用于制造全硅烷化肽的方法

专利名称：用于制造全硅烷化肽的方法
用于制造全硅烷化肽的方法本专利申请书要求对美国临时专利申请61/014，923的权益，其全部内容通过引 用结合到本专利申请中。本发明涉及一种用于利用全硅烷化技术来制造肽或肽类似物的方法。肽或肽类似物是有用的，例如作为药物。这种肽的一个例子是西曲瑞克，它可以用 于治疗女性的子宫内膜组织异位和子宫平滑肌瘤、以及男性的良性前列腺肥大。西曲瑞克 是一种促性腺激素释放激素的拮抗剂(GnRH拮抗剂)，它具有以下序列。Ac-D-Nal-D-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2(SEQID NO 1)在 EP-A-184243 中、在 Callens, IB C' s 2nd International Conference on Peptide Technologies, Rogozhin et al. Isvestija Akademia Nauk SSSR, SeriyaKhimecheskaya, No. 3, p. 657-660 (1978)以及Kricheldorf, Liebigs Ann. Chem. 763, p. 17-38(1972)中对全硅烷化技术进行了讨论。目前已经发现了一种使用全硅烷化技术用于有效并且快速的肽合成的方法，它在 所生产的肽或肽类似物的生产率和纯度方面可以有良好的结果。因此本发明考虑了一种用于制造肽或肽类似物的方法，该方法包括使一种具有式 (I) X-A-C00H的化合物与一种含有4至15个氨基酸的全硅烷化肽或全硅烷化肽类似物进行 反应，其中X是一种氨基保护基团，A是一种氨基酸、肽或肽类似物残基，并且-C00H表示一 种任选活化的羧基基团。已经发现大规模的制备性全硅烷化作用对于高级肽(例如，四肽、五肽、等等)是 可能的，并且后者具有足够的反应性和溶解性以便允许高产量地制造具有高纯度(特别是 光学纯度)的更长链的肽和肽类似物。也已经发现除了三甲基氰硅烷之外的硅烷化试剂是 适于使更长链的肽硅烷化的。在本发明中，“肽”应当被理解为是特别地表示一种化合物，该化合物基本上由通 过酰胺键彼此连接的多个氨基酸构成的。在本发明中，“肽类似物”应当被理解为是特别地表示一种化合物，该化合物基本 上由多个氨基酸构成并且任选地包括可以结合到一种肽中的其他化合物，例如杂取代的羧 酸，例如羟基羧酸或巯基羧酸。肽类似物在肽序列中经常包括至少1个键，该键不同于酰胺 键，例如尿烷，脲，酯或硫代酯键。在本发明中肽或肽类似物可以是直链的，环的或分支的， 并且优选地是直链的。在本发明中作为肽或肽类似物以及残基“A”的组分是有用的氨基酸包括天然的以 及非天然的氨基酸。”这些氨基酸可以选自例如以下的天然氨基酸丙氨酸、缬氨酸、正缬氨 酸、亮氨酸、正亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、异丝氨酸、同型丝氨酸、苏氨酸、别苏氨酸、甲硫氨 酸、乙硫氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、 赖氨酸、精氨酸、组氨酸、鸟氨酸、谷氨酰胺以及瓜氨酸。特别地，含有丝氨酸、异丝氨酸、同型丝氨酸和/或酪氨酸、更特别地是丝氨酸和/ 或酪氨酸的全硅烷化片段是优选的。
