专利名称：：具有抗肿瘤作用的乌骨藤碳-21甾体皂苷混合物的制作方法
技术领域：
：本发明属医药
技术领域：
，具体涉及一种从中药乌骨藤(AfaM&mhte腦ch/"w)中提取分离得到的具有抗肿瘤作用的碳一21甾体苷混合物一乌骨藤总苷H和以该类化合物为活性成分的药物组合物，以及它们在抗肿瘤方面的应用。
背景技术：
：癌症是当今世界最大的疑难病症之一。大量的临床和实验研究证明，中医药在癌症的防治和康复方面具有重要的作用，从中草药中寻找抗癌活性成分，不仅对发现新药有很大潜力，而且可为设计更理想的新药提供独特的化学结构。因此，很多国家和制药企业把抗癌药物开发的重点逐步转向天然药物。乌骨藤，为萝摩科植物，具有清热解毒、化痰软坚之功效。以乌骨藤单味制成的制靴'消癌平片"和"消癌平注射液"临床用于治疗食道癌、胃癌、肺癌、肝癌，取得较好的疗效，但存在以下几个问题(l)提取工艺有待改进"消癌平片"系乌骨藤水提取后加工制成的片剂，每日服用量24-30片。成分复杂，成品体积大，有效成分相对含量低，生物利用度低，服用量大；"消癌平注射液"系乌骨藤水提取浸膏，加聚山梨酯80加工制成的注射剂，以聚山梨酯80作增溶剂，毒副作用大。(2)质量控制技术落后"消癌平片"质量标准仅有理化鉴别项；"消癌平注射液"用分光光度法测定总酚酸的含量。(3)有效成分有待确证。乌骨藤中绿原酸等酚酸类成分仅为其抗炎有效成分，而其中的抗癌有效成分尚不明确。近年来，随着新的提取分离技术的产生，并应用于药物的生产中，同时政府十分重视提高中药产品的附加值和技术含量，从而提高药物的疗效。因此十分有必要对乌骨藤抗肿瘤作用有效成分进行进一步的研究与开发，阐明其中的有效成分或有效部位，这不仅对加快传统中药产业改造，实施中药现代化工程及促进医药产业发展有重要意义，而且对创制具有我国特色、拥有自主知识产权、并符合国际规范的新药有重要的指导意义。
发明内容本发明的目的是通过现代化学和药理手段，从乌骨藤中提取分离出具有抗肿瘤作用的碳一21甾体苷混合物一乌骨藤总苷H。本发明从乌骨藤中提取分离具有抗肿瘤作用的碳一21甾体苷类化合物，得到5种碳一21甾体苷，分别为通光藤苷A，通光藤苷B，通光藤苷C，通光藤苷D，MarsdenosideK，以及包含这5种碳一21甾体苷的混合物一乌骨藤总苷H。该混合物中，一般地其碳一21甾体苷类化合物的重量含量^80%。乌骨藤总苷H的制备方法，该方法包括以下步骤a.将乌骨藤的茎粉碎后，以乙醇提取；b.乙醇提取液浓縮后经硅胶柱层析，氯仿一乙醇进行梯度洗脱；c.用薄层层析检测层析流分，具有相同单一斑点的流分合并浓縮，得到含上述碳一21甾体苷类化合物的流份即为乌骨藤总苷H。本发明提取的乌骨藤总苷H，在动物体内抗肿瘤试验中，对小鼠移植性肿瘤S18。肉瘤及H22实体瘤具有明显的抑制作用。本发明中乌骨藤总苷H所包含的5种碳一21甾体皂苷是下列5个化学结构所示的5种甾体皂苷元之一与同一种糖链形成的5种糖苷，其中R为糖链。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>通光藤苷元乙通光藤苷A中，苷元为通光藤苷元乙-I，R为葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-(9-甲基-^D-阿洛吡喃糖基-(1—4)-^D-夹竹桃吡喃糖基。通光藤苷B中，苷元为通光藤苷元乙-II，R为3-CS^D-葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-0-甲基-AD-阿洛吡喃糖基-(1—4)-^D-夹竹桃吡喃糖基。通光藤苷C中，苷元为通光藤苷元乙-III，R为3-O^D-葡萄吡喃糖基o=c通光藤苷元乙-1ROH通光藤苷元乙-II<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>-(1—4)-6-去氧-3-0-甲基-^D-阿洛吡喃糖基-(1—4)-^D-夹竹桃吡喃糖基。通光藤苷D中，苷元为通光藤苷元乙-IV，R为葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-0-甲基-^D-阿洛吡喃糖基-(1—4)-^D-夹竹桃吡喃糖基。