专利名称：一种高含量的异杀鼠酮的柱层析制备方法
技术领域：
本发明涉及化学工程技术领域，尤其涉及一种高含量的异杀鼠酮的柱层析 制备方法。
背景技术：
异杀鼠酮(2-特戊酰—1，3-茚二酮，Valone，分子式C14H1403，分子量: 230.26)是一种新颖的茚满二酮类抗凝血类鼠药，由合成而得的异杀鼠酮粗产 品一般只含有异杀鼠酮65.0~95.0%，需要进一步纯化分离才能获得含量较高的 异杀鼠酮，由于原料中杀鼠酮和异杀鼠酮这对位置异构体化学性质相似， 一般 情况下较难分离，仅靠重结晶方法难以生产出高纯度的异杀鼠酮产品，无法满 足药理研究和质量控制对高含量异杀鼠酮的需求。目前，国内尚无高含量的异 杀鼠酮(纯度>99.0%)生产。异杀鼠酮的化学结构式为
O
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种高含量的异杀鼠酮的柱 层析制备方法，本发明通过优选吸附剂，不需要对原料进行任何处理，直接进 行层析分离，就能够去除包括位置异构体在内的各种杂质。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是 一种高含量的异杀鼠酮的柱
层析制备方法，包括以下步骤
1)将异杀鼠酮的工业粗产品，用体积比为50:50 99:1的低级酯和低级醇 混合溶剂溶解后，通入装填有吸附剂的层析柱中，温度为20~80°0 ，流速控制在0.5~5倍柱床体积/小时；
2) 用1 6倍柱床体积的低级醇，在20-80 。C温度范围内，以在0.5 5倍
柱床体积/小时的流速洗脱杂质；
3) 用1 6倍柱床体积的体积比为60:40 80:20的低级酯和低级醇混合溶液，
在20~80°C温度范围内，以0.5~5倍柱床体积/小时的流速洗脱杂质；
4) 用1 6倍柱床体积的体积比为80:20-99:1的低级酯和低级醇混合溶液， 在20 8(TC温度范围内，以0.5 5倍柱床体积/小时的流速冲洗吸附柱，将得到 的洗脱液旋转蒸发或者烘干，得高含量的异杀鼠酮。
进一步地，所述低级酯为乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酯丁酯；所述低级醇为 甲醇、乙醇或异丙醇；所述吸附剂为硅胶，其目数为60 100目、100~160目、 160~200目和200 300目中的一种。
本发明具有的有益的效果是本发明不需对原料进行任何的预处理，直接 用层析分离方法进行分离纯化，所得产品含量高(异杀鼠酮含量>99.0%)，收 率高，纯度高，易于产业化。
图1为异杀鼠酮和杀鼠酮的标准溶液液相色谱图；流动相为甲醇/醋酸铵-醋酸缓冲液(5 mmol/L, pH=5.5) =(70:30, v/v)的HPLC图；图中，1号峰为杀 鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰，杀鼠酮的色谱峰在6.2min左右， 异杀鼠酮的色谱峰在7.0 min左右。
图2为由实施例2得到的异杀鼠酮产品的液相色谱图；流动相为甲醇/醋酸 铵-醋酸缓冲液(5 mmol/L, pH=5.5) =(70:30， v/v)的HPLC图；图中，1号峰为 异杀鼠酮的色谱峰，其保留时间在7.0min左右。
图3为由实施例2得到的异杀鼠酮产品的甲醇溶液(1.0 mg/L)以直接进 样方式获得的一级质谱图。.
图4为由实施例2得到的异杀鼠酮产品的甲醇溶液(1.0 mg/L)以直接进 样方式获得准分子离子m/z 229后，然后以m/z 229为母离子进行碎裂的二级 质谱图。
具体实施例方式
本发明以工业合成生产的异杀鼠酮粗产品为原料制备高含量的异杀鼠酮， 其中粗产品中异杀鼠酮的含量为65.0~95.0%，通过装填有60 300目硅胶的吸附柱进行层析分离，采用体积比为60:40 99:1的低级酯和低级醇混合溶剂进行 淋洗和洗脱，分段收集，合并含量大于98.0%的收集液，干燥后，直接得到含 量>99.0 %的高含量异杀鼠酮；
本发明高含量的异杀鼠酮的柱层析制备方法，包括以下步骤
1) 将异杀鼠酮的工业粗产品，用体积比为50:50 99:1的低级酯和低级醇 混合溶剂溶解后，通入装填有吸附剂的层析柱中，温度为20 80'C ，流速控制 在0.5~5倍柱床体积/小时；
2) 用1 6倍柱床体积的低级醇，在20 80。C温度范围内，以在0.5 5倍 柱床体积/小时的流速洗脱杂质；
3) 用1 6倍柱床体积的体积比为60:40~80:20的低级酯和低级醇混合溶液， 在20 80'C温度范围内，以0.5 5倍柱床体积/小时的流速洗脱杂质；
4) 用1~6倍柱床体积的体积比为80:20~99:1的低级酯和低级醇混合溶液， 在20~80°C温度范围内，以0.5~5倍柱床体积/小时的流速冲洗吸附柱，将得到 的洗脱液旋转蒸发或者烘干，得高含量的异杀鼠酮。
所述的低级酯为乙酸乙酯、乙酸丙酯和乙酯丁酯中的一种；所述的低级醇 为甲醇、乙醇和异丙醇中的一种；所述的吸附剂为硅胶，其目数为60 100目、 100-160目、160~200目和200~300目中的一种。
