专利名称：：用于制备17-烯丙基氨基格尔德霉素(17-aag)以及其它袢霉素的方法
技术领域：
：本发明涉及将化学制备方法应用于袢霉素化合物的制备，该化合物作为抗生素以及在治疗诸如癌症等各种增殖性疾病方面非常有用。
背景技术：
：以下描述中包括那些对于本发明理解会有所帮助的信息。这并不是认可在此提供的任何信息为已有技术或与目前所申请的发明相关，或者它所参考的明确或暗示的公开出版物为已有冲支术。17-烯丙基氨基-格尔德霉素(17-AAG)是格尔德霉素(GDM)的合成类似物。这两种分子都属于广义上的抗生素分子，称为袢霉素(ansamycins)。作为首先,人樣吏生物。及水《连霉菌素(Sre/tow/^gra5co/7,'cM)分离出来的GDM，最初-故确定为是某些激酶的有效抑制剂，后来表明它们起着促进激酶降解的作用，专门将目标指向"分子陪4半(molecularchaperones)"，侈'J^口，^W木克蛋白质90s(HSP90s)。后来，各种其它袢霉素也显示出或多或少的活性，其中17-AAG最有希望，目前正由国家癌症十办会(NCI)实施的集中临床研究已经将它作为研究对象。参见FederalRegister,66(129);35443-35444;Erlichman"a/"Proc.AACR(2001),42,abstract4474。HSP90s是普遍存在的陪伴蛋白质，它涉及到4交宽范围内蛋白质的折叠、激活、以及组合，它也包括涉及信号转导、细胞周期控制、和转录调节等关键蛋白质。据研究人员报道，HSP90陪伴蛋白质与重要的信号蛋白质有关，诸如类固醇激素受体和蛋白质激酶，包括Raf-l、EGFR、v-Src族激酶、Cdk4、和ErbB-2(BuchnerJ.,1999，Zms;24:136-141;Stepa謂a,L."a/.，1996,Ge譜Dev.10:1491-502;Dai，K."a/.,1996，乂肠/.C/;缓271:22030-4)。研究进一步表明某些耳关合陪4半蛋白，例长口，Hsp70、p60/Hop/Stil、Hip、Bagl、HSP40/Hdj2/Hsjl、亲免疫因子、p23、和p50会有助于HSP90功能的发对军(参见Caplan,A.,1999,7>ewfe&Ce〃S,'o/.，9:262-68)。人们认为袢霉素抗生素，例如，除莠霉素A(HA)、格尔德霉素(GM)、以及17-AAG可通过与HSP90的N-末端袋紧密结合产生抗癌效果(Stebbins,C.W"/.，1997，CW/,89:239-250)。该袋(pocket嚢)被高度地保存下来，并且与DNA促旋酶的ATP结合部位之间有着寿交弱的同源寸生(Stebbins,C."a/.'sw/n^Grenert,J.P.W1997,乂5/o/.C/ze肌，272:23843-50)。A匕外，已经有结果显示ATP和ADP均以较弱的亲和力与该袋相结合，同时二者都具有弱的ATP酶活性(Proromou,C."1997,Ce〃'90:65-75;Pa腹etou，a/.，1998，EA/S(9乂，17:4829-36)。在活体外和在活体内的研究表明，由于N-末端袋#皮—丰霉素和其它HSP90抑制剂占有，因此改变了HSP90的功能并且抑制了蛋白质的折叠。同时表明在高浓度下，袢霉素和其它HSP90抑制剂可以阻止蛋白质底物与HSP90的结合(Scheibel，T.,H."a/"1999,尸rac.胸"c^/.5W.固96:1297-302;Schulte,T.W."/.,1995，J.肠/.C/z缓270:24585-8;Whitesell，L.,"a/.，1994，尸rac.7Va".Jc^/.OS/i91:8324-8328)。同时也已经表明袢霉素可4中制陪伴相关蛋白质底物中的ATP依赖物质的释方文(Schneider,C.,L.""/，1996，尸亂淑"caJ.Sc/.L^，93:14536-41;Sepp-Lorenzino，"a/.,1995，J.肠/.C/2缝270:16580-16587)。无论何种情况，底物都—皮蛋白酶中存在的一种普遍独立的过程降解(Schneider,C.，L.5"/ra;S印p-Lorenzino，L.,da/"1995，J,肠/.C/7缀，270:16580-16587;Whitesell,L.,"a/"1994,尸roc.淑/.JcaMc/."&4，91:8324-8328)。该底物的不稳定性通常发生在瘤和非转移细胞等类似物中，同时已经i正实它对以下物质特别有效，即信号调节物的亚群(subset),i"列^口，Raf(Schulte,T.W.e"/.'/997，S/ocAem.5/<9/A>^.i^s.239:655-9;Schulte,T.W.,ea/.,1995，JS/o/.CTzem.270:24585-8)、月包核甾体受体(nuclearsteroidreceptors)(Segnitz,B.，和U.Gehring.1997,乂肠/.C/z缓，272:18694-18701;Smith,D.F."a/"1995，Mo/.Ce〃.Sz'o/.15:6804-12)、v-wc(Whitesell,L.,""/.，1994，/^0^"//.^^^.&/.