从植物刺槐中制备d-松醇的方法

专利名称：从植物刺槐中制备d-松醇的方法
技术领域：
本发明涉及的是一种农业技术领域的制备方法，具体地说，涉及的是一种从 植物刺槐中制备D-松醇的方法。
背景技术：
刺槐(Robinia pseudoacacia Linnl)原产于北美，17世纪初被引入欧洲， 20世纪初期引入我国，刺槐引入我国后，由于其广泛适应性和多用途性被广泛 种植，据调査，我国大陆除黑龙江和海南省外，其他省市自治区均有栽培。刺 槐是目前研究较多的一种植物，但多数研究侧重于刺槐的营养价值与造林价值。 国内外对刺槐的化学成分的研究较多，曾有报道在刺槐果实中发现凝集素、芦丁 及槐实甙等成分；以及主要成分是单萜类和倍半萜化合物的刺槐花精油以及对六 种肿瘤细胞系有抑制作用的黄酮成分。
D-松醇是一种具有重要生理活性的单糖，有报道治疗代谢紊乱，咳嗽，糖尿 病，加强肌氨酸的保持力，以及对肝脏的保护作用。
化合物D-松肌醇的结构式为
OH
D-松醇可以通过化学合成制的，但是价格非常昂贵，目前主要通过从植物中
分离纯化天然制备而来。
经对现有的技术文献检索发现，专利WO/2002/077251用大豆的片段通过微
生物发酵来制备D-松醇的方法。专利US 6699511利用阴离子交换柱从长豆角中
提取制备，但目前还没有用农业废弃资源刺槐叶来制备D-松醇的报道
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足，提供一种从植物剌槐中制备 D-松醇的方法，该法以刺槐叶为原料，采用溶剂提取、浓縮、溶剂萃取和柱层析 工艺方法制备D-松醇，操作简单，成本低廉且获取的物质纯度较高。
本发明是通过以下技术方案实现的，包括如下步骤
第一步，将刺槐晾干后，干燥，再粉碎成粉末。
第二步，用20-40倍于刺槐粉末质量的乙醇和去离子水混合溶剂，常温下搅 拌提取，滤液减压真空浓縮，将混合溶剂提取物浓縮成浸膏；
第三步，用3 5倍于刺槐叶粉末质量的去离子水溶解膏状物后，等体积 1/2体积石油醚萃取3次。
第四步，将萃取后的水相浓縮至200ml，大孔树脂为固定相，用3L-5L蒸馏 水洗脱，收集水洗脱产物。
第五步，水洗脱产物浓縮后，采用沙维积法(Sevag法)，去除蛋白，反复3 次。保留上清液浓縮成膏。
第六步，醇沉将第五步得到的膏状物溶于IO倍质量的去离子水，再加入 50倍质量的乙醇，静置，离心，保留上清液，浓縮成膏。
第七歩，采用300—400目硅胶柱，乙酸乙酯-甲醇-水为流动相增大甲醇比 例梯度洗脱。
第八步，目标产物收集后蒸干用乙醇反复重结晶得白色针状晶体。 所述第一步中，所述的干燥，其温度是4(TC。
所述第一步中，粉碎是指用中药粉碎机粉碎成IO目-50目的植物粉末。 所述第二步中，所述乙醇和去离子水混合溶剂，其中乙醇体积浓度为 10%-50%。
所述第二步中，所述常温下搅拌提取，其时间为30min 2h。
所述第二步中，减压浓縮是指将溶液抽真空减压到-0. 1个大气压，置于50 'C以下的旋转水浴，使溶液得到浓縮。
所述第四步中，大孔树脂为吸附树脂，用量是浓縮液干物质的质量的150 倍以上。吸附时间为24小时以上。
所述的第六步中，静置是指4'C下静置2h。
本发明与现有技术相比有如下优点
51. 原材料采用农业废弃资源刺槐叶为原材料，废物利用，来源广泛，获取 简单，经济廉价，具有可持续发展的意义
2. 生产工艺传统用纯乙醇提取，会造成大量色素杂质，在后面的分离过程 中需要增加萃取的次数提高了成本，且用乙醇提取D-松醇产率低。传统用水煎 煮提取，得到的溶液粘稠，不宜过滤，且加热过程损耗能源。本发明采用乙醇溶 液常温下梯度提取，可兼顾提取得率，降低滤液粘稠度，縮短分离时间，提高效 率，且操作简单，节约了能源。蒸干浓縮过程回收的乙醇可以重复循环利用进行 提取，节约了材料，降低成本。相比较发酵工艺，具有操作以及工艺条件简单的 特点。
3. 利用硅胶柱进行分离可以获得高纯度的D-松醇。经过气相色谱的定量检 测，纯度可达到98%。
具体实施例方式
下面对本发明的实施例作详细说明本实施例在以本发明技术方案为前提下 进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限 于下述的实施例。
实施例1
