专利名称：含磷的二苯乙烯类化合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的化合物，具体地说涉及含磷的二苯乙烯类化合物。
本发明还涉及上述化合物的制备方法和用途。
背景技术：
癌症是人类健康的一大威胁，人类的大多数肿瘤都是由外界环境因素造成的，全世界每年死于癌症的人数大于500万。虽然现在已有一些治疗办法，如外科手术、放疗、化疗等可使病人治愈，但治愈率不高。用化学药物预防及治疗癌症，目前是制服肿瘤的最有效方法之一。
具有1，2-二苯乙烯骨架的化合物及其聚合物总称为茋类化合物(Stilbenoid)，天然茋类化合物的单体分为顺式和反式两种。天然界中存在的苷或苷元以反式构型较多，并常形成(E)-3，4’，5-三羟基二苯乙烯(反式-白藜芦醇，trans-Resveratrol)的骨架及其衍生物，分布于多种植物中。其中，白藜芦醇主要以反式结构存在于桑椹、花生、葡萄等70多种植物中，1940年被首次从毛叶藜芦(Veratrum guandiform)的根部提取得到，它具有抗老年痴呆、抗氧化、抗微生物、治疗糖尿病、神经保护作用等诸多重要的生物活性。而且，白藜芦醇对癌变过程中细胞和组织变异的三个主要阶段(诱导、起始和发展)都有抑制作用，成为抑制和治疗组织癌变和肿瘤发生最有前途的药物之一。
目前，以天然产物中的活性成分为母体化合物，根据药物分子学的原理进行结构修饰，设计开发具有高活性、低毒副作用的新分子实体已是新药开发的一种重要手段。因此，以白藜芦醇的结构为基础进行修饰，有可能开发出高活性、低毒副作用、抗癌谱广、稳定性好、从而可应用于临床的的化合物。
发明内容
本发明的一个目的是研究开发一种毒性低、抗癌谱广、抗癌活性高、稳定性好的含磷的二苯乙烯类衍生物。
本发明的另一目的是提供上述化合物的制备方法。
本发明还提供含有上述化合物的药物组合物及其用途。
根据本发明的一个目的，以天然产物白藜芦醇及其苷(例如虎杖苷)为先导化合物，在酚羟基上引入含磷或含磷酸酯或它们的衍生物基团，设计得到一类具有如式(I)所示结构的含磷的二苯乙烯类化合物
或
式(I)中，p、q、r、s独立地为0-5的整数，且r+s＞0，m、n独立地为0-20的整数，式(I)化合物可以是顺式或反式结构； R、R′独立地选自H、C1-C20直链或支链烷基、C1-C20酰胺基、C1-C20酰氧基、C1-C20链烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷基羰基氨基、C1-C20烷基氨基、C2-C20直链或支链链烯基、C2-C20直链或支链链炔基、-CO2H、-CO2R′″、-NH2、-CN、-NHR′″、-OH、-OR′″、卤素、取代的C1-C20直链或支链烷基或者取代的C2-C20直链或支链链烯基，其中R′″是C1-C20直链或支链烷基、直链或支链烯基、或直链或支链炔基； A和B独立地选自H、C1-C20烷氧基、C1-C20酰胺基、C1-C20酰氧基、C1-C20链烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷基羰基氨基、C1-C20烷基氨基、羧基、氰基、卤素、羟基、糖基； Ar独立地为取代或未取代的苄基、苯基等； R1、R2、R3、R4独立地选自H、金属离子、铵根离子、C1-C20直链或支链烷基、C2-C20直链或支链链烯基、C2-C20直链或支链链炔基、C1-C20的未取代或取代的饱和脂环烃基、苄基、苯基； 在本发明中，所述糖基包括葡萄糖基、阿拉伯糖基、木糖基、来苏糖基、核糖基、甘露糖基、半乳糖基、阿洛糖基、果糖基、山梨糖基、夫糖基、鸡纳糖基、芹糖基、鼠李糖基、金李梅糖基；所述金属离子包括钾离子、钠离子、钙离子、镁离子、锌离子等。
进一步地，本发明的化合物具有式(II)所示的结构