还可以使用它们的非天然的对映异构体。这些氨基酸可以选自例如以下的合成起源的氨基酸，它们是(1-萘基)丙氨酸、 (2-萘基)丙氨酸、高苯丙氨酸、(4-氯苯基)丙氨酸、(4-氟苯基)丙氨酸、(3-吡啶基)丙 氨酸、苯基甘氨酸、二氨基庚二酸(2，6_ 二氨基庚烷-1，7-二酸)、2氨基丁酸、2氨基四氢化 萘-2-羧酸、赤型- β _甲基苯丙氨酸、苏型- β _甲基苯丙氨酸、(2-甲氧苯基)苯基、1氨 基-5-羟基茚满-2-羧酸、2-氨基庚烷-1，7-二酸、(2，6_ 二甲基-4-羟苯基)丙氨酸、赤 型-β -甲基酪氨酸、或苏型_ β _甲基酪氨酸。根据本发明的方法的操作步骤总体上是在液相中进行的。在根据本发明的方法中，这种全硅烷化肽优选地含有4、5、6、7或8个氨基酸，更优 选地4、5或6个氨基酸。应当理解，这些数字类似地施用于在一种肽类似物中所连接的单 元的数目。在根据本发明的方法中可以适合以全硅烷化形式进行反应的肽序列的具体例子 包括H-Phe-IIe-Gly-Leu-OH(SEQ ID NO 2)H-Leu-Arg-Pro-(D)AlaNH2(SEQ ID NO 3)H-Ser-Tyr-(D)Cit-Leu-Arg-Pro-(D)AlaNH2(SEQ ID NO 4)H-Ser(tBu)-Thr-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-OH(SEQ ID NO 5)H-Trp-Ser-Tyr-(D)Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHNHC0NH2(SEQ ID NO 6)在根据本发明的方法的步骤(a)中，该全硅烷化肽或肽类似物是通过与一种硅烷 化剂的反应(优选在一种有机溶剂中)通过使一种对应的肽(类似物)硅烷化来获得的。 可以将这种全硅烷化肽或肽类似物分离并纯化，如果希望的话。然而，优选的是原位使用这 种全硅烷化肽或肽类似物，例如通过将一种含有全硅烷化肽或肽类似物的溶液与一种含有 (可任选地活化的)具有式(I)的化合物的溶液相组合。在本发明中，优选的是使用不含有氰基基团的硅烷化剂，例如N-三烷基甲硅烷基 胺类或N-三烷基甲硅烷基酰胺类。此类硅烷化剂的例子包括N，0-双(三甲基硅烷基)乙 酰胺、N，0-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺、六甲基二硅氮烷、N-甲基-N-三甲基硅烷基 乙酰胺(MSA)、N，_甲基-N-三甲基硅烷基三氟乙酰胺、N-(三甲基硅烷基)乙酰胺、N-(三 甲基硅烷基)二乙胺、N-(三甲基硅烷基)二甲胺、1_(三甲基硅烷基)咪唑、3-(三甲基硅 烷基)-2_噁唑烷酮N-甲基-N-三甲基硅烷基乙酰胺(MSA)是优选的。总体上，步骤(a)的反应是在从0°C至100°C，优选地从25°C至50°C的温度下进行 的。在步骤(a)的反应中，总体上相对于有待硅烷化的官能团的摩尔量，使用了 0. 5至 5当量、优选0. 7至1. 5当量的硅烷化剂。使用相对于有待硅烷化的官能团的摩尔量的2至 4当量的硅烷化剂也是可能的。“有待硅烷化的官能团”应当被认为特别地表示以下基团， 这些基团具有一个与该硅烷化剂进行反应的活性氢原子，例如氨基，羟基，巯基或羧基的基 团。应当理解，“全硅烷化”旨在特别地表示一种肽或肽类似物，其中这些具有一种可 以与该硅烷化剂进行反应的活性氢原子的基团被充分地硅烷化以确保得到一种用于偶联 的步骤(b)的均相反应介质。
当在一种溶剂的存在下进行这种硅烷化时，所述溶剂优选地是一种极性有机溶 剂，更优选地是一种极性疏质子有机溶剂。一种酰胺类型的溶剂，例如N，N-二甲基甲酰胺， 或特别是N，N-二甲基乙酰胺(DMAC)是更加特别优选的。在另一个实施方案中，硅烷化是在一种液体硅烷化介质中进行的，该介质基本上 由硅烷化剂以及肽或肽类似物构成。在本发明中，肽或肽类似物残基A应当理解为特别地表示一种肽或肽类似物，该 肽或肽类似物在它的N端或在一种肽类似物中的任选地相应位置上键合到氨基受到保护 的A的羧基基团上，这种氨基受到保护的A包括优选地从2至20个氨基酸，并且更优选地 2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸。在根据本发明的方法中可以适当地反应的具有化学式A的化合物的序列的具体 例子包括Z-Asp (OtBu)-Ala-OHZ-Ser-Tyr-(D)Cit-OHAc- (D) Nal-(D) Cph- (D) Pal-OHBoc-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Asn-Leu-OH(SEQ ID NO 7)Fmoc-His(Trt)-OH根据本发明的方法可以特别地施用于以下反应 术语“氨基保护基团X”是指能够用来替换一个氨基基团的酸性质子以降低其亲核 性的保护基团。典型地，在将有待加入的下一个氨基酸加入到这种增长的肽链之前在脱保 护反应中除去该氨基保护基团X。该氨基保护基团X优选地是具有位阻的。术语“位阻”旨 在特别地表示一种取代基，该取代基包括至少3个碳原子，特别地是至少4个碳原子，包括 至少一个仲、叔或季碳原子。这个位阻基团经常包括最多100个，优选地最多50个碳原子。提及由X在此所代表的氨基保护基团的非限制性例子，可以特别提到的是取代或未取代的酰基类型的基团，例如甲酰基、丙烯酰基(acrylyl) (Acr)、苯甲酰基(Bz)、乙酰基 (Ac)、三氟乙酰基，芳烷基氧基羰基类型的取代或未取代基团，例如苄氧基羰基(Z)、对氯 苄氧基羰基、对溴苄氧基羰基、对硝基苄氧基羰基、对甲氧基苄氧基羰基、二苯甲氧基羰基、 2(对联苯基)异丙基氧基羰基、2(3，5 二甲氧基苯基)异丙基氧基羰基、对苯基偶氮基苄 氧基羰基、三苯基膦酰基乙基氧基羰基或9芴甲氧羰基基团(Fmoc)，烷氧基羰基类型的取 代或未取代的基团，例如叔丁氧羰基(BOC)、叔戊氧基羰基、二异丙基甲氧基羰基、异丙基氧 基羰基、乙氧基羰基、烯丙氧羰基、2甲基磺酰基乙氧基羰基或2，2，2三氯乙氧基羰基，环烷 氧基羰基类型的基团，例如环戊基氧基羰基、环己基氧基羰基、金刚烷基氧基羰基或异冰片 基氧基羰基的基团，以及含有一个杂原子的基团，例如苯磺酰基、对甲苯磺酰基、均三甲苯 磺酰基、甲氧基三甲基苯磺酰基、2-硝基苯磺酰基、2-硝基苯次磺酰基、4-硝基苯磺酰基、 或4-硝基苯次磺酰基的基团在这些基团X中，那些包括一个羰基、次磺酰基或磺酰基基 团的基团是优选的。一种氨基保护基团X是优选地选自烯丙氧羰基基团、叔丁氧基羰基 (BOC)、苄氧基羰基(Z)、9_芴甲氧羰基(Fmoc)、4-硝基苯磺酰基(Nosyl)、2-硝基苯次磺酰 基(Nps)以及取代的衍生物。更优选地，该氨基保护基团X是叔丁氧羰基(BOC)。氨基保护基团X可以通过不同方法而被引入，例如通过将适当的酸卤化物(例如， 苄氧羰基氯)或酸酐(例如，乙酸酐以及二碳酸二叔丁酯(BOC2O))进行反应。另一方面， 可以通过酸解、氢解、用稀氨水处理、用钠处理、用氨基钠处理、用胼处理，或酶促水解来去 除氨基保护基团X。根据本发明的方法经常进一步包括将基团X从通过这种具有式(I)的 化合物与该全硅烷化肽的反应而产生的化合物中去除。在根据本发明的方法中，在这种具有式(I)的化合物与该全硅烷化肽之间的反应 经常是在一种羧基基团活化剂的存在下进行的。在那种情况下，这种羧酸活化剂是适当地 选自碳二亚胺、酰商、磷鐺盐以及脲鐺或胍鐺盐。更优选地，该羧酸活化剂是一种酰商。仍 然更优选地，它是从氯甲酸异丁酯和新戊酰氯中选择出的当使用额外的羧基活化剂时经常得到良好的结果，这些活化剂降低了副反应和/ 或增加了反应效率。例如，磷鐺和脲鐺盐在一种叔碱(例如，二异丙基乙胺(DIPEA)和三乙 胺(TEA))的存在下可以将受保护的氨基酸转化成活化的种类(例如，B0P、PyB0P、HBTU、以 及TBTU都生成HOBt酯)。其他试剂通过提供一种保护剂有助于防止外消旋作用。