专利名称：：Exendin4的类似物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及Exendin4类似物的多肽，该多肽具有降低血糖作用，可用于治疗II型糖尿病。本发明还提供了通过化学合成和重组DNA生产工艺生产这些多肽的方法。
背景技术：
：世界各国糖尿病患者人数逐年增多，现在中国有4000万，印度6000万，美国1800万，日本600万，糖尿病患者分为两种，一是胰岛素依赖型糖尿病(I型糖尿病)和非胰岛素依赖型糖尿病(II糖尿病)。其中，II型糖尿病占糖尿病患者的90%以上。II型糖尿病患者表现了许多特征，如餐后胰岛素分泌量不足，胰岛素分泌时间滞后，高血糖等。肥胖n型糖尿病患者周边细胞胰岛素受体敏感性降低，因而产生血糖高，血液中胰岛素水平也高的情况，糖化血红蛋白，HbAlc在8y。以上(正常为4一6%)。接着就会产生糖尿病并发症，如心脏病及肾功能衰竭等。如今，控制糖尿病的有6类药物參促胰岛素分泌类磺酰脲类，melitioneds类參非胰岛素促分泌药物胰岛素，a-葡萄糖苷酶抑制剂，双胍类及Thioagolinediones。根据英国UKPDS对数千名II型糖尿病患者的6年跟踪研究报告指出上述6类药物对II型糖尿病患者皆无能为力，不能遏制胰脏p-细胞的不断进行性的恶化，不能降低HbAlc水平，也不能阻止糖尿病的并发症如心脏病、肾衰竭因此需要研究新的II型糖尿病治疗药物。Exendin4和Exendin3是南美产巨靖蜴(Gilamonster,HelodermeSuspectum)的唾液中分泌的两种多肽，其中Exendin4由39个^&酸残基组成，其结构与GLP-1在氛基酸序列上有50%的同源性。研究表明Ex4作为GLP-1的类似物与GLP-1的受体相结合。动物及II型糖尿病患者的临床l、2、3期试验证明，Ex4能促进胰岛素原的合成，促胰岛素分泌，降低血糖，当血糖正常之后不再继续作用，因而不产生低血糖昏迷、休克，十分安全。它能降低HbAlc，增加p-细胞量，增加II型糖尿病患者胰岛素受体的敏感性，抑制胰高血糖素分泌等作用。与GLP-1相比，Ex4的临床应用，剂量为每日2次，每次5—10pg,而GLP-1则为200pg左右，且Ex4在血液中不受DPPIV二肽酶作用，半衰期比GLP-1长，但也存在不足之处，Ex4来源于巨蜥蜴，而GLP-1是人的内源物质，临床试验报告Ex4有52%的患者产生抗体(Diabetes(1997)1^，433—439;DiabetesCare(2002)^，330-336;JAMA(2002)巡，373-379;Diabetes(1995)仏1249-1258;Diabetes(2002)J12796-2803;DiabetesCare(2000)^64-69，N.Engl.J.Med(2002)里，393-463,Lancet(1998)巡，837-853)。关于Ex4改构的研究从C-端开始缩短肽链，结果表明Ex4的C-端9个氨基酸残基是活性所必需的，从N-端开始不断缩短肽链结果表明除掉一个氨基酸His,活性影响不大。然而，这些结果都是离体实验得到的，以GLP-1受体结合能力的大小，促胰岛瘤细胞分泌胰岛素的多少和cAMP的形成量来进行评价带有局限性(J.Biol.Chem.(1997)27221201-21206;RegulatoryPeptides(2003)Hi,153-158;TrendinpharmacologicalSci.(2003)21,377-383;PCT，WO03/011892,A2)。本发明目的在于改变Exendin4的化学结构，从C端缩短其肽链长度并改变氨基酸结构，保持其降血糖活性，从而提高与Exendin4的氨基酸序列的同源性，同时在结构上满足化学合成和基因工程方法生产的要求，适宜大量制造，降低成本，适应广大II型糖尿病患者的需要。本发明不采用离体的cAMP生成，胰岛素的分泌及GLP-1受体结合能力方法，而直接采用降低血糖方法对Exendin4类似物进行评价，有利于指导临床的应用。