式(II)中，p、q、r、s独立地为0-5的整数，且r+s＞0；式(II)化合物可以是顺式或反式结构； Y为Ar或-(CH2)x-；Ar为取代或未取代的苄基、苯基等；x为0-8的整数； R、R′独立地选自H、C1-C8直链或支链烷基、C1-C8酰胺基、C1-C8酰氧基、C1-C8链烷酰基、C1-C8烷氧羰基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷基羰基氨基、C1-C8烷基氨基、C2-C8直链或支链链烯基、C2-C8直链或支链链炔基、-CO2H、-CO2R′″、-NH2、-CN、-NHR′″、-OH、-OR′″、卤素、取代的C1-C8直链或支链烷基或者取代的C2-C8直链或支链链烯基，其中R′″是C1-C8直链或支链烷基、直链或支链烯基、或直链或支链炔基； A和B独立地选自H、C1-C8烷氧基、C1-C8酰胺基、C1-C8酰氧基、C1-C8链烷酰基、C1-C8烷氧羰基、C1-C8烷基羰基氨基、C1-C8烷基氨基、羧基、氰基、卤素、羟基、糖基； R1、R2、R3、R4独立地选自H、金属离子、铵根离子、C1-C8直链或支链烷基、C2-C8直链或支链链烯基、C2-C8直链或支链链炔基、C1-C8的未取代或取代的饱和脂环烃基、苄基、苯基。
本发明中，所述“C1-C8直链或支链烷基”包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等。
更优选地，本发明的化合物具有如通式(III)所示的结构
其中，R1、R2、R3、R4独立地选自H、金属离子、铵根离子、C1-C8直链或支链烷基、C2-C8直链或支链链烯基、C2-C8直链或支链链炔基、C1-C8的未取代或取代的饱和脂环烃基、苄基、苯基。
进一步地，典型的化合物包括白藜芦醇三氧代磷酸钠盐(化合物3)以及制备该化合物的中间体白藜芦醇三氧代磷酸(化合物2)和白藜芦醇三氧代磷酸乙酯(化合物1)，即式(I)中p＝0，q＝0，s＝2，r＝1，m＝1，n＝1，当R1-R4为乙基时，为化合物1；当R1-R4为氢时，为化合物2；当R1-R4为钠离子时，为化合物3，具体结构式如下
化合物3是一种具有抗肿瘤活性的含磷的二苯乙烯类化合物。在体外抑制肿瘤细胞生长实验中，该化合物显示出对体外培养的人肺癌、肝癌、血癌细胞的明显的生长抑制作用，并显示剂量-效应关系。该化合物可结合化疗、放疗、生物技术疗法治疗肿瘤，用于增强疗效和降低药物副作用。
本发明的化合物具有潜在的改善心血管、降血脂、抗炎、抗肿瘤等药理活性，并且经药理试验证明，本发明的部分化合物，与白藜芦醇和虎杖苷一样，可用于预防和治疗肿瘤，心血管疾病等，其中一些化合物对肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用，其活性甚至明显强于白藜芦醇和虎杖苷。而且，这些化合物因结构中存在磷酸酯基，能够成盐，与上述天然化合物相比，其稳定性更高，并且药代动力学参数也得到改善。
本发明还提供制备上述含磷的二苯乙烯类化合物的方法。
方法一通过白黎芦醇或虎杖苷等先导化合物，在碱性条件下，相转移催化剂作用下，与卤代磷酸酯类化合物缩合，得到含磷酸酯的二苯乙烯类衍生物，然后在碱性条件下水解得相应的酸，酸与碱反应得相应的盐。
所述的碱为氢氧化物、碳酸盐、有机或无机胺类化合物、四氢吡咯、哌啶、吗啉、哌嗪等的一种或其组合。“氢氧化物”的例子有氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等，“碳酸盐”的例子有碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、碳酸氢钙等，胺类化合物的例子有氨水、三乙胺、吡啶等。
所述的相转移催化剂为季铵盐，选自四丁基氯化铵、四丁基溴化铵和四丁基碘化铵，优选四丁基氯化铵。
例如，以白藜芦醇为原料，通过以下途径可以合成化合物1、2和3
白藜芦醇经步骤a与卤代磷酸酯反应得化合物1，化合物1经步骤b水解得酸2，或者白藜芦醇经步骤d与卤代磷酸反应直接得化合物2，化合物2经步骤3与碱反应得化合物3。并且对于化合物3，优选经步骤a、b、c制备，因为此路线条件温和、处理方便，反应总收率达55.7％。
本发明其他代表性化合物也可通过方法一来合成。例如，以白藜芦醇及虎杖苷为起始原料，分别与氯磷酸二乙酯、氯甲基磷酸二乙酯、溴乙基磷酸二乙酯、氯苄基磷酸二乙酯反应可合成化合物4、5、6、7，结构式如下所示
方法二本发明化合物的合成还可通过以下全合成方案来实现。
全合成方案
根据该方案，醛或酮化合物(IV)与苯酚化合物(V)可在钠氢和四氢呋喃(或乙酸酐和三乙胺)中缩合以形成不饱和酚(VI)，将化合物VI与卤代磷酸酯化合物反应，然后在酸性条件下水解，在碱性条件下成盐，从而形成目标化合物I。此外，不饱和酚VI直接与卤代磷酸酯化合物发生取代反应也可得到目标化合物1。
例如，通过上述方案可以合成得到化合物11、12、13
