专利名称：：嘧啶-2，4-二胺衍生物及其作为jak2激酶抑制剂的用途的制作方法
技术领域：
：本发明一般地涉及抑制蛋白激酶活性的化合物和组合物及其相关的方法。相关领域的描述Janus激酶(JAKs)属于激酶家族，在它们中有4种存在于哺乳动物中(JAKl,JAK2，JAK3和TYK2)，它们在来自胞外细胞因子，包括白细胞介素，干扰素以及大量激素的信号传导中整合(Aringer,M.等，LifeSci,1999.64(24):p.2173-86;Briscoe,J.等，PhilosTransRSocLondBBiolSci,1996.351(1336):p.167—71;Ihle，J.N.,SeminImmunol,1995.7(4):p.247-54;Ihle，J.N.，PhilosTransRSocLondBBiolSci，1996.351(1336):p.159-66;Finnbach-Kraft，I.等，Oncogene,1990.5(9):p.1329-36;Harpur，A.G.等，Oncogene,1992.7(7):p.1347-53;Rane，S.G.和E.P.Reddy，Oncogene,1994.9(8):p.2415-23;Wilks,A.F,，MethodsEnzymol,1991.200:p.533-46)。这些非-受体酪氨酸激酶与各种细胞因子受体结合并且通过使STAT(信号转导物和转录激活子)分子磷酸化起将来自胞外配体-受体结合的信号转导入胞质的作用，然后进入核并且直接转录涉及生长和增殖的各种耙基因(Briscoe,J.等；Ihle，J.N.(1995);Ihle，J.N.(1996);Rawlings，J.S.，K.M.Rosler和D.A.Harrison,JCellSci，2004.117(Pt8):p.1281-3)。这些激酶在细胞存活中的重要性由动物模型中JAKs缺失通常伴随免疫缺乏和不能生活这一事实而显而易见(Aringer，M.等)。JAK家族酶的特征在于大量JAK同源性(JH)结构域，包括羧基-末端蛋白酪氨酸激酶结构域(JH1)和相邻激酶-样结构域(JH2)，认为它们调节JH1结构域的活性(Harpur，A.G.等)。4种JAK同种型通过特异性结合某些细胞因子受体并且活化下游基因亚组转导不同的信号。例如，JAK2结合对白细胞介素-3(Silvennoinen，0.等，ProcNatlAcadSciUSA,1993.90(18):p.8429-33)，红细胞生成素(Witthuhn,B.A.等，Cell,1993.74(2):p.227-36),粒细胞集落刺激因子(Nicholson，S.E.等，ProcNatlAcadSciUSA,1994.91(8):p.2985-8)和生长激素(Argetsinger,L.S.等，Cell,1993.74(2):p.237-44)具有特异性的细胞因子受体。JAK家族酶已经成为各种血液和免疫病症的令人关注的一组耙标；JAK2目前作为瘤形成疾病，尤其是白血病和淋巴瘤(Benekli，M.等，Blood,2003.101(8):p.2940-54;Peeters，P.等，Blood,1997.90(7):p.2535-40;Reiter，A.等，CancerRes，2005.65(7):p.2662-7;Takemoto，S.等，ProcNatlAcadSciUSA，1997.94(25):p.13897-902)和实体瘤(Walz，C.等,JBiolChem，2006.281(26):p.18177-83)和其它骨髓增殖性疾病，诸如真性红细胞增多症(Baxter，E.J.等，Lancet,2005.365(9464):p.1054-61;James，C.等，Nature,2005.434(7037):p.1144-8;Levine，R.L.等，CancerCell，2005.7(4):p.387-97;Shannon,K.和R.A.VanEtten，CancerCell,2005.7(4):p.291-3)的有活力的耙标特别处于研究中，这是因为其下游效应基因活化涉及增殖。还已知JAK2在血液恶性胂瘤中突变，使得它不再需要结合细胞因子受体的配体，而是处于组成型活化状态。这种情况可以通过JAK2基因与编码ETV6，BCR或PCM1蛋白的基因(Peeters，P.等;Reiter，A.等;Griesinger,F.等，GenesChromosomesCancer,2005.44(3):p.329-33;LacroniqueV.等，Science,1997.278(5341):p.1309-12)之间的易位发生，从而生成与在慢性髓性白血病中观察到的BCR-ABL蛋白类似的致瘤融合蛋白。JAK2的过度活化还可以通过JAK2序列自身的突变而发生；例如，骨髄增生性疾病真性红细胞增多症涉及导致617位氨基酸上(JAK2V617F)发生缬氨酸-苯丙氨酸取代的点突变(Walz，C.等)。治疗人体恶性肿瘤的小分子JAK2抑制剂因其与瘤形成疾病和骨髓增生病相关并且在其中失调而具有重要意义。基于涉及大量人体恶性肿瘤，所以对设计治疗癌症和其它JAK2激酶蛋白介导和/或相关疾患的特异性和选择性抑制剂存在需求。本发明满足了这些需求并且提供了额外的相关优点。简述本发明一般地涉及化合物(在本文中也称作嘧啶-2，4-二胺衍生物)和包含所述化合物的药物组合物，其中该化合物具有如下一般结构(I)或(II):包括其立体异构体和药学上可接受的盐，其中R1，W1，W2，X1，x2，y1，y2和z如下文所定义。这些化合物具有超过广泛治疗应用的用途，并可以用于治疗JAK2蛋白激酶介导和/或相关(至少是部分)的疾病，诸如癌症。因此，在本发明在一个方面中，将本文所述的化合物配制成用于对有此需要的对象给药的药学上可接受的组合物。8本发明在另一个方面中提供了治疗或预防JAK2蛋白激酶-介导的疾病，诸如癌症的方法，该方法包括对有此需要的患者给予治疗有效量的本文所述的化合物或包含该化合物的药学上可接受的组合物。另一个方面涉及抑制生物样品中的JAK2蛋白激酶活性，该方法包括使所述的生物样品接触本文所述的化合物或包含该化合物的药学上可接受的组合物。另一个方面涉及抑制患者JAK2蛋白激酶活性的方法，该方法包括对患者给予本文所述的化合物或包含该化合物的药学上可接受的组合物。本发明的这些和其它方面在参照下文的详细描述时显而易见。为了达到这一目的，本文引述了更具体地在本发明各方面中列出的某些专利和其它对比文件。将这些对比文件各自完整地引入本文作为参考。详细描述本发明的一般方面提供了用作JAK2蛋白激酶抑制剂的化合物及其组合物和方法。本发明的化合物具有式(I)或(II)中所示的结构包括其立体异构体和药学上可接受的盐，其中Z为CH或N;W1和W2独立地为直接键，-C(=0)-或-O(CH2)n-;f为-H，-CF3，-0CF3，-0CHF2,-0CH3,-CH3，-0H，-N02，-NH2或卤素；X'和X2独立地为-H，-CF3，-0CF3,-0CHF2，-0CH3，-CH3，-OH,-N02，-NH2，卣素或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中Q为0或N且R不存在或R为-d—6烷基，条件是X'或f之一为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>丫1和丫2独立地为-H，-CN，囟素或被-CN取代的Cw烷基，条件是yi和Y'不均为-H;且n为1,2或3。除非另作陈述，否则本说明书和权利要求中使用的下列术语具有如下所述的含义"囟素"意旨氟，氯，溴或碘且一般为氟或氯。"d-6烷基"意旨1-6个碳原子的饱和直链或支链饱和或不饱和环状或无环烃基，而"CH烷基"具有相同含义，但包含1-4个碳原子。饱和直链或支链d-4烷基和d-6烷基的有代表性的实例包括甲基，乙基，正-丙基，异丙基，正-丁基，异丁基，仲-丁基和叔-丁基，且就Cw烷基而言进一步包括正-戊基，正-己基和相应的支化的链。有代表性的饱和环状烷基包括环丙基，环丁基，环戊基，-(^环戊基，环己基等；而不饱和环状烷基包括环戊烯基，环己烯基等。不饱和烷基在相邻碳原子之间包含至少一个双键或三键(分别称作"烯基"或"炔基")。有代表性的直链和支链烯基包括乙烯基，丙烯基，1-丁烯基，2-丁烯基，异丁烯基，l-戊烯基，2-戊烯基，3-甲基-l-丁烯基，2_甲基-2-丁烯基，2，3-二甲基-2-丁烯基等；而有代表性的直链和支链炔基包括乙炔基，丙炔基，l-丁炔基，2-丁炔基，l-戊炔基，2-戊炔基，3-甲基-l-丁炔基等。在上述结构(I)和(II)的更具体的方面中，Z为CH且所述的化合物由如下结构(III)或(IV)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(川)(iv)包括其立体异构体和药学上可接受的盐。在上述结构(i)和(n)的其它方面中，z为n且所述的化合物由如下结构(V)或(VI)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(vi)包括其立体异构体和药学上可接受的盐。在上述结构(III)和(V)的更具体的方面中，t为哌溱基，R为甲基且w1和w2均为直接键并且所述的化合物分别由结构(vii)和(vin)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(vii)(vm)在结构(VII)和(VIII)的更具体的实施方案中，t为-F且所述的、(IX)(X)在结构(vii)和(vni)的其它具体的实施方案中，x2为-h且所述的化合物分别由结构(xi)和(xii)表示(XI)(XII)在结构(ni)的其它具体的实施方案中，x2为哌溱基，R为甲基,w2为-0(ch2)「且w1为直接键，并且所述的化合物由结构(xiii)表示:(x川)在结构(xni)的额外具体实施方案中，xi为-ocH3。在结构(in)的其它具体的实施方案中，t为哌溱基，w1为-C(-0)-且W2为直接键，并且所述的化合物由结构(XIV)表示在结构的额外具体实施方案中(XIV)，f为-H且R为甲基或R为环己基。在结构(I)，(II),(III)，(IV)，(V)，(VI),(VII)，(VIII)，(IX)，(X)，(XI)，(XII),(XIII)和(XIV)的具体实施方案中,Y'和yz为卣素，且更具体地说，f为氯且Y'为氟。在结构(I)，(III),(V)，(VII),(VIII)，(IX)，(X),(XI)，(XII)的具体实施方案中，W和Y'为-CN和卣素，且更具体地说，Y1为-CN和f为氟。在结构(i),(in)，(iv)，(v)，(vi)，(vn),(vin)，(ix)，(x)，(xi)，(xn)，(xni)和(xiv)的具体实施方案中，y'和Y卩为-H和被-CN取代的d—4烷基，且更具体地说，Yi为-CH2CN和Y殳为-H。在结构(II)，(IV)和(VI)的具体实施方案中，r为-F或W为-CF3。具有相同分子式，但在性质或其原子鍵合顺序或其原子空间排列方面不同的化合物称作"异构体"。在其原子空间排列方面不同的异构体称作"立体异构体"。彼此为非镜像的立体异构体称作"非对映异构体"，且彼此为不能重叠的镜像的那些称作"对映异构体"。当化合物带有不对称中心时，例如它与4个不同的基团键合，对映异构体对是可能的。