专利名称：：6,18-环氧-14羟基红霉素内酯b及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种与红霉素母核类似，但又具有独特结构的新的化合物，以及制备方法。
背景技术：
：中国专利申请号98813253.2公开了一种"新的大环内酯类化合物"，涉及新的红霉素类似物和氮杂内酯类，特别是带有新的C-13取代基的红霉素类似物和氮杂内酯类，及其药用盐。该化合物是可用于治疗各种细菌和原虫感染的抗菌剂。红霉素的类衍生物有很多种，以红霉素C进行分析，在其14元大环结构中14位上没有羟基，6和18位间没有形成三元环。红霉素类药物的合成与开发主要集中于对14元环上的3、5、6、11和12位等活泼羟基的取代上以及取代基的再取代反应，并获得了很好的红霉素临床药物。但随着临床耐药菌的不断出现及这些菌的耐药性的增强，临床使用的红霉素药物疗效正逐步降低，需要进一步开发新的抗生素药物。因此，新的结构及在此基础上进行的衍生化反应所得到的系列化合物将为新一代红霉素药物开发提供很好的基础。这正是该
技术领域：
亟待解决的问题。
发明内容本发明的目的在于针对现有技术存在的技术难题，提供一种从放线多孢菌属(Acti,olyspora)新菌株(Acti,olysporaerythraea)YM906001的发酵液中分离得到的新的化合物——6，18-环氧-14-羟基红霉素内酯B。本发明的另一目的在于提供这种新化合物的制备方法。本发明所述的6，18-环氧-14羟基红霉素内酯B命名为6，18-环氧-14羟基红霉素内酯B，外观呈白色粉末，分子式为(:21113608，结构式如下o本化合物为红霉素母核的一个新的衍生物，具有两个不同于已知红霉素结构的特点，一是独特的含氧三元环状稳定结构，二是14位上的羟基取代。这两个特点在研究开发新一代的红霉素药物中有很重要的意义，14位上活泼的羟基为发生新的取代反应提供了更多的反应位点，在此基础上可以在3位、5位和14位的羟基可以进行各种取代反应，产生出不同于已知和临床上使用的新的红霉素药物。本化合物具有抗肿瘤、抗菌的作用，临床可用于敏感菌所致的各种感染。本化合物可用于合成新一代红霉素类药物的前体物质，为合成3新的红霉素提供了一种新的骨架。结构鉴定由HRESI-MS可知本化合物的[M+Na]为439，结合'HNMR和13CNMR谱给出分子式为C21H3608。与本化合物同时被分离得到的已知物质有红霉素内酯B(erythronolideB)，红霉素C(erythromycinC)和去甲基红霉素C(demethyl-erythromycinC)。将本物质核磁共振(NMR)的数据与上述3个物质的数据对比，发现本物质具有一个14元环的大环内酯，与红霉素具有类似的结构；二维核磁共振的结果证实了新化合物中确实存在着该结构。根据力NMR和13CNMR谱及HMBC等二维核磁共振谱，发现在本物质的C_6和C_18之间存在着一个环氧结构，C-14位存在着一个羟基/H」H之间及"C」H之间的相关关系如图1所示。经过SciFinder检索本化合物为新化合物，属于大环内酯类化合物，结构与红霉素内酯环类似。本化合物的光谱实验数据如表l所示。表1本化合物的^and13CNMR数据a'b~'H(mult"/inHz)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>a数据的归属是依据1H□1HC0SY，HMQC和HMBC等二维NMR试验。bNMR试验以DMSO为溶剂。本化合物的活性数据以本化合物5个浓度对H1299、A549、MCF10A、DU145、SK0V-3、NCI-H460、HT29、HCT-15、MCF7等多种肿瘤细胞株进行了抗肿活性的筛选，结果如表2所示。本物质在0.lmg/mL对肿瘤细胞株具有一定的抑制活性。表2本化合物对肿瘤细胞的抑制率<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>同时，对于本化合物也进行了抑菌实验，在目标菌株中，对枯草芽孢杆菌(细菌，抑菌圈直径3mm)、肺炎链球菌(细菌，抑菌圈直径5mm)、棒束孢菌(真菌，抑菌圈直径lmm)等具有抑制作用，但对真菌的抑制作用较弱。图1为本化合物各原子之间的相关关系图。图2为本化合物的分离与制备流程图。具体实施例方式本发明所述的6，18-环氧-14羟基红霉素内酯B的制备方法由以下步骤组成—、产红霉素多孢放线菌Actinopolysporasp.YM906001菌株的发酵处理a、斜面培养ISP4+10%NaCl，37。