根据本发明的另一方面，提供一种药物组合物，包含上述含磷的二苯乙烯类化合物为有效成分和药学上可接受的载体。
本发明的药物组合物可根据任何本领域公知的剂型制备方法，用于制备预防和治疗肿瘤、改善心血管、降血脂等的药物。特别地，该药物化合物用于预防或治疗异常细胞生长，所述异常细胞生长可以表现为肿瘤，所述肿瘤可以是肺癌、肝癌、血癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、黑素癌、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、软组织肉瘤、尿道癌、前列腺癌、淋巴细胞瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、脊椎肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤，尤其是肺癌、肝癌、血癌、胰腺癌或乳腺癌。
所述组合物可以单独使用、或与一种或多种其他抗肿瘤药物联合使用。与载体物质组合以制备单一剂型的活性成分的量可以依据所治疗的宿主及具体的给药方式而改变。
所述药物组合物可制备成适于给药的任意形式的制剂，例如适用于肠内(例如口服或直肠给药)、局部或肠外给药、或通过吸入喷雾向哺乳动物(包括人)给药，例如口服、注射、植入、外用等形式。其中，口服包括片剂(普通片、含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分色片、可溶片、泡腾片、阴道片或阴道泡腾片、缓释片、控释片、肠溶片、口腔控释片等)；胶囊剂(硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、控释胶囊、肠溶胶囊等)；丸剂(滴丸、糖丸、小丸)；口服液体制剂(糖浆剂、口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂)；颗粒剂(混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒、控释颗粒等)；散剂。注射剂包括注射液、注射无菌粉末或无菌块状物(包括采用溶剂结晶法、喷雾干燥法或冷冻干燥法等工艺制备)、注射用浓溶液；植入剂；外用制剂包括栓剂；气雾剂；粉雾剂；喷雾剂；膜剂；凝胶剂；贴剂等制剂形式。
具体实施例方式 下列实施例用于进一步说明本发明，并不意味着对本发明范围的任何限制。
试剂与仪器 白黎芦醇、虎杖苷购自陕西赛德高科技生物股份有限公司，含量≥99％，其他试剂均为市购分析纯试剂。
熔点测定采用申光牌WRR熔点仪； 元素分析测定采用德国Elmentar Vario EL元素分析仪； 核磁共振波谱测定采用美国Varian UNITY INOVA 400超导脉冲傅里叶变换核磁共振谱仪； 质谱测定采用英国VG ZAB-HS色质联用仪。
实施例1化合物4的合成
在50mL三颈瓶中，加入1.95g(5mmol)虎杖苷和4.14g(30mmol)无水碳酸钾，加入35mL DMF中，降温至-5℃，搅拌下缓慢滴加2.2mL(15mmol)氯磷酸二乙酯，缓慢升温至100℃，TLC跟踪反应，至原料点完全消失，约15小时后反应结束，加入至30mL水中，用二氯甲烷萃取(10mL×5)，分层，有机相用水洗(15mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，固体物用300-400目的硅胶经柱色谱分离，得1.51g白色固体化合物。收率45.7％；熔点205-206℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.11-1.15(m，12H)，3.40-3.49(m，12H)，3.54-3.57(m，1H)，3.76-3.79(m，2H)，3.91-3.93(m，1H)，4.07-4.15(m，8H)，5.88-5.94(m，1H)，6.09-6.49(m，3H)，6.73-7.25(m，6H)；MS(FAB)663(M+)。
实施例2化合物5的合成
