专利名称：一种基于山楂酸的光亲和标记小分子探针及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种基于山楂酸的光亲和标记小分子探针及其制备方法，属有机化物
及其制备的技术领域。
背景技术：
药物发现过程包括许多阶段，如靶点的鉴别、先导化合物的发现、小分子化合 物的结构优化、临床前及临床试验等。靶点的鉴别是药物发现与发展过程中的关键步骤 (Curr. Opin. Chem. Biol. 2002， 6 :427 433)，而目前基因水平上的生物技术不能解决哪种 蛋白质是针对某种疾病的小分子药物的靶点。可以预见，在基因组学基础上开展的蛋白质 组学研究将导致药物开发方面的实质性突破，使得生命科学研究能实现其最终目标，研制 出治疗包括癌症和艾滋病等在内的多种疾病的药物。因此针对药物发现的技术重心已经由 基因组转向了蛋白质组。光亲和标记技术是研究蛋白质组学的主要策略之一，它不仅对蛋 白质进行鉴别，同时也对其功能及相互作用进行研究。 光亲和标记技术是结合现代分子生物学、细胞生物学、有机化学等多学科的优势， 运用合成的光亲和小分子化合物作为工具探针，经特定波长的光照射分解产生高活性的中 间体，与其受体活性部位形成特异性的不可逆的共价结合。探针分子包括三个功能部位 活性基团(activity group)、光亲合标记基团(photoaffinitylabeling group)、报告基
O
团(r印orter group)或潜在报告基团(^l^N3可以与连有炔基的生物素或荧光素如
B0DIPY等发生"click"反应引入报告基团，ChemBioChem，2007，8 :1351 1358)，以及连接 部位(spacer)。活性部位的作用是将探针分子导向受体蛋白的活性中心；光亲和标记基团 的作用是在探针分子被导向受体蛋白的活性中心之后经特定波长的紫外光照射分解产生 高活性的卡宾或氮宾中间体，将探针分子共价修饰在受体蛋白的活性中心；报告基团或潜 在报告基团主要是方便以后的分离、纯化、检测等操作。 运用光亲和标记技术，大量的与疾病相关的靶点被发现、多种小分子与生物大分 子作用的模式被确定，这些信息对合理药物设计具有非常重要的意义。比如新的药物靶点 的发现，或者对一个已知蛋白的功能作新的阐述，这对于从分子水平阐明疾病的发生、发展 及治疗的意义是不言而喻的。这些靶点可被发展为高效、高速的高通量筛选模型，并在短时 间内随机筛选大量的小分子化合物，发现一些更高活性的小分子化合物作为先导物用于进 一步的新药开发研究。这样，从一个小分子探针为起点，其母体化合物或许在类药性、有效 性甚至代谢稳定性等方面存在问题，但新发现的化合物则不受原有结构的限制，有更宽的 改造空间。 山楂酸(maslinic acid， MA)是一种五环三萜酸，分子结构为
6<formula>formula see original document page 7</formula> 山楂酸 maslinic acid(M) 主要存在于油橄榄、蛇麻草、水杨梅、薄荷、丁香、红枣、山楂、石榴和鼠尾草等天然 植物中。近年来的研究表明MA具有诸多药理活性，如抗癌、抗氧化、抗艾滋病、抗菌、抗炎、 抗2型糖尿病等(生命科学，21 :264 269)。山楂酸具有如此众多的药理活性，加之对于 人体较高的安全性引起了人们广泛的研究兴趣。 中国药科大学温小安等最近报道了山楂酸对糖原磷酸酶 (glycogenphosphorylase， GP)具有中等强度的抑制活性(IC5。 = 28 ii M)，他们还测试了山 楂酸对于2型糖尿病模型动物KK-Ay小鼠的降血糖作用，KK-Ay小鼠每天口服山楂酸10mg/ kg或30mg/kg的剂量，连续服用2周后发现血糖水平大大降低。 而本发明人研究发现MA还对另一糖尿病靶标蛋白酪氨酸磷酸酯酶lB(Protein tyrosine phosphatase 1B，PTP1B)具有较好的抑制活性(IC5。 = 4. 26 y M)。山楂酸具有如 此众多的生理活性，在体内应该有多种作用靶点，设计、制备基于山楂酸的光亲和标记小分 子探针，可望用于研究针对抗糖尿病的靶点，此外还可望用于发现其它相关药理活性如抗 癌、抗氧化、抗艾滋病、抗菌、抗炎等的体内作用靶点及其与相关靶点的作用模式，这些信息 均有助于促进相关药物的研发。
发明内容