对映异构体的特征在于其不对称中心的绝对构型并且描述为Cahn和Prelog的R-和S-顺位规则(Cahn，R.,Ingold，C.和Prelog,V.Angew.Chem.78:413-47，1966;Angew.Chem.Internat.Ed.Eng.5:385-415，511，1966)或分子沿偏振光平面旋转并且命名为右旋或左旋(即分别为(+)或(-)-异构体)的方式。手性化合物可以作为各对映异构体或其混合物存在。包含等比例对映异构体的混合物称作"外消旋混合物"。本发明的化合物可以具有一个或多个不对称中心；这类化合物由此可以作为各(R)-或(S)-立体异构体或其混合物产生。除非另作陈述，否则本说明书和权利要求中描述或命名的具体化合物用以包括各对映异构体及其混合物，否则就是外消旋混合物。用于测定立体异构体立体化学并且分离它们的方法为本领域众所周知的(参见AdvancedOrganicChemistry的Ch.4中的讨论，第4版，March,J.，JohnWileyandSons,NewYorkCity,1992)。本发明的化合物可以表现出互变异构和结构异构现象。本发明包括具有能够调节MK2-2激酶活性的任意互变体或结构异构体形式及其混合物，并且不限于任意一种互变体或结构异构体形式。关注本发明的化合物可以被生物体，诸如人体内的酶代谢成可以调节蛋白激酶活性的代谢物。这类代谢物属于本发明的范围。照此可以将本发明的化合物或其药学上可接受的盐对患者，包括人给药或可以以药物组合物的形式给予，其中将上述物质与合适的载体或赋形剂混合。例如，可以按照最新版Remington'sPharmacologicalSciences,MackPublishingCo.,Easton，PA确定用于配制和给予药物的技术。"药物组合物"意旨本文所述的化合物中的一种或多种或其药学上可接受的盐与其它化学成分，诸如药学上可接受的赋形剂的混合物。药物组合物的目的在于有利于对生物体给予化合物。"药学上可接受的赋形剂"意旨加入到药物组合物中以便进一步有利于化合物给药的惰性物质。赋形剂的实例包括碳酸钩，磷酸钓，各种糖和各种类型的淀粉，纤维素衍生物，明胶，植物油和聚乙二醇类，但不限于它们。"药学上可接受的盐"意旨保持母体化合物生物有效性和特性的那些盐。这类盐可以包括(l)通过使母体化合物的游离碱与无机酸或与有机酸反应获得的酸加成的盐，所述的无机酸诸如盐酸，氢溴酸，硝酸，磷酸，硫酸和高氯酸等，所述的有机酸诸如乙酸，草酸，(D)-或(L)-苹果酸，马来酸，曱磺酸，乙磺酸，对甲苯磺酸，水杨酸，酒石酸，柠檬酸，琥珀酸或丙二酸等，优选盐酸或(L)-苹果酸；或(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子，例如碱金属离子，碱土金属离子或铝离子取代时形成的盐；或与有机碱，诸如乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺，氨丁三醇，N-甲基葡糖胺等形成的配位化合物。"治疗有效量"意旨将所治疗病症的一种或多种症状緩解至一定程度给予的化合物用量。就治疗癌症而言，治疗有效量意旨具有如下作用的用量(l)减小肿瘤尺寸；(2)抑制瘤转移；(3)抑制肿瘤生长；和/或(4)緩解与癌症相关的一种或多种症状。本文所用的术语"JAK2蛋白激酶-介导的疾患"或"疾病"意旨已知JAK2蛋白激酶起作用的任意疾病或其它有害情况。术语"JAK2蛋白激酶-介导的疾患"或"疾病"还意旨通过使用JAK2蛋白激酶抑制剂治疗緩解的那些疾病或疾患，包括在下文中更详细讨论的癌症。本文所用的"给予"或"给药"意旨为预防或治疗蛋白激酶相关病症对生物体递送本发明的化合物或其药学上可接受的盐或包含本发明化合物或本发明其药学上可接受的盐的药物组合物。合适的给药途径包括，但不限于口服，直肠，跨粘膜或肠给药或肌内，皮下，髓内，鞘内，直接心室内，静脉内，玻璃体内，腹膜内，鼻内或眼内注射。在某些实施方案中，给药途径为口服和静脉内。可选择地，可以以非全身方式的局部方式给予所述的化合物，例如通过将化合物通常以长效或緩释制剂的形式直接注入实体瘤。此外，可以以靶向递送系统，例如以包被了肿瘤特异性抗体的脂质体形式给予所述的化合物。在这种方式中，所述的脂质体可以靶向至肿瘤并且选择性地被胂瘤吸收。可以通过本领域众所周知的方法，例如通过常规的混合，溶解，制粒，制锭，磨细，乳化，包嚢，截留或冻干方法制备本发明的药物组合物。可以按照任意常规方式，使用包含有利于将活性化合物加工成可以在药学上使用的制剂的一种或多种生理学可接受的载体配制本发明使用的药物组合物。适当的制剂依赖于选择的给药途径。就注射剂而言，可以将本发明的化合物配制成水溶液，优选在生理相容性緩冲液，诸如Hanks溶液，林格液或生理盐水緩冲液中。就跨粘膜给药而言，适合于透过屏障的穿透剂用于制剂。这类穿透剂为本领域一般公知的。就口服给药而言，可以通过将活性化合物与本领域众所周知的药学上可接受的载体合并配制化合物。这类载体能够将本发明的化合物配制成片剂，丸剂，锭剂，糖锭，胶嚢，液体，凝胶，糖浆剂，淤浆，混悬液等，以便由患者口服摄入。可以使用固体赋形剂，任选如果需要研磨所得混合物并且在加入其它合适的助剂后加工颗粒混合物制备用于口服应用的药物制剂，从而得到片剂或锭锌。有用的赋形剂特别为填充剂，诸如糖类，包括乳糖，蔗糖，甘露糖醇或山梨醇；纤维素制品，诸如，例如玉米淀粉，小麦淀粉，稻米淀粉和马铃薯淀粉；和其它材料，诸如明胶，黄蓍树胶，甲基纤维素，羟丙基甲基-纤维素，羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解剂，诸如交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂或藻酸。还可以使用诸如藻酸钠这类盐。可以给锭芯提供合适的包衣层。为了这一目的，可以使用浓糖溶液，其可以任选包含阿拉伯树胶，滑石粉，聚乙烯吡咯烷酮，卡波普凝胶，聚乙二醇，和/或二氧化钛，漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或色素加入到片剂或锭剂包衣层中以便鉴別或表征活性化合物剂量的组合。可以口服使用的药物组合物包括由明胶构成的推入配合式胶嚢和由明胶和增塑剂，诸如甘油或山梨醇构成的软密封胶嚢。推入配合式胶嚢可以包含活性组分与填充剂，诸如乳糖，粘合剂，诸如淀粉和/或润滑剂，诸如滑石粉或硬脂酸镁和任选的稳定剂的混合物。在软胶嚢中，可以将活性化合物溶于和悬浮于合适的液体中，诸如脂肪油，液体石蜡或液体聚乙二醇。在这些制剂中还可以加入稳定剂。还可以使用的药物组合物包括硬胶嚢。可以将胶嚢或丸剂包装入棕色玻璃或塑料瓶以使活性化合物避光。优选将包含活性化合物胶嚢制剂的容器储存在受控的室温下(15-30°C)。为了通过吸入给药，可以便利地通过任意数量的现存技术将本发明使用的化合物以喷雾剂形式递送。另外，喷雾剂可以使用加压药包或喷雾器和合适的抛射剂，例如，但不限于二氯二氟甲烷，三氯氟曱烷，二氯四-氟乙烷或二氧化碳。就加压气溶胶而言，可以通过安装用于递送计量用量的阀门控制剂量单位。例如，可以配制包含化合物与适当粉末基质，诸如乳糖或淀粉的粉末混合物的用于吸入器或吹入器的明胶胶嚢和药筒。可选择地，可以以不使用抛射剂的气溶胶形式递送化合物。还可以为非肠道给药，例如通过快速浓注或连续输注配制化合物。用于注射的制剂可以以例如在安瓿或多剂量容器中的添加了防腐剂的单位剂型存在。这些组合物可以采用诸如栓剂，在油或水媒介物中的溶液或乳剂这类形式并且可以包含配制物质，诸如悬浮剂，稳定剂和/或分散剂。用于非肠道给药的药物组合物包括水溶性形式，诸如，但不限于活性化合物的盐的水溶液。另外，可以制备在亲脂性媒介物中的活性化合物的混悬液。合适的亲脂性媒介物包括脂肪油，诸如芝麻油，合成脂肪酸酯类，诸如油酸乙酯和甘油三酯类或诸如脂质体这类材料。含水的注射混悬液可以包含增加该混悬液粘度的物质，诸如羧甲基纤维素钠，山梨醇或葡聚糖。该混悬液可以任选还包含合适的稳定剂和/或增加化合物溶解度的试剂，以便能够制备高浓缩溶液。可选择地，活性组分可以为在使用前用合适的媒介物，例如无菌无热原水溶解的粉末形式。17还可以使用例如常规栓剂基质，诸如可可脂或其它甘油酯类的将化合物配制成直肠用组合物，诸如栓剂或保留灌肠剂。除上述制剂外，还可以将化合物配制成长效制剂。可以通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌注给药这类长效制剂。可以使用合适的聚合物或疏水性材料(例如含药理学可接受的油的乳剂)，离子交换树脂或作为微溶性衍生物，诸如，但不限于微溶性盐微这种给药途径配制本发明的化合物。用于本发明化合物的药用载体的非限制性实例为包含千醇，非极性表面活性剂，与水易溶混的有机聚合物的共溶剂系统和水相，诸如VPD共溶剂系统。VPD为由在无水乙醇中的体积构成的3。/。w/v节醇，8%w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80和65。/。w/v聚乙二醇300的溶液。VPD共溶剂系统(VPD:D5W)由用5%在水溶液中的葡萄糖按照1:1稀释的VPD组成。该共溶剂系统充分溶解化合物并且其自身在全身给药时产生低毒性。这类共溶剂系统的比例可以自然明显地改变，而不会破坏其溶解度和毒性特性。此外，可以改变共溶剂系统的组成例如，可以使用其它低毒性非表面活性剂，而不是聚山梨醇酯80，可以改变聚乙二醇的部分大小，其它生物相容性聚合物可以替代聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮和其它糖类或多糖类可以取代葡萄糖。可选择地，可以使用用于药物化合物的其它递送系统。脂质体和乳剂为疏水性药物递送媒介物或载体的众所周知的实例。此外，还可以使用某些有机溶剂，诸如二甲亚砜，尽管通常要负担较大的毒性。另外，可以使用緩释系统，诸如包含治疗剂的固体疏水性聚合物的半透性基质递送化合物。已经确立了各种緩释材料并且为本领域技术人员众所周知。緩释胶嚢根据其化学性质的不同可以释放化合物几周到IOO天以上。本文的药物组合物还可以包含合适的固体或凝胶相载体或赋形剂。这类载体或赋形剂的实例包括，但不限于碳酸钙，磷酸钙，各种糖类，淀粉，纤维素衍生物，明胶和聚合物，诸如聚乙二醇类。可以将本发明调节JAK2蛋白激酶的化合物中的许多作为生理学18可接受的盐提供，其中该化合物可以形成带负电荷或正电荷的种类。化合物形成带正电荷的部分的盐的实例包括，但不限于诸如盐酸盐，硫酸盐，碳酸盐，乳酸盐，酒石酸盐，苹果酸盐，马来酸盐和琥珀酸盐这类盐。本发明的化合物形成带负电荷的种类的盐包括，但不限于钠，钾，钙和镁的盐。适用于本发明的药物组合物包括组合物，其中包含足以实现指定目的，例如调节JAK2蛋白激酶活性和/或治疗或预防JAK2蛋白激酶-相关病症的用量的活性组分。更具体地说，治疗有效量意旨有效预防，緩解或改善疾病症状或延长所治疗对象存活的化合物用量。测定治疗有效量为本领域技术人员的充分能力，尤其是根据本文提供的详细披露的内容而言。就本发明方法中使用的任意化合物而言，最初可以根据细胞培养试验评估治疗有效量或剂量。然后可以在动物模型中配制使用剂量以便实现包括如在细胞培养物中测定的IC5。的循环浓度范围(即实现蛋白激酶活性半数最大抑制的测试化合物浓度)。然后可以将这类信息用于更精确地确定在人体中的有用剂量。可以通过在细胞培养物或实验动物中的标准药物操作，例如通过测定主题化合物的ICs。和LD5。