^^91:8324-8328)、以及某些横^争膜的酪氨酸激酶(Sepp-Lorenzino,L.，"a/.，1995,C/z，,，270:16580-16587),例如EGF受体(EGFR)和Her2/Neu(Hartmann，F.，"a/"1997，/""Ca騰r70:221-9;Miller,R"a/"1994，7^.54:2724-2730;Mim誦gh,E.G.,"/.，1996，C/z，.，271:22796-801;Sch匿，R."a/"1995，乂她dC7z缀38:3806-3812)、CDK4、和突变体p53。Erlichmanea/.,Proc.AACR(2001),42，abstract4474。这些蛋白质的诱导袢霉素损失导致某些调节路径遭到选择性石皮坏，并造成在细月包周期的特朱阶^:4亭滞生长(Muise-Heimericks，R.C"/.，1998，J.伤o/.C7zew"273:29864-72),以及凋亡、和/或导致#1治疗纟田月包的分4匕(Vasilevskaya,A,etal.,1999，C""cer7e&,59:3935-40)。(a)采用实施例44所述的方法，由实施例43步骤C得到的4I^Nr和制备2.16得到的游离磁形式的化合物，制名_该化合物。(b)采用实施例51步骤B所述的方法，由实施例51步骤A得到的化^b和制备2.17得到的化鋒(游离碱)，制备该化絲.色谱纯化后，将所得产物溶解在DCM中，加入饱和盐酸的乙S^液至pH1,并压出所需的盐酸盐。(c)采用实施例51步骤B所述的方法，由实施例51步骤A得到的化M和制备2.18得到的化合物(游离碱)，制名-该化合物.色谱纯化后，将所得产物溶解在饱和盐酸的乙S^液中，并压出所需的盐酸盐，在DMSO-d6中、在200MHz、实施例65的质子丽R图谱&:0.8-4.2ppm:u:28H;7.0-7.8ppm:u:8H;7.9-8.6ppm:2s:2H;10.4-11.6ppra:u:2H。在DMS0-d6中，在200MHz，实施例67的质子丽R图谱5:2.0—4.2ppra:u:21H5.9ppra:mt:1H6.75ppm:s:1H7.0—7.8ppm:u:8H10.95ppra:s:1H。实施例684-苯甲酖-2-(3,4-二氟笨基)-2-[2-(4-笨基-4-脲基派咬-1-基]乙基]吗啉盐酸盐二水合物，(+)异构体A)4-笨甲跣-2-(3,4-二氟苯基)-2-(甲酰甲基)吗水(+)异构体在氮气氛下，将2.6毫升草酰氯在59毫升DCM中的溶液*至-78"C，滴加4.6毫升DMS0在".5毫升DCM中的溶液，然后加入8.2克实施例37步骤B得到的化合物在59毫升DCM和5.7毫升DMS0中的溶液。在-60'C搅拌反应混合物30分钟，然后加入16毫升三乙胺，并搅拌反应混合物，同时使温度升至室温。用1N盐酸溶液、水、饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤，有右W目用硫酸镁干燥，并真空蒸发溶剂，得到7.5克所需产物，为油状。B)4-苯甲跣-2-(3，4-二氟笨J0-2-[2-(4-苯基-4-J^^派吱-l-基]乙基]吗包括但不限于净化检查的减少、收率和/或纯度的提高、以及临床上可4妄受试剂的使用。以下是本发明实施例中的一个示例反应方程式其中R'和R"或者均为氢，在此情况下，C4和C5之间的4建为单键，或者R'和R"均不存在，在此情况下，C4和C5之间的键为双^fc。C4和C5之间的虚线表示两种可能都存在。Nu-H是亲核体，反应期间将取代位置17上的R30基团。优选R3为1-4个碳原子，优选甲氧基。反应在挥发性非质子溶剂中进行，溶剂从下述溶剂中选耳又，即THF、乙醚、MTBE、THP、二噁烷、乙基仲丁基醚、甲基丁基醚、乙酸乙酯、或乙酸甲酯，最终生成一种可耳又卩戈的^L产物。优选采用非卣化溶剂。在有些实施例中，亲核体慢慢地加入拟一皮耳又代的苯醌格尔德霉素衍生物中，从而生成以单取代为主的产物。对于该步骤的监测，也可通过4吏用诸如TLC、HPLC等色i普纟支术，或i见有4支术中为人熟知的其它步艰《，例如，分光光度测定法、NMR等方法来测量反应的完成程度。该技术也可用于下述工艺后续步骤中。在优选实施例中，要使反应持续进行直至彻底完成为止，从而使全部的苯醌袢霉素反应物被充分地转化成相应的衍生物。以下是关于在挥发性非质子溶剂中制备粗取代产物的描述，产物经蒸发浓缩后，在诸如异丙醇、乙醇、和/或水等挥发性质子溶剂中淤浆(slurried)或溶解。在此提到的术语"淤浆"是指固体悬浮在液体中，其中固体如袢霉素略微不溶。在此情况下，"洗涤"可能生效，尤其是当杂质溶解度比固体溶解度大时更为如此。以下实施例1具有一定的说明性。替代洗涤或与洗涤相关的步骤是结晶步多聚，正如下述实施例2中的实施。每一种挥发性非质子溶剂和质子溶剂都可以通过采用蒸发或蒸发与离心、加热和/或抽真空相结合等方法方便地除去。正如该领域技术人员所体会的，只要压力减小(提高真空度)就可以采用较{氐的温度。在有些实施例中可单独i也进4亍加热或在标准室温下干燥。也可以采用一次或多次过滤步骤，方便地-使用挥发性质子溶剂洗涤过滤物质从而减少杂质的含量。