这些试剂 包括碳二亚胺(例如，DCC或WSCDI)，它们具有一个添加的辅助亲核体(例如，1-羟基-苯 并三唑(HOBt)U-羟基-氮杂苯并三唑(HOAt)、或HOSu)或它们的衍生物。可以使用的另 一种试剂是TBTU。还使用了使用氯甲酸异丁酯的混合酸酐法(具有或不具有一种添加的辅 助亲核体)，叠氮化物法也是如此，这是由于与它相关的低外消旋作用的缘故。这些类型的 化合物也可以增加碳二亚胺介导的偶合的速率，连同阻止了 Asn和Gln残基的脱水。典型 的额外的试剂也包括碱类，例如N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺(TEA)或N-甲基吗啉 (NMM) ο在根据本发明的方法中，步骤(b)的反应总体上是在-50°C至50°C、优选地 从-40°C至10°C的温度下进行的。另一方面，本发明考虑了使用一种极性有机溶剂来提供一种部分硅烷化的肽或肽 类似物的溶液，该肽或肽类似物是通过使一种具有式(I)X-A-COOH的化合物与一种全硅烷 化肽或全硅烷化肽类似物进行反应来获得的，其中X是一种氨基保护基团，A是一种氨基酸、肽或肽类似物残基，并且-COOH表示一种任选活化的羧基基团。已经发现可能的是在整个反应中在溶液中在一种极性有机溶剂中维持部分硅烷 化的、特别是具有至少5个氨基酸(或任选地类似的单元)的偶合产物，从而提供了一种均 相溶液，该溶液特别适合于工作进程以及纯化或可任选的进一步的反应步骤，例如脱保护 以及随后的偶联步骤。出乎意料的是，当该反应在低温下进行时这也是可能的。该极性有机溶剂可以选自例如醚类，特别是水混溶性的醚类，例如四氢呋喃、二噁 烷或来自硝基烷的1，2- 二甲氧基乙烷，特别地水混溶性的硝基烷，例如硝基甲烷或来自酰 胺类型的溶剂，特别是水混溶性的酰胺。在根据本发明的用途中，该极性有机溶剂优选地是一种酰胺类型的溶剂，优选地 选自N，N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮。更优选地是，该溶剂 是N，N-二甲基乙酰胺。该溶剂允许特别有效地工作进程以及所产生的肽或肽类似物的回 收，而没有副产物的实质性形成。在根据本发明的用途中，在该溶液中该部分烷基化的肽或肽类似物的浓度相对于 该溶液的总重量总体上是等于或大于约重量，优选地等于或大于约5%重量。在根据本 发明的用途中，在该溶液中该部分硅烷化的肽或肽类似物的浓度相对于该溶液的总重量总 体上是等于或小于约20%重量，优选地等于或小于约15%重量。在根据本发明的用途的一个具体方面，在A中氨基酸单元以及任选的类似物单元 的数目与该全硅烷化肽或该全硅烷化肽类似物中氨基酸单元以及任选的类似物单元的数 目的比值总体上是等于或大于1 5，优选地等于或大于1 4。在这个方面，所述比值总 体上是等于或小于3 2，优选地等于或小于1 1。在根据本发明的用途中，该溶液总体上含有相对于该溶液的总重量10%重量至 95%重量的极性有机溶剂。在根据本发明的用途中，该部分地硅烷化的肽或肽类似物是优选地通过如之前在 此说明根据本发明的方法而获得的。在根据本发明的用途的一个特别优选的实施方案中，该溶液在从-40°C至+10°C 的温度下是均相的。本发明也考虑了 一种用于制造肽或肽类似物的方法，包括根据本发明的用途。以下实例旨在说明本发明而非限制本发明。