专利名称：5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及新化合物及其制备方法和应用，具体是5- (4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻 唑衍生物及其制备方法与应用。
背景技术：
中国13亿人中每年有百万人死于癌症，需要治疗的200万左右，死亡130万左右。 癌症已成为人类的一大杀手。噻唑类化合物具有抗惊厥、抗病毒、抗菌和杀虫等作用。邵玲 等描述了 4-芳基-5-三唑基噻唑-2-亚胺类化合物，生物活性测定结果表明部分化合物对 苹果轮纹菌具有杀菌活性(高等学校化学学报，2007，28，270)。Michael等描述了 2-氨基 噻唑类乳腺癌药物(Bioorg&Med.Chem. 2004，12，1029)；姜凤超等描述了对细胞凋亡有抑 制活性的4-芳基噻唑-2-亚胺衍生物(药学学报，2006，41 :727)。Lin等描述了西佛碱类 化合物对C0X-2具有选择性抑制作用(Bioorg&Med Chem, 2008,16 (5) :2697)。何道航等描 述了 4-芳基-2-(2-羟苄亚氨基)噻唑的合成与杀菌活性[华南理工大学学报自然科学版， 2008，(3) 60]；中国专利(CN 101602761)描述了 4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄 亚氨基噻唑的制备与杀菌活性。5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物⑴的制备与抗肿瘤活性没有研究报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一类化学结构式(I)所示的5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基 噻唑衍生物。
x2其中，I式中&选自氢，羟基，甲氧基，硝基，氨基和氯；X2选自氢，硝基，氨基， 甲氧基，氯，溴和碘；x3选自氧，甲基，乙基，硝基，甲氧基，氯，溴，氨基和二甲氨基；x4选自 氢，硝基，氨基，甲氧基，氯，溴和碘。本发明的目的还在于提供所述5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物的制备方 法。5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物制备方法按如下化学反应式进行
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本发明的目的还在于提供所述5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物在制药中 的应用。所述的5-(4_氯苯甲基)-4_叔丁基噻唑衍生物对于人宫颈癌细胞、人肝癌细胞、 人鼻咽癌细胞等具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。本发明与现有技术相比具有如下优点1、5- (4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物是新化合物。2、首次发现5- (4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物对于人宫颈癌细胞、人肝癌细 胞、人鼻咽癌细胞等具有抗肿瘤活性。
具体实施例方式以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。实施例1 2- (2-羟基-5-溴苄亚氨基)-5- (4-氯苄基)_4_叔丁基噻唑的制备 lmmol 5_(4_氯苄基)_4_叔丁基2_氨基噻唑溶于5mL苯中，滴加lmmol 2-羟 基-5-溴苯甲醛苯溶液，加0. 2mL哌啶催化，回流1. 5h。冷却，抽滤，重结晶得2_(2_羟 基-5-溴苄亚氨基)-5-(4_氯苄基)-4_叔丁基噻唑。mp 145 148 °C，收率77.8%，
NMR(400MHz，CDC13) S 1. 43 (s，9H，3 X CH3)，4. 27 (s，2H，CH2) ,6. 91 (d, J = 8. 8Hz, 2-H0C6H33-H)，7. 15 (d, J = 8. 0Hz，2H，4_C1C6H42，6_H)，7. 30 (d, J = 8. 8Hz，2H，4_C1C6H43， 5-H) ,7. 46 (dd, J = 8. 8Hz, J = 2. 4Hz, 1H, 2-H0C6H34-H) , 7. 58 (d, J = 2. 0Hz, 1H, 2-H0C6H36-H)，9. 02 (s, 1H，N = CH)，12. 32 (s，1H, OH) ；C21H2。BrClN20S 元素分析(计算值)/%: C 54. 30 (54. 38)，H 4. 37 (4. 35)，N 6. 00 (6. 04)。实施例2 2- (2-羟基-3，5- 二溴苄亚氨基)_5_ (4_氯苄基)~4~叔丁基噻唑的制
备 lmmol 5_(4_氯苄基)_4_叔丁基2_氨基噻唑溶于5mL苯中，滴加lmmol 2-羟