在有些实施例中，所用亲核体选自由胺类、辟^醇类、碌^醇盐、石克醚、醇类、以及醇盐组成的组，每个构成、拥有、或可以经改斗生后拥有一个或多个官能团，官能团随后^皮添加额外的化学成分，例如生成的苯醌袢霉素^皮限定为另一种结构。在有些优选实施例中，亲核体具有以下结构的伯胺或仲胺其中R"和RS独立地代表氢、(C广C12)烷基或^皮烯丙基、炔丙基、羟基、氨基、巯基、羧酸盐、或卤化官能团等可选取代的(CVd2)烷基。一般而言，可以使用的胺类举不胜举，其中也包括Sasaki的美国专利第4,261,989号中表I所列的胺类。同时需要理解的是，还可以添加其它官能团如烯烃。例如，在有些实施例中，制备17-AAG或4，5-二氬类似物所4吏用的亲核体为烯丙基胺。可以^使用的其它有用亲核体包括但不限于详细描述部分出现的那些亲核体。有些实施例中，通过在方法的一个或多个步骤中4吏用减弱照明的方法来阻止或减小产物和/或反应物的光化降解，这是有益的。甚至在最后时，使最终产物存放在耐光容器中，从而保持或有助于产物的稳定性和保存期限。本发明前述方法的一个方面，其特征在于所述的实施例可^皮结合起来加以应用，而这些实施例是相互一致的。乂人工艺方法更广的方面i井，本发明的特征在于浓缩和/或纟是纯袢霉素的方法。该方法利用挥发性非质子溶剂，优选非卣化溶剂作为溶剂，接着用以下实施例1和实施例2中使用的挥发性质子溶剂进行蒸发、洗涤、或结晶。本发明的另一个方面，其特征在于产物可由该方法制得，并且每种产物都可以按照前述的任一实施例进行制备。另一方面，本发明的特征在于制备17-AAG的方法，其中包4舌提供溶解在质子溶剂溶液中的17-AAG,从所述质子溶剂溶液中结晶17-AAG，所述质子溶剂溶液基本不含水，并且脱除该质子溶剂溶液。术语"制备"是指浓缩、提纯、或将现有的17-AAG多晶型物转4匕成另一种形式的17-AAG。当该术i吾后紧^艮着过渡词"包4舌"时，它是指也包括其它的后续步骤，如溶解在溶液中，生成一种配方等等。术语"脱除"不一定就意。未着彻底脱除，但优选基本脱除，乂人而4吏纟寻在该步马聚完成后，以固体17-AAG为主的产物一皮j呆留下来，而只残存才及少量的;容剂。在一个实施例中，该质子;容剂为异丙醇，脱除异丙醇并结晶后的17-AAG,其熔点约为146。C至153°C,或者约为155。C或j氐于155°C。一个相关4旦不尽相同的方面4吏得所形成的多晶型物17-AAG的熔点更高，优选熔点在约20(TC或200。C以上的范围。在有些优选实施例中，熔点约为206-212°C,该熔点的获得可通过在质子溶剂溶液中结晶加以实现，如乙醇，其中质子溶剂溶液可能含水也可能不含水。应用人员已经观察到溶剂中含水通常会提高所生成的17-AAG多晶型物的最终熔点温度。通过前述方法制得的化合物还要求，最终可混入也可不混入其它一种或多种试剂。可选地，将该组合物存力文在耐光容器中以阻止、减小、或抑制降解的发生。可以预料，其它的亲脂化合物会同样产生不同熔点的,该混合物30分钟，真空浓縮，残余物用乙酸乙酯萃队有机相用水洗涤，用^^^钠干燥，并真空蒸发溶剂，得到1.9克所需产物。C)5-[2-(4-乙敌^^-4-苯基派咬-l-基)乙基]-3-苯甲跣-5-(3,4-二氯笨樣、^盐酸盐一;^^将1.8克前一步骤得到的化合物、1.7克4-乙St^-4-苯J^^^寸甲^t酸盐和1.7克碳酸钾在4亳升DMF中的混合物在80-100"加热2小时。冷却至室温后，将反应混合物倒入水中，压出所形成的沉淀并真空干泉沉淀物在silicaH上it行色谱纯化，用DCM/MeOH的混^#(100/3;v/v)作皿剂。将所得产物溶解在DCM中，加入饱和盐酸的乙S^:液至pH为l,压出所形成的沉淀，得到l克所需产物.熔点=165-170C.实施例75氯化5-(3，4-二氟笨基)-5-[2-[4-苯基-1-氮镇、双环[2.2.2]辛-1-基]乙基]-3-[3,5-二(三氟甲基)千基]逸哇烷-2-酮一水合物，(+)异构体A)5-[2-(苯甲跣勤乙基]-5-(3,4-二氟苯基)-3-[3，5-二(三氟甲基)千基]逸-唾烷-2-酮，(+)异构体采用实施例50步骤A所述的方法，由制备1.23得到的化合物((+)异构体)制备该4匕^/。B)5-(3，4-二氟苯_^)—5-(2—羟基乙基)-3-[3，5-二(三氟甲^^)节基〗逸顿-2-酮，(+)异构体采用实施例50步骤B所述的方法，由前一步骤得到的化合物制备该化合物。C)5-(3，4-二氟笨基)-5-[2-(甲磺跣勤乙基]-3-[3,5-二(三氟甲节基p恶^m-2-嗣，(+)异构体采用实施例50步骤C所述的方法，由前一步骤得到的化合物制备该化合物。D)氯化5-(3,4-二氟苯基)-5-[2-[4-苯基-1-氮镇、双环[2.2.2]辛-1-基乙基]-3-[3，5-二(三氟甲基)苄基]嗯哇烷-2-嗣一水合物，(+)异构体采用实施例50步骤D所述的方法，由前一步骤得到的化合物和4-苯基-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷制备该化合物。具体实施方式本发明涉及用于制备4半霉素，如苯醌袢霉素，及其彩f生物，如17-AAG和它的4，5-二氩类似物的改进方法。该方法在获得4交好纯度和收率的同时，还可以避免与萃取和色语分离准备相关所导致的时间碑毛费与昂贵的一企查处理等工作。