专利名称：一种连翘酯苷a的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取方法，具体地说，是一种连翘酯苷A的制备方法，属于医 药领域。
背景技术：
连翘属木犀科连翘落叶灌木，其果实可以入药，具有清热解毒、散结消肿、抗细菌 和真菌的作用。连翘酯苷A是连翘中的主要成分，不但对金黄色葡萄球菌等多种致病菌具 有抑制作用，而且还能够抑制磷酸二酯酶、真菌以及活性氧，因此在天然防腐剂和天然抗氧 化剂领域具有很广泛的应用前景。目前连翘酯苷A的提取分离方法在各种文献资料中均有报道。现有技术采用的方 法直接水提或水提后再用有机溶剂提取，然后再用硅胶柱分离或柱层析分离，得到最终产 物。如梁文藻等(药物分析杂志，1986，6(5)，沈3力66)从连翘中提取连翘酯苷A产物是应 用化学分离方法，然后用制备性薄层板进行纯化，得到纯品。上述方法的缺陷是生产效率 低、有机溶剂使用的过多，所用的材料也不能重复使用，不利于工业化生产。Sansel (Chem. Pharm. Bul 1,1982, 32(12), 4548-4553)使用的方法是先水提，然后上硅胶柱层析分离。其 缺陷是工艺复杂，分离过程中需要用大量的有机溶剂冲洗。中国专利2006100270 . 1、 200610027036. 4,200610027037. 9也都是大量使用有机溶剂，并且所用的材料价格昂贵，生 产成本高。连翘酯苷A的提取和分离技术，现在正向简单、环保的现代方向发展，但是现在文 献和专利中的工艺多数还停留在有机试剂萃取和硅胶柱分离的阶段，这样的工艺既不符合 环保的要求，而且，在生产操作过程中，也极不方便。因此，需要寻找一种工艺简单环保、成本低廉的连翘酯苷A提取方法，以满足不断 扩大的市场需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种工艺简单、溶剂安全无毒、成本低廉、环保的连翘酯苷A 提取方法。为实现上述目的，本发明采用下列技术方案一种连翘酯苷A的制备方法，其特征在于包括下面几个步骤1、酸提取取干燥连翘药材，用pH值为1 3的酸水10 20倍量浸泡5 10次， 每次Mh，用200 300目滤布过滤，滤液合并。2、树脂分离上述滤液先用PH值为1 2的酸水淋洗树脂1 4BV (柱体积)，上 AB-8树脂进行分离，上样后，再用水淋洗1 2BV，至淋洗液澄清为淡黄色，再用30 50% 乙醇淋洗3 10BV，收集醇淋洗液，60°C减压干燥至无醇，调pH值为1 3.3、聚酰胺分离将上述⑵中的分离液上100 300目的聚酰胺，先用PH值为1 2的酸水淋洗树脂1 4BV，再用0. 06%的NaHCO3溶液冲洗3 8BV，收集碱液，并调pH值为1 3。4、树脂分离将上述(3)中的分离液先用pH值为1 2的酸水淋洗树脂1 4BV， 再上AB-8树脂，上样量为2 8BV，再用95%乙醇淋洗2 6BV，收集醇淋洗液，60°C减压浓
缩至干。5、反相硅胶纯化取上述⑷中分离的干燥物用5 10倍量30 50%乙醇溶解 上样，用10%乙醇淋洗2 10BV，再用30-50%乙醇淋洗，收集30-50%乙醇淋洗液，60°C减 压浓缩至干。6、葡聚糖凝胶纯化取上述(5)中纯化的干燥物用5 10倍量30 50%乙醇溶 解上样，用30 50%乙醇淋洗3 10BV，收集淡黄色的色带，60°C减压浓缩至干。本发明所述的提取工艺具有以下的有益效果本工艺是完全使用醇水系统进行提 取和分离的工艺，经过工艺参数改进，形成了一条合理的、现代的和环保的工艺路线。另外，本条工艺路线的所用树脂材料均可以重复利用，降低了生产成本。聚酰胺 和AB-8都是很便宜的树脂，而反相硅胶和葡聚糖凝胶虽然价格稍高，但使用时已经是连翘 酯苷A的纯度在近80%左右，所以，带进去的杂质已经很少，经过简单的95%乙醇冲洗，就 可以重复利用。使用本发明的提取方法，最终产物连翘酯苷A的含量可达90% 95%。因 此，工艺简单、高效，适合工业化生产。