本发明的第一个目的是提出一种基于山楂酸的光亲和标记探针分子。该探针分子 可用于研究、发现活性化合物山楂酸的体内作用靶点、及与其靶点的作用模式、活性位点的 结构信息，为相关药物的研发提供重要信息。该探针分子的特征在于包括四个功能部位活 性基团、光亲合标记基团、潜在的报告基团和连接部位，其分子结构为
测试了该探针分子对于PTP1B的抑制活性(IC5。 = 2. 30 M)，发现其抑制活性好 于山楂酸的抑制活性(IC5。 = 4.26i!M)。该类探针分子可用于研究具有多种生理活性的山 楂酸体内作用靶点，及与其各种靶点的作用模式、活性位点的结构信息，为相关药物的研发 提供重要信息。 本发明的另一目的在于提供一种制备基于山楂酸的光亲和标记探针分子的方法。 为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案。以天然产物山楂酸为起始原料，乙酰基保护 得到第一化合物I，第一化合物I与草酰氯反应得到第二化合物II，第二化合物II与Boc单 保护的乙二胺反应，得到第三化合物III，第三化合物III首先在HC1的乙酸乙酯溶液中脱 去Boc保护基，然后再与带有光亲和标记基团的片段IV反应得到第五化合物V，第五化合物 V在碱的存在下水解脱除乙酰基保护基，得到产物基于山楂酸的光亲和标记探针分子VI。
现详细说明本发明的技术方案。 一种制备基于山楂酸的光亲和标记小分子探针的 方法，其特征在于，具体操作步骤
第一步第一化合物I的制备 山楂酸溶于N， N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷或四氢呋喃，加入乙酰化试剂乙酰氯 或醋酐，加入缚酸剂吡啶、三乙胺或4- 二甲氨基吡啶，室温反应6小时，减压蒸除溶剂，乙 酸乙酯、二氯甲烷或氯仿提取，分别用10%的稀盐酸与饱和碳酸氢钠溶液洗，无水硫酸钠 干燥后，减压蒸除溶剂，经硅胶柱层析纯化得第一化合物I，该化合物的^ NMR(CDCl3_d): S 5. 26 (1H， m， H—12) ， 5. 08 (3H， m， H—2) ， 4. 74 (1H， d， J = 10. 0Hz， H—3) ， 2. 81 (1H， m， H—18)， 2. 05 (3H， s， CH3C0) ， 1. 97 (3H， s， CH3C0) ， 1. 11 (3H， s) ， 1. 04 (3H， s) ， 0. 92 (3H， s) ， 0. 90 (3H， s)， 0. 89(6H， s) ，0. 72(3H， s);
第二步第二化合物II的制备 第一化合物I溶于二氯甲烷、四氢呋喃或氯仿，与酰化试剂草酰氯或二氯亚砜在 室温反应12小时，减压蒸除溶剂得第二化合物II，不需纯化，直接用于第三步反应；
第三步第三化合物III的制备 上步反应得到的第二化合物II溶于二氯甲烷、N， N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃， 加入Boc单保护的乙二胺，加入缚酸剂吡啶、三乙胺或4-二甲氨基吡啶在室温反应1小 时，反应完成后减压蒸除溶剂，乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿提取，饱和食盐水洗，经干燥后，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析纯化得第三化合物III，该化合物的111 NMR(CDCl3-d) :6.33(1H， s) ，5. 37(1H， s， H-12) ，5. 10—5. 06(1H， m， H_2) ，4. 95(1H， s) ，4. 74(1H， d， J = 8. 1， H_3)， 3. 41 (2H， m) ， 3. 15 (2H， m) ， 2. 57 (1H， m， H-18) ， 2. 05 (3H， s， CH3C0) ， 1. 97 (3H， s， CH3C0)， 1. 43 (9H， s) ， 1. 20 (3H， s) ， 1. 17 (3H， s) ， 1. 05 (3H， s) ， 0. 90 (3H， s) ， 0. 89 (6H， s) ， 0. 