在50mL三颈瓶中，加入1.14g(5mmol)白藜芦醇、4.15g(30mmol)无水碳酸钾，加到35mL丙酮中，降温至-5℃，搅拌下缓慢滴加2.9mL(20mmol)氯磷酸二乙酯，缓慢升温至室温，TLC跟踪反应，至原料点完全消失，约4小时后反应结束，加入至30mL水中，用二氯甲烷萃取(10mL×5)，分层，有机相用水洗(15mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，固体物用300-400目的硅胶经柱色谱分离，得1.95g黄色液体化合物。收率61.3％；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.30-1.41(m，18H)，4.18-4.31(m，12H)，6.94-7.12(m，3H)，7.20-7.26(m，4H)，7.46-7.52(d，J＝8.6Hz，2H)；MS(FAB)637(M+)。
实施例3化合物6的合成
在100mL的三颈烧瓶中，加入2.28g(10mmol)白藜芦醇，8.3g(60mmol)无水碳酸钾，同时加入50mL DMF，搅拌下滴加10.9mL(60mmol)溴代乙基磷酸二乙酯，加毕，慢慢升温至100℃，TLC跟踪反应，至原料点完全消失，约4小时后反应结束，停止加热，待冷却后，加入至120mL水中，用二氯甲烷萃取(40mL×5)，分层，有机相用水洗(60mL×3)，其后用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，固体物用300-400目的硅胶经柱色谱分离，得4.83克白色固体的化合物6。收率67.0％；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.40-1.57(m，18H)，3.99-4.14(m，6H)，6.29-6.31(t，J＝2.1Hz，1H)，6.56-6.63(m，2H)，6.81-6.90(m，3H)，6.98-7.02(d，J＝16.2Hz，1H)，7.37-7.43(m，2H)；MS(FAB)721(M+)。
实施例4化合物7的合成
在100mL的三颈烧瓶中，加入2.28g(10mmol)白藜芦醇，4.15g(30mmol)无水碳酸钾，同时加入50mLDMF，搅拌下滴加4.41mL(20mmol)的氯代苄基磷酸二乙酯，加毕，慢慢升温至100℃，TLC跟踪反应，至原料点完全消失，约4小时后反应结束，停止加热，待冷却后，加入至60mL水中，用二氯甲烷萃取(20mL×5)，分层，有机相用水洗(30mL×3)，其后用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，固体物用300-400目的硅胶经柱色谱分离，得2.28克白色固体的化合物7。收率50.3％；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.40-1.45(m，6H)，4.01-4.08(m，4H)，6.29-6.30(t，J＝2.2Hz，1H)，6.55-6.56(m，1H)，6.61-6.63(m，1H)，6.81-6.90(m，3H)，6.98-7.02(d，J＝16.2Hz，1H)，7.37-7.43(m，2H)；MS(FAB)455(M+)。
实施例5化合物1的合成
在1000mL的三颈烧瓶中，加入22.8g(100mmol)白黎芦醇，600mL DMF，82.8g(600mmol))无水碳酸钾，搅拌下滴加111.9g(600mmol)氯甲基磷酸二乙酯，加毕，慢慢升温至100℃，TLC跟踪反应，至原料点完全消失，约4小时后反应结束，停止加热，待冷却后，加入至600mL水中，用二氯甲烷萃取(200mL×50)，所得有机相用水洗(300mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，固体物用300-400目的硅胶经柱色谱分离，得42.7克白色固体的化合物。收率63.0％；熔点198-200℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.11-1.18(m，18H)，4.07-4.15(m，12H)，4.42-4.53(m，6H)，6.13-6.17(m，1H)，6.49-6.53(m，2H)，6.77-6.84(m，2H)，6.99-7.03(m，2H)，7.31-7.36(m，2H)；MS(FAB)679(M+)。
实施例6化合物2的合成
