专利名称：高纯度丹酚酸b、制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种一种从中药材丹参中提取并分离丹酚酸B的方法及丹酚酸 B的应用。
背景技术：
唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhizaBge)，为多年生草本植物，具有祛瘀 止痛，活血通经，清心除烦的功效。现代临床中，广泛将其用于预防和治疗心 脑血管疾病，肾病，肝病等。因提取物中成分复杂，难于向世界推广。
丹酚酸B是从丹参中分离得到的一种水溶性的酚酸类物质，其分子式为 C36H3。016，分子量为718.614，结构式为
临床医学证明，丹酚酸B具有保护心脏、心血管等功能。 现有技术中的丹酚酸B的提取和分离方法，是将药材粉碎成末或微波破壁 或浸提或煎提，进一步通过大孔吸附树脂、聚酰胺层析等方法获得。现有技术 的不足是得到的丹酚酸B纯度都低于92%,获得92%以上丹酚酸B的步骤非 常多，成本非常高，无法用于工业化生产。
发明内容
本发明的目的是提供一种丹酚酸B的新制备方法，得到的丹酚酸B，纯度 高，成本低适合工业化生产。
上述的目的通过以下的技术方案实现高纯度丹酚酸B的制备方法，其组成包括提取、聚酰胺层析、收集，
a. 所述的提取是将中药材丹参粉碎，第一次在去离子水100度的条件下加 入粉碎的丹参提取l小时，用丹参重量5倍量的水，然后在PH1—7.0的条件下 提取2—4次，每次时间40分钟，用丹参重量3倍量的水；
b. 所述的聚酰胺层析是提取液过滤后上聚酰胺预柱，先用水除杂,，再以低 浓度的CI—C5的低级醇除杂，以高浓度的CI—C5的低级醇解吸，分段收集 含丹酚酸B的组分，减压浓缩，浓缩液再用聚酰胺层析柱层析，以高浓度的 CI--C5的低级醇解吸，分段收集含丹酚酸B的组分，减压浓縮，调PH值；
c. 所述的收集是将b的提取液立刻过葡聚糖凝胶柱，分段收集含丹酚B的 组分，减压浓縮，冷冻干燥，得到高纯度的丹酚酸B。
所述的高纯度丹酚酸B的制备方法，在a、 b、 c、步骤中要用PH值调节 物质将PH值调节至1~6.5。
所述的高纯度丹酚酸B的制备方法，所述的C1"C5的低级醇为乙醇，所 述的低浓度的C1~C5的低级醇为10—80%,所述的高浓度的C1一C5的低级 醇为80—99.99%，所述的PH值调节物质为无机酸或有机酸或酸性氨基酸或其 混合物或氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠。
所述的高纯度丹酚酸B的制备方法，所述的步骤b和c的聚酰胺层析的过 程中，通过薄层层析或HPLC检测方法，检测解吸液中丹酚酸B的含量。
以上的制作方法制做的丹酚酸B在制备治疗心脑血管疾病、肾病、肺炎、 肺心病、胰腺炎、糖尿病、颈椎病、眼底血管性疾病、眼底神经性疾病、偏头 痛、慢性胃炎、眩晕、骨伤科疾病、老年痴呆症的药物方面的应用。
一种高纯度丹酚酸B,是以权利要求1-8的方法制备得到的。
本发明的有益效果
在现有的技术中，含有丹酚酸B的药品都作为中药存在，一般的丹酚酸B的 含量都在80%以下，剩余的20%的成分都说不清楚，也导致了临床应用时产品的 质量不稳定，副作用大，容易导致不良反应.
