涉及本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在人和/或所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列分别在人和/或所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更长或基本相同。优选地，而且，包括至少一种本发明的氨基酸序列的化合物、构建体、融合蛋白等的半衰期优选地是其中存在(即，在相同的灵长类动物中)的本发明氨基酸序列半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%过更长或基本相同。在本发明特殊但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸的化合物)针对与FcRn受体结合或能够FcRn受体结合的血清蛋白(例如，作为所述血清蛋白质再循环的一部分)，并且是这样的，即它们能够以这样的方式与所述血清蛋白结合或另外缔合，所述方式是当氨基酸序列或多肽构建体与所述血清蛋白分子结合或另外缔合时，不(显著)降低或抑制所述血清蛋白分子与FcRn的结合。能够与FcRn结合的一些特殊但非限制性血清蛋白包括血清白蛋白和免疫球蛋白，诸如，具体地是IgG。在另一个实施方案中，本发明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)可以这样的方式与血清蛋白(诸如血清白蛋白)结合或另外缔合，所述方式是当氨基酸序列或多肽构建体与血清蛋白分子结合或另外缔合时，不(显著)缩短所述血清蛋白分子的半衰期。在另一个实施方案中，本发明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)能够结合血清蛋白上不参与所述血清蛋白与FcRn结合的氨基酸残基。例如，当所述血清蛋白是血清白蛋白时，本发明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)能够结合不形成血清白蛋白结构域III部分的氨基酸残基。在本发明的一个实施方案中，所述氨基酸序列是免疫球蛋白序列或其片段，更具体地，免疫球蛋白可变区序列或其片段，例如，VH-、VL-或VHH-序列或其片段。本发明的氨基酸序列可以是结构域抗体，"dAb"，单结构域抗体或纳米体，或其中任一项的片段。本发明的氨基酸序列可以是完全人的、人源化的、骆驼的、骆驼化的人的序列或人源化的骆驼的序列，且更具体地，可以包括4个框架区(分别地FR1-FR4)和3个互补决定区(分别地CDR1-CDR3)。更具体地，按照本发明的氨基酸序列是(单)结构域抗体或纳米体。在其他方面，本发明涉及用于生成本发明氨基酸序列的方法，和具体地用于生成针对理想或目的血清蛋白(诸如人血清白蛋白)的本发明氨基酸序列的方法。在一方面，所述方法至少包括下列步骤a)提供氨基酸序列组、集合或文库；b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下，结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列；禾nc)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在低于6.7的至少一种生理pH值，诸如在6.5-5.5范围内的pH值下，以这样的缔合常数(KA)，结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列，所述缔合常数(KA)是该氨基酸序列在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下与相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5%，诸如至少10%，优选地至少25%，更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%,诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%，诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)；禾口d)分离在低于6.7的至少一种生理pH值，诸如在6.5-5.5范围内的pH值下，以这样的缔合常数(KA)结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列，所述缔合常数(KA)是该氨基酸序列在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下与相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%,更优选地至少50%，甚至更优选地至少60%，诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%，诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)。具体地，所述方法可以包括下列步骤a)提供针对目的或理想血清蛋白的氨基酸序列组、集合或文库；和b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下，结合于理想或预期血清蛋白的氨基酸序列；和c)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在低于6.7的至少一种生理pH值，诸如在6.5-5.5范围内的pH值下，以这样的缔合常数(KA)，结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列，所述缔合常数(KA)是该氨基酸序列在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下与相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%，更优选地至少50%，甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%，超过120%或甚至130°/。或更高)；禾口d)分离在低于6.7的至少一种生理pH值，诸如在6.5-5.5范围内的pH值下，以这样的缔合常数(Ka)结合于理想或预期血清蛋白的氨基酸序列，所述缔合常数(KA)是该氨基酸序列在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下与相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%，更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%，诸如甚至更优选地至少70%,诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)。更具体地，所述方法可以包括下列步骤a)提供针对预期或理想血清蛋白的氨基酸序列组、集合或文库；b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下，结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列；禾口c)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在低于6.7的至少一种生理pH值，诸如在6.5-5.5范围内的pH值下，以这样的缔合常数(KA)，结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列，所述缔合常数(KA)是该氨基酸序列在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下与相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%,更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%,诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)；禾口d)分离在低于6.7的至少一种生理pH值，诸如在6.5-5.5范围内的pH值下，以这样的缔合常数(KA)结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列，所述缔合常数(KA)是该氨基酸序列在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下与相同血清蛋白缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%,更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%,诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%，诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)。通常，在这些方法中，所述步骤b)即筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在高于7.0的至少一种生理pH值(诸如在7.2-7.4范围内的pH值)下，结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列，是通过在高于7.0的生理pH值(诸如在7.2-7.4范围内的pH值)下筛选而进行的。类似地，步骤C)即筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在低于6.7的至少一种生理pH值(诸如在6.5-5.5范围内的pH值)下，结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列，是在低于6.7的生理pH值(诸如在6.5-5.5范围内的pH值)下筛选而进行的。如技术人员应该清楚地，还可以将所述筛选步骤作为选择步骤进行。例如，已知抗体-抗原相互作用通常易受缓冲液条件、pH和离子强度改变的影响，但最通常地，没有对那些改变的评分或研究，并且不经常使用它们设计药物治疗剂，因为变化总体上是不可预知的。例如通过针对灵敏相互作用的存在筛选结合蛋白的所有组成部分，发现了具有理想结合特征的结合蛋白，其中所述筛选是例如通过在两种代表性条件(例如在pH7.4和在pH6.0下)，和确定的相对结合强度下进行结合测定而实现的。可以利用任何合适的结合测试包括ELISA、基于BIAcore的方法、斯卡查德分析等，测量所述相对相互作用强度。