测定本文所述化合物的毒性和治疗效率。获自这些细胞培养试验和动物研究的数据可以用于配制应用于人体的剂量范围。该剂量可以根据使用的剂型和所用的给药途径的不同而改变。确切的制剂，给药途径和剂量可以由各临床医师根据患者病'清选择(例i口，参见Goodman&Gilman,sThePharmacologicalBasisofTherapeutics,Ch.3，9thed.，Ed.byHardman,J.和Limbard，L.,McGraw-Hill,NewYorkCity,1996，p.46)。可以各自调整剂量和间隔以便提供足以维持JAK2激酶调节作用的活性种类的血浆水平。这些血浆水平称作最低有效浓度(MEC)。MEC对每种化合物而言可变，但可以根据体外数据评估，例如可以使用本文所述的试验确定实现激酶50-90%抑制所必须的浓度。实现MEC所必须的剂量取决于个体特征和给药途径。HPLC测定法或生物测定法可以用于测定血浆浓度。还可以使用MEC值测定剂量间隔。应使用将血浆水平维持高于MEC10-90%的时间，优选30-90%且最优选50-90%的方案给予化合物。目前，本发明化合物的治疗有效量可以在约2.5mg/m2-1500mg/mV天的范围。额外的例证性用量范围在0.2-1000mg/qid，2-500mg/qid和20-250mg/qid。就局部给药或选择性吸收而言，药物的有效局部浓度与血浆浓度无关并且本领域中公知的其它操作可以用于测定正确的剂量和间隔。当然，给予的组合物的用量取决于所治疗的对象，疾病的严重性，给药方式，开据处方的临床医师的判断等。如果需要，可以将组合物制成药包或分配器装置，诸如FDA批准的试剂盒，其可以包含一个或多个包含和小组的的单位剂型。例如，药包可以包含金属或塑料箔，诸如泡罩包。药包或分配器装置可以附带给药说明书。药包或分配器装置还可以附带与管理药物生产，应用或销售的政府管理部门规定形式的容器相关的注意事项，该注意事项反映出得到管理部门批准的组合物或人或兽医给药形式。例如，这类注意事项可以为美国食品与药品监督管理局批准的处方药或批准的标签或产品插页。还可以制备包含使用相容性药用载体配制的本发明化合物的组合物，将其放入适当容器并且标记可治疗所示疾患。如上所述，本发明的化合物和组合物可以应用于HK2蛋白激酶介导的广泛疾病和疾患。作为实例，这类疾病可以包括癌症，诸如血癌(例如急性髓性白血病(AML)和慢性髓性白血病(CML))，肺癌，NSCLC(非小细胞肺癌)，燕麦细胞癌，骨癌，胰腺癌，皮肤癌，隆突性皮肤纤维肉瘤，头颈癌，皮肤或眼内黑素瘤，子宫癌，卵巢癌，结肠直肠癌，肛门区癌，胃癌，结肠癌，乳腺癌，妇科肿瘤(例如子宫肉瘤，输卵管癌，子宫内膜癌，宫颈癌，阴道癌或外阴癌)，何杰金病，肝细胞癌，食道癌，小肠癌，内分泌系统癌(例如甲状腺，胰腺，甲状旁腺或肾上腺癌)，软组织肉瘤，尿道癌，阴茎癌，睾丸癌，前列腺癌(特别是激素-顽固性)，慢性或急性白血病，儿童实体瘤，嗜伊红细胞增多症，淋巴细胞淋巴瘤，膀胱癌，肾或输尿管癌(例如肾细胞癌，肾盂癌)，儿科恶性肿瘤，中枢神经系统肿瘤(例如原发性CNS淋巴瘤，脊柱轴瘤，髓母细胞瘤，脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤)，巴雷特(Barrett)食管(恶性前期综合征)，瘤形成皮肤病，银屑病，蕈样真菌病和良性前列腺肥大，糖尿病相关疾病，诸如糖尿病性视网膜病，视网膜缺血和视网膜新生血管形成，肝硬化，血管发生，心血管病，诸如动脉粥样硬化，免疫性疾病，诸如自身免疫病和肾脏病；但不限于它们。本发明的化合物可以与一种或多种其它化疗剂联用。可以为任何药物-药物反应调整本发明化合物的剂量。在一个实施方案中，所述的化疗剂选自有丝分裂抑制剂，烷化剂，抗代谢药，细胞周期抑制剂，酶，拓朴易构酶抑制剂，诸如CAMPTOSAR(伊立替康)，生物反应调节剂，抗激素，抗血管生成因子，诸如MMP-2，画P-9和C0X-2抑制剂，抗雄激素药，铂配位络合物(顺铂等)，取代的脲类，诸如羟基脲；甲基肼衍生物，例如丙卡巴肼；肾上腺皮质抑制剂，例如米托坦，氨基鲁米特，激素和激素拮抗剂，诸如肾上腺皮质类固醇(例如泼尼松)，孕激素类(例如羟基己酸孕酮)，雌激素类(例如己烯雌酚)，抗雌激素药，诸如他莫昔芬，雄激素类，例如丙酸睾酮和芳香酶抑制剂，诸如阿那曲唑和AROMASIN(依西美坦)。可以用于上述联合方法的烷化剂的实例包括，但不限于单独的氟尿嘧啶(5-FU)或其进一步与亚叶酸的组合；其它嗜^类似物，诸如UFT，卡培他滨，吉西他滨和阿糖胞苷，磺酸烷基酯类，例如白消安(用于治疗慢性粒细胞白血病)，英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙咬类，例如苯佐替派，卡巴醌，美妥替哌和乌瑞替派；乙烯亚胺类和甲基蜜胺类，例如六甲蜜胺，三乙烯三聚氰胺，三亚乙基磷酰胺，三亚乙基;P克代磷酰胺和三羟甲蜜胺；和氮芥，例如苯丁酸氮芥(用于治疗慢性淋巴细胞白血病，原发性巨球蛋白血症和非何杰金淋巴瘤)，环磷酰胺(用于治疗何杰金病，多发性骨髓瘤，神经母细胞瘤，乳腺癌，卵巢癌，肺癌，维尔姆斯瘤和冲黄紋肌肉瘤)，雌氮芥，异环磷酰胺，novembrichin，泼尼莫司汀和乌拉莫司汀(用于治疗原发性血小板增多，非何杰金淋巴瘤，何杰金病和卵巢癌)；和三"秦类，例如达卡巴溱(用于治疗软组织肉瘤)。可以用于上述联合方法的抗代谢物化疗剂的实例包括，但不限于叶酸类似物，例如曱氨蝶呤(用于治疗急性淋巴细胞白血病，绒毛膜癌，苯样真菌病，乳腺癌，头颈癌和成骨性肉瘤)和蝶罗呤；和噤呤类似物，诸如巯噪呤和硫鸟嘌呤，它们用于治疗急性粒细胞性白血病，急性淋巴细胞白血病和慢性粒细胞性白血病。可以用于上述联合方法的基于天然产物的化疗剂的实例包括，但不限于长春花生物碱类，例如长春碱(用于治疗乳腺和睾丸癌)，长春新碱和长春地辛；表鬼臼毒素，例如依托泊苷和替尼泊苷，它们两者均用于治疗睾丸癌和卡波西肉瘤；抗生素化疗剂，例如柔红霉素，多柔比星，表柔比星，丝裂霉素(用于治疗胃，宫颈，结肠，乳腺，膀胱和胰腺癌)，放线菌素D，替莫唑胺，普利霉素，博来霉素(用于治疗皮肤，食道和泌尿生殖道癌)；和酶化疗剂，诸如L-天冬酰胺酶。有用的COX-II抑制剂的实例包括Vioxx，CELEBREX(塞来考昔)，伐地考昔，帕雷考昔(paracoxib)，罗非昔布和Cox189。有用的基质金属蛋白酶抑制剂的实例描述在如下文献中W096/33172(1996年10月24日公布)，W096/27583(1996年5月7日公布)，欧洲专利申请号EP97304971.1(1997年7月8日提交)，欧洲专利申请号EP99308617.2(1999年10月29日提交)，W098/07697(1998年2月26日公布)，W098/03516(1998年1月29日公布)，W098/34918(1998年8月13日7〉布)，W098/34915(1998年8月13日公布)，W098/33768(1998年8月6日公布)，W098/30566(1998年7月16日公布)，欧洲专利申请公开号EP606,046(1994年7月13日公布)，欧洲专利申请公开号EP931，788(1999年7月28日公布)，W090/05719(1990年5月31日公布)，W099/52910(1999年10月21日公布)，WO99/52889(1999年10月21日公布)，W099/29667(199922年6月17曰公布)，PCT国际申请乂^开号PCT/IB98/01113(1998年7月21日提交)，欧洲专利申请号EP99302232.1(1999年3月25日提交)，英国专利申请号GB9912961.1(1999年6月3日提交)，美国专利US5,863,949(1999年1月26日授权)，美国专利US5，861，510(1999年1月19日授权)和欧洲专利申请公开号EP780，386(1997年6月25日公布)，将所有这些文献完整地引入本文作为参考。优选的MMP-2和腦P-9抑制剂为几乎没有或无抑制固P-1的活性的那些。更优选相对于其它基质金属蛋白酶(即MMP-1，MMP-3，画P-4，羅P-5，MMP-6，MMP-7，MMP-8,醒P-IO，醒P-ll，MMP-12和MMP-13)而言选择性抑制醒P-2和/或醒P-9的那些。用于本发明的画P抑制剂的某些具体实例为AG-3340,R032-3555，RS13-0830和选自如下的化合物3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基]-(l-羟基氨基甲酰基-环戊基)-氨基]-丙酸；3-外向-3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-8-氧杂-双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸羟基酰胺；(2R，3RM-[4-(2-氯-4-氟-节氧基)-苯磺酰基]-3-羟基-3-甲基-哌啶-2-甲酸羟基酰胺；4-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-四氢-吡喃-4-甲酸羟基酰胺；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基]_(l-羟基氨基甲酰基-环丁基)-氨基]-丙酸；4-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-四氢-吡喃-4-甲酸羟基酰胺；(R)3-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-四氢-吡喃-3-甲酸羟基酰胺；(2R，3R)l-[4-(4-氟-2-甲基节氧基)-苯磺酰基]-3-羟基-3-甲基-哌啶-2-曱酸羟基酰胺；3-[[(4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基]-(l-羟基氨基甲酰基-l-甲基-乙基)-氨基]-丙酸；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基]-(4-羟基氨基曱酰基-四氢-吡喃-4-基)-氨基]-丙酸；3-外向-3-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-8-氧杂-双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸羟基酰胺；3-内向-3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-8-氧杂-双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸羟基酰胺；和(R)3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-四氢-呋喃-3-甲酸羟基酰胺；和这些化合物的药学上可接受的盐和溶剂合物。23其它抗血管发生药，其它COX-II抑制剂和其它匪P抑制剂也可以用于本发明。本发明的化合物还可以与其它信号转导抑制剂联用，诸如可以抑制EGFR(表皮生长因子受体)应答的活性剂，诸如EGFR抗体，EGF抗体和为EGFR抑制剂的分子；VEGF(表皮生长因子受体)抑制剂；和erbB2受体抑制剂，诸如有机分子或结合erbB2受体的抗体，诸如腿CEPTIN(Genentech，Inc.,SouthSanFrancisco,CA)。