C下培养15天至气生孢子长出；b、种子培养ISP4(无琼脂)+10%NaCl，37"下，250转/分，培养10天；c、发酵培养在发酵培养基中，37摄氏度下，250转/分，培养30天，发酵培养基的组成及比例大豆粉20g，蛋白胨2g，葡萄糖20g，淀粉5g，酵母膏2g，NaCl74g，K2HP040.5g，MgS047H200.5g，Na2S0410H2025g，KC115g，MgCl26H2010g，CaS042H205g，CaC032g，去离子水1000ml，pH7.8;操作过程取一接种环长好的菌株孢子，接入温热灭菌过的种子培养基中(50ml/250ml三角烧瓶)，置于摇床上37。C下，250转/分，培养10天，制备种子培养液；再将种子培养液以10%的接种量接种于发酵培养基中(500ml/2000ml三角烧瓶)，发酵摇瓶于37。C下，250转/分，培养30天；二、制备提取物及化合物分离发酵终止后，4°CT4000转/分离心将菌丝体与发酵液分开，向发酵液中加入甲乙酮萃取三次，每次用量为1/3体积，减压除去甲乙酮，得发酵粗提取物，菌丝体用丙酮浸泡3次，每次用量约2000ml;减压除去丙酮，将丙酮浸出物与甲乙酮提取物合并，得菌株粗提取物；粗提取物经硅胶柱层析、S印hadexLH-20柱层析、ODS柱层析及HPLC制备得6，18-环氧红霉素内酯。本发明所述的产红霉素多孢放线菌Actinopolysporasp.YIM906001菌株系从中国新疆艾丁湖盐湖土样中分离获得的。现保藏在国家知识产权局专利局保藏单位保藏，保藏单位名称中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址中国，武汉大学，邮政编码430072。保藏日期为2007年10月9日，保藏编号为CCTCCM208243。培养条件培养基ISP4培养基(1%可溶性淀粉，0.4%(NH4)2S04，0.2%K2HP04，0.2%MgS047H20，0.4%CaC03，510%NaCl，1%MgCl26H20，1%KC1，2%Agar)。NaCl生长耐受范围2-25X，最适生长NaCl5_10%。最适生长pH:7-7.5。最适生长温度37t:。好氧。繁殖用接种针取少量菌丝于ISP4琼脂培养基，37t:培养7天后，基内菌丝开始生长、为白色，气生菌丝还未发育；培养12天后，气生菌丝发育生长、为白色；培养20天到其生长的对数期，基内菌丝白色、气生菌丝为白色到黄白色，无可溶性色素产生。权利要求一种6，18-环氧-14羟基红霉素内酯B，其特征在于命名为6，18-环氧-14羟基红霉素内酯B，外观呈白色粉末，分子式为C21H36O8，结构式如下F2008102337090C0000011.tif2.如权利要求1所述的6，18-环氧-14羟基红霉素内酯B的制备方法，其特征在于由以下步骤组成一、产红霉素多孢放线菌Actinopolysporasp.YIM90600T菌株的发酵处理a、斜面培养ISP4+10%NaCl，37。C下培养15天至气生孢子长出；b、种子培养ISP4无琼脂+10%NaCl，37t:下，250转/分，培养10天；c、发酵培养在发酵培养基中，37摄氏度下，250转/分，培养30天，发酵培养基的组成及比例大豆粉20g，蛋白胨2g，葡萄糖20g，淀粉5g，酵母膏2g，NaCl74g，K2HP040.5g，MgS047H200.5g，Na2S0410H2025g，KC115g，MgCl26H2010g，CaS042H205g，CaC032g，去离子水1000ml，pH7.8;操作过程取一接种环长好的菌株孢子，接入温热灭菌过的种子培养基中，置于摇床上37°CT，250转/分，培养10天，制备种子培养液；再将种子培养液以10%的接种量接种于发酵培养基中，发酵摇瓶于37°CT，250转/分，培养30天；二、制备提取物及化合物分离发酵终止后，4t:下4000转/分离心将菌丝体与发酵液分开，向发酵液中加入甲乙酮萃取三次，每次用量为1/3体积，减压除去甲乙酮，得发酵粗提取物，菌丝体用丙酮浸泡3次，每次用量约2000ml;减压除去丙酮，将丙酮浸出物与甲乙酮提取物合并，得菌株粗提取物；粗提取物经硅胶柱层析、S印hadexLH-20柱层析、ODS柱层析及HPLC制备得6，18-环氧红霉素内酯B。全文摘要本发明涉及一种与红霉素母核类似，但又具有独特结构的新的化合物，以及制备方法。本发明所述的6，18-环氧-14羟基红霉素内酯B分子式为C21H36O8。本发明所述化合物的制备方法由以下步骤组成一、产红霉素多孢放线菌Actinopolysporasp.YIM90600T菌株的发酵处理；二、制备提取物及化合物分离，制备得6，18-环氧红霉素内酯。本化合物具有抗肿瘤、抗菌的作用，临床可用于敏感菌所致的各种感染。本化合物可用于合成新一代红霉素类药物的前体物质，为合成新的红霉素提供了一种新的骨架。本化合物结构式如下文档编号C07D493/00GK101747337SQ200810233709公开日2010年6月23日申请日期2008年12月15日优先权日2008年12月15日发明者唐蜀昆,姜成林,徐丽华,李文均,赵立兴,黄胜雄申请人:云南大学