75 (3H， s); 第四步第五化合物V的制备 第三化合物III溶于氯化氢的饱和乙酸酸乙酯溶液，室温搅拌2小时脱去Boc保 护基，减压蒸除溶剂，残余物溶于N， N- 二甲基甲酰胺、四氢呋喃或二氯甲烷、，加入吡啶或 三乙胺，加入光亲和标记片段活性酯IV，室温搅拌12小时，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯、二氯 甲烷或氯仿提取，饱和食盐水洗，经干燥后，减压蒸除溶剂得第五化合物V，不需纯化，直接 用于第五步反应； 第五步基于山楂酸的光亲和标记小分子探针VI的制备 第五化合物V溶于甲醇，加入氢氧化锂或氢氧化钠，室温搅拌1 8小时，减压蒸 除溶剂，稀盐酸将体系调至ra = 6. 0，乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿提取，饱和食盐水洗，经干 燥后，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析纯化得基于山楂酸的光亲和标记小分子探针VI，该化合物 的丄H NMR(CDCl3-d) :8. 23(1H， d， J = 8. 0) ，6. 89(1H， d， J = 8. 0) ，6. 80(1H， s) ，6. 67(1H， d， J = 8. 0) ，6. 52(1H， s) ，5. 36(1H， s， H—12) ，4. 11(2H， t， J = 6. 2) ， 3. 96 (2H， s) ， 3. 66 (2H， m) ， 3. 54 (2H， m) ， 3. 31 (2H， m) ， 3. 32 (1H， m， H_2) ， 2. 98 (1H， d， J = 9. 3Hz， H_3) ， 2. 58 (IH， m， H-18)，1.91(2H， m)，1.69(2H， m)，1.31(4H， m) ， 1. 11(3H， s)，1.02(3H， s)，0.90(3H， s)， 0. 88 (3H， s) 0. 85 (3H， s) ， 0. 83 (3H， s) ， 0. 65 (3H， s)。
以下是与该制备方法相关的反应简式
<formula>formula see original document page 10</formula> 本发明的优点在于该探针可望用于研究针对抗糖尿病的靶点，此外还可望用于发 现其它相关药理活性如抗癌、抗氧化、抗艾滋病、抗菌、抗炎等的体内作用靶点及其与相关 靶点的作用模式，这些信息均有助于促进相关药物的研发。
具体实施例方式
现结合实施例详细说明本发明的技术方案。所有的实施例都严格按照上述的制备
方法的操作步骤进行操作。
实施例1 第一步第一化合物I的制备 3. 0g山楂酸溶于50mL N， N_ 二甲基甲酰胺，加入4. lmL醋酐，加入lOmL吡啶，室 温反应6小时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，二氯甲烷提取3次，每次用50mL，合并有机相， 用10%的稀盐酸洗2次，每次用20mL，再用饱和碳酸氢钠溶液洗2次每次用20mL，无水硫酸 钠干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混合溶剂比 例为石油醚乙酸乙酯=3 : 1，得3.2g第一化合物I，收率91X ;
第二步第二化合物II的制备 2. 7g第一化合物I溶于50mL 二氯甲烷，加入10ml草酰氯，滴加2滴N，N- 二甲基 甲酰胺催化反应，室温反应12小时，减压蒸除溶剂得2. 7g第二化合物II，不需纯化，直接用 于第三步反应； 第三步第三化合物III的制备 2. 0g第二化合物II溶于20mL二氯甲烷，加入0. 6g Boc单保护的乙二胺，加入0. 7mL三乙胺，室温反应1小时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，二氯甲烷分3次提取，每次用 60mL，合并有机相，用5%的稀盐酸洗涤2次，每次用20mL，饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次，每 次用20mL，无水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混 合溶剂比例为石油醚乙酸乙酯=3 : l，得1.78g第三化合物111，收率90% ;