基-3，5-二溴苯甲醛的苯溶液，加0.2mL哌啶催化，回流1. 5h。冷却，抽滤，重结晶得 2-(2_羟基-3，5-二溴苄亚氨基)-5-(4_氯苄基)-4_叔丁基噻唑，mp 171 174°C，收 率 80. 2 %/H NMR (400MHz, CDC13) 6 1. 42 (s，9H，3 X CH3)，4. 28(s，2H，CH2)，7. 14 (d, J = 8. 0Hz，2H，4-C1C6H42，6-H)，7. 30 (d, J = 8. 4Hz，2H，4_C1C6H43，5_H)，7. 57 (d, J = 2. 0Hz, 1H, 2-H0C6H24-H)，7. 76 (d, J = 2. 0Hz, 1H，2-H0C6H26_H)，9. 05 (s, 1H，N = CH)，13. 30 (s, 1H, OH)。 C21H19Br2ClN20S 元素分析(计算值)/% :C 46. 43(46. 47), H 3. 55(3. 53)，N 5.12(5. 16)。
实施例3 2-(2-羟基-3，5-二氯苄亚氨基)-5-(4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑的制 备lmmol 5_(4_氯苄基)_4_叔丁基2_氨基噻唑溶于5mL苯中，滴加lmmol 2-羟 基-3，5-二氯苯甲醛的苯溶液，加0.2mL哌啶催化，回流3.5h。冷却，抽滤，重结晶得 2-(2_羟基-3，5-二氯苄亚氨基)-5-(4_氯苄基)-4_叔丁基噻唑，mp 161 164°C，收 率 72. 5 %/H NMR (400MHz, CDC13) 6 1. 43 (s，9H，3 X CH3)，4. 28(s，2H，CH2)，7. 14 (d, J = 8. 4Hz，2H，4-C1C6H42，6-H)，7. 30 (d, J = 7. 6Hz，2H，4_C1C6H43，5_H)，7. 39 (d, J = 2. 4Hz, 1H, 2-H0C6H24-H)，7. 47 (d, J = 2. 4Hz, 1H，2-H0C6H26_H)，9. 06 (s, 1H，N = CH)，13. 12 (s，1H, OH)。 C21H19C13N20S 元素分析(计算值)/% :C 55.51 (55. 58), H 4. 19(4. 22), N 6. 19(6. 17)。实施例4 2-(2-羟基-3，5-二碘苄亚氨基)-5-(4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑的制 备lmmol 5_(4_氯苄基)_4_叔丁基2_氨基噻唑溶于5mL苯中，滴加lmmol 2-羟 基-3，5-二碘苯甲醛的苯溶液，加0.2mL哌啶催化，回流3. Oh。冷却，抽滤，重结晶得 2-(2-羟基-3，5-二碘苄亚氨基)-5-(4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑，mp 133 135 °C，收 率 70. 2 %/H NMR(400MHz, CDC13) 6 1. 41 (s，9H，3XCH3)，4. 27 (s，2H，CH2)，7. 13 (d, J = 8. 4Hz，2H，4-C1C6H42，6-H)，7. 30 (d, J = 8. 8Hz，2H，4_C1C6H43，5_H)，7. 75 (d, J = 2. 0Hz, 1H, 2-H0C6H24-H)，8. 11 (d，J = 2. 0Hz，1H，2-H0C6H26_H)，8. 96(s，lH，N = CH), 13. 56(s，lH，0H)。 C21H19C1I2N20S 元素分析(计算值)/% :C 39. 65(39. 61)，H 3. 04(3. 01), N 4.37(4.40)。实施例5 2- (3-硝基苄亚氨基)-5- (4_氯苄基)~4~叔丁基噻唑的制备 lmmol 5_ (4-氯苄基)-4-叔丁基2_氨基噻唑溶于5mL苯中，滴加lmmol 3-硝基 苯甲醛的苯溶液，加0. 2mL哌啶催化，回流2. 5h。冷却，抽滤，重结晶得2-(3-硝基苄亚氨 基)-5-(4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑，mp 126 128°C，收率 76. 3%，力 NMR(400MHz, CDC13) 8 :1. 42(s，9H，3XCH3)，4. 26(s，2H，CH2)，7. 14 (d, J = 8. 0Hz，2H，C6H4C1 3，5_H)，7. 26 (d, J =8. 0Hz，2H，C6H4C1 2，6_H)，7. 65 8. 50 (m，4H，3_02NC6H4)，9. 25 (s，1H，N = CH)。实施例6 2-(2-羟基-5-硝基苄亚氨基)-5-(4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑的制备 lmmol 5_(4_氯苄基)_4_叔丁基2_氨基噻唑溶于5mL苯中，滴加lmmol 2-羟 基-5-硝基苯甲醛的苯溶液，加0. 2mL哌啶催化，回流1. 5h。冷却，抽滤，重结晶得 2-(2_羟基-5-硝基苄亚氨基)-5-(4_氯苄基)-4_叔丁基噻唑，mp 161 164 °C，收 率 65. 