具体实施例方式通过下列实施例将有助于理解本发明，但不限制本发明的内容。实施例1(1)酸提取取干燥连翘药材lOOOg，用pH值为1的酸水10倍量浸泡5次，每次 Mh，用200目滤布过滤，滤液合并。(2)树脂分离上述滤液先用pH值为1的酸水淋洗树脂1BV，上AB-8树脂进行分 离，上样后，再用水淋洗1BV，至淋洗液澄清为淡黄色，再用30%乙醇淋洗:3BV，收集醇淋洗 液，60°C减压干燥至无醇，调pH值为1。(3)聚酰胺分离将上述(2)中的分离液上100-200目的聚酰胺，先用pH值为1的 酸水淋洗树脂1BV，再用0. 06 %的NaHCO3溶液冲洗!3BV，收集碱液，并调pH值为1。(4)树脂分离将上述(3)中的分离液先用pH值为1 2的酸水淋洗树脂1BV，再 上AB-8树脂，上样量为2BV，再用95%乙醇淋洗2BV，收集醇淋洗液，60°C减压浓缩至干。(5)反相硅胶纯化取上述中分离的干燥物用反相硅胶纯化取干燥物，用5 倍量30%乙醇溶解上样，用10%乙醇淋洗2BV，再用30%乙醇淋洗，收集30%乙醇淋洗液， 60°C减压浓缩至干。(6)葡聚糖凝胶纯化取上述( 中纯化的干燥物用5倍量30%乙醇溶解上样，用 30 %乙醇淋洗:3BV，收集淡黄色的色带，60 0C减压浓缩至干。实施例2(1)酸提取取干燥连翘药材5000g，用pH值为3的酸水20倍量浸泡10次，每次 Mh，用300目滤布过滤，滤液合并。(2)树脂分离上述滤液先用pH值为2的酸水淋洗树脂4BV，上AB-8树脂进行分 离，上样后，再用水淋洗2BV，至淋洗液澄清为淡黄色，再用50%乙醇淋洗10BV，收集醇淋洗液，60°C减压干燥至无醇，调pH值为3。(3)聚酰胺分离将上述(2)中的分离液上200-300目的聚酰胺，先用pH值为2的 酸水淋洗树脂4BV，再用0. 06%的NaHCO3溶液冲洗8BV，收集碱液，并调pH值为3。(4)树脂分离将上述(3)中的分离液先用pH值为1 2的酸水淋洗树脂4BV，再 上AB-8树脂，上样量为8BV，再用95%乙醇淋洗6BV，收集醇淋洗液，60°C减压浓缩至干。(5)反相硅胶纯化取上述⑷中分离的干燥物，用10倍量50%乙醇溶解上样，用 10%乙醇淋洗10BV，再用50%乙醇淋洗，收集50%乙醇淋洗液，60°C减压浓缩至干。(6)葡聚糖凝胶纯化取上述(5)中纯化的干燥物用10倍量50%乙醇溶解上样， 用50%乙醇淋洗10BV，收集淡黄色的色带，60°C减压浓缩至干。实施例3(1)酸提取取干燥连翘药材800g，用pH值为1. 5的酸水15倍量浸泡8次，每次 Mh，用200目滤布过滤，滤液合并。(2)树脂分离上述滤液先用pH值为1. 5的酸水淋洗树脂:3BV，上AB-8树脂进行 分离，上样后，再用水淋洗1BV，至淋洗液澄清为淡黄色，再用40 %乙醇淋洗4BV，收集醇淋 洗液，60°C减压干燥至无醇，调pH值为2。(3)聚酰胺分离将上述(2)中的分离液上100-200目的聚酰胺，先用pH值为1. 5 的酸水淋洗树脂3BV，再用0. 06%的NaHCO3溶液冲洗6BV，收集碱液，并调pH值为2。(4)树脂分离将上述(3)中的分离液先用pH值为1 2的酸水淋洗树脂!3BV，再 上AB-8树脂，上样量为5BV，再用95%乙醇淋洗4BV，收集醇淋洗液，60°C减压浓缩至干。(5)反相硅胶纯化取上述中分离的干燥物，用8倍量40%乙醇溶解上样，用 10%乙醇淋洗6BV，再用40%乙醇淋洗，收集40%乙醇淋洗液，60°C减压浓缩至干。(6)葡聚糖凝胶纯化取上述( 中纯化的干燥物用8倍量40%乙醇溶解上样，用 40 %乙醇淋洗4BV，收集淡黄色的色带，60 0C减压浓缩至干。实施例4(1)酸提取取干燥连翘药材30g，用pH值为2的酸水13倍量浸泡6次，每次Mh， 用200目滤布过滤，滤液合并。(2)树脂分离上述滤液先用pH值为1. 