在某些方面和实施例中，所用的4支术包括在反应物和产物都能溶解的条件下，亲核体攻击一种或多种挥发性非质子溶剂，例如，醚或乙酸盐，优选非卣化物。然后，将生成的产物蒸发浓缩，向浓缩产物中加入挥发性质子溶剂，如挥发性醇和/或水，其中挥发性质子溶剂起到洗涤作用或担当(再)结晶的介质。过滤、离心、滗析、和/或蒸发都有助于各个步骤的进行。生成的产物可直4妻或间4妻地用作与一半霉素相关的^丈用，例如作为抗生素或抗癌剂。；就间4妻;攻用而言，产物也是有用的，例如用作袢霉素衍生物合成的中间体，正如给予Schnur等并專争让乡合PfizerInc的美国专利第5,932,566号和PCT/IB94/00160(WO95/01342)中所4皮露的。在本发明前，DMF、DMSO、CH2C12、以及CHCl3都是制备袢霉素并完成耳又代反应和亲核加成反应可供选一奪的介质。该类i式剂和方法的应用需要涉及费事的冲企查(work-ups)处理工作和多次K洗与EtOAc萃取。在当今气候受控的时代，尤其不鼓励使用氯化了的溶剂。氯化了的溶剂有害于环境，其残留物质的存在对人体健康构成潜在的威胁。此外，申请者已经发现该类溶剂会促使产物降解，从而危及到产物的纯度和收率。本发明的方法更为直接，生成的产物通常有较高的收率和纯度，同时也避免了或者最大程度的减少了随之而来的环境和健康问题，因此可以很好地应用于工业化生产。权利要求中使用到的术语"可选地"是指可以进行紧接着该术语后的步骤但并不一定必须要实施。术语"脱除"和"浓缩"不一定意味着100%地除去〉容剂，可以允许4交少百分比的MJ余或浓缩。术语"非卣化"是指不含一个或多个卤素原子，例如F、Cl、Br、以及I。具有一定说明性的卣化溶剂包括CHCl3(氯仿)。"洗涤，，表示质子溶剂在所采用的条件下略微不溶袢霉素。洗涤可能包纟舌混合液的生成，并且，无i仑如何，3于脱除杂质有一定岁丈果。"挥发性非质子溶剂"是指沸点在约35°C至102°C之间的溶剂。优选的非质子溶剂如下表III中所示。非质子溶剂被认为是"非结构化的"，也就是说，在纯液体状态下，缺乏广延的氩键网络。但是，某些非质子溶剂有能力溶解和稳定化合物，或溶解自身使其质子化，例如，醇或7K本身。水和THF是易混合的。一4殳而言，在普通环境下非质子溶剂缺乏自分解成离子的能力。"挥发性质子溶剂"包括异丙醇、乙醇、水、及其它们的混合物。水是传统的质子;容剂。液相水的特征在于它具有广延的氢4建网络。在液相中，每个独立的水分子与相邻的水分子构成4个氢^fc。破坏这个广延的氢键网络需要提供大量的能量，这种能量的代价反映在低分子量化合物具有相对高的沸点(100°C)上。醇类，尤其是低分子量的醇类(少于12个碳原子的醇)显示出与水相似的特性。一个氢键网络在液体状态下建立起来。但是，由醇类分子建立的氢键网络，其氢键数目与水的有所不同醇类溶剂分子之间只产生3个氢键，而液态水分子之间通常有4个这样的键。这就使得醇类溶剂分子之间具有更大的"不牢固性"，意口未着它相对于水具有更j氐的沸点和冷凝温度。水/醇混合物的物理性质之一是形成共沸混合物。将醇加入到水中引起水沸点的降低。下表阐明了向水中加入10%的乙醇将会生成一种挥发性大于水本身的溶剂。表I<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表I进一步表明以乙醇为主所组成的混合物，如约95%的乙醇和5%的水，在与纯乙醇相同的溫度下发生沸腾。因此基于这个原因，实际上不可能通过水/乙醇混合物的蒸馏得到纯乙醇，这是蒸馏
技术领域：
为人熟知的事实。质子溶剂的另一个特点是它们会发生一定禾呈度的自身电离。例如，4安照以下方程式水^皮离解成带相反电荷的离子2H2OhH30++OH纯水本身离解度4艮小，但还是可以测得，这是众所周知的事实，即纯7jc在25°CT[H30+]=1(T7(或PH值为7)。"非氧化环境，，不是指不可能或实际不发生氧化，只是简单的il明发生这种情况的可能性减小。该类例子包括^f旦不限于减少照明和/或减少气态氧的应用。如果空气或氧气被氮气和/或氩气取代，则属于后一种情况。袢霉素和苯醌袢霉素术语"袢霉素"在文献中是众所周知的，它具有较宽类别的结构，其特征在于它是由不同长度的脂肪环、桥连芳香环结构相对端的组合物及其它们的还原等效物所构成。包含在该宽类别之内的还有它的子类-笨醌袢霉素。具有说明性的种类包括格尔德霉素(GM)17-氨基格尔德霉素(17-AG)17-烯丙基氨基格尔德霉素(17-AAG)在此4吏用的"苯醌袢霉素"拥有苯醌成分，同时也包^舌该^支术领域中已知的苯醌一半霉素。它在某些方面具有亲核加成的特4正，优选地，分子的苯醌部分包括一个烷氧基，优选曱氧基，同时优选地，17的位置能够被亲核体取代。反应的结果是形成"苯S昆袢霉素衍生物"。才艮据本发明，袢霉素和苯醌袢霉素可以是合成制得的，也可以是自然产生的或者是二者结合的产物，即"半合成"。它们也可以是单体或者二聚体。有关二聚体袢霉素的说明性示例包括但不限于在2000年4月7日提交并于2000年10月19日/>布的Rosen等的国际申请专利PCTUS00/09512(WO00/61578)中提到的二聚体#半霉素。本发明方法中其它有用的示例性苯醌—半霉素及其制备方法包括但不限于美国专利第3,595,955号(描述了格尔德霉素的制备)、第4,261,989号、第5,387,584号、和第5,932,566中所述的内容。