0 %/H NMR (400MHz, CDC13) 6 1. 45 (s，9H，3 X CH3)，4. 29(s，2H，CH2)，7. 09 (d, J = 9. 2Hz, 2-H0C6H33-H), 7. 16 (d, J = 8. 4Hz，2H，4_C1C6H42，6_H)，7. 31 (d，J = 8.4Hz，2H， 4-ClC6H43，5-H)，8. 28(dd, J = 8. 8Hz, J = 2. 4Hz, 1H，2-H0C6H34_H)，8. 45 (d, J = 2. 4Hz, 1H, 2-H0C6H36-H)，9. 19 (s，1H，N = CH)，13. 24(s，1H，OH)。C21H2。C1N303S 元素分析(计算值)/% C 58. 61 (58. 67)，H 4. 65 (4. 69)，N 9. 73 (9. 77)。实施例7 2- (4- 二甲氨基苄亚氨基)-5- (4_氯苄基)_4_叔丁基噻唑的制备 lmmol 5- (4-氯苄基)_4_叔丁基2-氨基噻唑溶于5mL苯中，滴加l_ol 4- 二甲 氨基苯甲醛的苯溶液，加0. 2mL哌啶催化，回流1. 5h。冷却，抽滤，重结晶得2- (4- 二甲氨基 节亚氨基)-5-(4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑，mp 165 167°C，收率70. 32%/H匪R(400MHz， CDC13) 6 1. 43(s，9H，3XCH3)，3. 07(s，6H，N(CH3)2) ,4. 25(s，2H，CH2), 6. 69 (d, J = 8. 8Hz, 2H，4-N(CH3)2C6H43，5-H)，7. 15(d，J = 8. 4Hz，2H，4_C1C6H42，6_H)，7. 28 (d，J = 8. 4Hz, 2H，4-C1C6H43，5-H)，7. 80(d，J = 8. 8Hz，2H，4_N(CH3) 2C6H42，6_H)，8. 51 (s，1H，N = CH)。 C21H19Br2ClN20S 元素分析(计算值)/%:C 67. 09 (67. 05)，H 6. 26(6. 36)，N 10.17(10.20)。实施例8 2- (3,4- 二甲氧基苄亚氨基)_5_ (4_氯苄基)_4_叔丁基噻唑的制备 lmmol 5_ (4_氯苄基)_4_叔丁基2_氨基噻唑溶于5mL甲苯中，滴加lmmol 3， 4- 二甲氧基苯甲醛的甲苯溶液，加0. 2mL哌啶催化，回流2. 5h。冷却，抽滤，重结晶得2- (3， 4-二甲氧基苄亚氨基)-5-(4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑，mp 122 125°C，收率71. 5%，咕 匪R(400MHz，CDC13) 6 :1. 45(s，9H，3XCH3)，3. 95(s，3H，0CH3)，3. 96 (s，3H，0CH3) ,4. 28 (s, 2H, CH2), 6. 92 (d, J = 8. 4Hz, 1H, C6H35_H)，7. 16 (d, J = 8. 4Hz，2H，C6H42，6_H)，7. 30 (d, J = 8. 4Hz,2H, C6H43, 5_H)，7. 33 (dd, J = 8. 4Hz, J = 2. 0Hz, 1H, C6H36_H)，7. 68 (d, J = 2. 0Hz, 1H, C6H32-H)，8. 59 (s, 1H, N = CH)。实施例9 18抗肿瘤活性1.抗肿瘤活性原理MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT 分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4，5- 二甲基-2-噻唑)-2，5_ 二苯基溴化四氮 R^ ；3- (4, 5-dimethyl-thiazol-2-yl) -2, 5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]为基石出。 MTT,是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄 色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲瓒(formazon)，而死细胞则无此功能。用DMS0溶解 formazon后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，既可定量测出细胞的存活率。根据光密 度值的变化观察样品对肿瘤细胞的抑制作用。2.