在500mL的三颈烧中，将13.56g(20mmol)的化合物1溶于200mL乙醇中，然后加入120mL水，此时可观察到有白色沉淀析出，于混合物中加入12g(300mmol)的氢氧化钠，温度加热50℃时，TLC跟踪反应至原料点消失，约2小时后，沉淀全部溶解，将溶剂蒸干，水200mL溶解，二氯甲烷及乙酸乙酯各200mL洗，稀盐酸酸化，析出白色沉淀，真空干燥得三乙酸取代的白色粉末状固体9.28克。产率91.0％；熔点224-226℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.57-4.63(m，6H)，6.13-6.18(m，1H)，6.49-6.54(m，2H)，6.77-6.83(m，2H)，6.91-6.99(d，J＝4.2Hz，2H)，7.31-7.35(m，2H)，12.03(s，br，6H)；MS(FAB)511(M+)。
实施例7化合物3的合成
称取1.2g(30mmol)的氢氧化钠溶于50mL水中，搅拌下加入5.11g(10mmol)上述磷酸化合物，不断搅拌至几乎澄清，过滤，所得滤液浓缩除水，干燥，得6.23克白色粉末状固体化合物3。产率97.2％；熔点＞260℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.42-4.50(m，6H)，6.13-6.18(m，1H)，6.49-6.53(m，2H)，6.93-6.98(m，2H)，7.02-7.06(m，1H)，7.19-7.23(m，1H)，7.56(m，2H)。
实施例8化合物10的合成
在氮气保护下，称取将3.04g(20mmol)3，5-二甲氧基苯基磷酸酯8溶于40mL干燥的四氢呋喃中，温度降低至-5℃，加入4.8g(200mmol)钠氢。搅拌下30min，然后加入5.76g(20mmol)醛9(其溶解于60mL干燥的四氢呋喃中)，加毕，慢慢升温至室温，TLC跟踪反应，至原料点完全消失，约16h后反应结束。降温至0℃，加入20mL水淬灭反应，用浓度1M的盐酸调节pH＝6，然后用乙酸乙酯(100mL×4)萃取，有机层用饱和食盐水洗(60mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，固体物用300-400目的硅胶经柱色谱分离，得2.74克白色固体化合物。收率48.0％；熔点90.5-94℃；1H-NMR(400MHz，CDCl3-d6)δ3.82(s，6H)，3.90(s，3H)，6.60-6.78(t，J＝2.2Hz，1H)，6.63-6.66(d，J＝2.2Hz，2H)，6.82-6.92(m，2H)，6.96-7.00(m，2H)，7.13-7.15(d，J＝2.1Hz，1H)；MS(FAB)287(M+)。
实施例9化合物11的合成
在100mL的三颈烧瓶中，加入2.74g(9.6mmol)的化合物10，加入60mLDMF、0.42mL(30mmol)三乙胺，搅拌下滴加5.45mL(30mmol)溴代乙基磷酸二乙酯，加毕，慢慢升温至100℃，TLC跟踪反应，至原料点完全消失，约4小时后反应结束，停止加热，待冷却后，加入至60mL水中，用二氯甲烷萃取(20mL×5)，所得有机相用水洗(30mL×3)，其后用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，固体物用300-400目的硅胶经柱色谱分离，得2.89克白色固体化合物。收率67.0％；熔点219-221℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.13-1.16(m，6H)，2.19-2.23(m，2H)，3.83(s，6H)，3.92(s，3H)，4.07-4.10(m，4H)，4.18-4.20(m，2H)，6.62-6.80(t，J＝2.2Hz，1H)，6.64-6.67(d，J＝2.2Hz，2H)，6.84-6.94(m，2H)，6.97-7.01(m，2H)，7.13-7.15(d，J＝2.1Hz，1H)；MS(FAB)451(M+)。
实施例10化合物12的合成