所述测试将揭示哪种结合蛋白表现出易受所选参数(pH)影响的相互作用和影响程度。备选地，通过例如从噬菌体、核糖体、酵母或细胞文库中，利用优选富集理想灵敏性的选择中的条件，选择结合蛋白的所有组成部分，从而发现了具有理想结合特征的结合蛋白。以基本pH(例如，pH7.4)培养噬菌体抗体并利用较低pH(例如，6.0)大量清洗结合的噬菌体粒子，以及随后进行酸洗脱(pH2.0)，应该富集基本不依赖于pH而识别抗原的那些噬菌体抗体。还可以从设计者蛋白质文库中分离具有理想结合特征的结合蛋白，在所述蛋白质文库中将推定的结合位点改造为不包含某些"灵敏的"相互作用中优选的氨基酸残基或序列，例如关于pH-灵敏性的组氨酸。例如，已知FcRn和IgG的相互作用非常易受pH的影响，当pH从pH6.7升至7.0时，相互作用降低2个数量级。亲和性转变的主要机制基础是结合位点的组氨酸含量组氨酸残基的咪唑侧改变通常在pH6.0-7.0的范围内加质子。预测在推定的结合位点中明显排除组氨酸(例如，利用优选消除文库中该残基的寡核苷酸，如使用三核苷酸和本领域中已知的，例如Knappik等，分子生物学杂志(J.MoLBiol)2000，巻296:57-86)以较高频率产生基本不依赖于pH结合的氨基酸序列。因此，术语"筛选"，用于本说明书中时，可以包括选择、筛选或选择和/或筛选技术的任何合适组合。通常，可以作为单独或独立的筛选步骤，或作为单独筛选过程的一部分执行步骤b)和C)。当作为单独筛选过程的一部分执行步骤b)和C)时，所述筛选过程可以例如包括下列步骤i)在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如7.2-7.4范围内的pH值下，使氨基酸序列组、集合或文库与血清蛋白相接触；ii)除去在步骤O中不结合的氨基酸序列(即，不以理想缔合常数结合血清蛋白的那些氨基酸序列，如本文中所述)；以便保留与血清蛋白结合的氨基酸序列组或集合；iii)使所述氨基酸序列组或集合经历低于6.7的至少一种生理pH值，诸如在6.5-5.5范围内的pH，这样在所述pH值下，以理想缔合常数结合血清蛋白的氨基酸序列保持与血清蛋白的结合，且同样地，在所述pH值下，不以理想缔合常数结合血清蛋白的氨基酸序列不保持与血清蛋白的结合.iv)除去步骤iii)中不结合的氨基酸序列(即，在所述pH值下，不以理想缔合常数结合血清蛋白的那些氨基酸序列，如本文中所述)；和任选地，v)收集在步骤iii)中保持与血清蛋白结合的氨基酸序列。以上方法中使用的氨基酸序列组、集合或文库可以是任何合适的氨基酸序列组、集合或文库。例如，所述氨基酸序列组、集合或文库可以是免疫球蛋白序列或免疫球蛋白序列片段的组、集合或文库，免疫球蛋白可变结构域序列或其片段的组、集合或文库，例如VH-、VL-或VHH-序列或其片段的组、集合或文库。在一个特殊但非限制性方面，所述氨基酸序列组、集合或文库是结构域抗体、能被用作结构域抗体的蛋白质、"dAb"、单结构域抗体、能被用作单结构域抗体的蛋白质、或纳米体(或以上任一项的合适片段)的组、集合或文库。所述氨基酸序列组、集合或文库可以是首次用于实验的组、集合或文库；可以是合成的或半-合成的氨基酸序列组、集合或文库(例如，不限于，通过亲和性成熟产生的氨基酸序列组、集合或文库)，或可以是免疫组、集合或文库。在一个实施方案中，所述组、集合或文库是通过用抗原适当免疫哺乳动物(诸如兔、大鼠、小鼠、猪或狗、或骆驼)(这样所述哺乳动物形成针对所述抗原的抗体)而获得的免疫组、集合或文库，并且然后从获自所述哺乳动物的生物学样品(诸如血液或B-细胞样品)出发，产生免疫球蛋白序列组、集合或文库。例如由本文中引用的现有技术，技术人员应该清楚用于获得和筛选所述免疫组、集合或文库的方法和技术。在一个优选的方法中，免疫球蛋白序列组、集合或文库获自受到目的血清蛋白(例如，血清白蛋白)适当免疫的哺乳动物。在另一个优选的方面，所述组、集合或文库是获自骆驼的VHH序列的组、集合或文库，和具体地是获自受到目的血清蛋白(例如，血清白蛋白)适当免疫的骆驼的VHH序列的免疫组、集合或文库。所述组、集合或文库可以包括任何合适数量的氨基酸序列，诸如1、2、3或约5、10、50、100、500、1000、5000、104，105，106，107,108或更多序列。以上氨基酸序列组、集合或文库可以包括一种或多种在选择和/或筛选过程前未知的序列，例如如果这些序列是一种或多种给定氨基酸序列的随机化步骤(例如通过易错PCR或其他方法)的结果。而且，可以通过理性或半-经验的方法，诸如计算机建模技术或生物静力学或数据-发掘技术，获得或定义以上氨基酸序列组、集合或文库中的一种或多种或全部氨基酸序列，其中可以将氨基酸序列定义或提议为被预期或认为赋有某些特性，诸如增高的稳定性、pH最适度、蛋白酶灵敏性或其他特性或其组合。在所述组、集合或文库中(和/或在本文中所述的筛选步骤中)，所述组、集合或文库中存在的氨基酸序列还可以适当地出现在合适的宿主或宿主细胞上，例如在噬菌体粒子、核糖体、细菌、酵母细胞等上。此外，利用由本文中引用的现有技术，技术人员应该清楚合适的宿主或宿主细胞、用于在所述宿主或宿主细胞上展示氨基酸序列的合适技术、和用于筛选所述宿主或宿主细胞上展示的氨塞酸序列组、集合或文库的合适技术。当在合适的组织或宿主细胞上展示氨基酸序列时，还可能(和习惯)首先从所述宿主或宿主细胞分离编码理想氨基酸序列的核苷酸序列，并且然后通过在合适的宿主生物体中适当表达所述核苷酸序列获得理想的氨基酸序列。此外，如技术人员应该清楚地，这可以以任何本身已知的合适方式执行。通过非-限制性实例的方法，所述组、集合或文库可以包括1、2或多种彼此不同(例如，以设计的点突变或以随机化位置)的氨基酸序列，包括源自天然多样化氨基酸序列(例如免疫文库)的不同组，或任何其他不同氨基酸序列来源(如例如Hoogenboom等，自然生物技术(NatBiotechnol)23:1105，2005和Binz等，自然生物技术(NatBiotechnol)2005,23:1247中所述)的多氨基酸序列。所述氨基酸序列组、集合或文库可以展示在噬菌体粒子、核糖体、细菌、酵母细胞、哺乳动物细胞表面上，并且在这些载体中与编码所述氨基酸序列的核苷酸序列相连。这使得所述组、集合或文库可以按照选择程序分离本发明的理想氨基酸序列。用于生成本发明氨基酸序列的方法还可以包括下列步骤a)提供关于在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列的氨基酸序列组、集合或文库；和b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在低于6.7的至少一种生理pH值，诸如在6.5-5.5范围内的pH值下，以这样的缔合常数(KA)结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列，所述缔合常数(KA)是该氨基酸序列在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH下与相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%，优选地至少25%,更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%,诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)；和c)分离在低于6.7的至少一种生理pH值，诸如在6.5-5.5范围内的pH值下，以这样的缔合常数(KA)结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列，所述缔合常数(KA)是该氨基酸序列在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下与相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%,更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80%或90°/。或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)。具体地，所述方法可以包括下列步骤a)提供关于在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下，以105-1012升/摩尔或更高，和优选地107-1012升/摩尔或更高或更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(Ka)，结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列的氨基酸序列组、集合或文库；b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在低于6.7的至少一种生理pH值，诸如在6.5-5.5范围内的pH值下，以这样的缔合常数(ka)结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列，所述缔合常数(KA)是该氨基酸序列在至少一种高于7.0的生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH下与相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%，更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%,诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)；和c)分离在低于6.7的至少一种生理pH值，诸如在6.5-5.5范围内的pH值下，以这样的缔合常数(KA)结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列，所述缔合常数(KA)是该氨基酸序列在高于7.0的至少一种生理pH值，诸如在7.2-7.4范围内的pH值下与相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%，更优选地至少50%，甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)。用于生成本发明氨基酸序列的方法还可以包括下列步骤a)提供关于在处于6.5-7.5范围内的至少一种生理pH值下，诸如pH7或在7.2-7.4范围内，结合理想或目的血清蛋白的氨基酸序列的氨基酸序列组、集合或文库；和b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在处于5-6范围内的至少一种生理pH值下，诸如pH5.5或在5.3-5.7的范围内，以这样的off-速率与理想或目的血清蛋白的氨基酸序列相互作用的氨基酸序列，所述off-速率是该氨基酸序列在处于5-6之间的至少一种生理pH值下，诸如例如pH5.5或在5.3-5.7范围内关于相同血清蛋白的off-速率的5-200%,诸如10-190%,例如50-150%，例如70-130%;禾口C)分离所述具有以上0ff-速率特征的氨基酸序列；和任选地，d)体内评估所述氨基酸序列的半衰期。