第四步第五化合物V的制备 1. 2g第三化合物III溶于30mL氯化氢的饱和乙酸酸乙酯溶液，室温搅拌2小时， 减压蒸除溶剂，残余物溶于30mLN， N-二甲基甲酰胺，加入3. 2mL三乙胺，加入1. 5g光亲和 标记片段活性酯IV，室温搅拌12小时，减压蒸除溶剂，加入50mL水，乙酸乙酯提取3次，每 次用50mL， 50mL饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得第五化合物V，不需纯 化，直接用于第五步反应； 第五步基于山楂酸的光亲和标记小分子探针VI的制备 第四步得到的第五化合物V溶于100mL甲醇，加入加入2g氢氧化钠固体，室温搅
拌i小时，减压蒸除溶剂，用10%稀盐酸将体系调至ra = 6. 0，乙酸乙酯萃取3次，每次用
50mL，合并有机相，50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析纯化，洗脱剂 为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混合溶剂比例为石油醚乙酸乙酯=15 : 1，得得1.7g 化合物VI，收率91X。 第一步、第三步、第五步的力NMR数据与发明内容中具体操作步骤所载的相应的数
据完全相同，此处不再重复。
实施例2 第一步第一化合物I的制备 3. Og山楂酸溶于50mL 二氯甲烷，加入3. 5mL乙酰氯，加入10mL三乙胺，室温反应6 小时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯提取3次，每次用50mL，合并有机相，用10%的 稀盐酸洗2次，每次用20mL，再用饱和碳酸氢钠溶液洗2次每次用20mL，无水硫酸钠干燥， 减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混合溶剂比例为石油 醚乙酸乙酯=3 : 1，得3.3g第一化合物1，收率94% ;
第二步第二化合物II的制备 2. 7g第一化合物I溶于50mL四氢呋喃，加入10ml 二氯亚砜，室温反应12小时，减 压蒸除溶剂得2. 5g第二化合物II，不需纯化，直接用于第三步反应；
第三步第三化合物III的制备 2. Og第二化合物1I溶于20mLN， N-二甲基甲酰胺，加入O. 6g Boc单保护的乙二 胺，加入0. 7mL吡啶，室温反应1小时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯分3次提取， 每次用60mL，合并有机相，用5%的稀盐酸洗涤2次，每次用20mL，饱和碳酸氢钠溶液洗涤2 次，每次用20mL，无水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶 齐U，混合溶剂比例为石油醚乙酸乙酯=3 : 1，得1.8g第三化合物III，收率92X ;
第四步第五化合物V的制备 1. 2g第三化合物III溶于30mL氯化氢的饱和乙酸酸乙酯溶液，室温搅拌2小时， 减压蒸除溶剂，残余物溶于30mL四氢呋喃，加入3. 2mL吡啶，加入1. 5g光亲和标记片段活 性酯IV，室温搅拌12小时，减压蒸除溶剂，加入50mL水，二氯甲烷提取3次，每次用50mL， 50mL饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得第五化合物V，不需纯化，直接用于
11第五步反应； 第五步基于山楂酸的光亲和标记小分子探针VI的制备 第四步得到的第五化合物V溶于lOOmL甲醇，加入加入1. 5g氢氧化锂固体，室温
搅拌8小时，减压蒸除溶剂，用io%稀盐酸将体系调至ra = 6. 0， 二氯甲烷提取3次，每次用
50mL，合并有机相，50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析纯化，洗脱剂 为石油醚与乙酸乙酯的混合溶齐U，混合溶剂比例为石油醚乙酸乙酯=15 : 1，得得1.8g 化合物VI，收率94%。 第一步、第三步、第五步的^ NMR数据与发明内容中具体操作步骤所载的相应的
数据完全相同，此处不再重复。 实施例3 第一步第一化合物I的制备 3. 0g山楂酸溶于50mL四氢呋喃，加入3. 5mL乙酰氯，加入10mL三乙胺，室温反应6 小时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，氯仿提取3次，每次用30mL，合并有机相，用10%的稀盐 酸洗2次，每次用20mL，再用饱和碳酸氢钠溶液洗2次每次用20mL，无水硫酸钠干燥，减压 蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混合溶剂比例为石油醚 乙酸乙酯=3 : 1，得3.0g第一化合物I，收率85X ;