3的酸水淋洗树脂2BV，上AB-8树脂进行 分离，上样后，再用水淋洗1BV，至淋洗液澄清为淡黄色，再用35 %乙醇淋洗8BV，收集醇淋 洗液，60°C减压干燥至无醇，调pH值为2. 5。(3)聚酰胺分离将上述O)中的分离液上200-300目的聚酰胺，先用pH值为1. 3 的酸水淋洗树脂2BV，再用0. 06%的NaHCO3溶液冲洗5BV，收集碱液，并调pH值为1. 5。(4)树脂分离将上述(3)中的分离液先用pH值为1 2的酸水淋洗树脂2BV，再 上AB-8树脂，上样量为4BV，再用95%乙醇淋洗!3BV，收集醇淋洗液，60°C减压浓缩至干。(5)反相硅胶纯化取上述中分离的干燥物，用6倍量25%乙醇溶解上样，用 10%乙醇淋洗5BV，再用35%乙醇淋洗，收集35%乙醇淋洗液，60°C减压浓缩至干。(6)葡聚糖凝胶纯化取上述( 中纯化的干燥物用7倍量25%乙醇溶解上样，用 25 %乙醇淋洗8BV，收集淡黄色的色带，60 0C减压浓缩至干。实施例5(1)酸提取取干燥连翘药材200g，用pH值为2. 5的酸水18倍量浸泡9次，每次Mh，用300目滤布过滤，滤液合并。(2)树脂分离上述滤液先用pH值为1. 8的酸水淋洗树脂4BV，上AB-8树脂进行 分离，上样后，再用水淋洗2BV，至淋洗液澄清为淡黄色，再用45 %乙醇淋洗7BV,收集醇淋 洗液，60°C减压干燥至无醇，调pH值为1.5。(3)聚酰胺分离将上述(2)中的分离液上100-300目的聚酰胺，先用pH值为1.8 的酸水淋洗树脂4BV，再用0. 06%的NaHCO3溶液冲洗7BV，收集碱液，并调pH值为2. 5。(4)树脂分离将上述(3)中的分离液先用pH值为1 2的酸水淋洗树脂4BV，再 上AB-8树脂，上样量为7BV，再用95%乙醇淋洗5BV，收集醇淋洗液，60°C减压浓缩至干。(5)反相硅胶纯化取上述中分离的干燥物，用9倍量45%乙醇溶解上样，用 10%乙醇淋洗8BV，再用45%乙醇淋洗，收集45%乙醇淋洗液，60°C减压浓缩至干。(6)葡聚糖凝胶纯化取上述( 中纯化的干燥物用9倍量45%乙醇溶解上样，用 45 %乙醇淋洗5BV，收集淡黄色的色带，60 0C减压浓缩至干。试验例本发明是用薄层检测系统对提取物进行定性检测。首先测定每组实施例中提取物的重量(见表1)，然后再根据以下检测方法对本发 明5个实施例样品的连翘酯苷A含量进行定量检测，检测结果见表2。含量测定方法照高效液相色谱法(《中华人民共和国药典2005年一部》附录VI D)测定。1、色谱条件色谱柱Dikma Cw4. 6謹，5 μ m)；流动相乙腈-水-醋酸 (15 85 0.2)；流速1. OmL IirT1;检测波长332nm;柱温室温；在此条件下连翘酯苷 A理论塔板数不低于3000。2、对照品溶液的制备取连翘酯苷A对照品适量，精密称定，加入50%乙醇制成 每Iml含0. 4mg的溶液，即得。供试品溶液的制备精密称取样品粉末10mg，置25ml容量瓶中。加入50%乙醇溶 液20ml，振摇使其全部溶解，再加50%乙醇溶液至刻度，摇勻，用0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得。表 权利要求
1.一种连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)原料药的酸浸泡提取；(2)树脂分离；(3)聚酰胺分离；(4)树脂分离；(5)反相硅胶纯化；(6)葡聚糖凝胶纯化。
2.根据权利要求1所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的酸 PH值为1 3。
3.根据权利要求1或2所述的连翘酯苷A制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的酸 浸泡提取为用10 20倍药材体积的酸，浸泡5 10次，每次Mh，用200 300目滤布过滤。