用于生成本发明氨基酸序列的方法中，所述氨基酸序列在不同pH条件下的off-速率在50-150%(更优选地80-120%)，即基本不依赖于pH。在一个实施方案中，本发明涉及包括至少一种本发明氨基酸序列的化合物(本文中也称为"本发明的化合物")，该化合物还可以任选地至少包括一个治疗部分，其包括选自由下列各项组成的组的至少一个治疗部分小分子、多核苷酸、多肽或肽。本发明的化合物适合于以这样的频率，或，备选地，以这样的间隔向灵长类动物施用，所述频率对应于所述灵长类动物中血清蛋白(诸如血清白蛋白)天然半衰期的低于50%(诸如约50%-70%),优选地至少60%(诸如约60%-80%)或优选地至少70%(诸如约70%-90%),更优选地至少约80%(诸如约80°/。-90%)或优选地至少约90%，所述间隔是至少4天(诸如约4-12天或更长)，优选地至少7天(诸如约7-15天或更长)，更优选地至少9天(诸如约9-17天或更长)，诸如至少15天(诸如约15-19天或更长，特别是为了施用于人)或至少17天(诸如约17-19天或更长，特别是为了施用于人)；其中进行所述施用具体是为了维持所述化合物在用该化合物治疗的受试者血清中的理想水平(如技术人员应该清楚地，这特别依赖于使用的化合物和/或待治疗的疾病)。临床医生或医师应该能够选择理想的血清水平和选择向待治疗受试者施用的剂量和/或量，从而在以本文中提到的频率施用本发明的化合物时，在所述受试者中获得和/或维持理想的血清水平。例如，所述剂量可以在理想血清水平的1倍-10倍间变化，诸如理想血清水平的2倍-4倍(其中，以本身已知的方式重新计算理想血清水平，从而提供待施用的相应剂量)。还可以将本发明的化合物配制为目的和/或被包装(例如，与合适的使用说明书一起)为以上述频率施用的单位剂量，并且所述单位剂量和包装产品构成本发明另外的方面。本发明另一方面涉及本发明化合物在提供所述单位剂量或包装产品中的用途(即，通过适当地配制和/或包装所述化合物)。在特殊的实施方案中，本发明的化合物是融合蛋白或构建体。在所述融合蛋白或构建体中，本发明的氨基酸序列可以直接与至少一种治疗部分相连，或通过连接体或间隔区与至少一种治疗部分相连。特殊的实施方案涉及包括免疫球蛋白序列或其片段的治疗部分，更具体地，(单)结构域抗体或纳米体。本发明还涉及多价和多特异性纳米体构建体，其包括至少一种作为纳米体的本发明氨基酸序列，和至少一种另外的纳米体。所述纳米体直接与所述至少一种另外的纳米体相连，或通过连接体或间隔区与所述至少一种另外的纳米体相连，优选地，通过氨基酸序列连接体或间隔区与所述至少一种另外的纳米体相连。此外，本发明涉及编码按照本发明氨基酸序列、或按照本发明化合物的氨基酸序列、或本发明多价和多特异性纳米体的核苷酸序列或核酸。本发明还提供包含本发明核苷酸序列或核酸和/或表达(或能够表达)本发明氨基酸序列、或按照本发明化合物的氨基酸序列、或本发明多价和多特异性纳米体的宿主或宿主细胞。而且，本发明涉及用于制备本发明氨基酸序列、化合物、或多价和多特异性纳米体的方法，其包括在这样的条件下培养或维持本发明的宿主细胞，在所述条件下所述宿主细胞产生或表达所述产物，并任选地进一步包括由此产生的所述产物。在一个实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包括选自由本发明氨基酸序列、化合物、或多价和多特异性纳米体组成的组中的一种或多种，其中所述药物组合物适合于对灵长类动物，以在所述灵长类动物中血清蛋白天然半衰期的至少约50%的间隔施用。所述药物组合物还可以包括至少一种药用载体、稀释剂或赋形剂。本发明还包括包含本发明的氨基酸序列、化合物或多价和多特异性纳米体的治疗的医学用途和方法，其中所述医学用途或方法的特征在于所述药物适合于对灵长类动物，以在所述灵长类动物中血清蛋白天然半衰期的至少约50%的频率施用。本发明还涉及用于延长或增长治疗剂血清半衰期的方法。所述方法包括使所述治疗剂与任意前述的本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体(包括多价和多特异性纳米体)相接触，以使所述治疗剂与本发明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体结合或另外缔合。在一些实施方案中，所述治疗剂是生物治疗剂，优选地是肽或多肽，在该情形中，接触所述治疗剂的步骤可以包括通过使所述肽或多肽与本发明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体相连接，而制备融合蛋白。这些方法可以进一步包括在治疗剂与本发明的氨基酸、化合物、融合蛋白或构建体结合或另外缔合后，向灵长类动物施用所述治疗剂。在该方法中，所述治疗剂在灵长类动物中的血清半衰期是治疗剂本身半衰期的至少1.5倍，或与治疗剂本身的半衰期相比增长至少1小时。在一些优选的实施方案中，所述治疗剂在灵长类动物中的血清半衰期是相应治疗部分本身半衰期的至少2倍、至少5倍、至少10倍或超过20倍。在其他优选的实施方案中，所述治疗剂在灵长类动物中的血清半衰期与相应治疗部分本身的半衰期相比，增长超过2小时，超过6小时或超过12小时。优选地，增长所述治疗剂在灵长类动物中的血清半衰期，以使所述治疗剂具有如本文中对本发明的化合物所定义的半衰期(g卩，在人中和/或在至少一种灵长类动物物种中)。在另一方面，本发明涉及用于修饰治疗剂的方法，所述方法使所述治疗剂的理想治疗水平，在适当施用所述治疗剂以获得所述理想治疗水平时，维持一段延长的时期。所述方法包括使所述治疗剂与任意前述的本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体(包括多价和多特异性纳米体)相接触，从而使所述治疗剂与本发明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体结合或另外缔合。在一些实施方案中，所述治疗剂是生物治疗剂，优选地是肽或多肽，在该情形中，接触所述治疗剂的步骤可以包括通过使所述肽或多肽与本发明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体相连接，而制备融合蛋白。这些方法可以进一步包括在治疗剂与本发明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体结合或另外缔合后，向灵长类动物施用该治疗剂，从而根据所述施用获得理想的治疗水平。在该方法中，所述治疗剂根据所述施用维持理想治疗水平的时间是治疗剂本身半衰期的至少1.5倍，或与治疗剂本身的半衰期相比增长至少l小时。在一些优选的实施方案中，所述治疗剂根据所述施用维持理想治疗水平的时间是相应治疗部分本身半衰期的至少2倍、至少5倍、至少10倍或超过20倍。在其他优选的实施方案中，所述治疗剂根据所述施用维持理想治疗水平的时间与相应治疗部分本身的半衰期相比，增长超过2小时，超过6小时或超过12小时。优选地，增长所述治疗剂根据所述施用维持理想治疗水平的时间，这样可以以本文中关于本发明化合物定义的频率施用所述治疗剂。在另一方面中，本发明涉及本发明化合物生产药物的用途，所述药物增高和/或延长在患者血清中所述化合物或构建体中的治疗剂水平，这样能够以与单独治疗剂相比更低的剂量(即，以基本相同的施药频率)施用所述化合物或构建体中的所述治疗剂。发明详述在一方面，本发明通过提供在生理pH值下，以基本不依赖于pH的方式(如本文中定义)结合血清蛋白的氨基酸序列和具体地，免疫球蛋白序列，和更具体地，免疫球蛋白可变结构域序列，而实现该目的。所述氨基酸序列还优选地是这样的，即它们可以以这样的方式与血清蛋白(诸如血清白蛋白)结合或另外缔合，所述方式是当所述氨基酸序列或多肽构建体与灵长类动物中的血清蛋白分子结合或另外缔合时，它们表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述灵长类动物中血清蛋白天然半衰期的至少约50%，优选地至少约60%，优选地至少约70%,更优选地至少约80%和更优选地至少约90%。本发明的氨基酸序列在向灵长类动物施用后的血清半衰期可以是所述灵长类动物中血清蛋白天然半衰期的至少50%,55%,60%，65%，70%,75%，80%,85%,90%,95%或至少100%。"所述灵长类动物中血清蛋白的天然血清半衰期"意指如下定义的血清半衰期，其中所述血清白蛋白在生理学条件下处于健康个体中。将血清白蛋白作为血清蛋白的实例，则血清白蛋白在人中的天然血清半衰期是19天。已知较小的灵长类动物具有较短的血清白蛋白天然半衰期，例如在8-19天的范围内。血清白蛋白的特殊半衰期可以是至少4，5,6,7,8，9，10，11，12,13,14，15,16，17，18,或19天或更长。由此，它遵从，例如在人个体中，本发明的氨基酸序列显示出与血清白蛋白相关的血清半衰期，为19天的至少约50%，即7.6天。在较小的灵长类动物中，根据这些物种中血清白蛋白的天然半衰期，所述血清半衰期可能再短几天。在本说明书中，术语"灵长类动物"指猴和猿物种，并包括猴物种，诸如来自弥猴属(诸如，和具体地，食蟹猴(食蟹猴(^facaca/^"'cM/anX))和或恒河猴(恒河猴(MacocamM/Wto)))和狒狒(豚尾狒狒(尸a;7/0ww'"m力)的猴，以及狨猴(来自狨(Cfl/fe/^x)属的物种)，松鼠猴(来自松鼠猴(&z'柳W)属的物种)和绢毛猴(来自柽柳猴(&g^rn^)属的物种)，以及猿物种，诸如黑猩猩(黑猩猩(尸fl"/rag/o办&力)，并且还包括人。人是按照本发明优选的灵长类动物。通常可以将氨基酸序列或化合物的半衰期定义为例如由于由天然机制对序列或化合物降解和/或序列或化合物清除或螯合，而引起的多肽的血清浓度被降低50°/。所需的时间。可以以任何本身已知的方式，诸如通过药物动力学分析，确定本发明氨基酸序列(和包括所述氨基酸序列的化合物)在相关灵长类动物物种中的半衰期。合适的技术对本领域中的技术人员应该是清楚的，且通常可以例如包括下列步骤向灵长类动物适当地施用合适剂量的待处理的氨基酸序列或化合物；每隔一定间隔从所述灵长类动物中收集血液样品或其他样品；确定所述血液样品中本发明氨基酸序列或化合物的水平或浓度；和由这样获得的数据(图)计算直到本发明氨基酸序列或化合物的水平或浓度与给药起始水平相比降低50%的时间。参考例如标准手册，诸如Kenneth,A等药品的化学稳定性药剂师手册(ChemicalStabilityofPharmaceuticals:AHandbookforPharmacists)禾口Peters等，药物动力学分析实践方案(Pharmacokineteanalysis:APracticalApproach)(1996)。