1、 将刺槐晾干后，40"C干燥，再用中药粉碎机粉碎成IO目-50目的植物粉末。
2、 称取40。C干燥后的粉末100g，用20倍的10%的的乙醇溶液，常温搅拌 提取0.5h，过滤，将溶液抽真空减压到-0. 1个大气压，置于50'C以下的旋转水 浴，使溶液得到浓縮，得浸膏23.5g。
3、 用300ml的去离子水溶解膏状物后，1/2体积石油醚萃取3次。
4、 将萃取后的水相浓縮至200ml， HZ841型弱极性大孔树脂为固定相，用 3L蒸馏水洗脱，收集水洗脱产物。
HZ841为华东理工大学上海华震科技有限公司根据企业标准生产的HZ841型 吸附树脂。
5、 水洗脱产物浓縮后，采用沙维积法(Sevag法)，样品氯仿正丁醇=25: 5: 1，混合震荡，去除蛋白，反复3次。保留上清液浓縮成膏。
6、 膏状物溶于10倍质量的去离子水，再加入50倍质量的乙醇，4'C下静置2h，离心，保留上清液，浓缩成膏。
7、 采用300—400目硅胶柱，乙酸乙酯-甲醇-水为流动相增大甲醇比例梯度 洗脱。
8、 过硅胶柱后，以磷钼酸为显色剂，喷雾显色后，热风枪加热，TLC检测 搜集目标产物D-松醇，目标产物收集后蒸干用乙醇反复重结晶得白色针状晶体 得2. 73gD-松醇。纯度为98. 1%。
实施例2
1、 将刺槐晾干后，4(TC干燥，再用中药粉碎机粉碎成IO目-50目的植物粉末。
2、 称取4(TC干燥后的粉末100g，用30倍的30%的乙醇溶液，常温搅拌提 取lh，过滤，将溶液抽真空减压到-O. 1个大气压，置于5(TC以下的旋转水浴， 使溶液得到浓縮，得浸膏25.3g。
3、 用400ml的去离子水溶解膏状物后，等体积石油醚萃取3次。
4、 将萃取后的水相浓縮至200ml， HZ841型弱极性大孔树脂为固定相，用 4L蒸馏水洗脱，收集水洗脱产物。
5、 水洗脱产物浓縮后，采用沙维积法(Sevag法)，样品氯仿正丁醇=25: 5: 1，混合震荡，去除蛋白，反复3次。上清液浓縮成膏。
6、 膏状物溶于IO倍质量的去离子水，再加入50倍质量的乙醇，静置，离 心，保留上清液，浓縮成膏。
7、 采用300—400目硅胶柱，乙酸乙酯-甲醇-水为流动相增大甲醇比例梯度 洗脱。
8、 过硅胶柱后，目标产物收集后蒸干用乙醇反复重结晶得白色针状晶体得 2. 75gD-松醇。纯度为97. 8%。
实施例3
1、 将刺槐晾干后，4(TC干燥，再用中药粉碎机粉碎成IO目-50目的植物粉末。
2、 称取4(TC干燥后的粉末100g，用40倍的50%的乙醇溶液，常温搅拌提
7取2h，过滤，将溶液抽真空减压到-0.1个大气压，置于5(TC以下的旋转水浴， 使溶液得到浓縮，得浸膏29. lg。
3、 用500ml的去离子水溶解膏状物后，等体积石油醚萃取3次。
4、 将萃取后的水相浓缩至200ml， HZ841型弱极性大孔树脂为固定相，用 5L蒸馏水洗脱，收集水洗脱产物。
5、 水洗脱产物浓縮后，采用沙维积法(Sevag法)，样品氯仿正丁醇=25: 5: 1，混合震荡，去除蛋白，反复3次。上清液浓縮成膏。
6、 膏状物溶于IO倍质量的去离子水，再加入50倍质量的乙醇，静置，离 心，保留上清液，浓缩成膏。
7、 采用300—400目硅胶柱，乙酸乙酯-甲醇-水为流动相增大甲醇比例梯度 洗脱。
8、 过硅胶柱后，目标产物收集后蒸干用乙醇反复重结晶得白色针状晶体得 2. 72gD-松醇。纯度为98. 0%。
实施例4
1、 将刺槐晾干后，4(TC干燥，再用中药粉碎机粉碎成IO目-50目的植物粉末。
2、 称取4(TC干燥后的粉末100g，用30倍的20%的乙醇溶液，常温搅拌提 取2h，过滤，将溶液抽真空减压到-O. 1个大气压，置于5(TC以下的旋转水浴， 使溶液得到浓縮，得浸膏28. 3g。
3、 用300ml的去离子水溶解膏状物后，等体积石油醚萃取3次。
4、 将萃取后的水相浓縮至200ml， HZ841型弱极性大孔树脂为固定相，用 5L蒸馏水洗脱，收集水洗脱产物。
5、 水洗脱产物浓縮后，采用沙维积法(Sevag法)，样品氯仿正丁醇=25: 5: 1，混合震荡，去除蛋白，反复3次。保留上清液浓縮成膏。
6、 膏状物溶于IO倍质量的去离子水，再加入50倍质量的乙醇，静置，离 心，保留上清液，浓缩成膏。