发明概述本发明提供了下列Exendin4类似物:HGEGTFTSDLSKQX,EEEAVX2LFIEWLKN"PPSX3HGEGTFTSDLSKQX,EEEAVX2LFIEWLKNG"PPSX3HGEGTFTSDLSKQX!EEEAVX2LFIEWUNGG，PSX3HGEGTFTSDLSKQXtEEEAVX山FIEWUNGGp3'PPSX3Em32(sEQiD醒)Em33(seqidno:2)Em34(seqidno:3)Em35(seqidno:4)HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNGGPSPPSX3Em36(seqidno:s)HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLOGGPSSPPSX3Em37(seqidno:6)HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNGGPSSGPPSX3Em38(seqidn0:7)X严Met、Uu或IlejX产Lys;X产Arg、0H或服2。另外本发明还提供了含有上述类似物的药物组合及制备上述Exendin4类似物的方法，使向广大的II型糖尿病患者大量提供Exendin4治疗药物成为可能。图1是合成的Exendin4类似物基因片断序列图2是基因工程法生产Exendin4类似物的流程图3是含多拷贝Exendin4基因的质粒的构建示意图4是用固相合成法合成Em32的示意图5是本发明Exendin4类似物的HPLC分析结构；图6A-B本发明Exendin4类似物的降血糖效果图7是本发明Exendin4类似物的促胰岛素分泌效果图。发明详述本发明的一个方面提供了结构发生改变，而仍具有降糖活性的Exendin4类似物，其具有如上所述的结构式。优选地，X,为Met或Leu,X2为Lys。更优选地，Xt为Met,X;为Arg。本发明的另一方面提供了含有上述Exendin4类似物的药物组合物，该组合物含有一种或多种具有上述结构式的化合物和一种药学上可接受的稀释剂或赋形剂，优选地该组合物为单位剂量形式，如片剂、丸剂、胶囊(包括持续释放或延迟释放形式).、粉剂、颗粒、酏剂、酊剂、糖浆和乳液，消毒的注射用溶液或悬液，气雾剂或液体喷剂，滴剂、针剂、自动注射装置或栓剂。例如，以片剂或胶嚢地形式口服给药，上述活性药物组分可以与一种口服的无毒的药学可接受的惰性载体，如乙醇、甘油、水及其类似物结合。另外，本发明还提供了上述化合物及药物组合物的在制备治疗疾病中的用途，优选地该疾病是糖尿病。本发明的又一个方面提供了制备上述Exendin4类似物的方法，包括化学合成方法和基因工程方法。对于X3为Arg的上述化合物，可以用基因工程方法来合成，还可以通过化学方法来合成，但优选用基因工程方法来合成。对于Xs为0H或卵2的上述化合物，可以通过化学方法来合成。优选的化学方法为固相合成法。实施例l:用基因工程方法生产HGEGTFTSDLSKQMEEEAVKLFIEWLKNPPSR"材料克隆载体含lac启动子质粒；宿主菌JM103:Promega公司；T4多核苷酸激酶试剂盒Promega^^司；T4连4妄酶试剂盒Promega7>司；限制性内切酶EcoRI、SalI、BglII、BamHI试剂盒Promega公司;分子量标准AJ)NA、(()Xi74DNA:Promega公司；低分子量标准蛋白质上海思吉生物制品有限公司；ATP(Adenosine-5，-triphosphate,腺香一5，—三磷酸)BoehringerMannheim7〉司；丙烯酸胺E.Merck;甲叉双丙烯醜胺Fluka;溴乙锭(Ethid咖bromid):Serva;Tris:A.R上海思吉生物制品有限公司(进口分装)；SDS:A.R上海思吉生物制品有限公司(进口分装)。LB培养液胰胨(Tryptone):0xoid,酵母浸出粉0xoid，氯化钠(A.R):中国医药集团上海化学试剂站。其他化学试剂均为AR级，中国医药集团上海化学试剂站提供。基因片段的连接<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>将以上四个基因片段(含量均为A"。M=3(0.D.))各加双蒸水30^1。取正负链DNA片段各2pl分别混合于两个塑料管中(即(l)+(3)和(2)+(4)),并加入下列试剂进行5，端磷酸化反应<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>混合后于37'C保温30分钟，然后于水浴中加热至95'C,维持3分钟后徐徐退火，自然冷却至室温。再将退火后的二个双股DNA片段混合(即(1+3)+(2+4))，并加入下列试剂<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>混匀后，于16'C维持过夜使之连接。然后经过12。/。