第二步第二化合物II的制备 2. 7g第一化合物I溶于40mL氯仿，加入10ml 二氯亚砜，室温反应12小时，减压蒸 除溶剂得2. 3g第二化合物II，不需纯化，直接用于第三步反应；
第三步第三化合物III的制备 2. 0g第二化合物II溶于20mL四氢呋喃，加入0. 6g Boc单保护的乙二胺，加入 0. 7mL吡啶，室温反应1小时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，氯仿分3次提取，每次用60mL， 合并有机相，用5%的稀盐酸洗涤2次，每次用20mL，饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次，每次用 20mL，无水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混合溶 剂比例为石油醚乙酸乙酯=3 : l，得1.7g第三化合物111，收率86% ;
第四步第五化合物V的制备 1. 2g第三化合物III溶于30mL氯化氢的饱和乙酸酸乙酯溶液，室温搅拌2小时， 减压蒸除溶剂，残余物溶于30mL 二氯甲烷，加入3. 2mL吡啶，加入1. 5g光亲和标记片段活 性酯IV，室温搅拌12小时，减压蒸除溶剂，加入50mL水，氯仿提取3次，每次用50mL， 50mL 饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得第五化合物V，不需纯化，直接用于第五 步反应； 第五步基于山楂酸的光亲和标记小分子探针VI的制备 第四步得到的第五化合物V溶于100mL甲醇，加入加入1. 5g氢氧化锂固体，室温
搅拌8小时，减压蒸除溶剂，用io%稀盐酸将体系调至ra = 6. 0，氯仿提取3次，每次用
50mL，合并有机相，50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析纯化，洗脱剂 为石油醚与乙酸乙酯的混合溶齐U，混合溶剂比例为石油醚乙酸乙酯=15 : 1，得得1.6g 化合物VI，收率88%。 第一步、第三步、第五步的力NMR数据与发明内容中具体操作步骤所载的相应的数 据完全相同，此处不再重复。
权利要求
一种基于山楂酸的光亲和标记探针分子，其特征在于，该探针分子包括四个功能部位活性基团、光亲合标记基团、潜在的报告基团和连接部位，其分子结构为FSA00000053480000011.tif
2. —种制备基于山楂酸的光亲和标记探针分子的方法，其特征在于，以天然产物山楂 酸为起始原料，乙酰基保护得到第一化合物I，第一化合物I与草酰氯反应得到第二化合物 II，第二化合物II与BOC单保护的乙二胺反应，得到第三化合物III，第三化合物III首先在HCl的乙酸乙酯溶液中脱去Boc保护基，然后再与带有光亲和标记基团的片段IV反应得 到第五化合物V，第五化合物V在碱的存在下水解脱除乙酰基保护基，得到产物基于山楂酸 的光亲和标记探针分子VI。
3. 根据权利要求2所述的制备基于山楂酸的光亲和标记小分子探针的方法，其特征在 于，具体操作步骤第一步第一化合物I的制备山楂酸溶于N， N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷或四氢呋喃，加入乙酰化试剂乙酰氯或醋 酐，加入缚酸剂吡啶、三乙胺或4- 二甲氨基吡啶，室温反应6小时，减压蒸除溶剂，乙酸 乙酯、二氯甲烷或氯仿提取，分别用10%的稀盐酸与饱和碳酸氢钠溶液洗，无水硫酸钠干 燥后，减压蒸除溶剂，经硅胶柱层析纯化得第一化合物I，该化合物的^ NMR(CDCl3-d): S 5. 26 (1H， m， H—12) ， 5. 08 (3H， m， H—2) ， 4. 74 (1H， d， J = 10. 0Hz， H—3) ， 2. 81 (1H， m， H—18)， 2. 05 (3H， s， CH3C0) ， 1. 97 (3H， s， CH3C0) ， 1. 11 (3H， s) ， 1. 04 (3H， s) ， 0. 92 (3H， s) ， 0. 90 (3H， s)， 0. 89(6H， s) ，0. 