在这些实例中并且贯穿本说明书，所采用的缩写定义如下AcOH是乙酸、AcOEt是乙酸乙酯、Boc是叔丁氧基羰基、n-BuOH是正丁醇、i-BuOH是 异丁醇、Cbz是苄氧基羰基、DCC是1，3 二环己基碳二亚胺、DCM是二氯甲烷、DIC是1，3- 二 异丙基碳二亚胺、DIPEA是N，N- 二异丙基乙胺、DMF是N，N- 二甲基甲酰胺、DMA是N，N- 二 甲基乙酰胺、EDC是1-(3- 二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、Fmoc是芴甲氧羰基、HBTU 是N，N，N' ,N'-四甲基-0-(1Η-苯并三唑-1-基)脲鐺-六氟磷酸盐)、Η0ΒΤ是1-羟基 苯并三唑、HOOBT是3，4- 二氢-3-羟基-4-氧-1，2，3-苯并三嗪、IBCF是氯甲酸异丁酯、 i-BuOH是异丁醇、IPE是二异丙醚、MeCN是乙腈、MeOH是甲醇、MSA是N-甲基-N-三甲基甲 硅烷基乙酰胺、NMM是N-甲基吗啉、NMP是1-甲基_2_吡咯烷酮、tBu是叔丁基、TEA是三 乙胺、THF是四氢呋喃、Tos是甲苯磺酰基、而Trt是三苯甲基。实例1 [2+4] :Z_Asp (OtBu)-Ala-Phe-IIe-Gly-Leu-OH (SEQ ID NO 8)
在氮气氛下，将Phe-Ile-Gly-Leu (SEQ ID NO 2) (1. 0当量)分散在DCM中并且在 室温下用MSA将其溶解。在氮气氛下，在25°C 士5下将Z-ASp(0tBut)-Ala(l. 05当量)和 TEA(1. 0当量)溶于CH2C12/DMF的混合物中然后冷却到_15°C。羧基的功能通过加入吡啶 (1. 0当量)和新戊酰氯(1. 0当量)而被激活。10分钟后，将这种烷基化的肽转移到这种 活化的肽上。用水稀释这种均相的偶联反应介质，产生一种两相系统。在真空下将CH2C12 去除，其中沉淀的肽和Z-Asp (OtBut) -Ala-Phe-Ile-Gly-Leu通过过滤被分离，用水洗涤然 后真空干燥。我们得到了一种白色固体，其产率为以重量计至少70%。实例2 [3+4] =Z-Ser-Tyr- (D) Cit-Leu-Arg-Pro- (D) AlaNH2. HCl (SEQ ID NO 4)在氮气氛下，将LeuArgPro (D) AlaNH2 (SEQ ID NO 3) (1.05 当量)溶于 DMA 中并且 在最高温度40°C下用MSA将其硅烷化，然后将该溶液冷却至大约_5°C。在氮气氛下，在最 高温度40°C下将ZSerTyr OOCitOH(1.0当量)和HOOBt (1. 05当量)溶于DMA中并且将该 溶液冷却至约_5°C。然后，将溶液A转到溶液B中，通过加入EDC. HCl (1. 1当量)来起始偶 合，并且将该反应混合物在_5°C下搅拌至少1小时然后在大约5°C下持续至少3小时。通过 HPLC检查该反应的结束。在真空下将该溶剂去除，并接着在的NaCl水溶液中将该浓缩 液稀释，并且通过稀HCl的受控加入将pH调节到2. 5至3. 3之间。为了去除HOOBt和DMA， 用DCM洗涤该水性溶液，然后用n-BuOH对这种肽萃取三次。通过减压蒸发将这种溶剂去除 直到水含量为< 重量。通过将温度维持在大约45°C下用丙酮逐步稀释该浆料以便使该 肽作为一种白色固体而沉淀，在大约20°C下在持续至少1小时搅拌后过滤该白色固体。用 丙酮并且最终用乙腈洗涤该固体。将该沉淀干燥直到丙酮含量重量，并且我们得到了 一种白色固体，其产率为以重量计至少70%。实例3 [3+7] :Ac- (D)Nal-(D)Cph-(D)Pal-Ser-Tyr-(D)Cit-Leu-Arg-Pro-(D) Ala-NH2. HCl(SEQ ID NO 1)在氮气氛下，将SerTyr (D) CitLeuArgPro (D) AlaNH2 (SEQ ID NO :4) (1. 05 当量) 溶于DMA中并且在最高温度40°C下用MSA将其硅烷化至少60分钟，然后将该溶液冷却 到约-5°C。在氮气氛下，在最高温度40°C下将Ac(D)Nal (D)Cph(D)Pal0H(l. 0当量)和 H00Bt(1.05当量)溶于DMA中，并且将该溶液冷却到大约-5°C。然后，将溶液A转移到溶 液B中，通过加入EDC. HCl (1. 