PAGE或1%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，以入DM/EcoRI，SalI双酶切DM片段或(()x174DM/SalI酶切片段为分子量标准参照物，分取连接的基因片段经过抽提、回收、干燥，溶解备用。如图1所示，将获得的基因片断用EcoRI/SalI双酶切，从而获得粘性末端。Exendin4类似物基因的克隆取含有Lac启动子的质粒lpg(lng/ml)，力。1xIO中盐緩沖液lpl，新制备的双蒸水6pl，然后加入限制性内切酶EcoRI、Sail各1^1，于37'C保温30分钟，经氯仿-酚试剂抽提，并用氯仿洗涤水层后，用60°/异丙醇沉淀，离心、干燥后备用。用4^1双蒸水溶解上述质粒片段，并与连接所得的Exendin4类似物基因片段2pl混合，力。1x10连接酶緩冲液1^1、ATP1^1、及T4连接酶2nl，于16'C连接过夜。如图3所示，将获得的质粒经限制内切酶BamHI/SalI双酶切后，再与经BgIll/SalI双酶切的上述基因片断连接，就可以得到含双基因片断的质粒。反复进行该步骤可以得到含有8个串联拷贝的质粒。转化取一个大肠杆菌JM103的单菌落，置LB培养液中过夜，从中取500nl接种于100ralLB培养液中，于37。C振荡培养，当菌体浓度达A刚咖-O.6(0.D.)时停止。于6000rpm离心，收集菌体，菌体悬浮于2ml0.lmol/LMgCl2溶液中，于冰浴中维持20分钟。再于6000rpm离心，收集菌体，重新悬浮于2ml0.1mol/LCaCl2溶液中，置水浴中保存备用；或加15%甘油，于-84'C冷冻备用。取以上感受态细胞100^1,加入含Exendin4类似物基因的Lac启动子质粒，于冰浴中维持30分钟，然后转移至42'C维持2分钟，冷却，涂板(1%琼脂粉，含50叫/ml氨爷青霉素UP)),37'C培养过夜；挑取菌落，分别转移至含50pg/mlAP的LB培养液的试管中，37'C振荡培养过夜，以备抽提质粒鉴定用。与此同时，将所提取的每个单菌落都划线于LB-琼脂平板上，经37r培养过夜，得到工程菌PE8/JM103(含8个拷贝)，作留种用(备用种)。发酵发酵使用LB培养液，含蛋白胨10g，酵母粉5g及NaCl10g/L。接种PE8/JM103工程菌于IO升发酵液中进行发酵，条件为搅拌速度500rpm,通气量为每分钟一个罐体积，37'C,pH7~8,溶氧30~501发酵20小时后6000rpm离心收集菌体，菌体悬浮于20隨ol/L磷酸緩沖液中(含NaCllmol/L)。按1000:1加溶菌酶，30'C保温1小时，进行破壁，破壁后离心(10，OOOrpm)收集沉淀。沉淀悬浮于4倍体积的6M的盐酸胍中，搅拌抽提过夜，20,OOOrpm离心，将上清夜对水透析，10，OOO离心收集沉淀，得包涵体。将包涵体湿重100g悬浮于1000ml水中，搅拌条件下滴加10ml2-甲基琥珀酸酐，过程中不断添加少量Na2C03粉剂，维持溶液PH8-9，反应2小时，使之完全，然后对水透析去盐。在PH7.0,20mmole/L磷酸緩冲液中加胰蛋白酶(1:1000w/w)37。C保温2小时裂解，用4mole/L盐酸调节PH2-3，搅拌维持4小时除去保护基，经HPLC純化，梯度是A相含0.5%的甲酸水溶液；B相含乙腈80y。(v/v)及甲酸0.5%的溶液。A相，B相溶液以线形梯度洗脱，20ml/分钟流速280nm，220mM紫外波长检测，得纯品GLP-1类似物。整个工艺流程见图2。本发明的X3为Arg的其它化合物皆用如实施例1所述相同的方法制备。实施例2、用固相合成法合成Em32化学结构Em32HGEGTFTSDLSKQLEEEAVKLFIEWLKNPPS-OHHGEGTFTSDLSKQLEEEAVKLFIEWLKNPPS-NH2固相树脂的选择当多肽c-末端为羧基时选择常规的王树脂(WangResin,购于上海吉尔生化公司)进行固相合成。在合成结束后，将得到的带侧链保护基的多肽树脂进行裂解(即脱保护基和切断树脂一步完成)，而多肽的C-末端就从王树脂上断裂下来形成羧基。当多肽C-末端为酰胺时选择常规的^&树脂(Fmoc-PAL-PEG-PSResin,购于PEAppliedBiosystem公司)进行固相合成。在合成结束后，将得到的带侧链保护基的多肽树脂进行裂解(即脱保护基和切断树脂一步完成)，而多肽的c-末端就从氨基树脂上断裂下来形成酰胺。制备步骤17种带侧链保护基的Fmoc-氨基酸原料——固相合成——脱侧链保护;g:~HPLC纯化——冷冻干燥——Em321.