而本发明从植物中提取到单体，明确了有效药物成分，减少了毒副作用，为 丹酚酸B西药化生产提供了可行之路.本发明采用的溶剂价格低廉，基本无毒，降低了药品成本。工艺简单，设备投
资少，得到的丹酚酸B的纯度高，并且确定的工艺路线适合工业化生产。 本发明的
具体实施例方式
实施例l:
取丹参药材lOOOg粉碎，加去离子水在100'C的条件下加热提取1小时，用 丹参重量5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用丹参重 量3倍的水。提取液滤过，调PH至3,使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，, 再用10%的乙醇除杂，80%乙醇解吸。收集含丹酚酸B的组分，减压回收。所得 溶液再用聚酰胺层析柱层析，用95%的乙醇解吸，得到含丹酚酸B的成分，分 段收集纯度大于98.5%的部分，减压浓縮，调PH至4.8。浓缩液过葡聚糖凝胶 柱，分段收集纯度大于98.5%的部分，减压浓縮，冷冻干燥后，得到高纯度的 丹酚酸B。
实施例2:
取丹参药材1500g粉碎，加去离子水在IOO'C的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在？114.8的条件下煎提3次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至2使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，再用30%的乙醇除 杂，90%乙醇解吸。收集含丹酚酸B的组分，减压回收。所得溶液再用聚酰胺层析 柱层析，用卯％的乙醇解吸，得到含丹酚酸B的成分，分段收集纯度大于98% 的部分，减压浓縮，调PH至5。浓縮液过葡聚糖凝胶柱，分段收集纯度大于 98.5%的部分，减压浓縮，冷冻干燥后，得到高纯度的丹酚酸B。
实施例3
取丹参药材2000g粉碎，加去离子水在100'C微沸的条件下加热提取1小 时，用5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用3倍的水。 提取液过滤，调PH至4，使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，再用50%的乙 醇除杂，用95%的乙醇解吸，收集含丹酚酸B的组分，减压回收乙醇.所得产物 再用聚酰胺层析柱层析，用95%的乙醇解吸，分段收集纯度大于98%的部分， 减压浓縮，调PH至4.8。浓缩液过葡聚糖凝胶柱，分段收集纯度大于98.5%的 部分，减压浓縮，冷冻干燥后，得到高纯度的丹酚酸B。. 实施例4:
取丹参药材1500g粉碎，加去离子水在IOO'C的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至3.5，使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，再用60%的乙 醇除杂，用无水乙醇解吸，收集含丹酚酸B的组分，减压回收乙醇.所得产物再 用聚酰胺层析柱层析，用95%的乙醇解吸，分段收集纯度大于98.5%的部分， 减压浓縮，调PH至4.0。浓縮液过葡聚糖凝胶柱，分段收集纯度大于98.5%的 部分，减压浓縮，冷冻干燥后，得到纯度为99.2%的丹酚酸8。
实施例5:
取丹参药材lOOOg粉碎，加去离子水在IOO'C的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提4次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至4.5,使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，再用40%的乙 醇除杂，用无水乙醇解吸，收集含丹酚酸B的组分，减压回收乙醇。所得产物 再用聚酰胺层析柱层析，用卯％的乙醇解吸，分段收集纯度大于98.5%的部分， 减压浓縮，调PH至5.0。浓缩液过葡聚糖凝胶柱，分段收集纯度大于98.5%的 部分，减压浓縮，冷冻干燥后，得到纯度为99。/。的丹酚酸B。
实施例6:
取丹参药材1000g粉碎，加去离子水在IOO'C的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至4.8，使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，再用20%的乙 醇除杂，用无水乙醇解吸，收集含丹酚酸B的组分，减压回收乙醇.所得产物再 用聚酰胺层析柱层析，用无水乙醇解吸，分段收集纯度大于98%的部分，减压 浓縮，调PH至5.5。浓縮液过葡聚糖凝胶柱，分段收集纯度大于98.5%的部分, 减压浓縮，冷冻干燥后，得到纯度为98.7%的丹酚酸8。
实施例7:
取丹参药材1000g粉碎，加去离子水在100。C的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至2，使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，再用20%的乙醇除杂，用80%的乙醇解吸，收集含丹酚酸B的组分，减压回收乙醇。所得产物 再用聚酰胺层析柱层析，用无水乙醇解吸，分段收集纯度大于98%的部分，减压 浓縮，调PH至6.0。浓縮液过葡聚糖凝胶柱，分段收集纯度大于98.5%的部分， 减压浓縮，冷冻干燥后，得到纯度为99。/。的丹酚酸B。 实施例8:
取丹参药材1000g粉碎，加去离子水在IOOC的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至3，使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，再用20%的乙 醇除杂，用80%的乙醇解吸，收集含丹酚酸B的组分，减压回收乙醇。所得产 物再用聚酰胺层析柱层析，用95%乙醇解吸，分段收集纯度大于98%的部分， 减压浓縮，得到的溶液用2%的NaOH调PH为6。浓縮液过葡聚糖凝胶柱，分 段收集纯度大于98.5%的部分，减压浓缩，立即冷冻干燥，得到纯度为98.3% 的丹酚酸B。
实施例9:
取丹参药材1000g粉碎，加去离子水在IOO'C的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至3，使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，再用50%的乙 醇除杂，用60%的乙醇解吸，收集含丹酚酸B的组分，减压回收乙醇.所得产物 再用聚酰胺层析柱层析，用95%乙醇解吸，分段收集纯度大于98%的部分，减 压浓縮，得到的溶液用2%的NaOH调PH为6。浓缩液过葡聚糖凝胶柱，分段 收集纯度大于98.5%的部分，减压浓縮，立即冷冻干燥，得到纯度为98.6%的 丹酚酸B。
实施例10:
取丹参药材1000g粉碎，加去离子水在100。C的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至3.1，使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，再用20%的乙 醇除杂，用70%的乙醇解吸，收集含丹酚酸B的组分，减压回收乙醇.所得产物 再用聚酰胺层析柱层析，用95%乙醇解吸，分段收集纯度大于99%的部分，减
8压浓縮，得到的溶液用2%的NaOH调PH为6。浓縮液过葡聚糖凝胶柱，分段 收集纯度大于98.5%的部分，减压浓縮，立即冷冻干燥，得到纯度为99.3%的 丹酚酸B。
实施例11:
取丹参药材1000g粉碎，加去离子水在100'C的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至3.1，使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，用10%的乙醇 除杂，再用20%的乙醇除杂，再用50%的乙醇除杂，用95%乙醇解吸，分段收 集含丹酚酸B的组分，减压回收乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析，用95% 乙醇解吸,分段收集纯度大于99%的部分，减压浓縮，得到的溶液用2%的NaOH 调PH为6。浓缩液过葡聚糖凝胶柱，分段收集纯度大于98.5%的部分，减压浓 縮，立即冷冻干燥，得到纯度为99.3%的丹酚酸8。
实施例12:
取丹参药材1000g粉碎，加去离子水在IOO'C的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至4，使用聚酰胺柱层析，以水洗脱去杂质，再用20%、 30%、 60%的乙醇除杂，用95%乙醇解吸，分段收集含丹酚酸B的组分，减压回收乙 醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析，用无水乙醇解吸，分段收集纯度大于98% 的部分，减压浓縮，得到的溶液用2W的NaOH调PH为6。浓縮液过葡聚糖凝 胶柱，分段收集纯度大于98.5%的部分，减压浓縮，立即冷冻干燥，得到纯度 为98.3%的丹酚酸8。
实施例13:
取丹参药材1000g粉碎，加去离子水在100C的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在PH4.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至2，使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，再用10%、 30%、 60%的乙醇除杂，用PH3无水乙醇解吸，分段收集含丹酚酸B的组分，减压回 收乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析，用90%乙醇解吸，分段收集纯度大 于98%的部分，减压浓縮，调PH至5.5。浓縮液过葡聚糖凝胶柱，分段收集纯度大于98.5%的部分，减压浓縮，，冷冻干燥后，得到纯度为98.7%的丹酚酸8。 实施例14:
取丹参药材1500g粉碎，加去离子水在IOO'C的条件下加热提取1小时，用 5倍的水，然后在？114.8的条件下煎提3次，每次40分钟，用3倍的水。提取 液过滤，调PH至2，使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质，再用20%、 30%、 60%的乙醇除杂，用90%的乙醇解吸，分段收集含丹酚酸B的组分，减压回收 乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析，用95%乙醇解吸，分段收集纯度大于 98%的部分，减压浓縮，调PH至5。浓縮液过葡聚糖凝胶柱，分段收集纯度大 于98.5%的部分，减压浓縮，冷冻干燥后，得到高纯度的丹酚酸B。
实施例15:
取丹参药材1000g粉碎，加去离子水在IOO"C的条件下加热提取1小时，用 丹参重量5倍的水，然后在？114.8的条件下煎提2次，每次40分钟，用丹参重 量3倍的水。提取液滤过，调PH至3，使用聚酰胺预柱层析，以水洗脱去杂质， 再用10%、 20%、 70%的乙醇除杂，用95%的乙醇解吸，分段收集含丹酚酸B 的组分，减压回收乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析，用95%乙醇解吸， 分段收集纯度大于98.5%的部分，减压浓縮，调PH至4.8。浓縮液过葡聚糖凝 胶柱，分段收集纯度大于98.5%的部分，减压浓縮，冷冻干燥后，得到高纯度 的丹酚酸B。
实施例16:
以上的制作方法制做的丹酚酸B在制备治疗心脑血管疾病、肾病、肺炎、 肺心病、胰腺炎、糖尿病、颈椎病、眼底血管性疾病、眼底神经性疾病、偏头 痛、慢性胃炎、眩晕、骨伤科疾病、老年痴呆症的药物方面的应用。
权利要求
1.一种高纯度丹酚酸B的制备方法，其组成包括提取、聚酰胺层析、收集，其特征是a.所述的提取是将中药材丹参粉碎，第一次在去离子水100度的条件下加入粉碎的丹参提取1小时，用丹参重量5倍量的水，然后在PH1-7.0的条件下提取2---4次，每次时间40分钟，用丹参重量3倍量的水；b.所述的聚酰胺层析是提取液过滤后上聚酰胺预柱，先用水除杂，，再以低浓度的C1---C5的低级醇除杂，以高浓度的C1---C5的低级醇解吸，分段收集含丹酚酸B的组分，减压浓缩，浓缩液再用聚酰胺层析柱层析，以高浓度的C1---C5的低级醇解吸，分段收集含丹酚酸B的组分，减压浓缩，调PH值；c.所述的收集是将b的提取液立刻过葡聚糖凝胶柱，分段收集含丹酚B的组分，减压浓缩，冷冻干燥，得到高纯度的丹酚酸B。
2. 根据权利要求1所述的高纯度丹酚酸B的制备方法，其特征是在a、 b、 c、步骤中要用PH值调节物质将PH值调节至1~6.5。
3. 根据权利要求1所述的高纯度丹酚酸B的制备方法，其特征是所述的 C1一C5的低级醇为乙醇，所述的低浓度的C1~C5的低级醇为10—80%,所 述的高浓度的C1~C5的低级醇为80—99.99%，所述的PH值调节物质为无机 酸或有机酸或酸性氨基酸或其混合物或氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠。
4. 根据权利要求2所述的高纯度丹酚酸B的制备方法，其特征是所述的 C1~C5的低级醇为乙醇，所述的低浓度的C1一C5的低级醇为10—80%，所 述的高浓度的C1~C5的低级醇为80—99.99%，所述的PH值调节物质为无机 酸或有机酸或酸性氨基酸或其混合物或氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠。
5. 根据权利要求1或4所述的高纯度丹酚酸B的制备方法，其特征是所述 的步骤b和c的聚酰胺层析的过程中，通过薄层层析或HPLC检测方法，检测解吸 液中丹酚酸B的含量。
6. 根据权利要求2所述的高纯度丹酚酸B的制备方法，其特征是所述的步 骤b和c的聚酰胺层析的过程中，通过薄层层析或HPLC检测方法，检测解吸液中丹酚酸B的含量。
7. 根据权利要求3所述的高纯度丹酚酸B的制备方法，其特征是所述的步 骤b和c的聚酰胺层析的过程中，通过薄层层析或HPLC检测方法，检测解吸液中 丹酚酸B的含量。
8. —种以上的制作方法制做的丹酚酸B在制备治疗心脑血管疾病、肾病、 肺炎、肺心病、胰腺炎、糖尿病、颈椎病、眼底血管性疾病、眼底神经性疾病、 偏头痛、慢性胃炎、眩晕、骨伤科疾病、老年痴呆症的药物方面的应用。
9. 一种髙纯度丹酚酸B，其特征是以权利要求l-7的方法制备得到。
全文摘要
高纯度丹酚酸B、制备方法及应用。现有技术中的丹酚酸B的提取和分离方法，是将药材粉碎成末或微波破壁或浸提或煎提，进一步通过大孔吸附树脂、聚酰胺层析等方法获得。现有技术的不足是得到的丹酚酸B纯度都低于92％，获得92％以上丹酚酸B的步骤非常多，成本非常高，无法用于工业化生产。本发明组成包括提取、聚酰胺层析、收集。本发明应用于治疗心脑血管疾病、肾病、肺炎、肺心病、胰腺炎、糖尿病、颈椎病、眼底血管性疾病、眼底神经性疾病、偏头痛、慢性胃炎、眩晕、骨伤科疾病、老年痴呆症。
文档编号C07D307/84GK101638403SQ20081013681
公开日2010年2月3日 申请日期2008年7月29日 优先权日2008年7月29日
发明者苑立超 申请人:苑立超