在WO95/19970(1995年7月27日公布)，WO98/14451(1998年4月9日7>布)，WO98/02434(1998年1月22日公布)和美国专利US5，747，498(1998年5月5日授权)中描述了EGFR抑制剂，并且这类物质可以如本文所述用于本发明。EGFR-抑制剂包括，但不限于单克隆抗体C225和抗-EGFR22Mab(ImCloneSystems，Inc.，NewYork，NY)，化合物ZD-1839(AstraZeneca)，BIBX-1382(BoehringerIngelheim)，MDX-447(MedarexInc.,Annandale,NJ)和OLX-103(Merck&Co.，WhitehouseStation,NJ)和EGF融合毒素(SeragenInc.，Hopkinton,MA)。这些和其它EGFR-抑制剂可以用于本发明。VEGF抑制剂，例如SU-5416和SU-6668(SugenInc.,SouthSanFrancisco,CA)还可以与本发明的化合物联用。VEGF抑制剂描述在例如下列文献中W001/60814A3(2001年8月23日7>布)，W099/24440(1999年5月20日公布)，PCT国际申请PCT/IB99/00797(1999年5月3日提交)，W095/21613(1995年8月17日公布)，W099/61422(1999年12月2日公布)，美国专利US5,834,504(1998年11月10日授权)，WO01/60814，WO98/50356(1998年11月12日授权)，美国专利US5,883,113(1999年3月16日授权)，美国专利US5,886,020(1999年3月23日授权)，美国专利US5，792，783(1998年8月11日授权)，WO99/10349(1999年3月4日公布)，WO97/32856(1997年9月12日公布)，WO97/22596(1997年6月26日公布)，WO98/54093(1998年12月3日公布)，WO98/02438(1998年1月22日公布)，WO99/16755(1999年4月8日公布)和WO98/02437(1998年1月22日公布)，将所有这些文献完整地引入本文作为参考。用于本发明的某些特异性VEGF抑制剂的其它实例为IM862(CytranInc.，Kirkland，WA);Genentech，Inc.的抗-VEGF单克隆抗体；和抗VEGFR2核酶(angiozyme)，即一种来自核酶(Boulder,CO)和手性子(Emeryvi1le,CA)的合成核酶。这些和其它VEGF抑制剂可以如本文所述用于本发明。pErbB2受体抑制剂，诸如GW-282974(GlaxoWell国eplc)和单克隆抗体AR-209(AronexPharmaceuticalsInc.，TheWoodlands,TX)和2B-l(Chiron)也可以与本发明化合物联用，例如如下文献中所示的那些W098/02434(1998年1月22日公布)，W099/35146(1999年7月15日公布)，W099/35132(1999年7月15日公布)，W098/02437(1998年1月22日公布)，W097/13760(1997年4月17日公布)，WO95/19970(1995年7月27日公布)，美国专利US5，587，458(1996年12月24日授权)和美国专利US5，877,305(1999年3月2日授权)，将所有这些文献完整地引入本文作为参考。用于本发明的ErbB2受体抑制剂还描述在美国专利US6,284,764(2001年9月4日授权)中，将该文献完整地引入本文作为参考。erbB2受体抑制剂化合物和描述在上述PCT申请，美国专利和美国临时申请中的物质和其它抑制erbB2受体的化合物和物质可以按照本发明与本发明化合物联用。本发明的化合物还可以与用于治疗癌症的其它活性剂联用，包括，但不限于能够增强抗肿瘤免疫应答的活性剂，诸如CTLA4(细胞毒性淋巴细胞抗原4)抗体和其它能够阻断CTLA4的活性剂；和抗增殖剂，诸如其它法尼基蛋白转移酶抑制剂，例如描述在美国专利US6,258,824Bl的"背景"部分中引述的参考文献中的法尼基蛋白转移酶抑制剂。上述方法还可以与放疗联合进行，其中与放疗联用的本发明化合物的量可有效治疗上述疾病。的疗法联用。可以如本文所述确定在该联合疗法中给予的本发明的化合物。在考虑下列非限制性实施例时进一步理解本发明。实施例实施例1基于计算机的前导鉴定实际的筛选计算基于JAK2激酶与Pan-Janus激酶抑制剂的复合物的晶体结构作为模板进行(PDBID:2B7A)。从虛拟库中对内部~200和~230万个集中和/或不同的药物类化合物进行计算机筛选产生了对购自0tavaChemicals(www.Otavachemicals.com)的库中的候选化合物的选择。将内部3种化合物测定为在低微摩尔范围内具有活性(<42nM-1.25pM),并且将0tava化合物之一测定为在直接JAK2激酶结合试验中在〈10nM下具有活性。将对特异性JAK2激酶活性重要的分子区鉴定的最具活性的化合物确定为属于嘧啶-2，4-二胺衍生物。正如下表l中所示，基于结合方式，QikProp(溶解度，渗透性)Lipinski-类标准和存在的所需药效基团过滤选自这类筛选的化合物。表1有代表性的嘧啶-2，4-二胺衍生物化合物序号结构卜lH"~<\》/=K/=\F3CCI化学式CH12C1F3N4分子量364，7526<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>实施例2嘧咬-2，4-二胺衍生物的一般合成可以由化学领域普通技术人员使用常规的合成操作以及通过下列一般反应方案制备本发明的化合物。简言之，使2，4-二氯嘧啶(l)与适当取代的苯胺(2)反应生成中间体(3)。然后使该中间体(3)与另一适当取代的胺(4)反应生成结构(I)的化合物。可选择地，使中间体(3)进一步与适当取代的胺(5)反应而生成结构(II)的化合物。如无任何具体声明，则所有的溶剂和试剂均购自Aldrich或WR的化学品并且可以根据需要通过标准实验室方法提供或纯化使用。实施例3嗜咬-2，4-二胺衍生物的合成A.制备2-氯-4-取代的嗜啶(3)的一般操作<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>将包含2，4-二氯嘧啶(1)(10mmol)，苯胺(2)(10mmol)和二异丙基乙胺(DIPEA)(1.5mmol)在30mL异丙醇(IPA)中的反应混合物回流过夜。除去溶剂并JU吏用CombiflashCompanion系统纯化残余物(10%-70。/。己烷/EtOAc)而得到所需的2-氯-4-取代的嘧咬(3)。2-氯-N-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4-胺(7)将2，4-二氯嘧咬(1)(1g，6.71mmol，Sigma-Aldrich)，3-氯-4-氟苯胺(6)(0.977g，6.71mmol，Sigma-Aldrich)和二异丙基乙胺(DIPEA)(3.47g，26.8咖ol)在2-丙醇(20mL)中的反应混合物回流18h。蒸发溶剂并且通过使用70%己烷与纯二氯甲烷(DCM)和20%乙酸乙酯(EtOAc)的溶剂系统(40g正相RediSep快速柱，运行时间50min)的CombiflashCompanion纯化而得到化合物(7)(0.8g)。(TLC，Rf-O.6，EtOAc)。白色固体，产率46.2%。力-NMR(400MHz，DMS0-d》10.18(s，1H),8.20(d，J=6.2Hz，1H)，7.90(m，lH)，7.50(m，1H)，7.43(t,J-8.9Hz，1H)，6.74(d，J-5.8Hz，1H)。ESI/MSm/z258.0(100%)，259.9(78%)，261.9(18%)。5-(2-氯嘧啶-4-基氨基)-2-氟苄腈(9)DIPEA,2-丙醇回流12hDIPEA/2-丙醇将2，4-二氯嘧啶(1)(1g，6.71mmol)，5-氨基-2-氟苄腈(8)(0.914g，6.71mmol)在2-丙醇(50mL)和1mLDIPEA中的反应混合物回流过夜。蒸发溶剂并且通过Combiflash(12g,DCM-10%MeOH/DCM)纯化粗物质而得到318mg化合物(9)(TLC，Rf=0.1,6%MeOH/DCM)。白色固体，产率19%。力NMR(400MHz，CD30D)8.15(m,2H),7.89(m，1H),7.35(t，J=9.23Hz，1H)，6.70(d,J-5.6Hz，1H)。ESI/MSm/z248.9(100%)，250.9(33%)。2-(3-氨基苯基)乙腈(ll)将3-硝基苯基乙腈(10)溶于浓HC1(15ml)和乙醇(15ml)的混合物。在冰冷却下逐步滴加SnCl2二水合物在乙醇(25ml)中的溶液并且将该混合物在室温下搅拌5小时。TLC(EtOAc/己烷1:1)Rf=0.1显示80%完成。在蒸发溶剂后，用NaOH将残余物处理至pH9。用Et0Ac萃取并且进行combiflash(12g,己烷/EtOAc10%-50%,70min)而得到1.182g化合物(ll)，为黄色油状物。力-NMR(400MHz,CDCU7.12(t，J-7.5Hz,1H),6.65(m,3H)，3.72(br-s，1H),3.64(s,2H)。2-(3-(2-氯嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(12)33<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>将2，4-二氯嗜咬(1)(1.127g，7.57mmol)2-(3-氨基苯基乙腈(11)(1g，7.57mmol)在2-丙醇(40mL)和15mmol三乙胺(TEA)中的反应混合物回流2天。蒸发溶剂并且通过Combiflash纯化(12g，两次，CHCh)而得到932mg化合物(12)，为淡绿色结晶。产率50%。^-NMR(400MHz,CDC13)8.16(d，J-6.15Hz，1H)，7.41(m，1H)，7.33(m,2H)，7.18(d，J=7.5Hz，1H)，6.96(br-s，1H),6.58(d，J=5.8Hz，1H)，3.77(s，2H)。B.制备2，4-二取代的嘧啶(I)的一般操作<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>将包含在7mL异丙醇中的2-氯-4-取代的嘧啶(3)(0.25mmol)，胺(4)或胺(5)(ApolloScientificandBionetBuildingBlocks,UK)(0.25mmol)和TFA(O.5mmol)的反应混合物回流过夜。在将该反应混合物冷却至室温后加入NaOH(O.6mmol)。除去溶剂并且通过Combiflash纯化残余物(4g,DCM-20%MeOH/DCM)而得到如下所述的结构(I)或(II)的化合物。N4-(3-氯苯基)-N2-(4-(三氟甲基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物1-1)向2-氯-N-(3-氯苯基)嘧啶-4-胺(13)(100mg，0.417mmol)在2-丙醇(10mL)中的溶液中加入4-(三氟甲基)苯胺(14)(67.1mg，0.417mmol)，随后添加催化剂三氟乙酸并且在回流温度下搅拌过夜。