在250mL的三颈烧中，将2.89g(6.4mmol)化合物11溶于60mL乙醇中，然后加入40mL水，此时可观察到有白色沉淀析出，于混合物中加入3.84g(96mmol)氢氧化钠，温度加热50℃时，TLC跟踪反应至原料点消失，约2小时后，沉淀全部溶解，将溶剂蒸干，水60mL溶解，二氯甲烷及乙酸乙酯各60mL洗，稀盐酸酸化，析出白色沉淀，真空干燥得白色粉末状固体2.35克。产率93.0％；熔点228-229℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.82(m，2H)，3.83(s，6H)，3.92(s，3H)，4.18-4.20(m，2H)，6.62-6.80(t，J＝2.2Hz，1H)，6.64-6.67(d，J＝2.2Hz，2H)，6.84-6.94(m，2H)，6.97-7.01(m，2H)，7.13-7.15(d，J＝2.1Hz，1H)；MS(FAB)395(M+)。
实施例11化合物13的合成
称取0.72g(18mmol)的氢氧化钠溶于10mL水中，搅拌下加入2.35g(6mmol)上述磷酸化合物12，不断搅拌至几乎澄清，过滤，所得滤液浓缩除水，干燥，得2.58克白色粉末状固体化合物13，产率98.0％，熔点＞260℃。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.84(m，2H)，3.84(s，6H)，3.94(s，3H)，4.19-4.21(m，2H)，6.64-6.82(t，J＝2.2Hz，1H)，6.65-6.68(d，J＝2.2Hz，2H)，6.86-6.96(m，2H)，6.98-7.02(m，2H)，7.14-7.16(d，J＝2.1Hz，1H)；MS(FAB)439(M+)。
实施例12化合物的药理活性试验 以化合物3为例，对化合物活性进行了测定 1)化合物3对体外肿瘤细胞生长的抑制作用 a)IC50值的测定(Lewis肺癌) 取Lewis肺癌细胞，培养于含10％小牛血清DMEM营养液中，接种于96孔培养板，1×104细胞/孔，置于37℃，5％CO2孵箱中，用10％小牛血清的DMEM培养液，将该化合物稀释至所需浓度，分别加入96孔板各孔中，每浓度3孔，6孔空白对照。培养72小时，加入MTT液，1小时后加DMSO显色，酶标仪测OD值。计算各浓度药物杀伤率，按坐标法得出化合物3对人肝癌细胞的IC50＝12.9μg/ml。
b)用与上述试验相同的方法，测出化合物3对人肝癌细胞的IC50＝12.9μg/ml。
c)用与上述试验相同的方法，测出化合物3对人白血病细胞(血癌)IC50＝14.1μg/ml。
以上试验结果显示，该化合物具有抑制体外非实体瘤细胞的功能。
2)化合物3抗肿瘤作用试验 a)取30只体重21-22g昆明种小鼠，雌雄各半，随机分成3组，每组10只，右腹皮下接种肝癌H22细胞悬浮液0.21ml/只。次日，取2组分别腹腔注射此化合物60mg，30mg/kg，每日一次，连续7天，对照组IP DMSO+生理盐水。于停药后次日处死小鼠，称体重，瘤重，计算抑瘤率，结果见下表1。
表1化合物3对肝癌的抑瘤率
表1的结果显示，化合物3对肝癌H22细胞具有明显的抑制作用，并且抑癌率随给药剂量的增大而增大。
b)体外癌细胞生长抑制实验 以8μg/ml、16μg/ml化合物3处理人肺癌细胞(Lewis)及白血病细胞，观察细胞动态生长情况4天。两天以内给药组与对照组细胞差别不大，第三天开始，给药组细胞数急剧下降，而对照组癌细胞继续呈对数生长。随着时间增加，组间差别愈大。
上述药理试验结果表明，本发明所述化合物对肝癌细胞(实体瘤)、白血病细胞(非实体瘤)的生长具有明显的抑制作用，并显示剂量-效应关系。
权利要求
1.含磷的二苯乙烯类化合物，具有如式(1)所示的结构
其中，p、q、r、s独立地为0-5的整数，且r+s＞0，m、n独立地为0-20的整数，所述化合物为顺式或反式结构；
R、R′独立地选自H、C1-C20直链或支链烷基、C1-C20酰胺基、C1-C20酰氧基、C1-C20链烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷基羰基氨基、C1-C20烷基氨基、C2-C20直链或支链链烯基、C2-C20直链或支链链炔基、-CO2H、-CO2R′″、-NH2、-CN、-NHR′″、-OH、-OR′″、卤素、取代的C1-C20直链或支链烷基或者取代的C2-C20直链或支链链烯基，其中R′″是C1-C20直链或支链烷基、直链或支链烯基、或直链或支链炔基；