还参考"药物动力学"("Pharmacokinetics"),MGibaldi&DPerron，由MarcelDekker出版，第2修订版(1982)。如在WO04/003019的第6和7页和在其中引用的其他参考文献中所述地，可以利用参数诸如tl/2-a，tl/2-|3和曲线下面积(AUC)表示半衰期。在本说明书中，"半衰期的增长"指这些参数中任一项，诸如这些参数中任两项，或基本全部三项参数的增大。"半衰期的增长"具体指在tl/2-a禾卩/或AUC或二者增大或不增大的条件下，tl/2-P的增大。在另一方面，针对血清蛋白(诸如血清白蛋白，优选地，人血清白蛋白)的本发明的氨基酸序列，和特别地本发明的免疫球蛋白序列，和更特别地本发明的免疫球蛋白可变结构域序列是这样的，即它们在恒河猴中具有至少约4天，优选地至少约7天，更优选地至少约9天的半衰期。在另一方面，本发明的氨基酸序列是这样的，即它们在人中具有的半衰期是至少约7天，优选地至少约15天，更优选地至少约17天。本发明还涉及本发明的化合物，其在人中具有这样的半衰期，所述半衰期是在所述化合物中存在的本发明的氨基酸序列的半衰期的至少80%,更优选地至少90%,诸如95%或更多或基本相同。更具体地，本发明还涉及本发明的化合物，其在人中具有至少约7天，优选地至少约15天，更优选地至少约17天的半衰期。本发明还提供包括本发明的氨基酸序列的化合物，具体地，除本发明的氨基酸序列外包括至少一种治疗部分的化合物。按照本发明的化合物的特征在于，在灵长类动物中表现出与本发明氨基酸序列在灵长类动物中相似的血清半衰期，更优选地，至少是本发明氨基酸序列在灵长类动物中血清半衰期的半衰期，和更优选地，大于本发明氨基酸序列在灵长类动物中半衰期的半衰期。在一方面，本发明通过提供本文中公开的氨基酸序列实现该目的，所述氨基酸序列可以结合能与FcRn结合的血清蛋白，该氨基酸序列还是这样的，即它们以这样的方式与血清蛋白结合或另外缔合，所述方式是当所述氨基酸序列或多肽构建体与血清蛋白分子结合或另外缔合时，不(显著)降低或抑制所述血清蛋白分子与FcRn的结合(即，与当氨基酸序列或多肽构建体不与其结合时，所述血清蛋白分子与FcRn的结合相比)。在本发明的这一方面，通过"不显著降低或抑制"意指关于血清蛋白针对FcRn的结合亲和性不被降低超过50%，优选地不被降低超过30%，甚至更优选地不被降低超过10%，诸如不被降低超过5%，或基本完全不被降低。在本发明的这一方面，"不显著降低或抑制"还可以意指(或另外意指)血清蛋白分子的半衰期不显著缩短(如下定义)。如技术人员通常理解地，当在本说明书中，提及结合时，所述结合优选地是特异性结合。当如本文中所述的氨基酸序列是单价免疫球蛋白序列(例如，单价纳米体)时，所述单价免疫球蛋白序列优选地以10—5-10—12摩尔/升或更小，和优选地1(T7-10—12摩尔/升或更小和更优选地10—8-10—12摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大，和优选地107-1012升/摩尔或更大和更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA),和/或以至少107M",优选地至少108M",更优选地至少1(^M—1,诸如至少1012M"的结合亲和性(Ka》結合人血清白蛋白。通常认为任何大于1(^摩尔/升的KD(或任何小于1(^M"的Ka僮)表示非-特异性结合。优选地，本发明的单价免疫球蛋白序列以小于500nM，优选地小于200nM，更优选地小于10nM,诸如小于500pM的亲和性，结合理想的血清蛋白。可以以任何本身已知的合适方式，包括，例如，斯卡查德分析和/或竞争结合测定，诸如放射性免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)和夹心竞争测定，以及本领域中本身已知方式的不同变化，确定抗原-结合蛋白与抗原或抗原决定簇的特异性结合。在另一方面，本发明的氨基酸序列(和具体地，免疫球蛋白序列，和更具体地，免疫球蛋白可变结构域序列)还可以是这样的，即它们可以以这样的方式与血清蛋白(诸如血清白蛋白)结合或另外缔合，所述方式是当氨基酸序列或多肽构建体与所述血清蛋白分子结合或另外缔合时，不(显著)縮短所述血清蛋白分子的半衰期(即，与当氨基酸序列或多肽构建体不与其结合时，血清蛋白分子的半衰期相比)。在本发明的这个方面，通过"不显著縮短"意指血清蛋白分子的半衰期(如利用本身已知的合适技术测量地)不被縮短超过50%，优选地不被縮短超过30%，甚至更优选地不被縮短超过10%，诸如不被縮短超过5%，或基本完全不被縮短。在另一方面，本发明的氨基酸序列(和具体地，免疫球蛋白序列，和更具体地，免疫球蛋白可变结构域序列)可以针对能够与FcRn结合的血清蛋白，并且还可以是这样的，即它们能够结合在血清蛋白分子上不参与所述血清蛋白与FcRn的结合的氨基酸残基(诸如血清白蛋白上的氨基酸残基)。具体地，按照本发明的这个方面，当本发明的氨基酸序列针对血清白蛋白时，它们是这样的，即它们能够结合不形成血清白蛋白结构域III部分的血清白蛋白氨基酸序列。例如，但不限于，本发明的这个方面提供这样的氨基酸序列，其能够结合于形成结构域I和/或结构域II部分的血清白蛋白氨基酸序列。本发明的氨基酸序列优选地是(单)结构域抗体或适合于用作(单)结构域抗体，并同样地，可以是重链可变结构域序列(VH序列)或轻链可变结构域序列(VL序列)，且优选地是VH序列。所述氨基酸序列可以例如是所谓的"dAbs"。然而，按照特别优选的实施方案，本发明的氨基酸序列是纳米体。对于纳米体的进一步描述和定义，以及本说明书中使用的一些其他术语(诸如，例如且不限于，术语"针对")，参考埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的同时待审申请(诸如WO06/040153和同时待审的国际申请PCT/EP2006/004678));以及本文中引用的其他现有技术。同样地，它们可以是属于"KERE"-类、"GLEW"-类或"103-P,R，S"-类的纳米体(也如埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的同时待审的专利申请中定义地)。优选地，本发明的氨基酸序列是人源化的纳米体(也如埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的同时待审专利申请中定义地)。可以有利地将本文中公开的氨基酸序列用作融合配偶体，从而增长治疗部分，诸如蛋白质、化合物(包括，但不限于，小分子)或其他治疗实体的半衰期。因此，在另一方面，本发明提供包括或基本由如本文中公开的氨基酸序列组成的蛋白质或多肽。具体地，本发明提供包括或基本由至少一种本发明的氨基酸序列组成的蛋白质或多肽构建体，所述本发明的氨基酸序列任选地，通过一种或多种合适的连接体或间隔区，与至少一种治疗部分相连。如本文中进一步所述，所述蛋白质或多肽构建体可以例如(不限于)是融合蛋白。本发明还涉及蛋白质或多肽构建体或融合蛋白和构建体的治疗用途，以及包括所述蛋白质或多肽构建体或融合蛋白的药物组合物。在一些实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由治疗性蛋白质、多肽、化合物、因子或其他实体组成。在优选的实施方案中，所述治疗部分针对理想的抗原或靶标，能够结合理想的抗原(和具体地，能够特异性结合理想的抗原)，和/或能够与理想的靶标相互作用。在另一个实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由治疗性蛋白质或多肽组成。在另一个实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由免疫球蛋白或免疫球蛋白序列(包括但不仅限于免疫球蛋白片段)，诸如抗体或抗体片段(包括但不限于ScFv片段)组成。在再一个实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由抗体可变结构域，诸如重链可变结构域或轻链可变结构域组成。在优选的实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由至少一种结构域抗体或单结构域抗体，"dAb"或纳米体⑧组成。按照该实施方案，本发明的氨基酸序列优选地还是结构域抗体或单结构域抗体，"dAb"或纳米体，这样由此产生的构建体或融合蛋白是多价构建体(如本文中所述)和优选地是多特异性构建体(也如本文中定义)，其包括至少2个结构域抗体、单结构域抗体、"dAbs"或纳米体⑧(或其组合)，至少其中之一是本发明的氨基酸序列。在特殊的实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由至少一个单价纳米体⑧或二价、多价、双特异性或多特异性纳米体⑧构建体组成。按照该实施方案，本发明的氨基酸序列优选地还是纳米体，这样由此产生的构建体或融合蛋白是多价纳米体构建体(如本文中所述)和优选地是多特异性纳米体构建体(也如本文中定义)，其包括至少2个纳米体，至少其中之一是本发明的氨基酸序列。按照本发明的一个实施方案，本发明的氨基酸序列是人源化的纳米体。而且，当本发明的氨基酸序列、蛋白质、多肽或构建体意欲用于药物或诊断应用时，上述各项优选地针对人血清蛋白，诸如人血清白蛋白。当所述氨基酸序列是免疫球蛋白序列，诸如免疫球蛋白可变结构域序列时，还可以使用所述序列的合适的(即，适合于本文中提到的目的)片段。例如，当所述氨基酸序列是纳米体时，所述片段可以基本如WO04/041865中所述。本发明还涉及包括或基本由本文中所述的氨基酸序列或其合适的片段组成的蛋白质或多肽。本发明的氨基酸序列还可以包括一个或多个关于一种或多种其他抗原、抗原决定簇、蛋白质、多肽或其他化合物的另外的结合位点。如本文中提及地，可以将本文中所述的氨基酸序列有利地用作融合配偶体，从而增长治疗部分，诸如蛋白质、化合物(包括，但不限于，小分子)或其他治疗实体的半衰期。因此，本发明的一个实施方案涉及包括至少一种本发明氨基酸序列和至少一种治疗部分的构建体或融合蛋白。与所述治疗部分本身相比，所述构建体或融合蛋白优选地具有增长的半衰期。通常，可以如以上引用的现有技术中所述(制备和使用)所述融合蛋白和构建体，但是其具有本发明的氨基酸序列，而不是现有技术中所述的增长半衰期的部分。通常，本文中所述的构建体或融合蛋白优选地具有这样的半衰期，所述半衰期高于相应治疗部分本身半衰期至少1.5倍，优选地至少2倍，诸如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍。而且，优选地，任何所述融合蛋白或构建体具有这样的半衰期，所述半衰期与相应治疗部分本身的半衰期相比，增长超过1小时，优选地超过2小时，更优选地超过6小时，诸如超过12小时。