4.根据权利要求1所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的树脂 分离为先用酸淋洗，上样后，再用水淋洗，至淋洗液澄清为淡黄色，再用醇淋洗，收集醇淋 洗液，减压干燥，调PH值。
5.根据权利要求1所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的聚酰 胺分离为将O)中的分离液上100 300目的聚酰胺，酸淋洗，再用碱冲洗，收集碱液，调 PH值。
6.根据权利要求5所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，碱冲洗为用0.06%的 NaHCO3溶液冲洗3 8BV。
7.根据权利要求4或5所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，减压后的pH值调 为1 3。
8.根据权利要求1所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，步骤⑷中所述的树脂 分离为先用酸淋洗树脂，再将步骤(3)中溶液上样，再用醇淋洗，收集醇淋洗液，减压浓缩至干。
9.根据权利要求4或8所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，所述的树脂为AB-8 树脂。
10.根据权利要求4、5或8任一所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，所述的酸 淋洗为用PH值为1 2的酸淋洗树脂1 4BV。
11.根据权利要求8所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，所述的醇淋洗是用 95%乙醇淋洗2 6BV。
12.根据权利要求1所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述的 反相硅胶纯化为取步骤(4)所得的干燥物，溶解上样，醇淋洗，收集醇淋洗液，减压浓缩至 干。
13.根据权利要求12所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，所述的醇淋洗是用 10%乙醇淋洗2 10BV，再用30-50%乙醇淋洗。
14.根据权利要求1所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，步骤(6)中所述的葡 聚糖凝胶纯化为取步骤(5)中干燥物溶解上样，醇淋洗，收集淡黄色的色带，减压浓缩至干。
15.根据权利要求12或14所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，所述的溶解上 样所用的溶液为5 10倍量30 50%乙醇。
16.根据权利要求4或14所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，所述的醇淋洗是 用30 50%乙醇淋洗3 10BV。
17.根据权利要求4、8、12或14任一所述的连翘酯苷A的制备方法，其特征在于，所述 的减压温度是60°C。
全文摘要
本发明公开了一种连翘酯苷A的制备方法，包括以下步骤(1)原料药的酸浸泡提取；(2)树脂分离；(3)聚酰胺分离；(4)树脂分离；(5)反相硅胶纯化；(6)葡聚糖凝胶纯化。本发明所述的方法完全使用醇水系统进行提取和分离的工艺，并本条工艺所用树脂材料均可以重复利用，降低了生产成本。使用本发明的提取方法，最终产物连翘酯苷A的含量可达90％～95％。因此，工艺简单、高效，适合工业化生产。
文档编号C07H15/18GK102060885SQ200910228550
公开日2011年5月18日 申请日期2009年11月13日 优先权日2009年11月13日
发明者周水平, 胡晨旭, 魏峰 申请人:天津天士力制药股份有限公司