蒸发溶剂并且通过使用DCM和5%MeOH溶剂系统的CombiflashCompanion纯化残余物(4g正相RediSep快速柱，运行时间50min,流量18ml/min)而得到化合物1-1。(TLC，Rf=0.4，10%MeOH/DCM)。^NMR(400MHz，DMS0-d6)8.08(d，J-6.15Hz，1H),7.8(s,2H),3.39(m,1H)，7.82(d，J=8.2Hz，2H)，7.66(d，J-8.2Hz，2H)，7.46(d,J-6,84Hz,1H)，7.36(t,J=8.2Hz,1H)，7.15(d，J-8.18Hz，1H)，6.42(d，J-6.15Hz，1H)ESI/MSm/z365.0(M+H)+。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(4-氟苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物1-2)向2-氯-N-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4-胺(7)(60mg，0.232mmol)在2-丙醇(10mL)中的溶液中加入4-氟苯胺(15)(25.8mg，0.23235minol)，随后添加催化剂三氟乙酸并且在回流温度下搅拌过夜。向该反应混合物中加入三乙胺，随后搅拌lh，此后TLC显示反应完成。蒸发溶剂并且通过使用己烷70°/。和DCM溶剂系统的CombiflashCompanion纯化残余物(4g正相RediSep快速柱，运4亍时间50min，流量18ml/min)而得到化合物l-2(TLC，Rf=0.35，5%Me0H/DCM)。^腿(楊MHz，而0-d》8.Ol(m，2H)，7.64(m，2H)，3.39(m，2H)，7.49(m,1H)，7.35(t,J=8.23Hz，1H)，7.ll(m，2H)，6.22(m，1H)，ESI/MSm/z333.0(M+H)+。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(4-吗啉代苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合鲍<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>1-3)向2-氯-N-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4-胺(7)(60mg,0.232mmol)在2-丙醇(10mL)中的溶液中加入4-吗啉代苯胺(16)(41.4mg，0.232咖ol)，随后添加催化剂三氟乙酸并且在回流温度下搅拌过夜。通过使用10%在DCM中的MeOH的溶剂系统的CombiFlashCompanion纯化粗残余物(4g正相RediSep快速柱，运行时间50min，流量26ml/min)而得到化合物1-3。(TLC,Rf=0.45，10%MeOH/DCM)HPLC-94%。^画R(400MHz,DMS0-d6)8.03(m,1H)，7，90(m，1H)，3.39(m，2H)，7.31(d，J=8.54Hz，2H)，6.98(d，J=8.55Hz，2H),6.33(d，J-6.83Hz，IH)，3.74(m，4H),3.10(s，4H)ESI/MSm/z400.1(M+H)+。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(4-(4-甲基哌溱-l-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物l-4)将在1-丁醇中的2-氯-N-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4-胺(7)(100mg，0.387nrniol)，4-(4-甲基哌溱-1-基)苯胺(17)(74.1mg，0.387画l，购自ApolloScientific,UK)，DIPEA(2mL，11.48mmol)和二甲氨基吡啶(DMAP)回流过夜。TLC(6。/。Me0H/DCM)显示反应完成。浓缩并且进行CombiFlash纯化(4g，DCM-100%EtOAc)而得到7mg化合物l-4，其在磷钼酸染色下为紫色。产率48%。^-NMR(400MHz，DMS0-d》9.45(s,1H),8.98(s，1H)，8.08(m，1H)，7.98(d，J-4.5Hz，1H)，7.45(m,3H)，7.30(t，J=9.2Hz,1H),6.86(d,J-8.9Hz，2H),6.10(d，J-5.8Hz,1H)，3.04(m，4H)，2.43(m，4H),2.20(s，3H)。ESI/MSm/z413.3(100%)，415.2(33%)。N4-(3-氯-4-氟笨基)-N2-(4-曱氧基-3-(3-(4-曱基哌嗪-l-基)丙氧基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物1-5)H3caH3CO、TEA2-丙醇1-5向2-曱氧基-5-硝基苯酚(18)(2g，11.82mmol)，3-氯丙基溴(2.234g，23.65mmol)在二甲基甲酰胺(DMF)(20mL)中的混合物中加入K2C03(3.27g)并且将所得反应混合物加热至80。C下3h。TLC(EtOAc)显示反应完成。然后使该反应混合物分配在水(IOOmL)与乙酸乙酯(150mL)之间。用饱和NaHC03和水洗涤有机层，然后用MgS04干燥并且过滤。浓缩该溶液而得到19,为淡黄色固体(3.9g)。向19(1.5g，6.11mmol)中加入在20mL1，4-二噁烷中的N-曱基哌嗪和碘化钠(l.373g，9.16mmol)并且将所得反应混合物加热至IO(TC下30h。浓缩橙色混合物以便除去1，4-二噁烷，且然后用50mL乙酸乙酯稀释。在搅拌0.5h后，将其过滤以便除去盐。用NaOH溶液(20mL)和水(3x20mL)洗涤有机层。用MgS04千燥并且浓缩至得到化合物20，为橙色油状物(l.00g)。力-NMR(40隨z，CDC13)7.90(dd，Jl=2.3Hz，J2-8.9Hz，1H)，7.75(d，J=2.3Hz，1H)，6.88(d，J=8.8Hz，1H)，4.14(m，2H)，3.94(s,3H)，2.58(m，IOH)，2.43(br-s，3H),2.03(m，2H)。在Parr摇瓶中有在异丙醇中的10%Pd/C存在下使化合物20进行氢化5h。TLC(15。/aMeOH/DCM)显示反应完成。通过C盐过滤并且浓缩得到化合物21(1g)，为棕色油状物。^-NMR(400MHz，CDCU6.68(d，J-8.2Hz,1H)，6.30(d，J=2.4Hz,1H)，6.20(dd，J1-2.4Hz，J2=8.2Hz，1H),3.99(t,J-6.5Hz，2H),3.75(s，3H)，3.46(s，3H),2.55(br-m，IOH)，2.32(s，3H)，2.01(m，2H)。将包含在TFA(lmL)和2-丙醇(10mL)中的21(100mg，0.387mmol)和7(108mg，0.387mmol)的反应混合物回流过夜。TLC(6%DCM/MeOH)显示7完全消耗。浓缩该反应混合物并且再溶于MeOH。通过添加NaOH使TFA猝灭。浓缩并且进行CombiFlash纯化(4g，DCM-15。/。MeOH/DCM)得到219mg化合物1-5，为棕色泡沫。力-NMR(40幅Hz，DMSO-d6)9.49(s，1H)，9.Ol(s,1H)，8.04(m，1H)，8.OO(d，卜5.8Hz，1H)，7.4(br-s，1H),7.29(t，J=9.3Hz，1H)，7.20(m，2H)，6.85(d,J=8.8Hz,1H)，6.13(d，J=5.8Hz，1H)，3.86(t，J-6.15Hz，2H)，3.88(s，3H)，2.48(s，8H)，2.35(s，3H),1.83(m，2H)。ESI/MSin/z，501.2(100%),503.3(33%)。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(6-(三氟曱基)吡啶-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物1-6)向7(100mg，0.387mmol)和5-氨基-2-(三氟曱基)吡啶(22)(62.8fflg，0.387mmol)在2-丙醇(IOmL)中的混合物中加入TEA并且将该反应混合物回流24h。TLC(EtOAc,Rf=0.3)显示反应完成。浓缩该混合物以便除去异丙醇并且再溶于甲醇。加入NaOH以中和TFA。进一步浓缩并且进行CombiFlash纯化(4g,己烷/EtOAc150/0-90%,50min)而得到106mg化合物1-6，为固体。力-NMR(400MHz，CDCh)8.69(s,1H)，8.42(d，J-8.5Hz，1H)，8.11(d，J=5.4Hz，1H)，7.59(m，1H)，7.53(m，1H),7.15(m，3H)，6.49(s，1H)，6.19(d，J=5.5Hz，1H)。ESI/MSm/z，384.0(100%),386.0(33%)。2-(3-(2-(4-(4-曱基哌唤-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)笨基)将化合物12(100mg，0.409mmol)和17(78mg，0.409mmol,ApolloScientific,UK)、溶于10mL2-丙醇并且加入TEA(1mL)。将所得混合物回流过夜。TLC(20%MeOH/DCM，Rf=0.2)显示反应完成。加入NaOH并且形成一些白色沉淀。浓缩并且进行CombiFlash纯化(0-25。/oMeOH/DCM)得到化合物l-7(186mg),为白色固体。^NMR显示乙腈(化合物1-7)39内部可能存在某些苯胺。产率114%。'H-NMR(400MHz，CD30D)7.88(d，J-6.lHz，1H)，7.79(s，1H)，7.44(m,3H)，7.27(t，J-7.86Hz,1H)，7.OO(m，3H)，6.15(d，J=6.lHz，1H)，3.75(s，2H)，3.27(m，4H)，2.96(ra,4H)，2.59(s，3H)。ESI/MSm/z,400.1(100%)。2-(3-(2-(4-甲氧基-3-(3-(4-曱基哌嗪-l-基)丙氧基)苯基氨基)嗜啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-8)向12(100mg，0.409mmol)和21(114mg，0.409mmol)在2-丙醇(IOmL)中的混合物中加入TFA并且将其回流过夜。TLC(20%MeOH/DCM,Rf=0.1)显示反应完成。添加NaOH产生白色沉淀。浓缩并且进行CombiFlash纯化(0-25%MeOH:DCM)得到化合物1-8(236mg),为固体泡沫。