格尔德霉素也可在商业上获得，例如，可从CNBiosciences,—家德国Darmstadt的MerckKGaA分7>司，总部i殳在美国加利福尼亚州圣地亚哥(cat.第345805号)获得。关于从吸水《连霉菌培养基(ATCC55256)中生化提纯4,5-二氢格尔德霉素及其氢醌衍生物的内容，在转让给PfizerInc.、国际申请编号为PCT/US92/10189的专利中有所披露，该专利于1993年7月22日作为WO93/14215被公布，并将Cullen等列为发明人；另外一种通过采用格尔德霉素催化加氬制备4,5-二氢格尔德霉素的合成方法也为人所熟知。参见ProgressintheChemistryofOrganicNaturalProducts,CT^wZ-y/r^1^m"am_yc/w^4w"'Z/Wcs，331976,p.278。亲核体地，它们可选自由石克醇类、石克醇盐、辟u醚、醇类、以及醇盐组成的组，其每个构成、拥有、或经改性后拥有一个或多个官能团，官能团随后添加额外的4匕学成分，例如抗体。在有些优选实施例中，亲核体是具有以下结构的伯胺或仲胺R\R5其中R"和RS独立地代表氢、(CrC!2)烷基、或一皮烯丙基、炔丙基、羟基、氨基、巯基、羧酸盐、或卣化功能基等可选取代的(C,-C12)烷基。一4殳而言，可以使用的胺举不胜举，其中也包括给予Sasaki的美国专利第4,261,989号中表I所列的胺。同时需要理解的是，还可添加其它官能团如烯烃。例如，在有些实施例中，制备17-AAG或4,5-二氢类似物所使用的亲核体为烯丙胺。烯丙胺和在此所述的其它亲核体都是在商业上可获卩寻的，如/人Sigma-Aldrich获得。下表列举了一些优选的亲核体，这些亲核体可用于本发明的不同实施例中。表II<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>挥发性非质子溶剂表III列出了对本发明各种实施例有用的挥发性非质子溶剂的示例。表m<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>以上列表只是示意性的，本领域技术人员将会i人识到其它现有的挥发性非质子溶剂也可以使用。由于醚和乙酸盐是极性、非质子介质，因此特别有用；它们可溶解各种有机化合物，兼有水和烃的性质，同时具有烷基"部分"和带有孤电子对的氧原子。反应容器适于本发明的反应容器是商业上可获的、配备有磨石少玻璃接头的3皮璃反应弁瓦。4吏用该类容器时，通常用到由特氟隆(teflon聚四氟乙烯)或其它惰性材料涂布的磁力搅棒，例如，涂布PTFE或其它惰性涂料。在工业放大合成时，许多金属反应容器是密封的，因此本身就耐光。也可以采用机械搅拌，其中搅拌轴和/或搅棒插至反应容器中。为了排除光照，使用简单黑暗的室内光即可。可选地，反应瓶以及具有光敏材料的反应部分可用铝箔包裹，或者采用现有才支术中已知的另一种耐光容器装^f瓦或包装。需要对加入速度进行控制的反应可以在多瓶颈的园底烧瓶中进行，烧瓶配有加入漏斗(滴加漏斗)。简单的加入漏斗类似于分离漏斗，出口有凸出的标准4,形4妾头，可以实J见液体反应物或遂液被逐滴加入，其中旋塞阀用于控制滴加速度。用于加入漏斗的旋塞阀可以优选特氟隆旋塞阀，这样，就可以避免旋塞阀润滑脂的4吏用，以免其浸入有枳》容剂中4吏所需要的产物受到污染。许多小型反应采用注射器加入液体，这样做方便易行，它可以使每单位时间加入反应物的量得到精确控制。但是文献中众所周知的另一种加入液体反应物的方法是使用注射泵。当然也可以使用调速泵和其它设备。反应监测权利要求中的术语"使用色谱技术监测"是指用来确定是否存在所需要的产物及其/或量的多少，或者，是否不存在反应物或不需要的产物及其/或量的多少。现有技术中已知的方法有多种，以下仅就其中的几种予以讨^r。TLC薄层色谱法(TLC)是吸附色语的一种，其中载在平面上的薄层吸附剂充当固定相。TLC最常用的吸附剂是硅月交和氧化铝。硅藻土和纤维素最不常用。通过溶剂沿着吸附剂薄层作毛细管运动实现TLC色谱的洗脱或展开(development)。TLC洗脱液的选择取决于吸附剂类型和吸附剂中有待分析化合物的亲和力。TLC对于监测反应进程、检测反应中间体、分析粗产物、或未知混合物，从而确定组分的数目以及检验提纯效率等诸多方面非常有用。对于无色有才几,匕合物而言，可以通过5见有4支术中已知的许多技术显现吸附剂上的化合物。然而，本发明中起始原料和产物的颜色分别为肉眼可见的黄色和紫色。HPLC在高压液相色语(HPLC)中，液相依靠压力强行通过固定相，从而提高了洗脱液通过吸附剂色谱柱的流量。可以应用现代化工业仪器检测溶剂混合物和溶剂梯度。通常采用可变波长紫外检测仪对起始原料和产物进行最佳4企测，并且通过信号的适当才交准，应用商业上可获得的软件定量地检测原料用量。溶剂脱除为了从反应混合物、萃取液、色谱组分、或(再)结晶的母液中得到需要的产物，常常有必要浓缩溶液或彻底地脱除溶剂。该过程可通过常压或减压下的简单蒸馏或分馏来完成。有时，采用常压蒸馏脱除大部分的溶剂，剩余少量溶剂在减压下进行脱除。但无论如何，必须考虑需要产物的稳定性和挥发性，也就是i兌必须注意避免因过热而造成的产物分解。