抗肿瘤活性实验试样5_ (4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物优选化合物2_ (2-羟基-5-溴苄 亚氨基)-5-(4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑，2-(2-羟基-3，5- 二溴苄亚氨基)_5-(4_氯苄 基)_4_叔丁基噻唑，2-(2-羟基-3，5- 二氯苄亚氨基)-5-(4-氯苄基)_4_叔丁基噻唑， 2- (2-羟基-3，5- 二碘苄亚氨基)-5- (4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑，2- (2-羟基-5-硝基苄 亚氨基)-5- (4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑，2- (4- 二甲氨基苄亚氨基)-5- (4-氯苄基)-4-叔 丁基噻唑，2- (2-羟基苄亚氨基)-5- (4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑，2- (2-氯-5-硝基苄亚氨 基)-5- (4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑，2- (2-硝基苄亚氨基)-5- (4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑 和2- (4-硝基苄亚氨基)-5- (4-氯苄基)-4-叔丁基噻唑。细胞系宫颈癌细胞系HeLa ；肝癌细胞系Bel 7402 ；鼻咽癌细胞系CNE 2(中南大 学湘雅医学院细胞库提供)。试剂噻唑蓝(MTT)、RPMI 1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术 公司)；胰酶(美国AMRESC0公司)；96孔培养板(美国英杰生命技术公司)；二甲基亚砜 (美国Sigma公司)。仪器HFSafe-1500型超净工作台、HF151UV型C02培养箱(上海力申科学仪器有 限公司)；XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司)；Multiskan MK3型酶标仪 (美国Thermo公司)；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司)。实验操作试样对于hela细胞、Bel 7402细胞和CNE 2细胞的测试。每种细 胞的实验操作过程相同，一次实验过程中，每种试样设置5个浓度梯度(O.Symol/mL、0. 25 u mol/mL、0. 1 u mol/mL、0. 05 u mol/mL、0. 025 u mol/mL)，每个浓度四个平行试样，每 组实验平行3次，并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔0D值，检测波长570nm。3.抗肿瘤活性评价1)细胞抑制率计算
正常OD值一加药OD值
细胞抑制率(％) = - x 100%
正常OD值2) IC50 值计算试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，计算试样对细胞的半数抑制浓度IC5(I 值。试样对于hela细胞、Bel 7402细胞和CNE 2细胞的IC5(1见表1。表1 5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物对于hela细胞、Bel 7402细胞和 CNE 2细胞的抑制活性 测试结果显示，被测试的5- (4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物对于人宫颈癌细 胞(hela细胞)、人肝癌细胞(Bel 7402细胞)、人鼻咽癌细胞(CNE 2细胞)等具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。
权利要求
一类5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物(I)，其具有如下化学结构式其中，I式中X1选自氢，羟基，甲氧基，硝基，氨基和氯；X2选自氢，硝基，氨基，甲氧基，氯，溴和碘；X3选自氢，甲基，乙基，硝基，甲氧基，氯，溴，氨基和二甲氨基；X4选自氢，硝基，氨基，甲氧基，氯，溴和碘。F2009102267745C00011.tif
2.权利要求1所述的5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物的应用，其特征在于，式 I所示化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一类5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物(I)，其具有如下化学结构式其中，I式中X1选自氢，羟基，甲氧基，硝基，氨基和氯；X2选自氢，硝基，氨基，甲氧基，氯，溴和碘；X3选自氢，甲基，乙基，硝基，甲氧基，氯，溴，氨基和二甲氨基；X4选自氢，硝基，氨基，甲氧基，氯，溴和碘。5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物(I)对于人宫颈癌细胞、人肝癌细胞、人鼻咽癌细胞等具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。
文档编号C07D277/42GK101845026SQ20091022677
公开日2010年9月29日 申请日期2009年12月30日 优先权日2009年12月30日
发明者向建南, 夏曙, 李珺姊, 胡艾希, 覃智 申请人:湖南大学