力-腿(400MHz,CD30D):7.90(d,J-5.8Hz，1H),7.78(s,1H)，7.45(d,J=8.2Hz,1H)，7.26(m,2H),6.98(m，3H),6.16(d，J=6.2Hz，1H)，3.91(t，J-5.8Hz，2H)，3.84(s，3H)，3.74(s，2H)，3.34(s，2H),2.71(br-m，2H)，2.56(s，3H)，1.96(m，2H)。ESI/MSm/z，488.2(100%)。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(4-(三氟曱基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物l-9)向7(60mg，0.232mmol)和14(37.5mg,0.232mmol)在2-丙40醇(7mL)中的混合物中加入TFA并且将其回流过夜。TLC(6%MeOH/DCM，Rf-O.15)显示反应完成。添加NaOH以中和TFA。浓缩粗产物并且进行CombiFlash纯化(4g，0-10%MeOH/DCM，50min)得到化合物1-9(70mg)，为白色固体。'H丽R(400MHz，CD30D)7.99(d，J=5.8Hz，1H)，7.95(dd，J产2.7Hz,J2=6.8Hz，1H)，7.79(d，J=8.5Hz，2H)，7.53(d，J=8.5Hz,2H)，7.44(m,1H),7.17(t,J=8.9Hz,1H),6.23(d，J=5.8Hz，1H)。ESI/MSm/z,383.1(100%)，385.1(33%)。2-氟-5-(2-(4-(4-曱基哌唤-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苄腈(化合物1-10)将9(60mg,0.241mmol)和17(46.2mg，0.241mmol),ApolloScientific,UK)的混合物溶于10mL2-丙醇并且加入催化剂TFA。将所得混合物回流过夜。TLC(20%MeOH/DCM，Rf-0.l)显示反应完成。添加NaOH以中和TFA。浓缩并且进行CombiFlash纯化(4g正相RediSep快速柱，运行时间，40min，流量26mL/min，0-20%MeOH/DCM)得到化合物l-10(82mg，84%)，为白色固体。^画R(400MHz,CD卿8.35(m,1H)，7.92(d，J=5.8Hz，1H)，7.70(m，1H)，7.40(d，J-8.9Hz，2H)，7.23(t，J-9.8Hz，1H)，7.01(d，J=9.2Hz，2H)，6.12(d，J=5.8Hz，1H)，3.23(m，4H)，2.70(br-s,4H)，2.40(s,3H)。ESI/MSm/z404.1(M+H)。2-(3-(2-(3-氟-4-(4-曱基哌嗪-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-11)41将12(60mg，0.245mmol)和3-氟-4-(4-甲基哌嗓-l-基)苯胺(23)(51.3mg，0.245mmol，购自ApolloScientific,UK)在2-丙醇(7mL)中的混合物和催化剂TFA回流过夜。TLC(20%MeOH/DCM，Rf=0.2)显示反应完成。添加NaOH产生白色沉淀。浓缩并且进行CombiFlash纯化(4g,0-20。/。Me0H/DCM)得到化合物1-11(115mg)，为白色固体。'HNMR(400MHz，CD3OD)7.93(d，J=6.1Hz，1H)，7.73(s，1H),7.61(dd,J产2.4Hz，J产4.7Hz，1H)，7.53(d，J=7.8Hz，1H)，7.32(t，J-8.2Hz,1H)，7.20(d，J=8.9Hz，1H)，7.OO(m,2H)，6.20(d,J-5.8Hz，1H),3.84(s，2H)，3.16(br-s，4H)，2.92(br-s，4H)，2.56(s，3H)。ESI/MSm/z418.1(M+H)。2-(3-(2-(6-(4-曱基哌唤-l-基)吡啶-3-基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-12)将12(60mg，0.245画l)和6-(4-甲基哌溱-l-基)吡啶-3-胺(24)(47.1mg，0.245,1，购自BionetBuildingblocksUK)在2-丙醇(7mL)中的混合物和催化剂TFA回流24h。TLCU0%MeOH/DCM，Rf-0.l)显示反应完成。添加NaOH以中和TFA。浓缩并且进行ComMFlash纯化(4g,0-20%Me0H/DCM)得到化合物1-12(97mg)，TEA2-丙醇TEA2-丙醇CN为固体。产率99%。H醒R(400MHz，CD3OD)8.35(d，J=2.7Hz,1H)，7.88(d，J=6.2Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.76(dd，J产2.7Hz，J2-9.2Hz，1H),7.37(d，J-8.5Hz，1H)，7.27(t,J=7.9Hz,1H),7.01(d,J-7.5HZ，1H),6.88(d,J-9.2Hz,1H)，6.16(d，J=5.8Hz，1H),3.81(s，2H)，3.6Ubr-s，410，2.87(br-s，4H)，2.56(s，3H)。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(6-(4-甲基哌嗪-l-基)吡啶-3-基)嘧啶-2，4-二胺(化合物1-13)TEA242-丙醇将7(60mg，0.232mmol)和24(44.7mg，0.232画l)在2-丙醇(7mL)中的混合物和催化剂TFA回流24h。TLC(20%MeOH/DCM)显示反应完成。添加NaOH，浓缩该混合物并且进行CombiFlash纯化(4g，100n/。DCM-25。/。MeOH/DCM)而得到化合物1-13(86.7mg),为白色固体。90%产率。屮NMR(400MHz，CD30D)8.23(d，J=2.4Hz，1H)，7.92(m，1H)，7,90(d，J-5.8Hz，1H)，7.82(dd，J1-9.2Hz,J2=2.7Hz，1H)，7.35(m，1H)，7.12(t，J=8.9Hz，1H)，6.88(d，J=9.2Hz,1H),3.61(br-s，4H)，2.90(m，4H)，2.59(s，3H)ESI/MSm/z414.1(M+H)。N4-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(3-氟-4-(4-曱基哌嗪-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(化合物1-14)将7(60mg，0.232mmol)和23(48.7mg，0.232画1)在2-丙醇(7mL)中的混合物和催化剂TFA回流24h。此后TLC(20%MeOH/DCM,Rf-O.1)显示反应完成。在室温下3天后，形成一些白色固体(103mg)。过滤且NMR显示产物为TFA盐。加入NaOH并且浓缩该混合物且通过CombiFlashcompanion纯化(4g，DCM-25%MeOH)而得到化合物1-14(88.8mg)，为白色固体。产率为89%。^NMR(400MHz，CD30D)7.90(m，2H)，7.47(m，2H)，7，27(dd，Jl=9.6Hz，J2=2.4Hz，1H)，7.14(t，J=6.4Hz，1H)，6.99(t，J-9.6Hz，1H)，6.15(d，J=5.8Hz,1H),3.10(br-s，4H),2.75(br-s,4H)，2.43(s，3H)。ESI/MSm/z431.0(M+H)。(4-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(4-甲基哌嗪-l-基)甲酮(化合物1-15)^1-152-丙醇在l(TC下和10min内用l-甲基哌溱(26)处理4-硝基苯甲酰氯(25)(lg，5.39fflol)在CH3CN(50mL)中的溶液。将该反应混合物再搅拌lh，随后添加TEA(1.49mL，2eq)并且再搅拌半小时。用冰冷水(150mL)稀释该反应混合物并且用EtOAc(4x150迈L)萃取。用MgS04干燥有机层并且浓缩至得到1.lg(82。/。产率)(4-甲基哌嗪-1-基)(4-硝基苯基)甲酮27，为黄色固体。TLC:10%MeOH/DCM，Rf=0.6。屮MR(400MHz，CDC13)8.28(d，J-8.5Hz，2H)，7.56(d，J=8.5Hz，2H),3.88(br-s，4H),3.46(br-s,4H),2.40(s,3H)ESI/MSm/z250.0(M+H)在H2(60psi)压力下将包含在20mL乙醇中的(4-甲基哌溱-l-44基)(4-硝基苯基)曱酮(27)(200mg，0.802mmol)和10%Pd/C(60mg)混合物振摇4h。反应完成并且过滤后，浓缩得到28(83.8mg,产率48。/。)，为淡黄色油状物。'H-NMR(400MHz，CD3OD)7.19(dd，J1-2.OHz,J2-6.5Hz，2H)，6.68(dd,J1-2.7Hz，J2-6.5Hz,2H),3.64(br-s，4H)，2.44(br-s，4H)，2.31(s，3H)ESI/MSm/z220.0(M+H)。将7(50mg，0.194ramol)和28(33mg，0.150mmol)在2-丙醇(5mL)中的混合物和催化剂TFA在150。C下微波处理1h。TLC显示反应完成。HPLC显示可能的主要新的斑点。CombiFlash纯化(4g，DCM-15。/。MeOH/DCM)得到32mg化合物1-15，为半固体？H-NMR(400MHz，CD3OD)7.98(d,J-6.15Hz，1H)，7.94(m,1H)，7.72(d,J-8.54,2H)，7.36(dd，J1-2.0Hz，J2-6.8Hz，2H)，7.19(dd，Jl=2.OHz，J2-8.8Hz，2H)，6.21(d，J-6.lHz，1H)，3.65(br-s,4H)，2.48(br-s，4H)，2.34(s,3H)ESI/MSm/z441.2(M+H)。2-(3-(2-(4-(4-环己基哌嗪-l-羰基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-16)将12(50mg,0.204mmol)，(4-氨基苯基)(4-环己基哌溱甲酮(29)(58.7mg，0.204mmol)在2-丙醇(5mL)和催化剂TFA中的混合物回流24h。加入NaOH并且TLC(10%MeOH/DCM)显示存在一些原料物质和额外的新的斑点。浓缩并且进行CombiFlash纯化(4g，DCM-15。/oMeOH/DCM)得到化合物1-16(95mg)，为棕色固体。卞MR(400MHz，CD3OD)7.99(d，J=5.8Hz,1H)，7.73(m，3H)，7.55(d，J-8.2Hz,1H)，7.35(m，3H)，7.05(d，J=7.9Hz，1H)，6.24(d，J-6.2Hz，1H)，3.80(s，2H)，3.699br-s,4H)，2.75(br-s，4H)，2.48(br-s,1H)，451.95(br-s，2H)，1.83(br-s，2H)，1.65(d，J=13.0Hz,1H),1.29(br-s,4H)ESI/MSm/z496.l(M屮H)。