溶剂的脱除和低压升华干燥法可采用目前商业上可获得的旋转蒸发设备来实现。其它可采用的简单设备对于本领域技术人员而言是熟知的。在较高真空度、较低温度下的脱除溶剂的方法也为本4页i或^支术人员所熟夕口。过滤过滤就是通过多孔阻挡层的使用，如过滤器，使不溶的固体从液体中分离出来；液体通过过滤器而固体被保留在过滤器上。依靠重力(重力过滤)和/或4吏用吸入(吸滤)使液体得以通过过滤器。过滤步骤用于澄清溶液和/或收集固体。有才几化学中最常用的过滤器是滤纸和烧结玻璃料，二者都能够从商业上可获得的各种来源得到，这对于本领域技术人员来讲是熟悉的。吸滤通常使用B(ichner、Hirsch、或烧结玻璃料。在吸滤操作时，通过采用吸气器或其它抽真空装置使得液体压力低于过滤器压力，然后由大气压迫使液体通过过滤器。(再)结晶结晶就是从溶液或给定材料的熔化物中沉积出晶体。晶体形成时，同类分子倾向于附着到由同类型分子组成的日益增长的晶体结晶过程在接近平衡的条件下发生，则分子沉积到由同类分子组成的表面这一倾向性将导致结晶物质纯度的提高。因此结晶过程是一种重要的提_纯方法将结晶归入更广泛的术i吾"沉淀"，其含义是溶解的化合物中止溶解，不论"结晶"与否均有效地在溶液外以固体的形式存在。沉淀或结晶可以在持续的时间内发生，例如从数秒钟到数小时直至数天。该过程也取决于下述实施例2中所示的温度，同时还取决于所用溶剂和溶质的性质，而且不同温度下物质的溶解度有一定差异。术语"再结晶"是指不论是否使用同样的溶剂和采用同样的条件，也不论是否足以达到形成相同或不同熔点的多晶型物，化合物已经发生了一次或多次结晶。其实，本发明所体现的一个方面就在于它能够形成并采用不同的多晶型物结构。申请人已经确定出合成多种相对较纯的形态(多晶型物)17-AAG的可能性，它们当中有些具有约147至153。C相对低的熔点，例如，从基本上纯的异丙醇中结晶出来，有些具有约200-212°C的更高^容点，例如，AM匕合了部分水的乙醇中结晶出来。可以将水和乙醇预先混合好，或者事后把水加到乙醇溶液中，其中该乙醇卩容液中已含有)容角竿的17-AAG。与高》容点形态的17-AAG相比，17-AAG的熔点越低，越容易在室温下溶解于各种溶剂和油中，同时用低熔点形态的17-AAG配制药物或药物组合物更是具潜在的优点。较高熔点形态所带来的好处在于，可在不同的条件下具备更术人员可以根据最终目的的不同，简单地采用在适宜溶剂中溶解和结晶的方法，很容易实现一种多晶型物向另一种多晶型物的转化。在使用17-氨基格尔德霉素("17-AG";参见实施例5、6)的过程中也观察到相似的现象，这就暗示我们对于其它袢霉素来说，可以获得不同的多晶型物，同时，对于其它不相关的化合物来i兌可能也这样。实施例实施例117-烯丙基尔德霉素(17-AAG)的合成将45.0g(80.4mmo1)格尔德霉素置于装有1.45L千燥THF的2L干燥火免并瓦中，向其中逐滴滴力口36.0mL(470mmo1)烯丙胺，滴加高于30分钟，其中蜂丙胺置于50mL的干燥THF中。反应混合物在氮气保护下于室温搅拌4小时，直至TLC分析表明反应已经完成[(GDM:亮黄色Rf=0.40;(5%MeOH-95%CHC13);17-AAG:紫色Rf=0.42(5%MeOH-95%CHCl3)]。旋转蒸发脱除溶剂，4且产物在25°C下与420mLH20:EtOH(90:10)混合，然后过滤，并在45。C下干燥24小时，得到40.9g(66.4mmol)紫色晶体17-AAG(82.6%的收率，HPLC监测254nm处纯度>98%)。MP206-212°C。^NMR和HPLC〗寻到的结果与需要产物的相一致。实施例217-AAG在异丙醇中结晶提纯的可选方法不是在乙醇中结晶，而是在800mL2-丙醇(异丙醇)中于80。C或在回流下(约82.2°C)溶解实施例1中的粗产物17-AAG,然后冷却至室温。过滤，然后在45。C下干燥24小时，得到44.6g(72.36mmol)紫色晶体17-AAG(90%的收率，HPLC监测254nm处纯度>99%)。MP147-153°C。^NMR和HPLC得到的结果与需要产物的相一致。实施例3实施例2的17-AAG多晶型物的乙醇洗涤才是纯的可选方法是在400mL的H20:EtOH(90:10)中于25°C混合实施例2中的产物17-AAG,过滤，并在45。C下干燥24小时，得到42.4g(68.6mmol)紫色晶体17-AAG(95%的收率，HPLC监测254nm处纯度〉99%)。MP147-153°C。'HNMR和HPLC得到的结果与需要产物的相一致。实施例4多晶型物的转化17-AAG在乙醇中再结晶才是纯的可选方法是在300mL的EtOH中于回流下(约80°C)溶解实施2中的产物17-AAG,然后加入1200mL水并冷却至室温。过滤收集固体，然后在45。C下干燥24小时，得到41.0g(67mmol)紫色晶体17-AAG(93%的收率，HPLC监测254nm处纯度>99%)。MP206-212°C。1HNMR和HPLC得到的结果与需要产物的相一致。实施例517-^^^格尔德霉素(17-AG)的合成将2.0g(3.57mmol)格尔德霉素置于装有40ml干燥THF的干燥烧瓶中，烧瓶经火焰烘干。在氮气保护下向其中加入2.55ml(17.8mmol，曱醇溶液，ca7N)氨水。