1当量)启动偶联，并且将该反应混合物在_5°C下搅拌至少 2小时然后在大约5°C 士5下保持至少8小时。通过HPLC检查该反应的结束。用水稀释 该反应混合物，该反应混合物在整个反应中保持均相，并且用HCl的稀水溶液将pH调节到 2. 0 士0. 5。然后，在士 35°C下用DCM将该溶液洗涤2次，之后跟随用n-BuOH对这种肽的3次 萃取。最后，用水洗涤这些组合的有机相。通过减压蒸发将该溶剂去除直到水含量为 重量。用丙酮稀释该浆料以便将这种肽作为一种白色固体而沉淀，在大约15°C下持续至少 1小时搅拌后过滤该白色固体。用丙酮洗涤该固体。将该沉淀干燥直到丙酮含量重 量。然后，将这种干燥的固体在甲醇与丙酮的1/1混合物中在大约20°C下研磨持续至少1 小时，过滤并用丙酮洗涤。我们得到了一种白色固体，其产率为以重量计至少70%。实例 4 [4+7] =Boc-Cys (Trt)-Ser(tBu)-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr-Cys(Trt)Val LeuGly OH(SEQ ID NO 9)在氮气氛下，将Ser (tBu)-Thr-Cys (Trt) Val Leu Gly OH(SEQ ID NO :5) (1. 0 当 量)溶于NMP中并且在最高温度50°C下用MSA将其硅烷化至少90分钟，然后将该溶液冷却到大约 5°C。在氮气氛下，将 Boc-Cys (Trt)-Ser (tBu)-Asn-Leu-OH(SEQ ID NO 7) (1. 02 当 量)和NMM(1.05当量)溶于NMP中，然后将该溶液冷却到-15°C 士5。然后，这个羧基的部 分通过IBCF(1. 05当量)的加入而被活化。然后，将溶液A转移到溶液B中，并且将该反应 混合物在0°C下搅拌至少60分钟。用沉淀了这种肽的KHS04的水性溶液稀释该反应混合 物，该反应混合物在整个反应中保持均相。将该固体过滤，用水然后用丙酮与水的9/1的混 合物对其进行洗涤。干燥之后，我们得到了一种白色固体，其产率为以重量计至少75%。实例 5 [4+7] =Fmoc-His (Trt) -Trp-Ser-Tyr- (D) Ser (tBu) -Leu-Arg-Pro-NHNHCO NH2(SEQ ID NO 10)在氮气氛下，将H-TrpSerTyr (D) Ser (tBu) LeuArgProNHNHC0NH2 (SEQ ID NO 6) (1.0当量)溶于DMA中并且在最高温度40°C下用MSA将其硅烷化至少60分钟。将该溶液 冷却到士25°C，并且加入Fmoc-His (Trt)-0H(1. O当量)和HBTU(1. 1当量)，将该溶液在 士25°C下混合直到完全溶解然后冷却到约_5°C。通过DIPEA(1. 1当量)的受控加入来起始 这种偶联。通过HPLC检查该反应的结束。用沉淀了这种肽的KHS04的水性溶液稀释该反 应混合物，该反应混合物在偶联过程中保持均相。将该固体过滤并且用水洗涤。干燥之后， 我们得到了一种白色固体，其产率以重量至少70%。
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权利要求
用于生产肽或肽类似物的方法，该方法包括(a)通过与除了三甲基甲硅烷基氰化物以外的硅烷化剂的反应通过使相应的肽硅烷化来生产全硅烷化肽或全硅烷化肽类似物；并且(b)使式(I)X A COOH的化合物与含有4至15个氨基酸的全硅烷化肽或全硅烷化肽类似物进行反应，其中X是氨基保护基团，A是氨基酸、肽或肽类似物残基，并且 COOH表示任选活化的羧基基团。
2.根据权利要求1所述的方法，其中该全硅烷化肽含有4、5、6、7或8个氨基酸。
3.根据权利要求1所述的方法，其中该全硅烷化肽含有4、5或6个氨基酸。
