专利名称：一种高纯度乳酸链球菌素的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种高纯度生物防腐剂，具体地说，涉及一种高纯度乳酸链球菌素的
制备方法。
背景技术：
乳酸链球菌素又称乳链菌肽，英文名Nisin，是N型血清的某些乳酸链球菌在代谢 过程中合成和分泌的具有很强杀菌作用的小肽，能有效的抑制许多引起食品腐败变质的革 兰氏阳性菌的生长、繁殖，特别对耐热芽孢杆菌、肉毒梭菌以及李斯特氏菌有强烈的抑制作 用，是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然食品防腐剂。 目前，乳酸链球菌素在食品中已经广泛使用，但纯度普遍较低，对乳酸链球菌素的 提纯又普遍存在工艺步骤多，纯化过程复杂，设备投入较大且纯度不高等缺点。
发明内容
本发明的在于解决现有技术存在的纯化过程复杂、纯度不高的问题，提供一种高 纯度乳酸链球菌素的制备方法。 为了实现本发明目的，本发明的一种高纯度乳酸链球菌素的制备方法，包括下述 步骤 1)先将乳酸链球菌素粗粉溶解于酸溶液、有机溶剂、或酸与有机溶剂的混合液 中； 2)然后搅拌静置、离心分相，取乳酸链球菌素层； 3)再将乳酸链球菌素层用有机溶剂溶解，再次离心分相，去杂，干燥而成。 其中，所述乳酸链球菌素粗粉中乳酸链球菌素的含量为5_10%。 所述酸溶液的pH为2-6，一般为盐酸、醋酸、硫酸等。 所述有机溶剂可以是醇类、醚类或羧酸类，比如乙醇、乙醚、乙酸。 所述乳酸链球菌素粗粉与其溶解液的比例为1 : 10-20。 步骤2)搅拌时可以加入食盐使溶液饱和，充分搅拌溶解，静置。搅拌时间为1-3
个小时，静置时间为6-16个小时。盐与乳酸链球菌素粗粉的比例为0.5-2 : 1。 所述离心分相采用离心转速为2000-10000转/分，时间为5-40分钟。离心后整
个混合液分成四层，分别为轻相、乳酸链球菌素层、重相和杂质层，除去残渣(大量杂质)及
轻重相，取乳酸链球菌素层。 步骤3)中用步骤1)所用溶液溶解乳酸链球菌素、离心分相，去杂、干燥。
所述干燥方法可以是 喷雾干燥取离心后的沉淀，用溶液溶解，搅拌均匀，喷雾干燥，喷雾过程中应不断 搅拌保证混合均匀，喷雾干燥后即获得高纯度的乳酸链球菌素干粉。 真空干燥取离心后的沉淀，用溶液溶解后抽滤，抽干后真空干燥，干燥完成粉碎 即获得高纯度的乳酸链球菌素干粉。
干燥时所述的溶液为醇类、醚类、羧酸类有机溶剂。 本发明高纯度乳酸链球菌素的制备方法，其工艺步骤简单，所需设备较少，所得产 品纯度达到98%以上。 本发明工艺方法安全、简便、产品纯度高，是一个良好的乳酸链球菌素纯化技术， 可广泛的用于大规模的工业化生产过程中。
具体实施例方式
下面用实施例进一步描述本发明，有利于对本发明及其优点、效果更好的了解，但
所述实施例仅用于说明本发明而不是限制本发明。
实施例1 取Nisin粗品(盐析后经小板框压滤所得的湿粉，乳酸链球菌素重量百分含量约 为7%)300克，粉碎后加入4升盐酸(pH为2)和2升乙醇，充分搅拌1小时。慢慢加入400 克精盐搅拌溶解使溶液饱和，静置6小时。离心分相(转速为2000rpm)40分钟，离心后整 个混合液分成四层，分别为轻相(主要是乙醇)、乳酸链球菌素层、重相和杂质层，除去残渣 (大量杂质)及轻重相，取乳酸链球菌素层，Nisin层呈灰白色，加入2升乙醇搅拌混匀后， 再次离心分相(转速为2000rpm，40分钟)去除液体，取沉淀层，此时Nisin层呈乳白色，如 颜色不是乳白色需反复离心分相直至颜色呈乳白色。取沉淀物加入4升乙醇搅拌均匀后进 行喷雾干燥，在喷雾干燥过程中应不停的搅拌使其混合均匀，喷雾干燥后即获得高纯度的 乳酸链球菌素产品。 经生物测定最终产品的效价为39394IU/mg，作为标品的纯品的效价为40000IU/ mg，可知本发明所用的方法制得的乳酸链球菌素产品纯度为98. 49%。