7、 采用300—400目硅胶柱，乙酸乙酯-甲醇-水为流动相增大甲醇比例梯度 洗脱。8、过硅胶柱后，目标产物收集后蒸干用乙醇反复重结晶得白色针状晶体得 2. 77gD-松醇。纯度为98. 2%。
实施例5
1、 将刺槐晾干后，4(TC干燥，再用中药粉碎机粉碎成IO目-50目的植物粉末。
2、 称取4(TC干燥后的粉末100g，用20倍的50%的乙醇溶液，常温搅拌提 取lh，过滤，将溶液抽真空减压到-0. 1个大气压，置于5(TC以下的旋转水浴， 使溶液得到浓縮，得浸膏24.7g。
3、 用500ml的去离子水溶解膏状物后，等体积石油醚萃取3次。
4、 将萃取后的水相浓縮至200ml， HZ841型弱极性大孔树脂为固定相，用 3L蒸馏水洗脱，收集水洗脱产物。
5、 水洗脱产物浓縮后，采用沙维积法(Sevag法)，样品氯仿正丁醇=25: 5: 1，混合震荡，去除蛋白，反复3次。上清液浓縮成膏。
6、 膏状物溶于IO倍质量的去离子水，再加入50倍质量的乙醇，静置，离 心，保留上清液，浓縮成膏。
7、 采用300—400目硅胶柱，乙酸乙酯-甲醇-水为流动相增大甲醇比例梯度 洗脱。
8、 过硅胶柱后，目标产物收集后蒸干用乙醇反复重结晶得白色针状晶体得 2. 64gD-松醇。纯度为97. 7%。
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权利要求
1、一种从植物刺槐中制备D-松醇的方法，其特征在于包括如下步骤第一步，将刺槐晾干后，干燥，再粉碎成粉末；第二步，用20-40倍于刺槐粉末质量的乙醇和去离子水混合溶剂，常温下搅拌提取，滤液减压真空浓缩，将混合溶剂提取物浓缩成浸膏；第三步，用3～5倍于刺槐叶粉末质量的去离子水溶解膏状物后，等体积～1/2体积石油醚萃取3次；第四步，将萃取后的水相浓缩至200ml，大孔树脂为固定相，用3L-5L蒸馏水洗脱，收集水洗脱产物；第五步，水洗脱产物浓缩后，采用沙维积法，去除蛋白，反复3次，保留上清液浓缩成膏；第六步，醇沉将第五步得到的膏状物溶于10倍质量的去离子水，再加入50倍质量的乙醇，静置，离心，保留上清液，浓缩成膏；第七步，采用300-400目硅胶柱，乙酸乙酯-甲醇-水为流动相增大甲醇比例梯度洗脱；第八步，目标产物收集后蒸干用乙醇反复重结晶得白色针状晶体。
2、 根据权利要求l所述的从植物刺槐中制备D-松醇的方法，其特征是，第 一步中所述的干燥，其温度是40。C。
3、 根据权利要求l所述的从植物刺槐中制备D-松醇的方法，其特征是，第 一步中的粉碎是指用中药粉碎机粉碎成10目-50目的植物粉末。
4、 根据权利要求l所述的从植物刺槐中制备D-松醇的方法，其特征是，第 二步中所述的乙醇和去离子水混合溶剂，其中乙醇体积浓度为10%-50%。
5、 根据权利要求1所述的从植物刺槐中制备D-松醇的方法，其特征是，第 二歩中所述的常温下搅拌提取，其时间为30min 2h。
6、 根据权利要求1所述的从植物刺槐中制备D-松醇的方法，其特征是，第 二步中所述的减压浓縮是指将溶液抽真空减压到-0. 1个大气压，置于5(TC以下 的旋转水浴，使溶液得到浓縮。
7、 根据权利要求l所述的从植物刺槐中制备D-松醇的方法，其特征是，第四步中所述的大孔树脂为吸附树脂，用量是浓縮液干物质的质量的150倍以上， 吸附时间为24小时以上。
8、根据权利要求l所述的从植物刺槐中制备D-松醇的方法，其特征是，第 六步中所述的静置是指4'C下静置2h。
全文摘要
一种农业技术领域的从植物刺槐中制备D-松醇的方法，步骤为将刺槐晾干后，干燥，再粉碎成粉末；用乙醇和去离子水混合溶剂，常温下搅拌提取，滤液减压真空浓缩，将混合溶剂提取物浓缩成浸膏；用去离子水溶解膏状物后，石油醚萃取；将萃取后的水相浓缩，大孔树脂为固定相，用蒸馏水洗脱，收集产物；采用沙维积法，去除蛋白，保留上清液浓缩成膏；膏状物溶于去离子水，再加入乙醇，静置，离心，保留上清液，浓缩成膏；采用硅胶柱洗脱；目标产物收集后蒸干用乙醇反复重结晶得白色针状晶体。该法以刺槐叶为原料，采用溶剂提取、浓缩、溶剂萃取和柱层析工艺方法制备D-松醇，操作简单，成本低廉且获取的物质纯度较高。
文档编号C07C43/00GK101492350SQ200910047048
公开日2009年7月29日 申请日期2009年3月5日 优先权日2009年3月5日
发明者代光辉, 峰 刘, 佳 陈 申请人:上海交通大学