反应混合物在室温下搅拌24小时，直至TLC分析表明反应已经完成。旋转蒸发脱除溶剂，将粗产物溶解在30mL的EtOH中并加入120mL水l吏其结晶，得到1.8g(3.30mmol)红色晶体17-AG(HPLC监测纯度为99%)。MP284-286°C。'HNMR和HPLC得到的结果与需要产物的相一致。实施例617-AG在异丙醇中再结晶提纯实施例5中17-AG的可选方法是将最终产物17-AG于80。C或在回流下(约82.2*€)溶解在30mL基本上纯的2-丙醇(异丙醇)中，然后冷却至室温。过滤，然后在45。C下干燥24小时，得到1.5g(2.7mmo1)紫色晶体17-AAG(76%的收率，HPLC监测254nm处纯度〉99%)。MP267-271°C。'HNMR和HPLC得到的结果与需要产物的相一致。上述实施例并非是局限性的，它们只是体现本发明各个方面和实施例中有一定代表性的示例。在此引用的所有资料对于本发明的该领域技术人员而言具有一定的指导性。尽管披露的资料没有一篇被认为是已有的技术，但是每篇资料在此都以同样的程度一并作为参考，就好比每篇资料都一皮完全独立地并入作为参考。本领域技术人员将会很容易地体会到本发明可以很好地达到以上所述的目标、结果、优点、及其包含的固有特点。用所述方法和组合物来阐明优选实施例，目的是为了示例而不是对本发明涵盖范围的限制。本领域:技术人员可以对其进4亍某些改动并用作其它用范围内。显而易见，对于本领域冲支术人员来i兌，在不偏离本发明4青神和范围的情况下，可以对本发明进行各种替换和更改。因此，这类额200810059556.2说明书第5/12页uiH(糊固z,CDC13，TMS)S8.68-8.69(d，1H,/=4.4Hz)，7.97-7.99(t,2H),7.69-7.71(m,2H),7.38-7.48(m,3H),7.17-7.21(m，1H).MS(EI):m/z(%):155(100)[M+],154(21),153(7)，115(7),76(9).称取lmmol的2,6-二溴吡啶，3.0mmo1的PhB(OH)2，4mmo1的氢氧化钠，0.9mol。/。的醋酸钯，0.2g硅胶(300-400目)，3.5g聚乙二醇2000于25ml的圆底烧瓶中，加入3ml的水，磁搅拌，在80。C下反应24小时，冷至室温，用4*15ml的乙醚萃取。蒸干乙醚后，即得产品。用石油醚/乙酸乙酯进行柱分离，得分析纯产品，产率为卯％。HNMR(400MHz,CDC13,TMS)S8.13-8.15(q,4H)，7.73-7.77(q,1H,/=8.8Hz),7.64-7.66(d,2H,7.2Hz),7.46-7.50(t,4H,/=7.2Hz),7.39-7.43(m,2H).MS(EI):m/z(%):232(16)[M++1],231(100)[M+],230(63)[MM],102(11).实施例7称取lmmol的5-溴嘧啶，l.Ommol的PhB(OH)2,2mmo1的氢氧化钠，0.5mol。/。的醋酸钯，0.2g硅胶(300-400目)，3.5g聚乙二醇2000于25ml的圆底烧瓶中，加入3ml的水，磁搅拌，在80°C下反应1小时，冷至室温，用4*15ml的乙醚萃取。蒸干乙醚后，即得产品。用石油醚/乙酸乙酯进行柱分离，得分析纯产品，产率为98%。V^^G^H丽R.(400MHz,CDC13，TMS)S9.15(s,1H),8.89(s,2H),7.41-7.53(m,5H).MS(EI):m/z(%):157(10)[M++l]，156(100)[M+],155(15)[MM],102(54)实施例8称取lmmol的3-溴喹啉，1.5mmol的PhB(OH)2，2mmo1的碳酸钠，0.5mol%的醋酸钯，0.1g硅胶(300-400目)，3.5g聚乙二醇2000于25ml的圆底烧瓶中，权利要求1.一种制备袢霉素的方法，包括以下步骤(a)提供挥发性非质子溶剂中的袢霉素；(b)通过蒸发浓缩所述袢霉素；(c)向步骤(b)的产物中加入挥发性质子溶剂；以及(d)在适宜条件下脱除所述挥发性质子溶剂，提纯所述袢霉素，所述脱除可采用过滤步骤完成。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述挥发性非质子溶剂选自由THF、乙醚、MTBE、THP、二噁烷、乙基仲丁基醚、甲基丁基醚、乙酸乙酯、以及乙酸曱酯ia成的ia中的一种或多种，其中所迷挥发性质子溶剂包括选自由挥发性醇类、水、及其混合物组成的组中的一种或多种成分。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述挥发性质子溶剂用于从溶液中结晶所述袢霉素。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述挥发性质子溶剂用于洗涤所述袢霉素。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述挥发性非质子溶剂包括THF。6.才艮据权利要求1所述的方法，进一步包括色i普技术，以监测反应完成程度和/或纯度。7.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(b)和/或步骤(d)包4舌热、离心、滗冲斤、和/或真空的施用。