2-(3-(2-(4-(4-甲基哌嗪-l-羰基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-17)将12(50mg，0.204mfflol)和28(44.8mg，0.204隱ol)在2-丙醇(5mL)和催化剂TFA中的混合物回流24h。加入NaOH并且TLC(10。/oMeOH/DCM)显示存在一些原料物质和额外的新的斑点。浓缩并且进行CombiFlash纯化(4g,DCM-15%MeOH/DCM)得到化合物1-17(52mg)，为黄色固体。力纖(400MHz,DMS0-d6)9.53(s,1H),9.40(s,IH)，8.06(d，J-5.8Hz,1H)，7.78(m，3H)，7.58(s,1H)，7.31(m，3H)，6.98(d，J=7.lHz，1H)，6.27(d，J-5.5Hz，1H)，4.02(s，2H)，3.48(br-m，4H)，2.42(br-m，4H)，2.28(br-s，3H)ESI/MSm/z428.2(M+H)。2-(3-(2-(4-(4-甲基哌嗪-l-基)-3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈(化合物1-18)11-18将12(50mg,0.204咖ol)和4-(4-甲基哌溱-l-基)-3-(三氟甲基)苯胺(29)(46.6mg，0.409mmol)在2-丙醇(5mL)和催化剂TFA中的混合物在130。C下接触微波条件2.5h。TLC证实存在新的斑点。通过添加NaOH使该反应混合物猝灭，浓缩并且通过CombiFlash纯化进行纯化(4gC-18，5%-100°/WK/CH3CN)，且通过HPLC检查级分。合并纯的级分并且浓缩至得到4.5mg化合物l-18，为淡黄色固体。^-NMR(300MHz,CDC13-CD30D)7.62(d,J=6.OHz,1H)，7.50(s，1H)，7.46(d，J-9Hz,1H)，7.24(s，2H)，7.02(m，2H),6.70(d，J=7.2Hz,1H)，5.89(d,J=5.8Hz，1H)，3.45(s，1H),3.35(s,1H),3.03(s，2H),2.61(s，4H)，2.29(s，4H),2.05(s,3H)。ESI/MSm/z468.36(M+H)。实施例4有代表性的化合物的盐形式按照下列操作制备化合物1-11和1-18的有代表性的盐形式(即HC1，硫酸盐，曱磺酸盐和苯磺酸盐形式)并且列在下表2中。2-(3-(2-(3-氟-4-(4-曱基哌嗪-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈二盐酸盐(化合物1-112HC1)将化合物1-11(2.06g)悬浮于125mL2-丙醇中。加入浓HC1(2.47mL,6eq)。加热该混合物，直到获得澄清溶液。在室温下冷却该溶液，此后将其放入-20。C冰箱。3天后，在氩气环境中过滤并且用乙醚洗涤而得到化合物1-11的双-HCl盐，为1.823g黄色粉末，产率70%。2-(3-(2-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈硫酸盐(化合物1-11硫酸盐)将350mg化合物1-11溶于35mL丙酮并且加入0,122mL(2.5eq)H2S04。沉淀快速形成。将该混合物储存在室温下过夜。过滤得到394mg黄色吸湿性粉末。将该固体悬浮于乙醇中1小时并且过滤得到350mg白色粉末，产率68%(不吸湿)。力-NMR300MHz，CD力D)7.94(d，J=7.33Hz，1H),7.76(s，1H)，7.65(d，J=8.3Hz，1H)，7.49(m，2H)，7.29(m，3H)，6.57(d，J=7.33Hz，1H)，3.96(s，2H)，3.74(t，J-12.45Hz，4H)，3.42(m，4H)，3.12(s，3H)，"F-NMR(300MHz，CD3OD)-186.99Hz。47元素分析理论值C，45.02;H,4.60;N，15.98;S,10.45，测定值C,45.68;H，4.30;N,15.96;S,9.39。2-(3-(2-(3-氟-4-(4-曱基哌嗪-l-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈曱磺酸盐(化合物1-11曱磺酸盐)向化合物1-11(400mg)在40mLIPA中的温热溶液中加入甲磺酸(0.186niL,3eq)。澄清溶液逐步变混浊并且将该混合物储存在-20。C下过夜。在N2中过滤残余物并且在真空中干燥而得到400mg白色粉末，产率68%。4-NMR(300MHz，CD3OD)7.83(d，J=7.08Hz,1H)，7.67(s，1H)，7.55(d，J=8.55Hz，1H)，7.42(m，2H),7.19(m，3H)，6.43(d，J=7.33Hz,1H),3.85(s，2H)，3.62(d，J=11.23Hz，4H)，3.37(m,4H)，3.歸,J-ll.OHz，2H),3.04(s,3H)，2.71(s,6H)。元素分析理论值C49.25，H5.29,N16.08,S10.52，测定值C48.75，H5.50，N15.13，S10.51。2-(3-(2-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-l-基)苯基氡基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈苯磺酸盐(化合物1-11苯磺酸盐)向化合物1-11(400mg)在30mL乙醇中的溶液中加入苯磺酸(455mg，3eq)。澄清溶液形成，此后快速出现白色沉淀。在&中过滤残余物过夜，在真空中干燥而得到520mg白色固体，产率74%。^-NMR(300MHz,CD30D-CDC13)7.93(m，3H),7.82(d，J=7.08Hz,1H)，7.66(s，1H)，7.49M,5H)，7.27(d,J-7.33Hz，1H),7'21(d，J-9.04Hz，1H),7，04(t，J=7.3Hz，1H)，6.49(d,J=7.32Hz,1H)，3.85(s,2H)，3.67(d，J=10.2Hz，2H),3.63(d，J=ll.7Hz，2H),3.39(s，4H)，3.03(s，3H)。元素分析理论值C57.28，H4.94,N13.36，S8.74，测定值C57.06，H4.86，N13.20，S8.66。2-(3-(2-(4-(4-甲基哌嗪-l-基)-3-(三氟曱基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈盐酸盐(化合物1-18HC1)化合物1-18(500mg)难以完全溶于40mLIPA。然而，在添加HC1(0.446mL，5eq)并且加热后，获得澄清黄色溶液。将该溶液冷却至室温并且放入-20。C水箱内2天。过滤并且在真空至干燥后得到570rag粉末,产率84%。力-賺(300MHz,CD卿7.87(d,J-7.32Hz，1H)，7.81(s,2H)，7.60(m，3H),7.36(m，1H)，7.22(d,J-7.82Hz，1H)，6.48(d，J-7.33Hz，1H),3.89(m，3H)，3.60(d，J=7.57Hz，2H)，3.25(m，4H)，2,99(s，3H)，1.14(d,J=6.35Hz，6H，IPA)。元素分析理论值C，53.17;H，6.06;N，15.50;Ci，11.21，测定值C，53.27;H,6.37;N，14.84;Cl，10.81。2-(3-(2-(4-(4-甲基哌嗪-l-基)-3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈疏酸盐(化合物1-18硫酸盐)向化合物l-18(400mL)在50mLIPA中的溶液中加入H2S04(0.137mL，3eq)。沉淀快速形成。在&中经周末过滤得到407mg黄色粉末，产率68%。!H-醒(300MHz,CD3OD)7.89(d,J=7.32Hz，1H),7.78(m,2H),7.60(m，3H)，7.36(t,J-7.32Hz，1H)，7.22(d，J-7.08Hz,1H)，6.48(d，J=7.33Hz，1H)，3.87(s,2H),3.60(d,J=7.1Hz，2H),3.27(m，4H)，3，21(s,3H)。元素分析理论值C，44.15;H，4.65;N，14.13;S,9.24，测定值C，44.20;H,4.65;N，13.98;S，9.16。2-(3-(2-(4-(4-曱基哌溱-l-基)-3-(三氟曱基)苯基氨基)嗜咬-4-基氨基)苯基)乙腈曱磺酸盐(化合物1-18甲磺酸盐)向化合物l-18H00mg)在20mL丙酮中的溶液(几乎澄清)中加入甲磺酸(0.139mL,2.5eq)。该溶液变混浊。将该混合物经周末储存在-20。C下。倾倒出丙酮。洗涤固体并且在真空中干燥而得到429mg黄色粉末，产率74%。lH-腿(300MHz，CD力D)7.88(d，J=7.33Hz，1H)，7.78(m，2H)，7.59(m，3H),7.35(t，J=7.32Hz,1H)，7.22(d，J-7.08Hz,1H)，6.48(d,J=7.33Hz，1H)，3.86(s，2H)，3.60(d，J=7.57Hz，2H)，3.27(m，4H)，2.99(s，3H),2.72(s,6H)。元素分析理论值C，46.08;H,5.06;N，14.47;S，9.46，测定值C,46.08;H，4.93;N,14.16;S，10.25。2-(3-(2-(4-(4-曱基哌嗪-l-基)-3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)乙腈苯磺酸盐(化合物1-18苯磺酸盐)向化合物1-18(400mg)在IPA(30mL)中的热悬浮液中加入苯磺酸(406mg，3eq)。将其在室温下冷却并且储存在-20。C下过夜。在N2中过滤得到516mg黄色粉末，产率72%。^-NMR(300MHz，CD30D)7.81(m，7H)，7.58(m,3H)，7.43(m,7H),7.19(d，J=7.57Hz，1H)，6.47(d，J=7.33Hz，1H)，3.84(s，2H)，3.58(d，2H)，3.23(m，5H)，2.97(s，3H),19F-NMR(300Mz，CD30D)-126.58。元素分析理论值C，51.60;H，5.05;N，11.70;S，7.65，测定值C，51.57;H,4.96;N，10.98;S，7.61。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>实施例5有代表性的化合物的活性A.JAK2激酶抑制试验可以测定JAK2激酶活性的一种例证性方式通过在体外JAK2激酶反应后保留在溶液中的ATP量进行定量，诸如激酶-Glo测定试剂盒(Promega，Inc.，Madison,WI)来进行。在激酶反应后保留在溶液中的ATP的量用作催化荧光素得到氧荧光素+1个光子的荧光素酶的底物。因此，LuminoskanAscentInstrument(ThermoElectronCorp.，Milford，MA)读取的发光信号与激酶反应后存在的ATP量相关，并且与激酶活性的量成反比。