而且，优选地，任何所述融合蛋白或构建体具有这样的半衰期，所述半衰期是超过l小时，优选地超过2小时，更优选地超过6小时，诸如超过12小时，和例如约1天、2天、1周、2周或3周，且优选地，不超过2个月，尽管后者不太关键。而且，如上所提及地，当本发明的氨基酸序列是纳米体时，可以使用它增长其他免疫球蛋白序列，诸如结构域抗体、单结构域抗体、"dAbs"或纳米体的半衰期。因此，本发明的一个实施方案涉及这样的构建体或融合蛋白，其包括至少一种本发明的氨基酸序列和至少一种免疫球蛋白序列，诸如结构域抗体、单结构域抗体、"dAbs"或纳米体。所述免疫球蛋白序列优选地针对理想的靶标(其优选地是治疗靶标)，和/或有效于或适合于治疗、预防和/或诊断目的其他免疫球蛋白序列。因此，在另一方面，本发明涉及多特异性(和具体地，双特异性)纳米体构建体，其包括至少一种本文中所述的纳米体，和至少一种其他纳米体，其中所述至少一种其他纳米体优选地针对理想的靶标(其优选地是治疗靶标)，和/或有效于或适合于治疗、预防和/或诊断目的其他纳米体。关于包含一种或多种纳米体的纳米体和多价和多特异性多肽和它们的制备的一般性描述，参考埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的同时待审申请，诸如WO06/040153和共同待审国际申请PCT/EP2006/004678(以及这些申请中引用的其他现有技术)，和还参考例如Conrath等，生物学化学杂志(J.BiolChem,),巻276,10.7346-7350，2001;Muyldermans,分子生物技术综述(ReviewsinMolecularBiotechnology)74(2001),277-302;以及参考例如WO96/34103和WO99/23221。埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的同时待审申请中存在关于本发明一些特殊多特异性和/或多价多肽的一些其他实例。具体地，关于为了增长半衰期包括至少一种针对血清蛋白的纳米体的多价和多特异性构建体、编码所述构建体的核酸、包括所述构建体的组合物、上述各项的制备、和上述各项的用途的一般性描述，参考埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx.N.V.)的国际申请WO04/041S65。通常可以与其中所述半衰期增长的纳米体类似地使用本文中所述的氮基酸序列。在一个非-限制性实施方案中，所述其他纳米体针对单体和或多聚体(即三体)形式的肿瘤坏死因子a(TNF-a)。所述纳米体构建体的一些实例可以存在于埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx.N.V.)的同时待审国际申请中，其名称为"改良的针对肿瘤坏死因子-a的纳米体(/m;^m^^]Vano6o(iz'es7"應or脸cra^Fa"or-a一a)"，其与本申请具有相同的优先权和相同的国际递交日。本发明还涉及编码本文中所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白和构建体的核苷酸序列或核酸。本发明还包括遗传构建体，所述遗传构建体包括上述核苷酸序列或核酸，和一种或多种本身已知的用于遗传构建体的元件。所述遗传构建体可以处于质粒或载体的形式。而且，所述构建体通常可以是如埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx.N.V.)的同时待审专利申请和本文中提到的现有技术，以及其中引用的其他现有技术中所述的。本发明还涉及包含所述核苷酸序列或核酸，和/或表达(或能够表达)本文中所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白和构建体的宿主或宿主细胞。而且，所述宿主细胞通常可以是如埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx.N.V.)的同时待审专利申请和本文中提到的现有技术，以及其中引用的其他现有技术中所述的。本发明还涉及用于制备本文中所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的方法，所述方法包括在这样的条件下培养或维持本文中所述的宿主细胞，在所述条件下，所述宿主细胞产生或表达如本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，且任选地，还包括分离由此产生的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体。而且，通常可以如埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx.N.V.)的同时待审专利申请和本文中提到的现有技术，以及其中引用的其他现有技术中所述地执行所述方法。本发明还涉及药物组合物，其包括至少一种如本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，和任选地，至少一种药用载体、稀释剂或赋形剂。所述制剂、载体、赋形剂和稀释剂通常可以是如埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx.N.V.)的同时待审专利申请和本文中提到的现有技术，以及其中引用的其他现有技术中所述的。然而，由于本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体具有增长的半衰期，所以优选地将它们施用到循环中。同样地，可以以任何容许所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体进入循环的合适方式，诸如静脉内、通过注射或灌输，或以任何其他容许所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体进入循环的合适方式(包括口服施药、经由皮肤施药、透粘膜施药、鼻内施药、通过肺的施药等)施用它们。而且，还例如由WO04/041862的教导，技术人员应该清楚合适的施药方法和途径。因此，在另一方面。本发明涉及用于预防和/或治疗至少一种能够通过使用如本文中所述的化合物、融合蛋白或构建体预防或治疗的疾病或病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用药物活性量的本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白和构建体，和/或包括所述本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白和构建体的药物组合物。能够通过使用如本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体预防或治疗的疾病和病症通常与能够通过使用本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体中存在的治疗部分预防或治疗的疾病和病症相同。待治疗的受试者可以是任何灵长类动物，但是具体地是人。如技术人员应该清楚地，待治疗的受试者应该具体地是患有或处于本文中提及疾病和病症危险的人。更具体地，本发明涉及治疗方法，其中施用本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的频率是本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体针对的血清蛋白天然半衰期的至少50%，优选地至少60%,优选地至少70%,更优选地至少80%和最优选地至少90%。属于本发明范围内的对灵长类动物特殊施药频率是本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体针对的血清蛋白天然半衰期的至少50%，55%，60%,65%,70%，75%,80%,85%,90%,95%或至少100%。换言之，属于本发明范围内的特殊施药频率是每4,5,6,7，8,9,10,11，12，13,14，15,16,17,18,或19天。不限制地，上文提到的施药频率特别适合于维持利用所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体治疗的受试者血清中的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体理想水平，任选地，在施用意欲建立所述理想血清水平的一或多(起始)剂量后。如技术人员应该清楚地，所述理想的血清水平可以特别依赖于使用的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体和/或待治疗的疾病。临床医生或医师应该能够选择理想的血清水平，和选择向待治疗受试者施用的剂量和/或量，从而在以本文中提到的频率施用本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体时，在所述受试者中获得和/或维持理想的血清水平。在本发明的上下文中，术语"预防和/或治疗"不仅包括预防和/或治疗疾病，通常还包括预防疾病的发作，减缓或逆转疾病进程，预防或减缓一种或多种与疾病相关症状的发作，减轻和/或缓解一种或多种与疾病相关的症状，减少疾病和/或其任意相关症状的严重性和/或持续时间，和/或预防疾病和/或其任意相关症状严重性的增加，预防、降低或逆转由疾病导致的任何生理学损伤，和通常任何有益于受治疗患者的药理学作用。待治疗的受试者可以是任何灵长类动物，但是具体地是人。如技术人员应该清楚地，待治疗的受试者应该具体地是患有或处于能通过本文中提及的治疗部分治疗的疾病和病症危险的人。在另一个实施方案中，本发明涉及用于免疫治疗，和具体地用于被动免疫治疗的方法，所述方法包括向患有或处于本文中提及疾病和病症危险的受试者施用药物活性量的本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，和/或包括所述本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的药物组合物。本发明还涉及用于延长或增长治疗剂血清半衰期的方法，在这些方法中，治疗剂与任意本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，包括多价和多特异性纳米体相接触，这样该治疗剂与所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体结合或另外缔合。所述治疗剂和所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体可以以技术人员己知的不同方式结合或另外缔合。在生物治疗剂，诸如肽或多肽的情形中，该治疗剂可以按照本领域中已知的方法与所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体融合。