72(3H， s);第二步第二化合物II的制备第一化合物I溶于二氯甲烷、四氢呋喃或氯仿，与酰化试剂草酰氯或二氯亚砜在室温 反应12小时，减压蒸除溶剂得第二化合物II，不需纯化，直接用于第三步反应； 第三步第三化合物III的制备上步反应得到的第二化合物n溶于二氯甲烷、N， N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃，加 入Boc单保护的乙二胺，加入缚酸剂吡啶、三乙胺或4-二甲氨基吡啶在室温反应l小时， 反应完成后减压蒸除溶剂，乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿提取，饱和食盐水洗，经干燥后，减 压蒸除溶剂，硅胶柱层析纯化得第三化合物III，该化合物的111 NMR(CDCl3-d) :6.33(1H， s) ，5. 37(1H， s， H-12) ，5. 10—5. 06(1H， m， H—2) ，4. 95(1H， s) ，4. 74(1H， d， J = 8. 1， H—3)，‘3. 41 (2H， m) ， 3. 15 (2H， m) ， 2. 57 (1H， m， H-18) ， 2. 05 (3H， s， CH3C0) ， 1. 97 (3H， s， CH3C0)， 1. 43 (9H， s) ， 1. 20 (3H， s) ， 1. 17 (3H， s) ， 1. 05 (3H， s) ， 0. 90 (3H， s) ， 0. 89 (6H， s) ， 0. 75 (3H， s);第四步第五化合物V的制备第三化合物III溶于氯化氢的饱和乙酸酸乙酯溶液，室温搅拌2小时脱去Boc保护基， 减压蒸除溶剂，残余物溶于N， N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或二氯甲烷、，加入吡啶或三乙 胺，加入光亲和标记片段活性酯IV，室温搅拌12小时，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯、二氯甲烷 或氯仿提取，饱和食盐水洗，经干燥后，减压蒸除溶剂得第五化合物V，不需纯化，直接用于 第五步反应；第五步基于山楂酸的光亲和标记小分子探针VI的制备第五化合物V溶于甲醇，加入氢氧化锂或氢氧化钠，室温搅拌1 8小时，减压蒸除溶 剂，稀盐酸将体系调至ra = 6. 0，乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿提取，饱和食盐水洗，经干燥 后，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析纯化得基于山楂酸的光亲和标记小分子探针VI，该化合物 的丄H NMR(CDCl3-d) :8. 23(1H， d， J = 8. 0) ，6. 89(1H， d， J = 8. 0) ，6. 80(1H， s) ，6. 67(1H， d， J = 8. 0) ，6. 52(1H， s) ，5. 36(1H， s， H—12) ，4. 11(2H， t， J = 6. 2) ， 3. 96 (2H， s) ， 3. 66 (2H， m) ， 3. 54 (2H， m) ， 3. 31 (2H， m) ， 3. 32 (1H， m， H—2) ， 2. 98 (1H， d， J = 9. 3Hz， H—3) ， 2. 58 (1H， m， H-18)，1.91(2H， m)，1.69(2H， m)，1.31(4H， m) ， 1. 11(3H， s)，1.02(3H， s)，0.90(3H， s)， 0. 88 (3H， s) 0. 85 (3H， s) ， 0. 83 (3H， s) ， 0. 65 (3H， s)。
4.根据权利要求3所述的制备基于山楂酸的光亲和标记小分子探针的方法，其特征在 于，具体操作步骤第一步第一化合物I的制备3.0g山楂酸溶于50mL N，N-二甲基甲酰胺，加入4. lmL醋酐，加入10mL吡啶，室温反应 6小时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，二氯甲烷提取3次，每次用50mL，合并有机相，用10% 的稀盐酸洗2次，每次用20mL，再用饱和碳酸氢钠溶液洗2次每次用20mL，无水硫酸钠干 燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混合溶剂比例为 石油醚乙酸乙酯=3 : 1，得3.2g第一化合物I，收率91X ;第二步第二化合物II的制备2. 