专利名称：一种硒化寡糖快速脱盐、纯化的方法
技术领域：
本发明涉及生物化学领域，尤其涉及一种利用活性炭柱对硒化寡糖进行快速脱盐和分离 的方法，该方法可用于纯化化学方法制备的硒化寡糖。 技术背景
冃甜研究表明人类很多疾病的发生、发展与体内的过氧化状态密切相关，例如糖尿病、 肿瘤等，降低体内的过氧化状态是治疗或缓解病症的重要途径之一。谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px)是人体内重要的抗氧化酶，晒是谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性中心，对其发挥 抗氧化作用具有重要作用。因此人体补硒可以提高体内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性， 预防和缓解疾病的发生和发展。
目甜补硒产品中的无机硒(如亚硒酸钠)具有毒性，安全性差，剂量难以控制；硒蛋O 往往存在抗原性的问题；硒多糖虽然没有抗原性和毒性，但是由于分子量较大，难以吸收。 硒化寡糖由于没有毒性和抗原性，分子量较小、易于吸收等特点，成为理想的补硒产品。但 是硒化寡糖在制备的过程中使用了大量的无机硒作为反应底物，反应产物中存在大量的无机 硒，必须将产物中的无机硒除掉，才能保证硒化寡糖的纯度和安全性。目前没有特别有效的 技术能够在较短的时间内针对大量的硒化寡糖进行脱盐和纯化，生产受到限制，本发明就是 针对化学方法制备硒化寡糖过程中脱盐和纯化的难题，利用廉价的活性炭为原料，建立硒化 寡糖快速脱盐和纯化的方法。
发明内容
本发明的目的是针对化学法制备硒化寡糖过程中，产物中存在大量无机盐和无机硒， 需要脱盐处理，另外硒化寡糖在分子量上存在一定差异等问题，建立以活性炭柱为系统的脱 盐和分离方法。
本发明的原理是经过处理的活性炭对寡糖和多糖具有吸附作用，但是对单糖和无机盐 类吸附作用很小，因此可以通过蒸馏水洗脱， 一次性将无机盐和单糖除掉；活性炭对寡糖的 吸附作用与寡糖的分子量密切相关，分子量越大，吸附能力越强；活性炭的吸附性与洗脱液有关，洗脱液中有机成分越多，吸附性越差，所以可以通过改变洗脱液中有机溶剂的含量使 硒化寡糖逐一分开。
本发明的技术方案是-种硒化寡糖快速脱盐、纯化的方法，具体歩骤如下
(1) 活性炭的处理以20%的乙酸溶液浸泡活性炭粉末，并煮沸20分钟，冷却后备
用；
(2) 将上述处理好的活性炭粉末填入层析柱中形成活性炭柱，以70-8(TC热蒸馏水洗 脱，直至洗脱液为中性；
(3) 将活性炭柱冷却至室温；
(4) 建立活性炭柱层析系统，该系统由层析柱l、活性炭粉末2、密封瓶塞3、抽虑瓶 口 4和抽虑瓶5组成，其中活性炭粉末2填入层析柱1中形成活性炭柱，层析柱1穿过密封 瓶塞3与抽虑瓶5相通；
(5) 将硒化寡糖溶解，缓慢的加入到活性炭柱层析系统中活性炭柱的顶端，此时真空 泵不工作，硒化寡糖溶液缓慢渗入活性炭，并与活性炭充分结合；
(6) 以常温的蒸馏水为洗脱液，打开真空泵，由于粉末状活性炭在层析柱中堆积较为 密集，液体通过活性炭柱的速度较慢，因此真空泵从抽虑瓶口处抽气，使活性炭柱下端形成 负压，将硒化寡糖中的无机硒、无机盐和单糖洗脱掉，脱盐和纯化的速度通过控制层析柱下 端的负压程度来调节；
(7) 分别以5%、 15%、 30%、 40%的乙醇溶液为洗脱液洗涤活性炭柱层析系统，收集 不同分子量的硒化寡糖，具体洗脱液的浓度根据硒化寡糖的性质决定，最后的洗脱液中可以 加入5%的醋酸，最后的洗脱液可以加热至7(TC。