A和B独立地选自H、C1-C20烷氧基、C1-C20酰胺基、C1-C20酰氧基、C1-C20链烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷基羰基氨基、C1-C20烷基氨基、羧基、氰基、卤素、羟基、糖基；所述糖基选自葡萄糖基、阿拉伯糖基、木糖基、来苏糖基、核糖基、甘露糖基、半乳糖基、阿洛糖基、果糖基、山梨糖基、夫糖基、鸡纳糖基、芹糖基、鼠李糖基、金李梅糖基；
Ar独立地为取代或未取代的苄基、苯基；
R1、R2、R3、R4独立地选自H、金属离子、铵根离子、C1-C20直链或支链烷基、C2-C20直链或支链链烯基、C2-C20直链或支链链炔基、C1-C20的未取代或取代的饱和脂环烃基、苄基、苯基；所述金属离子选自钾离子、钠离子、钙离子、镁离子、锌离子。
2.权利要求1所述的含磷的二苯乙烯类化合物，其具有式(II)所示的结构
其中，p、q、r、s独立地为0-5的整数，且r+s＞0；所述化合物为顺式或反式结构；
Y为Ar或-(CH2)x-；Ar为取代或未取代的苄基、苯基等；x为0-8的整数；
R、R′进一步独立地选自H、C1-C8直链或支链烷基、C1-C8酰胺基、C1-C8酰氧基、C1-C8链烷酰基、C1-C8烷氧羰基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷基羰基氨基、C1-C8烷基氨基、C2-C8直链或支链链烯基、C2-C8直链或支链链炔基、-CO2H、-CO2R′″、-NH2、-CN、-NHR′″、-OH、-OR′″、卤素、取代的C1-C8直链或支链烷基或者取代的C2-C8直链或支链链烯基，其中R′″是C1-C8直链或支链烷基、直链或支链烯基、或直链或支链炔基；
A和B进一步独立地选自H、C1-C8烷氧基、C1-C8酰胺基、C1-C8酰氧基、C1-C8链烷酰基、C1-C8烷氧羰基、C1-C8烷基羰基氨基、C1-C8烷基氨基、羧基、氰基、卤素、羟基、糖基；
R1、R2、R3、R4进一步独立地选自H、金属离子、铵根离子、C1-C8直链或支链烷基、C2-C8直链或支链链烯基、C2-C8直链或支链链炔基、C1-C8的未取代或取代的饱和脂环烃基、苄基、苯基。
3.权利要求1所述的含磷的二苯乙烯类化合物，其具有通式(III)所示的结构
其中，R1、R2、R3、R4进一步独立地选自H、金属离子、铵根离子、C1-C8直链或支链烷基、C2-C8直链或支链链烯基、C2-C8直链或支链链炔基、C1-C8的未取代或取代的饱和脂环烃基、苄基、苯基。
4.权利要求1所述的含磷的二苯乙烯类化合物，其中所述化合物为白藜芦醇三氧代磷酸乙酯(1)或白藜芦醇三氧代磷酸(2)，结构式如下
5.权利要求1所述的含磷的二苯乙烯类化合物，其中所述化合物为和白藜芦醇三氧代磷酸钠盐(3)，结构式如下
6.制备权利要求1所述的含磷的二苯乙烯类化合物的方法，包括醛或酮化合物(IV)与苯酚化合物(V)在钠氢和四氢呋喃中、或在乙酸酐和三乙胺中缩合以形成不饱和酚(VI)，化合物VI与卤代磷酸酯化合物反应，然后在酸性条件下水解，在碱性条件下成盐，得到目标化合物I，或者不饱和酚VI
与卤代磷酸酯化合物发生取代反应得到目标化合物1，反应路线如下
7.制备权利要求5所述的含磷的二苯乙烯类化合物的方法，包括白黎芦醇在碱性条件下，相转移催化剂作用下，与卤代磷酸酯类化合物缩合，得二苯乙烯磷酸酯类衍生物，然后在碱性条件下水解得相应的酸，酸与碱反应得相应的盐。
8.权利要求6或7所述的方法，其中所述碱为氢氧化物、碳酸盐、有机或无机胺、四氢吡咯、哌啶、吗啉、哌嗪中的一种或其结合。
9.权利要求7所述的方法，其中所述相转移催化剂为季铵盐。
10.一种药物组合物，含有权利要求1所述含磷的二苯乙烯类化合物与药学上可接受的辅料。
11.权利要求1所述的含磷的二苯乙烯类化合物在制备治疗或预防肿瘤疾病的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种具有式(I)所示结构的含磷的二苯乙烯类化合物及其制备方法，以及含有该化合物的药物组合物及其在用于制备治疗或预防肿瘤疾病的药物中的应用。
文档编号C07F9/12GK101691384SQ200910175158
公开日2010年4月7日 申请日期2009年9月23日 优先权日2008年10月8日
发明者唐田, 赵金华, 王彦表, 蔡敏英, 冯汉林, 于琳 申请人:深圳海王药业有限公司