7g第一化合物I溶于50mL 二氯甲烷，加入10ml草酰氯，滴加2滴N，N- 二甲基甲酰 胺催化反应，室温反应12小时，减压蒸除溶剂得2. 7g第二化合物II，不需纯化，直接用于第 三步反应；第三步第三化合物III的制备2. 0g第二化合物II溶于20mL 二氯甲烷，加入0. 6g Boc单保护的乙二胺，加入0. 7mL 三乙胺，室温反应1小时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，二氯甲烷分3次提取，每次用60mL， 合并有机相，用5%的稀盐酸洗涤2次，每次用20mL，饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次，每次用 20mL，无水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混合溶 剂比例为石油醚乙酸乙酯=3 : l，得1.78g第三化合物111，收率90% ;第四步第五化合物V的制备1. 2g第三化合物III溶于30mL氯化氢的饱和乙酸酸乙酯溶液，室温搅拌2小时，减压 蒸除溶剂，残余物溶于30mLN， N- 二甲基甲酰胺，加入3. 2mL三乙胺，加入1. 5g光亲和标记片段活性酯IV，室温搅拌12小时，减压蒸除溶剂，加入50mL水，乙酸乙酯提取3次，每次用 50mL， 50mL饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得第五化合物V，不需纯化，直 接用于第五步反应；第五步基于山楂酸的光亲和标记小分子探针VI的制备第四步得到的第五化合物V溶于lOOmL甲醇，加入加入2g氢氧化钠固体，室温搅拌l 小时，减压蒸除溶剂，用10%稀盐酸将体系调至ra = 6. 0，乙酸乙酯萃取3次，每次用50mL， 合并有机相，50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析纯化，洗脱剂为石油 醚与乙酸乙酯的混合溶齐U，混合溶剂比例为石油醚乙酸乙酯=15 : 1，得得1.7g化合物 VI，收率91X。
5. 根据权利要求3所述的制备基于山楂酸的光亲和标记小分子探针的方法，其特征在 于，具体操作步骤第一步第一化合物I的制备3. 0g山楂酸溶于50mL 二氯甲烷，加入3. 5mL乙酰氯，加入10mL三乙胺，室温反应6小 时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯提取3次，每次用50mL，合并有机相，用10 %的 稀盐酸洗2次，每次用20mL，再用饱和碳酸氢钠溶液洗2次每次用20mL，无水硫酸钠干燥， 减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混合溶剂比例为石油 醚乙酸乙酯=3 : 1，得3.3g第一化合物I，收率94X ;第二步第二化合物II的制备2. 7g第一化合物I溶于50mL四氢呋喃，加入10ml 二氯亚砜，室温反应12小时，减压蒸 除溶剂得2. 5g第二化合物II，不需纯化，直接用于第三步反应； 第三步第三化合物III的制备2. Og第二化合物II溶于20mLN，N- 二甲基甲酰胺，加入0. 6g Boc单保护的乙二胺，加 入0. 7mL吡啶，室温反应1小时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯分3次提取，每次用 60mL，合并有机相，用5%的稀盐酸洗涤2次，每次用20mL，饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次，每 次用20mL，无水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混 合溶剂比例为石油醚乙酸乙酯=3 : l，得1.8g第三化合物111，收率92% ;第四步第五化合物V的制备1. 2g第三化合物III溶于30mL氯化氢的饱和乙酸酸乙酯溶液，室温搅拌2小时，减压 蒸除溶剂，残余物溶于30mL四氢呋喃，加入3. 2mL吡啶，加入1. 