氨基酸单体氨基酸名称来源Fmoc--L-AU-OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc--L-Arg(Pmc)-OHPeptideInstitute'Inc.Fmoc--L-Asp(0tBu)-OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc-隱L-Gln(Trt)--OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc--L-Glu歸u)-OHPEApplied.BiosystemFmoc--L-Gly-OHPeptideInstitute,Inc.Pmoc--L-His(Trt)画OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc--L-Ile-OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc--L-Leu-OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc--L-Lys(Trt)--OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc--L-Phe-OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc-陽L-Pro-OHPeptideInstitute,IncFmoc--L-Ser(tBu)國-OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc--L-Thr(tBu)--OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc.-L-Trp-OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc--L-Tyr(tBu)--OHPeptideInstitute,Inc.Fmoc.-L-Val-OHPeptideInstitute,Inc.2.固相合成的过程如图4所示，固相合成系将Em32的C-末端精氨酸先连接在M树脂(Fmoc-PAL-PEG-PS树脂)上，然后一个一个氨基酸从C-端向N-端延伸，共进4亍33步。(1)仪器设备AppliedBiosystetn多肽合成仪，433A型(2)试剂名称规格N-甲基吡咯烷酮多肽合成级二氯甲烷分析純六氩"比咬分析纯2.0MDIEA/NMP多肽合成级DMAP/DMF多肽合成级溶于DMF的HBTU100mmole/0.5MH0BT多肽合成级其中DMF-N,N-二曱基曱酰胺，DIEA-N,N-二异丙基乙胺，NMP-N-曱基吡咯烷酮，DMAP-二甲氨基吡啶，HOBT-l-羟基苯并三唑，HBTU-2-(lH-苯并三唑-基-1，1，'3,3-四甲基-Uroniumhedrofiuorophosphate。(3)操作；以0.25mmole规模为例，称取树脂约0.5g,置入多肽合成仪上的反应器中，将各种带保护基氨基酸称取lmmole装瓶，按Em32s的氨基酸序列从C-端向N-端排列在合成仪中，于25。C室温条件下，由电脑程序(SynthAssiat)控制自动进4亍脱Fmoc保护、活化、连结，4安图所示再进行下一轮循环，如此进行33步完成合成。氨基酸缩合过程中，需要将羧基活化，一般有HBTU-Fastmoc法，H0Bt/DCC法，通用的DCC，酸酐法等方法。我们采用HBTU-Fastmoc法进行羧基活化，如下图。当合成结束后，将得到的带侧链保护基的多肽树脂在多肽合成仪上吹干后称重，接着脱保护基和切断树脂一步完成。3.脱保护基及切断树脂(l)仪器设备磁力搅拌仪(2)试剂名称水去离子水三氟乙酸分析纯苯酚分析纯15巯基乙醇分析純笨甲醚分析純乙醚分析純将带保护基的Em32s多肽树脂置于具塞三角烧瓶，加入裂解试剂如下表试剂用量(ml)水0.50笨曱瞇0.50笨盼0.75巯基乙醇0.20三氟乙酸10.0然后在恒温3(TC条件下，电磁搅拌反应6小时；过滤、收集滤液，树脂用少量三氟乙酸洗涤；合并收集液与洗涤液，加入乙醚(约200-250mL)产生沉淀，过滤，沉淀用少量乙醚洗涤后立即^t入千燥器中。4.HPLC分离纯化仪器设备名称型号旋转蒸发仪ZFQ85A分析型HPLCLC10AD制备型HPLCLC8A紫外流动检测记录SIBAS,YOKOGAWA3057试剂名称规格Z精HPIX級乙醇HPLC级曱醇HPLC级三氟乙酸_HPLC级通过两步HPLC反相层析来制备得到纯度为95%以上的产品。(1).第一步粗分a),色语柱采用CI8介质的反相层析柱。