所述治疗剂可以直接融合，或利用间隔区或连接体分子或序列融合。在优选的实施方案中，所述间隔区和连接体由氨基酸组成，但是可以如本领域中熟知的方式使用其他非-氨基酸间隔区或连接体。因此，接触所述治疗剂的步骤可以包括通过将所述肽或多肽和本发明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，包括多价和多特异性纳米体连接，而制备融合蛋白。所述治疗剂还可以与本发明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体直接结合。作为一个实例，多价和多特异性纳米体可以包括至少一种结合所述血清蛋白(诸如血清白蛋白)的可变结构域和至少一种结合所述治疗剂的可变结构域。用于延长或增长治疗剂血清半衰期的方法还可以包括在所述治疗剂与本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体结合或另外缔合后，向灵长类动物施用所述治疗剂。在所述方法中，如本文中别处所述地，以显著量延长或增长所述治疗剂的半衰期。按照适合于预防和/或治疗待预防或治疗的疾病或病症的治疗方案，施用所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体和/或包括所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的组合物。临床医生通常应该能够根据因素，诸如待预防或治疗的疾病或病症，待治疗疾病的严重性和/或其症状的严重性，待使用的本发明特殊纳米体或多肽，待使用的特殊施药途径和药物制剂或组合物，患者的年龄、性别、体重、饮食、一般状态，和临床医生熟知的类似因素，确定合适的治疗方案。通常，所述治疗方案应该包括以一种或多种药物有效量或剂量，施用一种或多种本发明的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，或一种或多种包括所述本发明氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的组合物。临床医生也可以根据以上引用的因素确定具体的待施用量或剂量。通常，为了预防和/或治疗本文中提到的疾病和病症，并根据待治疗的特殊疾病或病症，待使用的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的功效和/或半衰期，使用的特殊施药途径和特殊药物剂型或组合物，通常应该以这样的量，在一天中连续地(例如通过灌输)作为单次每日剂量或作为多次分开的剂量施用本发明的纳米体和多肽，所述量是1克_0.01微克/kg体重/天，优选地0.1克-0.1微克/kg体重/天，诸如约1,10,100或1000微克/kg体重/天。临床医生通常能够根据本文中提到的因素确定合适的每日剂量。还应该清楚地是，在特殊情形中，临床医生可以选择偏离这些量，例如，基于以上引用的因素和他的专业判断。通常，可以由对类似常规抗体或抗体片段通常施用的量获得一些关于待施用量的指导，所述类似常规抗体或抗体片段针对基本通过相同途径施用的相同靶标，然而考虑亲和性/亲和力、功效、生物分布、半衰期和技术人员熟知的类似因素中的差别。通常，在以上方法中，应该使用本发明的单纳米体或多肽。然而，组合使用两种或更多本发明的纳米体和/或多肽属于本发明的范围。本发明的纳米体和多肽还可以与一种或多种其他药物活性化合物或成分(principles)组合使用，即作为组合的治疗方案，其可以或可以不引起协同功效。而且，临床医生应该能够基于以上引用的因素和他的专业判断，选择所述其他化合物或原理，以及合适的组合治疗方案。具体地，本发明的纳米体和多肽可以与其他药物活性化合物或成分组合使用，所述药物活性化合物或成分用于或能够用于预防和/或治疗能够用本发明融合蛋白或构建体预防或治疗的疾病和病症，且作为其结果，可以或可以不获得协同功效。如临床医生应该清楚地，可以以关于有关疾病或病症本身已知的任何方式，确定和/或观注按照本发明使用的治疗方案的效力。临床医生还应该能够，在适当和或个案基础上，改变或修改具体的治疗方案，从而获得理想的治疗效果，以避免、限制或减少不希望的副作用，和/或在一方面获得理想治疗效果和另一方面避免、限制或减少不希望副作用之间获得适当的平衡。通常，应该遵从所述治疗方案，直到获得理想的治疗效果和/或为了维持所述理想的治疗效果长久。而且，这可以由临床医生确定。使用的术语和表述作为描述而非限制性术语使用，且不意欲使用所述术语和表述排除所示和所述特征及其部分的任何等价物，承认多种修改可能在本发明的范围内。引入本文中所述的全部参考文献作为参考，具体地对于上文中提到的教导。实验部分实施例l:识别血清白蛋白特异性纳米体兽医系道德委员会(根特大学，比利时)批准后，按照标准方案，以每周一次的时间间隔，用6次肌肉内注射人血清白蛋白，以及小鼠血清白蛋白、食蟹猴血清白蛋白和狒狒血清白蛋白的混合物，交替免疫2只美洲鸵(llamas)(117，118)。文库构建当最后一次抗原注射后4天在美洲驼中诱导了适当的免疫响应时，收集150ml血液样品，并按照供应商的指示，通过在Ficoll-PaqueTM的密度梯度离心纯化外周血淋巴细胞(PBLs)。其次，从这些细胞中提取总RNA，并将其用作RT-PCR的起始材料，从而扩增编码基因片段的纳米体。将这些片段克隆到噬菌粒载体pAX50中。按照标准方法(见，例如在本文中引入的由申请人提交的现有技术和申请)制备噬菌体并将其保存在4°C，以便将来使用。选择透揮屏,蕴成薪分"莸淳与虛獰A蛋力游翁合在第一次选择中，在室温(RT)下，以100昭/ml，将人血清白蛋白(西格玛(Sigma)A-8763)包被在Maxisorp96-孔板(Nunc,Wiesbaden,德国)上过夜。在RT下，用处于PBS中的4%Marvel封闭板2小时。用PBST清洗3次后，将噬菌体加入到4%Marvel/PBS中，并在RT下培养1小时。充分清洗后，用0.1M三乙醇胺(TEA)洗脱，并用1MTris-HClpH7.5中和结合的噬菌体。廢遂謝术沐与力弱游;^教效齢1.通过ELISA筛选纳米体的pH-独立性结合为了针对它们与白蛋白的pH-不灵敏或有条件结合而筛选纳米体，用两种代表性的条件，pH5.8和pH7.3进行结合ELISA，并确定相对结合强度。用100pl处于碳酸氢盐缓冲液(50mM,pH9.6)中的1|ig/ml人血清白蛋白溶液，在4'C，包被Maxisorb微量滴定板(Nunc,商品号430341)过夜。包被后，用含有0.05%吐温20的PBS(PBST)清洗该板3次，并在室温(RT)下，用含有2%Marvel的PBS(PBSM)封闭2小时。封闭步骤后，用PBSTpH5.8清洗包被的板2次，将在PBSMpH5.8中稀释10倍的每种周质样品等分试样(100^il)转移到包被的板中，并容许在RT下结合1小时。样品培养后，用PBST清洗该板5次，并在RT下，与100pl处于2%PBSM中的1:1000小鼠抗-myc抗体稀释液一起培养1小时。在RT下1小时后，用PBST清洗该板5次，并与100pi与辣根过氧化物酶缀合的山羊抗-小鼠抗体的1:1000稀释液一起培养。1小时后，用PBST清洗板5次，并与100慢TMB(Pierce，商品号34024)—起培养。20分钟后，利用100plH2SO4终止反应。在450nm处测量每个孔的吸光率。2.通过表面等离振子共振(BIAcore)筛选动力学off-速率。对于活化利用NHS/EDC和对于钝化利用乙醇胺(Biacore胺偶联试剂盒)，将人血清白蛋白通过胺偶联固定在CM5传感器芯片表面上。固定大约IOOORU人血清白蛋白。实验在25。C进行。针对纳米体与白蛋白的pH依赖性结合所使用的缓冲液(Biacore)如下10mM柠檬酸钠(Na3C6H507)+10mM磷酸钠(Na2HP04)+10mM乙酸钠(CH3C00Na)+115mMNaCl。通过加入HC1或NaOH(根据测量的混合物pH)使该混合物变为pH7、pH6禾卩pH5。在pH7、pH6和pH5的运行缓冲液中稀释周质提取物。以45^1/分钟的流速，向活化的和参考表面注射样品1分钟。用甘氨酸-HClpH1.5+0.1。/。P20的3s脉冲再生那些表面。利用BiacoreT100评估软件实现评估。辦鹏#組朋鄉沐还生成由C-末端抗-HSA纳米体(ALB8)、9个氨基酸的Gly/Ser连接体和N-末端抗-IL6R纳米体组成的双特异性纳米体。该构建体还称为IL6R202。该构建体在大肠杆菌(E.coli)中表达为c-myc、His6-标记的蛋白质，并随后通过固定金属亲合层析(IMAC)和大小排阻层析(SEC)从培养基中对其进行纯化。在所有选择中，观察到富集。将来自每次选择的产物作为集合重新克隆到表达载体pAX51中。挑取菌落，并在96深-孔板(lml容积)中生长，并通过加入IPTG诱导纳米体表达。按照标准方法(见，例如在本文中引入的申请人提交的现有技术和申请)制备周质提取物(体积~80^ll)。通过ELISA进行文库评估通过在固相包被的人血清白蛋白上进行ELISA，针对白蛋白特异性，筛选各自纳米体的周质提取物。利用生物素化的小鼠抗-his抗体(SerotecMCA1396B)进行对与固定的人血清白蛋白结合的纳米体片段的检测，所述生物素化的小鼠抗-his抗体是通过链霉抗生物素-HRP(DakoCytomation弁P0397)检测的。通过加入TMB基质溶液(Pierce34021)形成信号，并在450nm波长处检测信号。在第1轮淘选(panning)后，可以容易地获得关于阳性克隆的高击中率。图1说明典型的ELISA结果。实施例2:利用表面等离振子共振(BIAcore)确定鉴定的纳米体与人血清白蛋白的pH依赖性结合。对于活化利用NHS/EDC和对于钝化利用乙醇胺(Biacore胺偶联试剂盒)，将人血清白蛋白通过胺偶联固定在CM5传感器芯片表面上。分别固定大约1000RU食蟹猴和人血清白蛋白。实验在25'C进行。针对纳米体与白蛋白的pH依赖性结合所使用的缓冲液(Biacore)如下10mM柠檬酸钠(Na3C6Hs07)+10mM磷酸钠(Na2HP04)+10mM乙酸钠(CH3COONa)+115mMNaCl。通过加入HC1或NaOH(根据测量的混合物pH)使该化合物变为pH7、pH6和pH5。在pH7、pH6和pH5的运行缓冲液中稀释标准缓冲液HBS-EP+周质提取物或纯化的纳米体。以45^1/分钟的流速，向活化的和参考表面注射样品1分钟。用甘氨酸-HClpH1.5+0.1%P20的3s脉冲再生那些表面。利用BiacoreT100评估软件实现评估。表1中记录了不同纳米体在pH7和pH5条件下的off速率。大多数纳米体(4A2，4A6，4B5,4B6，4B8，4C3，4C4,4C5,4C8,4C9,4D3，4D4,4D7和4D10)在pH5具有比在pH7更快的off速率。纳米体4A9在pH5具有比在pH7更慢的off速率。对于其他纳米体，包括IL6R202,Alb-8，4C11，4B1,4B10和4D5，在不同pH条件下与抗原的结合不变。