MarsdenosideK中，苷元为11-oc-(9-苯甲酰基-12-p-(9-乙酰基-通光藤苷元乙，R为3力，D-葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-6>-甲基-^D-阿洛吡喃糖基-(l—4)-^D-夹竹桃吡喃糖基。本发明提供的碳一21甾体皂苷以及包含有碳一21甾体皂苷的乌骨藤总苷H的制备方法如下乌骨藤用乙醇等作为提取溶剂进行提取，将提取浓縮得到的浸膏经硅胶柱层析，用薄层层析检测层析流分，合并具有相同单一斑点的流分，浓縮，得到乌骨藤总苷H。将乌骨藤总苷H经Rp—18低压柱或制备型HPLC(高效液相)分离和纯化，分得通光藤苷A，通光藤苷B，通光藤苷C，通光藤苷D，MarsdenosideK。通过酸水解以及紫外光谱仪、红外光谱仪、电喷雾质谱仪、核磁共振氢谱仪、核磁共振碳谱仪等光谱分析技术，得到上述5种碳-21甾体苷的化学结构,依次为通光藤苷元乙-I3-0-AD-葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-0-甲基-^D-阿洛吡喃糖基-(1—4)-^D-夹竹桃吡喃糖苷；通光藤苷元乙-II3-O-AD-葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-0-甲基-^D-阿洛吡喃糖基-(1—4)-^D-夹竹桃吡喃糖苷；通光藤苷元乙-1113-0-^D-葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-0-甲基-^D-阿洛吡喃糖基-(1—4)-/WD-夹竹桃吡喃糖苷；通光藤苷元乙-IV葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧_3-0—甲基—^D—阿洛吡喃糖基—(1—4)-^D—夹竹桃吡喃糖苷；ll-a—6>-苯甲酰基-12-p-O-乙酰基-通光藤苷元乙3-O-^D-葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-O-甲阿洛吡喃糖基-(1—4)-AD-夹竹桃吡喃糖苷。本发明的药物组合物含有治疗有效量的乌骨藤总苷H，以及含有一种或多种药学上可接受的载体。本发明的乌骨藤总苷H和药物组合物可用于制备治疗抗肿瘤的药物。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使乌骨藤总苷H与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。本发明的药物组合物优选含有乌骨藤总苷H占总重量比为0.1%99.5%。最优选含有活性成分占总重量比为0.5%95%。对本发明中的乌骨藤总苷H进行了小鼠移植性肿瘤S18。肉瘤及？122实体瘤体内抗肿瘤试验，以及对环磷酰胺抑制小鼠移植性肿瘤S18Q肉瘤及1122实体瘤的增效作用。(一)乌骨藤总苷H对小鼠移植性肿瘤S1SQ肉瘤体内抗肿瘤试验。1.方法在无菌条件下取生长79天的小鼠移植性肿瘤S，腹水，用4倍体积生理盐水稀释，于小鼠腋窝皮下接种0.2mL/只，接种次日随机分组，每组10只。设空白对照组，乌骨藤总苷H的不同浓度给药剂量组，环磷酰胺(CTX)组。接种次日起乌骨藤总苷H组每天灌胃给药1次，连用10天，CTX组腹腔注射给药2天，每天1次。停药次日动物称体重，处死后剥离瘤块，称瘤重。按下式计算肿瘤生长抑制率。抑瘤率=(1-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)><100%。所得数据用平均值士标准差表示，并用t检验法比较各组间的统计学差异。2.结果见表1表l不同浓度乌骨藤总苷H对小鼠S，肿瘤的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注:与空白对照组比较，**P<0.01(二)乌骨藤总苷H对小鼠H22实体瘤体内抗肿瘤试验。l.方法在无菌条件下取生长7~9天的小鼠移植性肿瘤H22腹水，用4倍体积生理盐水稀释，于小鼠腋窝皮下接种0.2mL/只，接种次日随机分组，每组10只。设空白对照组，乌骨藤总苷H的不同浓度给药剂量组，环磷酰胺(CTX)组。