以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。 实施例1
层析柱尺寸巾28 x 500 mm。内装60-100目的硅胶约80 g。异杀鼠酮原 料用乙酸丙酯/甲醇(60:40， v/v)溶解，其浓度为10.0 mg/mL，上样体积为1000 mL，上样及洗脱温度均为80'C。先用360 mL甲醇淋洗，再用1200 mL的乙 酸丙酯/甲斷80:20， v/v)淋洗层析柱；最后用800 mL乙酸丙酯/甲醇(95:5， v/v) 洗脱，流速为8.0 mL/min，收集层析柱洗脱液，分段收集流份，进行紫外在线 监测，合并收集含量为99%以上的洗脱液，真空干燥后得异杀鼠酮产品8.31g， HPLC分析结果表明，产品中异杀鼠酮含量99.3%,收率83.1%。
实施例2
层析柱尺寸巾28 x 500 mm。内装160-200目的硅胶约60 g。异杀鼠酮原 料用乙酸丙酯/乙醇(60:40， v/v)溶解，其原料浓度为10.0mg/mL，上样体积 为1000 mL，上样及洗脱温度均为80°C。先用350 mL乙醇淋洗，再用1100 mL 乙酸乙酯/乙醇(80:20， v/v)淋洗层析柱;最后用800 mL乙酸乙酯/乙醇(95:5， v/v) 洗脱，流速为8.0mL/min，收集层析柱洗脱液，分段收集流份，进行紫外在线监测，合并收集含量为99。/。以上的洗脱液，真空干燥后得异杀鼠酮产品8.72g， HPLC分析结果表明，产品中异杀鼠酮含量99.1。/。，收率87.2%。
实施例3
层析柱尺寸O20 x400 mm。内装160-200目的硅胶约40 g。异杀鼠酮原 料用乙酸丁酯/异丙醇(60:40， v/v)溶解，其原料浓度为10.0mg/mL，上样体 积为1000 mL，上样及洗脱温度均为80°〇。先用320 mL异丙醇淋洗，再用1000 mL乙酸丁酯/异丙醇(80:20， v/v)淋洗层析柱；最后用750 mL乙酸丁酯/异丙醇 (95:5， v/v)洗脱，流速为8.0mL/min，收集层析柱洗脱液，分段收集流份，进行 紫外在线监测，合并收集含量为99%以上的洗脱液，真空干燥后得异杀鼠酮产 品8.83g， HPLC分析结果表明，产品中异杀鼠酮含量99.5%，收率88.3%。
实施例4
层析柱尺寸O20x400mm。内装200 300目的硅胶约40g。异杀鼠酮原 料用乙酸丁酯/甲醇(60:40， v/v)溶解，其原料浓度为10.0mg/mL，上样体积 为1000 mL，上样及洗脱温度均为80aC。先用350 mL甲醇淋洗，再用1100 mL 乙酸丁酯/甲醇(80:20， v/v)淋洗层析柱;最后用800 mL乙酸丁酯/甲醇(95:5， v/v) 洗脱，流速为8.0 mL/min，收集层析柱洗脱液，分段收集流份，进行紫外在线 监测，合并收集含量为99。/。以上的洗脱液，真空干燥后得异杀鼠酮产品8.76g， HPLC分析结果表明，产品中异杀鼠酮含量99.5%，收率87.6。/0。
上述实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的 精神和权利要求的保护范围内，对本发明作出的任何修改和改变，都落入本发 明的保护范围。
权利要求
1. 一种高含量的异杀鼠酮的柱层析制备方法，其特征在于，包括以下步骤1)将异杀鼠酮的工业粗产品，用体积比为50:50～99:1的低级酯和低级醇混合溶剂溶解后，通入装填有吸附剂的层析柱中，温度为20～80℃，流速控制在0.5～5倍柱床体积/小时。2)用1～6倍柱床体积的低级醇，在20～80℃温度范围内，以在0.5～5倍柱床体积/小时的流速洗脱杂质。3)用1～6倍柱床体积的体积比为60:40～80:20的低级酯和低级醇混合溶液，在20～80℃温度范围内，以0.5～5倍柱床体积/小时的流速洗脱杂质。4)用1～6倍柱床体积的体积比为80:20～99:1的低级酯和低级醇混合溶液，在20～80℃温度范围内，以0.5～5倍柱床体积/小时的流速冲洗吸附柱，将得到的洗脱液旋转蒸发或者烘干，得高含量的异杀鼠酮。
2. 根据权利要求1所述的柱层析制备方法，其特征在于，所述低级酯为乙酸乙酯、 乙酸丙酯或乙酯丁酯。
3. 根据权利要求1所述的柱层析制备方法，其特征在于，所述低级醇为甲醇、乙 醇或异丙醇。
4. 根据权利要求1所述的柱层析制备方法，其特征在于，所述吸附剂为硅胶，其 目数为60 100目、1Q0 160目、160~200目和200~300目中的一种。
全文摘要
本发明公开了一种高含量的异杀鼠酮的柱层析制备方法。以异杀鼠酮的工业粗产品为原料制备高含量的异杀鼠酮，粗产品中异杀鼠酮的含量为65.0～95.0％，经溶解、柱层析、浓缩和干燥后得到含量大于99.0％的异杀鼠酮。本发明的方法工艺流程简单、生产成本低，易于产业化。采用本发明方法制备的产品纯度高、收率高。
文档编号C07C45/00GK101434526SQ200810163440
公开日2009年5月20日 申请日期2008年12月22日 优先权日2008年12月22日
发明者金米聪, 陈晓红 申请人:宁波市疾病预防控制中心