8.根据权利要求1所述的方法，进一步包括在非氧化环境下进行(a)-(d)中的一个或多个步骤。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述袢霉素选自由17-AAG和4，5-二氢17-AAG组成的组。10.根据权利要求1-9中任一权利要求所述的方法，均可选地包装在耐光容器中。11.一种制备17-AAG的方法，包4舌以下步-骤提供溶解在质子溶剂溶液中的17-AAG,所述质子溶剂溶液基本不含水；从所述质子溶剂溶液中结晶所述17-AAG;以及脱除所述质子溶剂溶液。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述质子溶剂是异丙醇，其中脱除所述异丙醇并经过结晶的17-AAG，其熔点为146°C-153°C。13.根据权利要求11所述的方法，其中所述质子溶剂是异丙醇，其中月兑除所述异丙醇并经过结晶的17-AAG,其;^容点约为155。C或4氐于155°C。14.一种包括17-AAG的组合物，通过权利要求12或13所述的方法制成。15.—种包括17-AAG的组合物，通过权利要求11所述的方法制成。16.根据权利要求14所述的组合物，可选地包装在耐光容器中。17.根据权利要求15所述的组合物，可选地包装在耐光容器中。18.—种制备17-AAG的方法，包括以下步骤提供溶解在质子溶剂溶液中的17-AAG，所述质子溶剂溶液含有部分水；乂人所述质子溶剂溶液中结晶所述17-AAG;以及脱除所述质子溶剂溶液。19.根据权利要求18所述的方法，其中脱除所述质子溶剂溶液并经过结晶的17-AAG,其熔点高于200。C。20.根据权利要求18所述的方法，其中脱除所述质子溶剂溶液并经过结晶的17-AAG,其熔点为206°C-212°C。21.根据权利要求19或20所述的方法，其中所述质子溶剂溶液进一步包4舌乙醇。22.—种包括17-AAG的组合物，通过权利要求21所述的方法制成，所述组合物可选地包装在耐光容器中。23.—种将第一袢霉素多晶型物转化成第二袢霉素多晶型物的方法，包括在足以生成所述第二袢霉素多晶型物的条件下，将所述第一袢霉素多晶型物溶解在质子溶剂溶液中。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述第一多晶型物，其熔点高于所述第二多晶型物的熔点。25.根据权利要求23所述的方法，其中所述第一多晶型物，其熔点低于所述第二多晶型物的熔点。26.根据权利要求23-25中任一权利要求所述的方法，其中所述袢霉素为17-AAG。27.根据权利要求24所述的方法，其中所述袢霉素为17-AAG,所述第二多晶型物由基本不含水的异丙醇溶液结晶形成。28.根据权利要求25所述的方法，其中所述袢霉素为17-AAG,所述第二多晶型物由含水的乙醇溶液结晶形成。29.—种纟且合物，包4舌》容点为147-153。C形态的17-AAG。30.根据权利要求29所述的组合物，其中所述17-AAG是结晶态。31.—种组合物，包括熔点为267-271'C形态的17-AG。32.根据权利要求31所述的组合物，其中所述17-AG是结晶态。33.—种将结晶化合物的一多晶型物转化成另一多晶型物的方法，包4舌以下步-腺(a)提供第一结晶态化合物，所述第一结晶态化合物具有第一熔点，并且由第一溶剂结晶制得；(b)在第二溶剂中再次结晶所述化合物，获得第二结晶态，所述第二结晶态化合物具有与所述第一熔点不同的第二熔点。34.根据权利要求33所述的方法，高于所述第二结晶态的熔点。35.根据权利要求34所述的方法,低于所述第二结晶态的熔点。其中所述第一结晶态，其熔点其中所述第一结晶态，其熔点36.根据权利要求33-35中任一权利要求所述的方法，其中所述化合物为袢霉素。37.才艮据斗又利要求36所述的方法，其中所述一半霉素选自由17-AAG和17-AGia成的纟且。38.—种包括17-AAG的组合物，根据权利要求1、11或18中任一权利要求所述的方法制备，所述17-AAG具有小于212。C的熔点。39.—种包括17-AAG的组合物，所述17-AAG具有小于212。C的熔点。40.才艮据权利要求39所述的组合物，其中所述17-AAG具有小于20(TC的火容点。41.一种包括17-AAG的组合物，所述17-AAG具有约146°C-155。C之间的^容点。42.—种包括17-AAG的组合物，所述17-AAG具有146°C-155°C之间的夂容,泉。43.—种包括17-AAG的组合物，所述17-AAG具有约155。C或小于155。C的熔点。44.一种主要由17-AAG组成的组合物，所述组合物具有147-153。C的熔点和至少99%的纯度水平，其通过HPLC且在254nm处光谱吸收测得。全文摘要本发明涉及用于制备高收率、高纯度、和17-烯丙基氨基格尔德霉素(17-AAG)的不同多晶型物以及其它袢霉素的有效化学方法。文档编号C07D225/06GK101230040SQ200810006258公开日2008年7月30日申请日期2002年9月18日优先权日2001年9月24日发明者琳张,西埃德·塞加,马库斯·F·贝姆申请人:康福玛医药公司