接种次日起乌骨藤总苷H组每天灌胃给药1次，连用10天，CTX组腹腔注射给药2天，每天1次。停药次日动物称体重，处死后剥离瘤块，称瘤重。按下式计算肿瘤生长抑制率。抑瘤率=(1-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)><100%。所得数据用平均值±标准差表示，并用t检验法比较各组间的统计学差异。2.结果见表2_表2不同浓度乌骨藤总苷H对小鼠Hb肿瘤的抑制作用组别药物浓度瘤重(g)抑瘤率(％)(mg/kg)空白对照组乌骨藤总苷H低剂量组100乌骨藤总苷H中剂量组200乌骨藤总苷H高剂量组300CTX组40注:与空白对照组比较，**P<0.01(三)乌骨藤总苷H对环磷酰胺抑制小鼠移植性肿瘤S18Q的增效作用试验。l.方法在无菌条件下取生长79天的小鼠移植性肿瘤S，腹水，用4倍体积生理盐水稀释，于小鼠腋窝皮下接种0.2mL/只，接种次日随机分组，每组10只。设生理盐水对照组，乌骨藤总苷H高、中、低剂量组，环磷酰胺(CTX)单用组，化疗药物与乌骨藤总苷H合用组。接种次日起每天给药1次，连用10天，联合给药组每天先腹腔注射给化疗药物，6小时后再灌胃给乌骨藤总苷H。停药次日动物称体重，处死后剥离瘤块，称瘤重。按下式计算肿瘤生长抑制率。抑瘤率=(l-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)X100%。两药合用后是否增效，按下式计算q值—_^yi_q=EA+(1-EA)Eb式中EA为A药抑瘤率，EB为B药抑瘤率，EAB为两药合用的抑瘤率，q^.851.15为两药作用相加，q>1.25为两药作用增强(或协同)，q<0.85为两药拮抗。2.97±0.382.29±0.3322.72.05±0.3131.01.90±0.3436.21.23±0.2558.62.结果见表3表3不同浓度乌骨藤总苷H对小鼠S，肿瘤CTX化疗的增效作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>说明乌骨藤总苷H与CTX合用对抑制小鼠S，肿瘤有相加作用。(四)乌骨藤总苷H对环磷酰胺抑制小鼠移植性肿瘤H22的增效作用试验。l.方法在无菌条件下取生长79天的小鼠移植性肿瘤3Hb腹水，用4倍体积生理盐水稀释，于小鼠腋窝皮下接种0.2mL/只，接种次日随机分组，每组10只。设生理盐水对照组，乌骨藤总苷H高、中、低剂量组，环磷酰胺(CTX)单用组，化疗药物与乌骨藤总苷H合用组。接种次日起每天给药1次，连用10天，联合给药组每天先腹腔注射给化疗药物，6小时后再灌胃给乌骨藤总苷H。停药次日动物称体重，处死后剥离瘤块，称瘤重。按下式计算肿瘤生长抑制率。抑瘤率=(l-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)X100%。两药合用后是否增效，按下式计算q值3—EA+(1-Ea)Eb式中EA为A药抑瘤率，EB为B药抑瘤率，EAB为两药合用的抑瘤率，qi.851.15为两药作用相加，q>1.25为两药作用增强(或协同)，q0.85为两药拮抗。2.结果见表4表4不同浓度乌骨藤总苷H对小鼠H22肿瘤CTX化疗的增效作用<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>说明乌骨藤总苷H与CTX合用对抑制小鼠H22肿瘤有相加作用。下面对本发明中的乌骨藤总苷H进行碳-21甾体皂苷含量测定来进一步说明本发明。实验乌骨藤总苷H中碳-21甾体皂苷的含量测定1.实验仪器与试剂(1)恒温水浴锅W501，上海申生科技有限公司。(2)电子天平Sartorius,BP211D，德国。(3)紫外可见分光光度仪TU-1800型，北京普析通用仪器公司。(4)试剂硫酸、茴香酸、乙醇、甲醇均为分析纯。(5)对照品采用自制的通光藤苷B为对照品，纯度为98.0%。(6)茴香醛硫酸显色剂的配制量取茴香醛0.2mL与硫酸2.0mL，加无水乙醇37.8mL混匀，即得。2.