本发明的有益效果是简单易行，成本较低，不仅可以脱去硒化寡糖中存在的无机硒盐 和其它的无机盐类，还可以通过改变洗脱液的成分，快速的将不同分子量的硒化寡糖分离丌， 寡糖的总得率在80%以上，且脱盐和纯化的速度可以灵活控制，可产业化，具有广阔的应用 前景。
图1为活性炭柱层析系统示意图。图中1、层析柱，2、活性炭粉末，3、密封瓶塞，4、抽虑瓶口， 5、抽虑瓶。
具体实施例方式
实施例1
硒化卡拉胶寡糖的脱盐与纯化
以卡拉胶、亚硒酸钠、硫酸为原料合成硒化卡拉胶寡糖，反应产物中含有大量的亚硒酸 钠、硫酸钠等无机盐，其中硒盐的含量达到40%，严重影响硒化卡拉寡糖的品质和安全性。 按照本发明方法对合成的硒化卡拉胶寡糖进行脱盐与纯化，步骤如下-
(1) 活性炭的处理以20%的乙酸溶液浸泡，并煮沸20分钟，冷却后备用；
(2) 将上述处理好的活性炭粉末填入层析柱中形成活性炭柱，以78t:的热蒸馏水洗 脱，直至洗脱液为中性；
(3) 将活性炭柱冷却至室温；
(4) 建立活性炭柱层析系统，该系统由层析柱l、活性炭粉末2、密封瓶塞3、抽虑瓶 口 4和抽虑瓶5组成，其中活性炭粉末2填入层析柱1中形成活性炭柱，层析柱1瓶口穿过 密封瓶塞3与抽虑瓶5相通； -
(5) 将硒化卡拉胶寡糖溶解，缓慢的加入到活性炭柱层析系统中活性炭柱的顶端，此 时真空泵不丁作，硒化卡拉胶寡糖溶液缓慢渗入活性炭，并与活性炭充分结合；
(6) 以2%的BaCl2作为检测溶液，以蒸馏水为洗脱液进行洗脱，打丌真空泵，通过控 制层析柱下端的负压程度来控制脱盐和纯化的速度，直到洗脱液与BaCl2溶液不发生沉淀反 应为止；
(7) 分别以5%、 15%、 30%、 40%的乙醇溶液洗脱，收集硒化卡拉胶寡糖。硒化卡拉胶 寡糖经原子吸收法检测硒元素的含量达0. 3%，硒化寡糖的的得率在80%。
权利要求
1、一种硒化寡糖快速脱盐、纯化的方法，其特征在于，该方法步骤如下(1)活性炭的处理以20％的乙酸溶液浸泡活性炭粉末，并煮沸20分钟，冷却后备用；(2)将上述处理好的活性炭粉末填入层析柱中形成活性炭柱，以70-80℃的热蒸馏水洗脱，直至洗脱液为中性；(3)将活性炭柱冷却至室温；(4)建立活性炭柱层析系统，该系统由层析柱、活性炭粉末、密封瓶塞、抽虑瓶口和抽虑瓶组成，其中活性炭粉末填入层析柱中形成活性炭柱，层析柱穿过密封瓶塞与抽虑瓶相通；(5)将硒化寡糖溶解，缓慢的加入到活性炭柱层析系统中活性炭柱的顶端，此时真空泵不工作，硒化寡糖溶液缓慢渗入活性炭，并与活性炭充分结合；(6)以常温的蒸馏水为洗脱液，打开真空泵，使活性炭柱下端形成负压，将硒化寡糖中的无机硒、无机盐和单糖洗脱掉，脱盐和纯化的速度通过控制层析柱下端的负压程度来调节；(7)根据硒化寡糖的性质，用不同浓度的乙醇溶液为洗脱液洗涤活性炭柱层析系统，收集不同分子量的硒化寡糖。
2、根据权利要求1所述的一种硒化寡糖快速脱盐、纯化的方法，其特征在于，所述最后 的乙醇洗脱液中可以加入5°/。的醋酸，最后洗脱液可以加热至70°C。
全文摘要
本发明涉及生物化学领域，具体涉及一种利用活性炭柱对硒化寡糖进行快速脱盐和分离的方法，该方法可用于纯化化学方法制备的硒化寡糖。本发明是以活性炭柱作为脱盐、纯化体系，通过真空泵使层析柱的下方处于负压状态，在压力的作用下洗脱液迅速通过活性炭柱，在不同洗脱剂的作用下，将硒化寡糖中的盐分去掉并将不同分子量的硒化寡糖分离开。本发明所用设备简单，工艺易于操作，成本较低，工作时间较短，脱盐和分离纯化效果较好，回收率达到80％以上，可产业化，具有广阔的应用前景。
文档编号C07H1/06GK101602785SQ20091001238
公开日2009年12月16日 申请日期2009年7月4日 优先权日2009年7月4日
发明者吴海歌, 姚子昂 申请人:大连大学