b).流动相A相含O.5%(v/v)乙酸的水溶液；B相含乙睛80°/。(v/v)和0.5%(v/v)乙酸的水溶液；c).上样溶液将多肽-树脂经裂解去除树脂及侧链保护基的多肽粗品(纯度约30一50°/。)用0.5。/。乙酸溶液配成浓度为5.0mg/ml的溶液。d).冼脱条件采用线性梯度冼脱，操作流速为20ml/min,紫外检测波长为280nm，柱温为室温，洗脱梯度为时间(迈in)流动相B020'/。3060%5090%e).样品收集收集2(f60%B的冼脱主峰，产品纯度约75—85%。17(2).第二步精制a).色语柱采用C18介质的反相层析柱。b).流动相与第一步粗分相同。c).上样溶液将第一步粗分得到的收集液(纯度约75_85%)加同体积的双蒸水稀释。d).冼脱条件采用分段逐次冼脱，操作流速为20ml/min,紫外4企测波长为280nm,柱温为室温，冼脱程序为30%B2个柱体积35%B2个柱体积50%B6个柱体积；e).样品收集收集50%B的冼脱液，产品的纯度>95%。结果如图5所示。5.冷冻干燥(1)仪器设备设备型号真空冷冻干燥机FD-5低温水箱(2)操作先将Em32溶液放入低温冰箱中冷冻2小时，然后将其放进冷冻千燥设备中进行冻干得到所需化合物。本发明的X;为0H或冊2的其它化合物皆用如实施例2所述相同的方法制备。实施例3:Bxendin4类似物的降低血糖作用取C57小鼠(中国科学院上海动物中心)，8周龄(体重20g),9只，分为3组。只给^i水，禁食过夜。对照组0时，眼窦取血30pl，置于O.3ml0.9W(aCl溶液中，然后腹腔注射20%葡萄糖溶液20(^1，分别于60，120，150,180分钟同样采血，其中于120分钟时第二次腹腔注射20%葡萄糖200^1。血样经3000rpm离心5分钟后，使血球沉淀，取全部离心上清液，以国家卫生部，上海生物制品研究所出品的血糖测定试剂盒进行血糖测定。Ex4组，按照对照组同样方法，0时Wt后腹腔注射20y。葡萄糖溶液200^1，皮下注射Exendin4类似物2pg，血糖测定4姿对照組同样方法进行。Em32-38组，4要Ex4组同样方法进行。三组降血糖测定结果如图6A和B所示。实施例4:Exendin4类似物的促胰岛素分泌作用C57小鼠(体重20g)禁食过夜，腹腔注射40%葡萄糖lOOjnl，第一组仅给葡萄糖，皮下注射生理盐水100nl，第二组给糖后皮下注射Exendin4类似物溶液100pl(2ng含药量)，于0，2，5，10，20,30，60，90,120min取血20^d,吹入离心管中(预加20plEDTA1%)，离心取血清用胰岛素试剂盒(CrystalChemlnc)测胰岛素。结果见图719<110>上海华谊生物技术有限公司<120>Exendin4的类4以物<150>CN200410054300.4<151〉2004-09-06<160>7<210>1<211>32<212>PRT<213>Exendin-4类似、物<220><221>VARIANT<222>(14)..(14)<223>Xaa=Met,Leu或lie<220><221>VARIANT<222>(32)..(32)<223>Xaa-Arg,0H或NH2<400>1HisGlyGluGlyThrPheThrSerAspLeuSerLysGinXaaGluGlu151015GluAlaValLysLeuPhelieGluTrpLeuLysAsnProProSerXaa202530<210>2<211>33<212>PRT<213>Exendin-4类似物<220><221>VARIANT<222〉(14)..(14)<223〉Xaa-Met,Leu或lie<220><221〉VARIANT<222>(33).(33)<223>Xaa-Arg,0H或NH2<400>2HisGlyGluGlyThrPheThrSerAspLeuSerLysGinXaaGluGlu151015GluAlaValLysLeuPhelieGluTrpLeuLysAsnGlyProProSer202530Xaa<210>3<211〉34<212〉PRT<213〉Exendin-4类似物<220〉<221>VARIANT<222>(14)..(14)<223>Xaa=Met,Leu或lie<220><221>VARIANT<222>(34)..