图2a和2B中显示代表性克隆的传感图(sensorgram)。实施例2a:与白蛋白结合的纳米体ALB8与针对治疗靶标IL6R的纳米体(IL6R202)的融合不影响其与人或食蟹猴血清白蛋白的PH独立性结合。通过表面等离振子共振(BIAcore)评估IL6R202的pH-不灵敏结合特性。对于活化利用NHS/EDC和对于钝化利用乙醇胺(Biacore胺偶联试剂盒)，将人和食蟹猴血清白蛋白通过胺偶联固定在CM5传感器芯片表面上。分别固定大约1000RU食蟹猴和人血清白蛋白。实验在25。C进行。针对纳米体与白蛋白的pH依赖性结合所使用的缓冲液(Biacore)如下10mM柠檬酸钠(Na3C6Hs07)+lOmM磷酸钠(Na2HP04)+10mM乙酸钠(CH3COONa)+115mMNaCl。通过加入HCl或NaOH(根据测量的混合物pH)使该化合物变为pH7、pH6和pH5。在pH7、pH6和pH5的运行缓冲液中稀释周质提取物或纯化的纳米体。以45^1/分钟的流速，向活化的和参考表面注射样品1分钟。用甘氨酸-HClpH1.5+0.1°/。P20的3s脉冲再生那些表面。利用BiacoreT100评估软件实现评估。下文显示IL6R202的结合特征。当将ALB8引入到双特异性纳米体形式IL6R202中时，pH-独立性结合特征与其作为单价纳米体的pH-独立性结合特征相比，没有区别。而且，所述双特异性构建体中的ALB8显示与食蟹猴血清白蛋白的交叉-反应性，并具有类似的结合特征。ALB8与人血清白蛋白的结合动力学.<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>IL6R202与人和食蟹猴血清白蛋白的结合动力学<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>实施例3:食蟹猴中的药物动力学特征利用人源化的抗-IL6R构件和人源化的抗-血清白蛋白构件(人源化的抗-血清白蛋白构件-Alb-8)，将纳米体(纳米体称为IL6R202)构建到二价构建体中。使用9-氨基酸GlySer连接体来连接不同的构件。将该构建体表达在大肠杆菌中，并利用ProtA进行纯化，随后进行大小排阻层析(SEC)。在食蟹猴中进行关于IL6R202的药物动力学研究(具有不依赖于pH的k-off速率——见上)。通过大丸剂(bolus)注射(l.Oml/kg,大约30秒)，将IL6R202静脉内施用到左臂或右臂的头静脉中，以获得2.0mg/kg的剂量。表2总结关于所有猴的剂量方案。<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>如下述确定血浆样品中的IL6R202浓度用100^处于碳酸氢盐缓冲液(50mM,pH9.6)中的5pg/ml12B2-GS9-12B2(B2存1302nr4.3.9)溶液，在4。C，包被Maxisorb微量滴定板(Nunc，商品号430341)过夜。包被后，用含有0.1%吐温20的PBS(PBST)清洗该板3次，并在室温(RT)下，用含有P/。酪蛋白的PBS(250pl/孔)封闭2小时。在单独的未包被板(Nunc，商品号249944)中，以PBS稀释血浆样品，和纳米体-标准物(掺加到100%汇集的空白食蟹猴血浆中)的连续稀释物，从而在由10%汇集的食蟹猴血浆组成的最终样品基质中获得处于PBS中的理想浓度/稀释度。在RT下，在未包被板中培养所有预先-稀释物30分钟。封闭步骤后，(用含有0.1。/。吐温20的PBS)清洗包被的板3次，并将每种样品稀释物的等分试样(100)il)转移到包被的板中，并容许在RT下结合1小时。样品培养后，(用含有0.1。/。吐温20的PBS)清洗该板3次，并在RT下，与100|il处于PBS中的100ng/mlsIL6R溶液(Peprotech,商品号20006R)—起培养1小时。在RT下1小时后，(用含有0.1%吐温20的PBS)清洗该板3次，并与100pl处于含有1。/。酪蛋白(R&D系统,商品号BAF227)的PBS中的250ng/ml生物素化多克隆抗-IL6R抗体溶液一起培养。培养30分钟(RT)后，(用含有0.P/。吐温20的PBS)清洗板3次，并与100|il与辣根过氧化物酶缀合的链霉抗生物素(DaktoCytomation，商品号P0397)的1/5000稀释液一起培养30分钟(RT)。30分钟后，(用含有0.1%吐温20的PBS)清洗板3次，并与100pl慢TMB(Pierce,商品号34024)—起培养。20分钟后，利用100HC1(1N)终止反应。在450nm处测量每个孔的吸光率(TecanSunrise分光光度计)，并针对620nm处的吸光率对其进行校正。该测定测量游离的纳米体以及与sIL6R和/或食蟹猴血清白蛋白结合的纳米体。基于具有关于各种纳米体可变斜率的S形标准曲线，确定每份血浆样品中的浓度。IL6R202的LLOQ和ULOQ是7.00ng/ml。在2个独立的测定中分析每份单独的血浆样品，并计算平均血浆浓度，用于药物动力学数据分析。表3中列出以2.00mg/kg向雄性和雌性食蟹猴单次静脉内施药后，关于IL6R202的基本药物动力学参数。用二-区室建模，从中央区室消除，计算所有参数。确定的IL6R202半衰期是6.8+/-0.226天，其与在食蟹猴中食蟹猴血清白蛋白的半衰期非常类似。表3:以2.00mg/kg向雄性和雌性食蟹猴单次静脉内施药后，关于IL6R202的基本药物动力学参数1。猴3m猴4f平均值SDCV(%)C(0)Og/ml)57.656.557.1±0.7781.36Vss(mL/kg)65.160.662.9±3.185.06Vz(mL/kg)70.064.667.3±3.825.67Vc(mL/kg)34.735.435.1±0.4951,41Vt(mL/kg)30.425.227.8±3.6813.2CL(mL/天/kg)6.976.746.860.1632.37CLd(mL/天/kg)22.119.120.62.1210.3t'/2(天)6.966.646.800.2263.33MRT(天)9.358.999.170.2552.78AUCinf(吗争天/ml)2872972927.072.42AUCinf/D(kg,天/ml)0.1440.1480.1460.002831.94所有参数利用二-区室建模计算表1.记录了在pH7和pH5下，不同纳米体⑧的off速率(由Biacore确定)<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>权利要求1.氨基酸序列，所述氨基酸序列以处于生理pH值时基本不依赖于pH的方式与血清蛋白结合。2.按照权利要求1的氨基酸序列，所述氨基酸序列在动物或人体细胞中存在的pH值时，以这样的缔合常数(KA)与血清蛋白结合，所述缔合常数(KA)是所述氨基酸序列在处于所述细胞外存在的pH值时与相同血清蛋白结合的缔合常数(KA)的至少5。/。，诸如至少10%,优选地至少25%,更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%，诸如甚至更优选地至少70%,诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)。3.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述细胞参与血清蛋白的再循环。4.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述细胞包含或表达FcRn受体。5.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列在动物或人体细胞的(亚)细胞区室或小泡内部存在的pH值时，以这样的缔合常数(Ka)与血清蛋白结合，所述缔合常数(Ka)是所述氨基酸序列在处于所述细胞所在的人或动物体循环中，诸如在血液(流)或在淋巴系统中存在pH值时与相同血清蛋白结合的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%，更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)。6.按照权利要求的氨基酸序列，其中所述细胞参与血清蛋白的再循环。7.按照权利要求6的氨基酸序列，其中所述细胞的所述(亚)细胞区室或小泡参与血清蛋白的再循环。8.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述细胞包含或表达FcRn受体。9.按照权利要求l的氨基酸序列，所述氨基酸序列在至少一种低于6.7的生理pH值下，以这样的缔合常数(KA)结合血清蛋白，所述这样的缔合常数(KA)是所述氨基酸序列在至少一种高于7.0的生理pH值下与相同血清蛋白结合的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%,更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%，诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)。10.按照权利要求l的氨基酸序列，所述氨基酸序列在6.5-5.5范围内的pH值(诸如6.5，6.4,6.3,6.2,6.1,6.0,5.9,5.8,5.7或5.6)下，以这样的缔合常数(KA)结合血清蛋白，所述这样的缔合常数(KA)是所述氨基酸序列在7.2-7.4范围内的pH值(诸如7.2，7.3或7.4)下与相同血清蛋白结合的缔合常数(KA)的至少5%,诸如至少10%,优选地至少25%,更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%,诸如甚至更优选地至少70%，诸如至少80%或90%或更高(或甚至超过100%,诸如超过110%,超过120%或甚至130%或更高)。11.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列结合这样的血清蛋白，所述血清蛋白在天然存在所述血清蛋白的人或动物体内进行再循环或再循环机制。12.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列结合人血清蛋白。13.按照权利要求12的氨基酸序列，所述氨基酸序列与来自至少另一种哺乳动物物种，诸如小鼠、大鼠、兔、狗或灵长类动物的相应(即，直向同源)血清蛋白交叉-反应。14.按照权利要求13的氨基酸序列，所述氨基酸序列与来自至少另一种灵长类动物物种的相应(即，直向同源)血清蛋白交叉-反应，所述灵长类动物物种来自猕猴属(MacaCfl)(诸如，和具体地，食蟹猴(食蟹猴(Afacaca/oscz'cw/aWs))禾口/或恒河猴(恒河猴(Macacaww/afto)))禾口狒狒(豚尾狒狒(尸—o))。15.