含量测定2.1对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的对照品5.05mg，置于10mL量瓶中，加乙醇液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每lmL含通光藤苷B0.505mg)。2.2供试品溶液的制备精密称取乌骨藤总苷H12mg用乙醇定容至IOmL量瓶(1.20mg/mL)，摇匀，即得。112.3测定方法精密吸取浓度为1.20mg/mL的乌骨藤总苷H0.5mL至具塞试管中，挥千溶剂，分别加入0.5mL茴香醛硫酸显示剂于IO(TC下反应15分钟，冰水浴10分钟终止反应，精密加入IOmL甲醇于432nm处测定吸收度值。2.4检测波长的选择标准品溶液吸收波长的扫描精密量取0.5mL通光藤苷B对照品溶液(O0.505mg/mL)至具塞试管中，挥干溶剂，分别加入0.5mL茴香醛硫酸显示剂于10(TC下反应15分钟，冰水浴10分钟终止反应，精密加入IOmL甲醇，在紫外分光光度计上400-600nm范围内扫描。结果标准品溶液在432nm处有最大吸收。样品溶液吸收波长的扫描精密量取0.5mL供试品溶液(01.20mg/mU至具塞试管中，挥干溶剂，分别加入0.5mL茴香醛硫酸显示剂于IO(TC下反应15分钟，冰水浴10分钟终止反应，精密加入10mL甲醇，在紫外分光光度计上400-600nm范围内扫描。结果样品溶液在432nm处有最大吸收。2.5线性关系的考察精密称取通光藤苷B5.05mg用95%乙醇定容至10mL量瓶(0.505mg/mL)，分别精密吸取浓度为0.505mg/mL的通光藤苷B0.1mL，0.2mL，0.3mL，0.4mL，0.5mL，0.6mL，0.7mL，0.8mL，0.9mL，1.1mL，1.3mL至具塞试管中，挥干溶剂，分别加入0.5mL茴香醛硫酸显示剂于10(TC下反应15分钟，冰水浴10分钟终止反应，精密加入10mL甲醇，照紫外一可见分光光度法(中国药典72005年版一部附录VA)在432nm波长处测定，结果标准曲线为y二0.0129x十0.0178，R2=0.9993，i兑明本品浓度在5.05-65.65吗.mL—'范围内，与吸收度之间呈良好的线性关系，见说明书附图1。2.6样品稳定性试验精密量取0.5mL供试品溶液至具塞试管中，挥干溶剂，分别加入0.5mL茴香醛硫酸显示剂于10(TC下反应15分钟，冰水浴10分钟终止反应，精密加入10mL甲醇，分别于Omin，5min，10min，15min，20min，30min在紫外分光光度计上432nm波长处测定吸光度。结果RSD为1.16%，说明样品溶液在30min内稳定。2.7仪器精密度精密吸取供试品溶液于432nm处测定吸收度值。连续测定6次，结果RSD为0.05%。2.8重复性试验精密称取乌骨藤总苷H6份分别依法测定吸收度值。结果平均含量为83.47%，RSD为1.63%2.9加样回收率试验称取乌骨藤总苷H各6mg置10mL量瓶中，分别精密加入浓度为5.1mg/mL的对照品lmL，用甲醇定容，混匀。分别依法测定吸收度值，计算，即得，结果平均回收率为99.3%，RSD为2.16%。'2.IO样品含量测定依法制备供试品溶液并测定，计算含量，结果见表5:表5乌骨藤总苷H样品含量测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>本发明与现有技术相比，阐明了乌骨藤中抗肿瘤的有效成分，去除了现有产品中大量的杂质，工艺简单方便，质量控制标准有针对性。图1为通光藤苷B标准曲线图具体实施方式以下通过实施例进一步说明本发明。实施例l:乌骨藤总苷H的制备乌骨藤茎粉碎后，用70%乙醇回流3次，每次1小时，合并提取液，减压回收溶剂，得乙醇提取物，该提取物经硅胶柱层析，以氯仿一乙醇进行梯度洗脱，用薄层层析检测层析流分，合并具有相同单一斑点的流分，浓縮，分得l、2、3、4、5、6、7、8、9个流分，其中流分8即为乌骨藤总苷H。乌骨藤总苷H，黄棕色粉末，Lieberman-Burchard和Keller-Killiani反应均呈阳性，显示为含2—去氧糖的甾体化合物。实施例2制备通光藤苷A乌骨藤茎粉碎后，用70%乙醇回流3次，每次1小时，合并提取液，减压回收溶剂，得乙醇提取物，该提取物经硅胶柱层析，以氯仿一乙醇进行梯度洗脱，用薄层层析检测层析流分，合并具有相同单一斑点的流分，浓縮，分得l、2、3、4、5、6、7、8、9个流分，将流分8经低压Rp-18柱(甲醇水)分离和制备HPLC(甲醇水)纯化后，得到通光藤苷A。