本试验可有效测定激酶抑制射针对JAK2激酶的ICs。值。将这些试验设定在白色平底96孔平板中的50ul体积中一式两份进行。将抑制剂加入到IX激酶緩沖液，6uMATP，62.5uMJAK2-特异性底物，30ng活性JAK2酶和水的从微摩尔到纳摩尔浓度范围顺序稀释的溶液中。将该溶液在301C下以360rpm孵育2小时。52孵育后，向各孔中加入50ul激酶-Glo试剂，包括所有阳性对照和阴性对照孔并且在室温下孵育15分钟。然后通过LuminoskanAscent仪器读取平板并且使用AscentSoftware2.6版展示结果。然后对每种测试的抑制剂计算ICs。值。还通过放射性测定法；即激酶Profiler和IC50Profiler测定服务系统(Millipore-Upstate，Dundee,UK)测试化合物。简言之，在有放射性标记的ATP存在下对重组JAK2酶测试单一浓度(用于单点筛选)或许多浓度(用于ICs。测定)的化合物。JAK2V617F突变体同种型近期已经在集中于其在致瘤性转化方面取得了进展。因此，还使用SelectScreen测定服务系统(InvitrogenCorporation,Carlsbad,CA)，包括JAK2的野生型和V617F突变体同种型测试了化合物。这些酶包括蛋白质的JH1和JH2同源区并且仅在617位氨基酸上不同。B.基于细胞的JAK2激酶抑制剂试验将基于细胞培养物的试验用于评价本发明化合物抑制一种或多种细胞活性，诸如癌细胞生长和/或存活的能力。大量癌细胞系可以获自美国典型培养物保藏中心(ATCC)和其它来源。简言之，将细胞接种入96-孔組织培养物处理的不透明白色平板(ThermoElectron,Vantaa，Finland),根据细胞增殖速度的不同，在lOOul合适的生长培养基中600—14000个细胞/孔(由ATCC测定)。然后使细胞接触适当浓度的药物并且使其生长存在96小时。此后，向各孔中加入100ulCell-Titer-Glo试剂(Promega，Inc.,Madison,WI)。然后在室温下将平板振摇2分钟以使细胞裂解并且在室温下孵育10分钟以使发光信号稳定。与来自Promega的激酶-Glo试验试剂类似，该试剂包含荧光素酶及其底物荧光素。被细胞裂解物中ATP活化的荧光素酶将荧光素催化转化成氧荧光素，即发光的反应。产生的光的量与细胞裂解物中ATP的量成正比，ATP的量自身与细胞数量成正比并且得到细胞增殖指数。为了检测细胞培养物中JAK2酶的特异性抑制，还可以进行蛋白53质印迹试验。为了这一目的，用对分离和保存蛋白质具有特异性的緩冲液(l。/。NonidetP-40，120mMNaCl,3隨TrispH7.4，1:100蛋白酶抑制剂混合物in[Calbiochem/EMDBiosciences],1:100磷酸酶抑制剂混合物l[Sigma-Aldrich，SaintLouis,MO]，1:100磷酸酶抑制剂混合物2[Sigma-Aldrich，SaintLouis,MO])裂解用可能的JAK2抑制剂处理的细胞。然后使用BCA蛋白质测定试剂盒(Pierce)对这些裂解物中的蛋白质浓度进行定量。使已知量的蛋白质，例如50ug上10。/。SDS-聚丙烯酰胺凝胶并且进行还原，变性SDS-PAGE。将电泳的蛋白转至硝化纤维膜，然后用针对STAT5，pSTAT5(Tyr694),STAT3和pSTAT3(Tyr705)的抗体探测。因为分别在694位酪氨酸和705位酪氨酸上的STAT5和STAT3为JAK2的底物，所以测定在处理细胞中这些位点上的磷酸化的量可以提供评价JAK2抑制剂功效的方式。C.JAK2激酶特异性活性数据在300nM-10nM稀释范围筛选作为JAK2抑制剂的化合物序号1-4,1-7，1-11和1-17，其中使用Cell-Titer-Glo试验测定存活百分比。这些化合物各自产生相对于来自计算ic5。值的抑制剂浓度的。/。存活值。这些化合物在不同癌细胞系中产生的ICs。值低于10nM。对化合物序号卜4,1-7,1-11和1-17测定了针对JAK2激酶的ICs。值(使用Promega激酶-Glo试验)。经测定这些化合物各自具有低于1uM的ICs。值。IC5eProfileTM数据显示化合物序号1-4，1-7，1-11和1-17的ICs。值低于1uM，而来自使用针对野生型(JAK2WT)和突变体JAK2激酶(JAK2V617F)的InvitrogenSelectScreenprofiling筛选的化合物的数据显示这4种化合物的ICs。值低于1jjM。实施例6有代表性的化合物调节STAT3和STAT5A.化合物1-4抑制STAT3和STAT5磷酸化在本实施例中，证实化合物1-4减少AGS胃癌细胞系中STAT3和STAT5的"K2-依赖性磷酸化。简言之，将AGS细胞在25cm2组织培养烧瓶中铺板并且在有不同浓度化合物1-4存在下孵育24小时。孵育后，裂解细胞并且分离总蛋白且定量。对50jig总蛋白进行电泳并且转至硝化纤维膜，此时使用针对STAT3-磷酸-Y705和STAT5-磷酸-Y694的抗体进行蛋白质印迹分析。还与STAT3和STAT5总进行比较。进行光密度测定分析以便对这些处理的细胞中STAT3和STAT5磷酸化的量进行定量。将磷酸-STAT3和磷酸-STAT5与总STAT3和STAT5进行比较并且测定STAT磷酸化相对于未处理的对照组的比例。用1号化合物处理的细胞在低微摩尔浓度(5-10uM)下展示出下降的STAT3和STAT5磷酸化水平。B.化合物1-4减少STAT3活化当STAT3被JAK2磷酸化时，它形成同型二聚体并且易位至核以便影响涉及细胞增殖的大量靶基因的转录。在96孔平板上孵育AGS胃癌细胞并且在有5jaM化合物l-4存在下孵育1，5或24小时。孵育后，使用STAT3HitKU(Thermo—Fisher)染色细胞并且在ArrayScanVTi高含量筛选仪(Thermo-Fisher)上使用MolecularTranslocationBioApplication检测。核被假拟染色成蓝色(Hoechst)且STAT3被假拟染色成绿色(FITC)。在未处理的细胞中，在核中发现了大量的STAT3，表明STAT3被磷酸化，具有活性并且诱导转录。然而，在使用化合物l-4处理的细胞中，STAT3染色限于核外部，这表明它未磷酸化并且无活性，即预期的JAK2抑制剂的作用。在与未处理的样品这核STAT3水平比较时，在用化合物1-4处理后24h，核STAT3减少了50%以上。C,化合物l-4和l-7减少表达Jak2(V617F)的细胞中STAT5磷酸化在本实施例中，证实化合物1-4，1-7，1-11和1-17减少表达JAK2的V^F突变体的细胞中STAT5的JAK2-依赖性磷酸化。简言之，将HEL细胞在25cm2组织培养瓶中铺板并且在有不同浓度化合物序号1或2存在下孵育24小时。孵育后，裂解细胞并且分离和定量总蛋白。电泳50jJg总蛋白并且转至硝化纤维膜上，此时使用针对STAT5-磷酸-Y694的抗体进行蛋白质印迹分析。与总STAT5进行比较。进行光密度测定分析以便定量这些测试细胞中STAT5磷酸化的量。从本试验中测定ECs。值就化合物1-4而言为299nM,就化合物1-7而言为4nM,就化合物1-11而言为65.8nM且就化合物1-17而言为266nM。将本说明书中涉及和/或申请数据单上所列的所有上述美国专利，美国专利申请公开文献，美国专利申请，外国专利，外国专利申请和非专利公开文地引入本文作为参考。从上述中可以理解，尽管描述本发明的具体实施方案是为了例证目的，但是可以在不脱离本发明精神和范围的情况下进行各种变型。因此，本发明不受限制，而由待批权利要求限定。权利要求1.具有如下结构(I)的化合物包括其立体异构体和药学上可接受的盐，其中Z为CH或N；W1和W2独立地为直接键，-C(＝O)-或-O(CH2)n-；X1和X2独立地为-H，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH3，-CH3，-OH，-NO2，-NH2，卤素或其中Q为O或N且R不存在或R为-C1-6烷基，条件是X1或X2之一为Y1和Y2独立地为-H，-CN，卤素或被-CN取代的C1-4烷基，条件是Y1和Y2不均为-H；且n为1，2或3。2.权利要求1所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中z为CH。3.权利要求2所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中f为卣素。4.权利要求3所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中YZ为-CN，面素或被-CN取代的Cw烷基。5.权利要求3所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中Y工为-CN，囟素或被-CN取代的Cw烷基。6.权利要求2所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中f为-H。7.权利要求6所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中^为-CN，卣素或被-CN取代的Cw烷基。8.权利要求6所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中yz为-CN，卤素或被-CN取代的Cw烷基。9.权利要求2所述的化合物，选自或其立体异构体或学上可接受的盐。10.权利要求2所述的化合物，选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>或其立体异构体或药学上可接受的盐。11.权利要求1所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中Z为N。12.权利要求11所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中X2为-H。13.权利要求12所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中y2为-CN，卤素或被-CN取代的Cw烷基。14.权利要求12所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中r为-CN，面素或被-CN取代的d"烷基。15.权利要求11所述的化合物，选自或其立体异构体或药学上可接受的盐。16.组合物，包含权利要求1所述的化合物与药学上可接受的赋形剂。17.治疗JAK2蛋白激酶-介导的疾病的方法，所述方法包括对有此需要的对象给予治疗有效量的权利要求16所述的组合物。18.权利要求17所述的方法，其中JAK2蛋白激酶-介导的疾病为癌症。19.权利要求17所述的方法，其中所述的癌症为结肠癌，前列腺癌，睾丸癌，肺癌，子宫癌，卵巢癌，胃癌，乳腺癌，胰腺癌，白血病或淋巴瘤。全文摘要披露了具有作为JAK2激酶抑制剂活性的嘧啶-2，4-二胺类衍生物和组合物以及使用它们治疗癌症和其它JAK2激酶-相关疾患的方法。文档编号C07D239/48GK101657431SQ200880010977公开日2010年2月24日申请日期2008年2月29日优先权日2007年3月1日发明者D·J·拜尔斯,H·范卡亚拉帕蒂,刘晓辉申请人:休普基因公司