(34)<223>Xaa-Arg，OH或NH2<400>3HisGlyGluGlyThrPheThrSerAspLeuSerLysGinXaaGluGlu151015GluAlaValLysLeuPhelieGluTrpLeuLysAsnGlyGlyProPro202530SerXsa<210>4<211〉35<212>PRT<213>ExeruUn-4类A乂物<220><221>VARIANT<222>(14)..(14)〈223〉Xaa=Met，Leu或lie<220〉<221〉VARIANT<222>(35)..(35)<223>Xaa-Arg，OH或NH2<400〉4HisGlyGluGlyThrPheThrSerAspLeuSerLysGinXaaGluGlu151015GluAlaValLysLeuPhelieGluTrpLeuLysAsnGlyGlyProPro202530ProSerXaa35<210>5<211>36<212>PRT<213>Exendin-4类合又物<220><221>VARIANT<222>(")..(14)<223>Xaa=Arg,OH或NH2<220>22<221>VARIANT<222>(36)..(36)<223〉Xaa=Arg，OH或NH2<400>5HisGlyGluGlyThrPheThrSerAspLeuSerLysGinXaaGluGlu151015GluAlaValLysLeuPhelieGluTrpLeuLysAsnGlyGlyProSer202530ProProSerXaa35<210〉6<211>37<212>PRT<213>Exendin-4类似物<220><221>VARIANT<222>(14).(14)<223〉Xaa=Met,Leu或lie<220〉<221>VARIANT<222>(37)..(37)<223>Xaa=Arg,OH或NH2<400>6HisGlyGluGlyThrPheThrSerAspLeuSerLysGinXaaGluGlu151015GluAlaValLysLeuPhelieGluTrpLeuLysAsnGlyGlyProSer202530SerProProSerXaa35'<210>7<211>38<212>PRT<213>Exendin-4类似物<220><221>V組ANT<222>(14)..(14)<223〉Xaa-Met，Leu或lie'<220><221〉VARIANT<222>(38)..(38)<223>Xaa-Arg,0H或冊2<400>7HisGlyGluGlyThrPheThrSerAspLeuSerLysGinXaaGluGlu151015GluAlaValLysLeuPhelieGluTrpUuLysAsnGlyGlyProSer202530SerGlyProProSerXaa权利要求1、Exendin4类似物，其具有如下结构式HGEGTFTSDLSKQX1EEEAVX2LFIEWLKNGGP31PPSX3Em35其中X1＝Met、Leu或Ile；X2＝Lys；X3＝Arg、OH或NH2。2、如权利要求1所述的Exendin4类似物，其中所述的X,是Met。3、如权利要求1所述的Exendin4类似物，其中所述的X:是Leu。4、如权利要求1所述的Exendin4类似物，其中所述的X!是Ile。5、如权利要求1-4任一项所述的Exendin4类似物，其中所述的X;是Arg。6、如权利要求1-4任一项所述的Exendin4类似物，其中所述的X;是0H。7、如权利要求1-4任一项所述的Exendin4类似物，其中所述的X;是NH8、一种药物组合物，其含有如权利要求1-7任一项所述的Exendin4类似物。9、如权利要求8所述的药物组合物，其还含有药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。10、如权利要求9所述的药物组合物，其中，所述的载体选自于如下一组物质乙醇、甘油和水。11、如权利要求1-7任一项所述的Exendin4类似物在制备治疗糖尿病药物中的用途。12、如权利要求11所述的用途，其中的糖尿病是II型糖尿病。13、如权利要求8-10任一项所述的药物组合物在制备糖尿病药物中的用途。14、如权利要求13所述的用途，其中的糖尿病是II型糖尿病。全文摘要本发明提供了Exendin4类似物多肽，该多肽具有降低血糖作用，可用于治疗II型糖尿病。本发明还提供了含有该多肽的药物组合物和通过化学合成和重组DNA生产工艺生产这些多肽的方法。文档编号C07K14/435GK101643504SQ20091015975公开日2010年2月10日申请日期2004年9月6日优先权日2004年9月6日发明者波周,孙玉琨,张培璋申请人:上海华谊生物技术有限公司