通光藤苷A，白色无定形粉末，即142-144。C，[oc]哲-16.1。(MeOH;c=0.5)'，分子式C48H7401S。经光谱数据分析和理化性状测定与文献报道(ShujiMiyakawa，KimikoYamaura,KojiHayashietal.FiveglycosidesfromtheChinesedrug'tong-guan-san，Thestemsofifensofevi/ste"s"'5"5"i艇Phytochemistry1986，25(12):2861-2865)的通光藤苷A完全一致。实施例3制备通光藤苷B乌骨藤茎粉碎后，用70%乙醇回流3次，每次1小时，合并提取液，减压回收溶剂，得乙醇提取物，该提取物经硅胶柱层析，以氯仿一乙醇进行梯度洗脱，用薄层层析检测层析流分，合并具有相同单一斑点的流分，浓縮，分得l、2、3、4、5、6、7、8、9个流分，将流分8经低压Rp_18柱(甲醇水)分离和制备HPLC(甲醇水)纯化后，得到通光藤苷B。通光藤苷B，白色无定形粉末，mpl33-134°C，[oc]哲+11.5。(MeOH;c二O.5)，分子式C51H82019。经光谱数据分析和理化性状测定与文献报道(ShujiMiyakawa，KimikoYamaura,KojiHayashietal.FiveglycosidesfromtheChinesedrug'tong—guan—san，Thestemsof■/J/ansote/zist6vsci6"5"i历s.Phytochemistry1986，25(12):2861-2865)的通光藤苷B完全一致。实施例4制备通光藤苷C乌骨藤茎粉碎后，用70%乙醇回流3次，每次1小时，合并提取液，减压回收溶剂，得乙醇提取物，该提取物经硅胶柱层析，以氯仿一乙醇进行梯度洗脱，用薄层层析检测层析流分，合并具有相同单一斑点的流分，浓缩，分得l、2、3、4、5、6、7、8、9个流分，将流分8经低压Rp-18柱(甲醇水)分离和制备HPLC(甲醇水)纯化后，得到通光藤苷C。通光藤苷C，白色无定形粉末，mpl29-131°C，[a]哲+15.5。(Me0H;cO.5)，分子式C53H76019。经光谱数据分析和理化性状测定与文献报道(ShujiMiyakawa,KimikoYamaura，KojiHayashietal.FiveglycosidesfromtheChinesedrug'tong-guan—san':Thestemsof船rsofe/7J.ste/sci'5^j'鹏.Phytochemistry1986，25(12):2861-2865)的通光藤苷C完全一致。实施例5制备通光藤苷D乌骨藤茎粉碎后，用70%乙醇回流3次，每次1小时，合并提取液，减压回收溶剂，得乙醇提取物，该提取物经硅胶柱层析，以氯仿一乙醇进行梯度洗-脱，用薄层层析检测层析流分，合并具有相同单一斑点的流分，浓縮，分得l、2、3、4、5、6、7、8、9个流分，将流分8经低压Rp-18柱(甲醇水)分离和制备HPLC(甲醇水)纯化后，得到通光藤苷D。通光藤苷D，白色无定形粉末，mpl39-14rC，[a]哲+16.5。(MeOH;c=0.5)，分子式C51H8。019。经光谱数据分析和理化性状测定与文献报道(ShujiMiyakawa，KimikoYamaura,KojiHayashietal.FiveglycosidesfromtheChinesedrug'tong—guan—san，ThestemsofJkr5"ofe/7J's^e/jscissi/ffs.Phytochemistry1986，25(12):2861-2865)的通光藤苷D完全一致。实施例6制备MarsdenosideK乌骨藤茎粉碎后，用70%乙醇回流3次，每次1小时，合并提取液，减压回收溶剂，得乙醇提取物，该提取物经硅胶柱层析，以氯仿一乙醇进行梯度洗脱，用薄层层析检测层析流分，合并具有相同单一斑点的流分，浓縮，分得l、2、3、4、5、6、7、8、9个流分，将流分8经低压Rp-18柱(甲醇水)分离和制备HPLC(甲醇水)纯化后，得到MarsdenosideK。