4.根据权利要求1至3中任何一项所述的方法，其中步骤(b)的反应是在有机溶剂中 进行的。
5.根据权利要求1至4中任何一项所述的方法，其中该硅烷化剂选自N-三烷基甲硅烷 基胺类以及N-三烷基甲硅烷基酰胺类，并且优选N-甲基-N-三甲基硅烷基乙酰胺(MSA)。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其中该有机溶剂是极性有机溶剂，优选酰胺类型的 溶剂，更优选N，N-二甲基乙酰胺(DMAC)。
7.根据权利要求1至6中任何一项所述的方法，其中步骤(a)的硅烷化反应是在从 25°C至50°C的温度下进行的。
8.根据权利要求1至7中任何一项所述的方法，其中相对于待硅烷化官能团的摩尔量， 使用0. 5至5当量、优选0. 7至1. 5当量的硅烷化剂。
9.根据权利要求1至8中任何一项所述的方法，其中A包含2、3、4、5、6、7、8或9个氨 基酸。
10.根据权利要求1至9中任何一项所述的方法，其中X是吸电子的氨基保护基团。
11.根据权利要求10所述的方法，其中X是Boc基团。
12.根据权利要求1至11中任何一项所述的方法，其中步骤(b)的反应是在羧基活化 剂、优选地是新戊酰氯和氯甲酸异丁酯的存在下进行的。
13.根据权利要求1至12中任何一项所述的方法，进一步包括将基团X从由该反应所 产生的化合物中去除。
14.极性有机溶剂用于提供部分硅烷化的肽或部分硅烷化的肽类似物的溶液的用途， 该肽或肽类似物通过使式(I)X-A-COOH的化合物与全硅烷化肽或全硅烷化肽类似物进行 反应来获得，其中X是氨基保护基团，A是氨基酸、肽或肽类似物残基，并且-COOH表示任选 活化的羧基基团。
15.根据权利要求14所述的用途，其中该极性有机溶剂是酰胺类型的溶剂，优选地选 自N，N- 二甲基甲酰胺以及N，N- 二甲基乙酰胺。
16.根据权利要求15所述的用途，其中该溶剂是N，N-二甲基乙酰胺。
17.根据权利要求14至16中任何一项所述的用途，其中在A中氨基酸单元以及任选类 似物单元的数目与在该全硅烷化肽或该全硅烷化肽类似物中氨基酸单元以及任选类似物 单元的数目的比值是1 5至3 2，优选地1 4至1 1。
18.根据权利要求14至17中任何一项所述的用途，其中该溶液含有10%重量至95% 重量的极性有机溶剂。
19.根据权利要求14至18中任何一项所述的用途，其中该部分硅烷化的肽或肽类似 物是通过使根据权利要求9或10中任何一项所述的式(I)的化合物与根据权利要求1至3中任何一项所述的全硅烷化肽或全硅烷化肽类似物进行反应来获得的。
20.根据权利要求14至19中任何一项所述的用途，其中该溶液在_40°C至+10°C的温 度下是均相的。
21.用于制造一种肽或肽类似物的方法，包括根据权利要求14至20中任何一项所述的用途。
22.在液体介质中包含具有4至15个氨基酸的肽或肽类似物的溶液，所述液体介质含 有N-甲基-N-三甲基硅烷基乙酰胺和酰胺类型的溶剂。
23.根据权利要求23所述的溶液，其中该酰胺类型的溶剂是N，N-二甲基乙酰胺。
全文摘要
用于制造全硅烷化的肽或肽类似物的方法，该方法包括(a)通过与除了三甲基甲硅烷基氰化物以外的硅烷化剂的反应通过使相应的肽硅烷化来生产全硅烷化的肽或全硅烷化的肽类似物；并且(b)使具有化学式(I)X-A-COOH的化合物与含有从4至15个氨基酸的全硅烷化的肽或全硅烷化的肽类似物进行反应，其中X是氨基保护基团，A是氨基酸、肽或肽类似物残基，并且-COOH表示任选活化的羧基基团。
文档编号C07K1/107GK101918428SQ200880125084
公开日2010年12月15日 申请日期2008年11月18日 优先权日2007年11月19日
发明者罗兰·卡伦斯, 蒂里·德尔普朗什 申请人:索尔维公司