5g光亲和标记片段活性酯 IV，室温搅拌12小时，减压蒸除溶齐U，加入50mL水，二氯甲烷提取3次，每次用50mL，50mL 饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得第五化合物V，不需纯化，直接用于第五 步反应；第五步基于山楂酸的光亲和标记小分子探针VI的制备第四步得到的第五化合物V溶于100mL甲醇，加入加入1. 5g氢氧化锂固体，室温搅拌8 小时，减压蒸除溶剂，用10%稀盐酸将体系调至1^ = 6.0，二氯甲烷提取3次，每次用50mL， 合并有机相，50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析纯化，洗脱剂为石油 醚与乙酸乙酯的混合溶齐U，混合溶剂比例为石油醚乙酸乙酯=15 : 1，得得1.8g化合物 VI，收率94%。
6. 根据权利要求3所述的制备基于山楂酸的光亲和标记小分子探针的方法，其特征在于，具体操作步骤第一步第一化合物I的制备3. 0g山楂酸溶于50mL四氢呋喃，加入3. 5mL乙酰氯，加入lOmL三乙胺，室温反应6小 时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，氯仿提取3次，每次用30mL，合并有机相，用10%的稀盐酸 洗2次，每次用20mL，再用饱和碳酸氢钠溶液洗2次每次用20mL，无水硫酸钠干燥，减压蒸 除溶剂，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混合溶剂比例为石油醚乙 酸乙酯=3 : 1，得3.0g第一化合物I，收率85X ;第二步第二化合物II的制备2. 7g第一化合物I溶于40mL氯仿，加入10ml 二氯亚砜，室温反应12小时，减压蒸除溶 剂得2. 3g第二化合物II，不需纯化，直接用于第三步反应；第三步第三化合物III的制备2. 0g第二化合物II溶于20mL四氢呋喃，加入0. 6g Boc单保护的乙二胺，加入0. 7mL 吡啶，室温反应1小时，减压蒸除溶剂，加入20mL水，氯仿分3次提取，每次用60mL，合并有 机相，用5%的稀盐酸洗涤2次，每次用20mL，饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次，每次用20mL，无 水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，混合溶剂比例 为石油醚乙酸乙酯=3 : l，得1.7g第三化合物III，收率86X ;第四步第五化合物V的制备1. 2g第三化合物III溶于30mL氯化氢的饱和乙酸酸乙酯溶液，室温搅拌2小时，减压 蒸除溶剂，残余物溶于30mL 二氯甲烷，加入3. 2mL吡啶，加入1. 5g光亲和标记片段活性酯 IV，室温搅拌12小时，减压蒸除溶剂，加入50mL水，氯仿提取3次，每次用50mL， 50mL饱和 食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得第五化合物V，不需纯化，直接用于第五步反 应；第五步基于山楂酸的光亲和标记小分子探针VI的制备第四步得到的第五化合物V溶于100mL甲醇，加入加入1. 5g氢氧化锂固体，室温搅拌8 小时，减压蒸除溶剂，用10%稀盐酸将体系调至ra = 6. 0，氯仿提取3次，每次用50mL，合并 有机相，50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓縮，硅胶柱层析纯化，洗脱剂为石油醚与 乙酸乙酯的混合溶齐U，混合溶剂比例为石油醚乙酸乙酯=15 : l，得得1.6g化合物VI， 收率88%。
全文摘要
一种基于山楂酸的光亲和标记小分子探针及其制备方法，属有机化合物及其制备的技术领域。以天然产物山楂酸为起始原料，乙酰基保护得到化合物I，化合物I与草酰氯反应得到化合物II，化合物II与Boc单保护的乙二胺反应得到化合物III，化合物III首先在HCl的乙酸乙酯溶液中脱去Boc保护基，然后再与带有光亲和标记基团的片段IV反应得到化合物V，化合物V在碱的存在下水解脱除乙酰基保护基，得到光亲和标记小分子探针VI。所述的探针分子可用于研究、发现活性化合物山楂酸的体内作用靶标、及与其靶点的作用模式、活性位点的结构信息，为相关药物的研发提供重要信息。
文档编号C07J63/00GK101792478SQ20101012695
公开日2010年8月4日 申请日期2010年3月18日 优先权日2010年3月18日
发明者仇文卫, 喻艳华, 杨帆, 汤杰, 邹慧, 龚雪萍 申请人:华东师范大学