MarsdenosideK，白色无定形粉末，即135-137。C，[ot]带-5.5。(MeOH;c二O.5)，分子式C5(,H720,9。经光谱数据分析和理化性状测定与文献报道(DengJ，LiaoZX，ChengDF.Threenewpolyoxypregnaneglycosidesfromi/arsote/w's7b腦ki服HelvChimAct，2005(88):2675-2682)的MarsdenosideK完全一致。权利要求1、一种从乌骨藤中提取得到的碳-21甾体苷类混合物-乌骨藤总苷H，其特征在于主要为5种碳-21甾体苷类化合物，通光藤苷A，通光藤苷B，通光藤苷C，通光藤苷D，MarsdenosideK，这5种碳-21甾体苷是下列5个化学结构所示的5种甾体皂苷元之一与同一种糖链形成的5种糖苷，其中R为糖链。通光藤苷元乙-I通光藤苷元乙-II通光藤苷元乙-III通光藤苷元乙-IV11-α-O-苯甲酰基-12-β-O-乙酰基-通光藤苷元乙2、根据权利要求1所述的碳一21甾体苷类混合物，其特征在于5种化合物为通光藤苷A中，苷元为通光藤苷元乙-I,R为3-0-^D-葡萄吡喃糖基-(l一4)-6-去氧-3-6>-甲基-AD-阿洛吡喃糖基-(l—4)-^D-夹竹桃吡喃糖基；通光藤苷B中，苷元为通光藤苷元乙-n，R为3-0-^D-葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-0-甲基-^D-阿洛吡喃糖基-(1—4)-^D-夹竹桃吡喃糖基；通光藤苷C中，苷元为通光藤苷元乙-m，R为3-0-^D-葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-0-甲基-^D-阿洛吡喃糖基-(1—4)-^D-夹竹桃吡喃糖基；通光藤苷D中，苷元为通光藤苷元乙-IV，R为3-CS^D-葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-0-甲基-^D-阿洛吡喃糖基-(1—4)-/WD-夹竹桃吡喃糖基；MarsdenosideK中，苷元为11-a-(9-苯甲酰基-12-f3-(9-乙酰基-通光藤苷元乙,，R为3-0-^D-葡萄吡喃糖基-(1—4)-6-去氧-3-0-甲基-^D-阿洛吡喃糖基-(1一4)-^D-夹竹桃吡喃糖基。3、根据权利要求1所述的碳一21甾体苷混合物一乌骨藤总苷H，其特征在于为包含有乌骨藤碳一21甾体苷类化合物通光藤苷A，通光藤苷B，通光藤苷C，通光藤苷D，MarsdenosideK这5种碳一21甾体苷的任意组合的混合物。.4、根据权利要求3所述的碳一21甾体苷混合物一乌骨藤总苷H，其特征在于其中乌骨藤碳一21甾体苷类化合物的重量含量大于或等于80%。5、根据权利要求1所述的碳一21甾体苷混合物一乌骨藤总苷H的制备方法，该方法包括以下步骤a.将乌骨藤的茎粉碎后，以乙醇提取；b.乙醇提取液浓縮后经硅胶柱层析，氯仿一乙醇进行梯度洗脱；c.用薄层层析检测层析流分，具有相同单一斑点的流分合并浓縮，得到含上述碳一21甾体苷类化合物的流份，即为乌骨藤总苷H。6、根据权利要求1所述的碳一21甾体苷混合物一乌骨藤总苷H，其特征在于抗肿瘤有效量的与药学上可接受的载体所组成的药物组合物。7、根据权利要求1所述的碳一21甾体苷混合物一乌骨藤总苷H，其特征在于该混合物具有对抗肿瘤方面的应用。全文摘要本发明属医药
技术领域：
，具体涉及从中药乌骨藤(Marsdeniatenacissima)中提取分离得到的具有抗肿瘤作用的碳-21甾体苷类混合物，这种混合物主要包含有5种碳-21甾体苷类化合物，这5种化合物分别为通光藤苷A，通光藤苷B，通光藤苷C，通光藤苷D，MarsdenosideK。这种甾体苷化合物总重量含量≥80％的混合物被定名为乌骨藤总苷H。本发明还涉及该化合物的制备方法，以该化合物为活性成分的药物组合物，以及本发明化合物和药用组合物在抗肿瘤药物方面的应用。文档编号C07J71/00GK101215313SQ20081005904公开日2008年7月9日申请日期2008年1月7日优先权日2008年1月7日发明者叶益萍,徐世芳,李晓誉,陈峰阳申请人:浙江省医学科学院