实施例2 取Nisin粗品(盐析后经小板框压滤所得的湿粉，乳酸链球菌素含量约为 10% )300克，粉碎后加入2升盐酸(pH为6)和1升醋酸，充分搅拌3小时。慢慢加入600 克精盐搅拌溶解使溶液饱和，静置IO小时。离心分相(转速为5000rpm)10分钟，离心后整 个混合液分成四层，分别为轻相、乳酸链球菌素层、重相和杂质层，除去残渣(大量杂质)及 轻重相，取乳酸链球菌素层，加入2升醋酸搅拌混匀后再次离心分相去除液体，沉淀层即为 Nisin层取沉淀层，此时Nisin层呈乳白色，如颜色不是乳白色需反复离心分相直至颜色呈 乳白色。取沉淀物加入4升醋酸溶解后抽滤，抽干后真空干燥，干燥完成粉碎即获得高纯度 的乳酸链球菌素干粉。 经生物测定最终产品的效价为39276IU/mg，本发明所用的方法制得的乳酸链球 菌素产品纯度为98. 19%。
实施例3 取Nisin粗品(盐析后经小板框压滤所得的湿粉，乳酸链球菌素含量约为 9% )300克，粉碎后加入l升盐酸(pH为4)，浸泡6小时后加入2. 5升盐酸和2. 5升乙醇， 充分搅拌2小时。慢慢加入150克精盐搅拌2小时，静置16小时。整个混合液分成四层， 分别为轻相(主要是乙醇)、Nisin层、重相和杂质层。抽出轻相与Nisin层，离心分相(转 速为10000rpm)5分钟，除去残渣(大量杂质)及轻重相，离心后Nisin层呈灰白色。加入 2升乙醇搅拌混匀后再次离心除杂去除液体，沉淀层即为Nisin层取沉淀层，此时Nisin层呈乳白色，如颜色不是乳白色需反复离心分相直至颜色呈乳白色。加入4升乙醇搅拌均匀，
取2升进行喷雾干燥，在喷雾干燥过程中应不停的搅拌使其混匀。另外2升进行抽滤，抽干
后6(TC真空干燥12小时，粉碎后待测。 喷雾干燥的条件进口温度190-200°C 出口温度90-100。C 喷头转速5000rpm 进料量2L/h 最终喷雾干燥得8. 5g，生物测定效价为39294IU/mg，乳酸链球菌素产品纯度为 98. 24%。 真空干燥的8. 3g，生物测定效价为39376IU/mg，乳酸链球菌素产品纯度为 98. 44%。 尽管对本发明已作了详细的说明并引证了一些具体实例，但对本领域技术人员来 说，只要不离开本发明的精神和范围，作各种变化或修正是显然的。
权利要求
一种高纯度乳酸链球菌素的制备方法，其特征在于，其包括下述步骤1)先将乳酸链球菌素粗粉溶解于酸溶液、有机溶剂、或酸与有机溶剂的混合液中；2)然后搅拌静置、离心分相，取乳酸链球菌素层；3)再将乳酸链球菌素层用有机溶剂溶解，再次离心分相，去杂，干燥而成。
2. 权利要求l所述的方法，其特征在于，步骤l)中所述酸溶液的pH为2-6。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述有机溶剂为醇类、醚类或羧酸类。
4. 根据权利要求l所述的方法，其特征在于，步骤l)中所述乳酸链球菌素粗粉与其溶解液的比例为i : 10-20。
5. 根据权利要求l-4任意一项所述的方法，其特征在于，步骤2)搅拌时加入食盐使溶液饱和，搅拌时间为1-3个小时，静置时间为6-16个小时。
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，食盐与乳酸链球菌素粗粉的比例为0. 5-2:1。
7. 根据权利要求l-6任意一项所述的方法，其特征在于，所述离心分相采用离心转速为2000-10000转/分，时间为5-40分钟。
8. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述干燥为喷雾干燥或真空干燥。
全文摘要
本发明提供了一种高纯度乳酸链球菌素的制备方法，其以乳酸链球菌素的粗粉作为原料，经溶解、搅拌后静置、离心分相、除杂、取样溶解再次离心分相除杂、取样干燥，产品纯度在98％以上。本发明工艺方法安全、简便、产品纯度高，是一个良好的乳酸链球菌素纯化技术，可广泛的用于大规模的工业化生产过程中。
文档编号C07K1/14GK101701034SQ200910152930
公开日2010年5月5日 申请日期2009年9月22日 优先权日2009年9月22日
发明者叶万荣, 周斌, 周桂飞, 许峰, 陈剑, 陈艺强 申请人:浙江银象生物工程有限公司