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列以这样的方式与所述血清蛋白结合或另外缔合，所述方式是当所述氨基酸序列与所述血清蛋白分子结合或另外缔合时，不(显著)縮短所述血清蛋白分子的半衰期。16.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列结合能够与FcRn结合的血清蛋白。17.按照权利要求15的氨基酸序列，所述氨基酸序列以这样的方式与所述血清蛋白结合或另外缔合，所述方式是当所述氨基酸序列与所述血清蛋白分子结合或另外缔合时，不(显著)减少或抑制所述血清蛋白分子与FcRn的结合。18.按照权利要求16或17的氨基酸序列，所述氨基酸序列能够结合所述血清蛋白上不参与所述血清蛋白和FcRn结合的氨基酸残基。19.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列结合选自由下列各项组成的组的血清蛋白血清白蛋白、免疫球蛋白诸如IgG或运铁蛋白。20.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列结合血清白蛋白。21.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列以这样的方式与至少一种灵长类动物物种的血清蛋白结合或另外缔合，所述方式是当所述氨基酸序列与所述灵长类动物中的所述血清蛋白结合或另外缔合时，所述氨基酸序列表现出的血清半衰期是所述灵长类动物中所述血清蛋白天然血清半衰期的至少50%。22.按照权利要求21的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出的血清半衰期是所述灵长类动物中所述血清蛋白天然血清半衰期的至少60%。23.按照权利要求21或22的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出的血清半衰期是所述灵长类动物中所述血清蛋白天然血清半衰期的至少80%。24.按照权利要求21-23中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出的血清半衰期是所述灵长类动物中所述血清蛋白天然血清半衰期的至少90%。25.按照权利要求21-24中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出的血清半衰期是至少4天。26.按照权利要求25的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出的血清半衰期是至少7天。27.按照权利要求25或26的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出的血清半衰期是至少9天。28.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列是免疫球蛋白序列或其片段。29.按照权利要求28的氨基酸序列，所述氨基酸序列是免疫球蛋白可变结构域序列或其片段。30.按照权利要求28的氨基酸序列，所述氨基酸序列是VH-、VL-或VHH-序列或其片段。31.按照权利要求28-30中任一项的氨基酸序列，其中所述免疫球蛋白序列是结构域抗体、"dAb"、单结构域抗体或纳米体，或其中任一项的片段。32.按照以上权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列是完全人的、人源化的、骆驼的、骆驼化的人的序列或人源化的骆驼的序列。33.包括权利要求1-32中任一项的氨基酸序列的化合物。34.按照权利要求33的化合物，其中所述化合物还包括至少一种治疗部分。35.按照权利要求34的化合物，其中所述治疗部分选自由小分子、多核苷酸、多肽或肽组成的组中的至少一种。36.按照权利要求33-35中任一项的化合物，所述化合物是融合蛋白或构建体。37.按照权利要求36的化合物，其中在所述融合蛋白或构建体中，按照权利要求1-32中任一项的氨基酸序列与至少一种治疗部分直接相连，或通过连接体或间隔区与所述至少一种治疗部分相连，或引入至少一种治疗部分。38.按照权利要求33-37中任一项的化合物，其中所述治疗部分包括免疫球蛋白序列或其片段。39.按照权利要求38的化合物，其中所述治疗部分包括(单)结构域抗体或纳米体。40.多价和多特异性纳米体构建体，其包括至少一种作为纳米体的按照权利要求1-32中任一项的氨基酸序列，和至少一种其他纳米体。41.按照权利要求40的多价和多特异性纳米体构建体，其中所述作为纳米体的按照权利要求1-32中任一项的氨基酸序列与至少一种其他纳米体直接相连，或通过连接体或间隔区与至少一种其他纳米体相连。42.按照权利要求41的多价和多特异性纳米体构建体，其中所述作为纳米体的按照权利要求1-32中任一项的氨基酸序列通过连接体或间隔区与至少一种其他纳米体相连，且其中所述连接体是氨基酸序列。43.核苷酸序列或核酸，所述核苷酸序列或核酸编码按照权利要求1-32中任一项的氨基酸序列、或按照权利要求33-35中任一项的化合物的氨基酸序列、或权利要求40-42中任一项的多价和多特异性纳米体。44.宿主或宿主细胞，所述宿主或宿主细胞包含按照权利要求43的核苷酸序列或核酸，和/或表达(或能够表达)按照权利要求1-21中任一项的氨基酸序列、或按照权利要求22-28中任一项的化合物的氨基酸序列、或权利要求30-32中任一项的多价和多特异性纳米体。45.用于制备按照权利要求1-32中任一项的氨基酸序列、或按照权利要求33-39中任一项的化合物的氨基酸序列、或权利要求40-42中任一项的多价和多特异性纳米体的方法，所述方法包括在这样的条件下培养或维持按照权利要求44的宿主细胞，在所述条件下，所述宿主细胞产生或表达按照权利要求1-32中任一项的氨基酸序列、或按照权利要求33-39中任一项的化合物的氨基酸序列、或权利要求40-42中任一项的多价和多特异性纳米体，且任选地，还包括分离由此产生的按照权利要求1-32中任一项的氨基酸序列、或按照权利要求33-39中任一项的化合物的氨基酸序列、或权利要求40-42中任一项的多价和多特异性纳米体。46.药物组合物，其包括选自由下列各项组成的组中的一种或多种权利要求1-32中任一项的氨基酸序列、或权利要求33-39中任一项的化合物、或权利要求40-42中任一项的多价和多特异性纳米体，其中所述药物组合物适合于对灵长类动物，以在所述灵长类动物中所述血清蛋白天然半衰期的至少50%的时间间隔施用。47.按照权利要求46的药物组合物，其还包括至少一种药用载体、稀释剂或赋形剂。48.按照权利要求1-32中任一项的氨基酸序列、按照权利要求33-39中任一项的化合物、或权利要求40-42中任一项的多价和多特异性纳米体制造施用于灵长类动物的药物的用途，其中以在所述灵长类动物中所述血清蛋白天然半衰期的至少50%的时间间隔施用所述药物。49.按照权利要求48的用途，其中所述灵长类动物是人。50.按照权利要求49的用途，其中以至少7天的时间间隔施用所述药51.治疗方法，其包括向需要所述治疗方法的灵长类动物施用按照权利要求1-32中任一项的任何氨基酸序列、按照权利要求33-39中任一项的化合物或权利要求40-42中任一项的多价和多特异性纳米体，其中所述施用以在所述灵长类动物中所述血清蛋白天然半衰期的至少50%的频率进行。52.按照权利要求51的方法，其中所述灵长类动物是人。53.按照权利要求52的方法，其中以至少7天的时间间隔施用所述药物。54.用于延长或增长治疗剂的血清半衰期的方法，所述方法包括使所述治疗剂与按照权利要求1-32中任一项的任意氨基酸序列、或按照权利要求33-39中任一项的化合物或权利要求40-52中任一项的多价和多特异性纳米体相接触，从而使所述治疗剂与所述氨基酸序列、化合物、或多价和多特异性纳米体结合或另外缔合。55.权利要求45的方法，其中所述治疗剂是生物治疗剂。56.权利要求55的方法，其中所述生物治疗剂是肽或多肽，且其中接触所述治疗剂的步骤包括通过使所述肽或多肽与所述氨基酸序列、化合物、或多价和多特异性纳米体连接而制备融合蛋白。57.权利要求54-56中任一项的方法，其还包括在所述治疗剂与所述氨基酸序列、化合物、或多价和多特异性纳米体结合或另外缔合后，向灵长类动物施用所述治疗剂。58.权利要求57的方法，其中所述治疗剂在灵长类动物中的血清半衰期是治疗剂本身半衰期的至少1.5倍。59.权利要求57的方法，其中所述治疗剂在灵长类动物中的血清半衰期与治疗剂本身的半衰期相比，增长至少1小时。60.氨基酸序列，当在pH5-8范围内测量时，所述氨基酸序列针对血清蛋白的koff速率在+/-70%范围内。61.权利要求60的氨基酸序列，其中所述针对血清蛋白的koff速率在+/-60%范围内。62.氨基酸序列，所述氨基酸序列在5.5-4.5范围内的pH值下针对血清蛋白具有这样的koff速率，所述koff速率是在6.5-7.5范围内的pH下针对相同血清蛋白的koff速率的20-180%。63.氨基酸序列，所述氨基酸序列在5.5-4.5范围内的pH值下针对血清蛋白具有这样的koff速率，所述koff速率是在6.5-7.5范围内的pH下针对相同血清蛋白koff速率的40-160%。64.权利要求60-63中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列是纳米体。65.权利要求60-63中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列是dAbso66.权利要求60-65中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列结合所述血清蛋白和至少一种蛋白质靶标。67.权利要求60-65中任一项的氨基酸序列，其中所述血清蛋白是人血清白蛋白，且所述氨基酸序列结合所述人血清白蛋白和至少一种蛋白质耙标。68.权利要求60-67中任一项的氨基酸序列，其中体内半衰期是与其结合的血清蛋白体内半衰期的70%或更长。69.权利要求60-68中任一项的氨基酸序列，其中体内半衰期是与其结合的血清蛋白体内半衰期的80%或更长。70.权利要求60-69中任一项的氨基酸序列，其中体内半衰期是与其结合的血清蛋白体内半衰期的90%或更长。全文摘要本发明涉及与血清蛋白诸如血清白蛋白结合的氨基酸序列；包括或基本由所述氨基酸序列组成的化合物、蛋白质和多肽；编码所述氨基酸序列、蛋白质或多肽的核酸；包括所述氨基酸序列、蛋白质和多肽的组合物，且特别是药物组合物；和所述氨基酸序列、蛋白质和多肽在pH5-8范围内基本独立的用途。文档编号C07K14/00GK101528767SQ200780037886公开日2009年9月9日申请日期2007年10月11日优先权日2006年10月11日发明者亨德里克斯·雷内瑞斯·雅各布斯·马托伊斯·霍根博姆,伊格纳茨·约瑟夫·伊莎贝拉·拉斯特斯申请人:埃博灵克斯股份有限公司