专利名称：从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法
技术领域：
本发明涉及中草药中天然活性成分的提取方法，具体涉及从何首乌中提取分离二
苯乙烯苷的方法。
背景技术：
何首乌，又称首乌、赤首乌，为寥科植物何首乌(polygonum multif lorumthunb)的 干燥块根。现代医学表明，何首乌具有增强免疫功能，抗氧化作用，延缓大脑衰老，提高DNA 修复功能，延长寿命，降低胆固醇，改善脂肪代谢等多项功能。何首乌的主要成分有羟基蒽 醌类化合物(主要为大黄素、大黄氛、大黄酸等葡萄糖苷，均为二苯代乙烯化合物)，醌类化 合物，二苯乙烯苷类化合物，酰胺类化合物，色原酮类化合物，卵磷脂，微量元素钙、铁、锌、 锰、铜等。 二苯乙烯苷是何首乌中特有的生物活性成分，它具有良好的水溶性，同时具有抗 氧化清除自由基，降低胆固醇，保肝等多重功能，作为抗衰老的标的组分极具研究的价值。 二苯乙烯苷的化学名称为2， 3， 5， 4'-四羟基二苯乙烯-2-0-13 -d-葡萄糖苷(tsg)，为白色 无定形粉末，易溶于水、甲醇、乙醇，其相对分子量为406. 39(吕丽爽等，何首乌中二苯乙烯 苷的醇提工艺，食品与发酵工业，2004年30巻10期，132 135页)。 现有的从何首乌中提取二苯乙烯苷的方法大都采用水或乙醇极性溶剂提取，如公 开号为CN101003554的发明专利公开了一种从何首乌中分离制备四羟基二苯乙烯苷方法， 它是将何首乌块茎粉碎，过筛20目，用水或乙醇提取2次(乙醇的料液比为1 : 9，水的 料液比为l : 15)，将提取液浓縮；浓縮液用聚酰胺或大孔吸附树脂层析柱分离，乙醇梯度 洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集二苯乙烯苷组分；将收集到的二苯乙烯苷组分进行减压浓 縮，用溶剂结晶方法，室温条件下制备过饱和溶液，慢慢降低温度，缓慢蒸发溶剂析出晶体， 抽滤后，取粗晶体相同条件下进行重结晶，得到二苯乙烯苷白色针状晶体。该方法操作较简 便、提取纯度较高，但是提取溶剂水或乙醇的用量大，生产成本较高；而且在以水为溶剂提 取时，提取温度需在5(TC条件下进行，而这样的温度条件下会加速对二苯乙烯苷的破坏，使 其水解成其它化合物。 又如公开号为CN101560229的发明专利公开了一种何首乌提取物二苯乙烯苷的 提取方法，其步骤为(l)何首乌醇提物的制备对何首乌粗粉末采用60%的乙醇微波提取 3次，旋转薄膜回收乙醇，得到何首乌提取浓縮液；(2)采用高速逆流色谱法去除脂溶性杂 质；(3)利用大孔吸附树脂纯化二苯乙烯苷；(4)将上述二苯乙烯苷粗品混悬于水溶液中， 再次装于逆流色谱仪中，用乙酸乙酯连续萃取，监测直至乙酸乙酯提取液中无二苯乙烯苷 为止，回收乙酸乙酯至小体积，通过低温结晶处理得到二苯乙烯苷精品。该发明所述方法操 作较简便、提取纯度较高，但是同样存在提取溶剂水或乙醇用量大的不足。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种工艺简单，生产成本低、提取收率高的从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法。 为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案 从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，取何首乌，粉碎，用水或低碳醇渗漉提
取，提取液经大孔树脂柱层析、反渗透浓縮、析晶、重结晶、冷冻干燥即得。
上述方法具体包括以下步骤 1)取何首乌，粉碎，用原料重量的3 15倍的水或低碳醇渗漉提取，渗漉速度为 0. 1 2BV/h，渗漉时间4 24h ; 2)提取液过大孔树脂柱，用体积浓度为40 70%的低碳醇洗脱，收集洗脱液； 3)将洗脱液反渗透浓縮，得浓縮液； 4)浓縮液于常温下析晶，重结晶，冷冻干燥即得。 为了进一步提高二苯乙烯苷的收率，同时尽量减少二苯乙烯苷水解成其它化合
物，可以向浓縮液中加入有机酸后放置12 72h析晶，有机酸的加入量为浓縮液质量的
0.3 0.5%。所述的有机酸为甲酸、乙酸或抗坏血酸。由于二苯乙烯苷在酸性条件下的溶
解度小，因此更易析出晶体。
上述方法中 何首乌粉碎过10 30目筛。 所述提取用低碳醇的体积浓度为10 75%，优选50 70%。
所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇或丁醇。所述大孔树脂的型号优选为ADS-21、 ADS-7、ADS-17、ADS-4或ADS-F8。
所述洗脱用低碳醇的用量为树脂重量的2 6倍，洗脱流速为0. 5 2BV/h。
所述洗脱液反渗透浓縮至适量即可，优选浓縮至原料重量的0. 5 0. 8倍。
所述的冷冻干燥为现有常规的冷冻干燥方式。
与现有技术相比，本发明所述方法的优点在于 1、采用常温渗漉提取，在具备提取溶剂用量少、杂质少、操作方便等优点外，还能 避免在高温条件下进行提取对二苯乙烯苷的破坏；与传统提取工艺比较，能最大限度的提 取目标成分，且保证不会被破坏；同时相对于超声提取和超临界提取来说更适合于工业化 大生产。 2、提取液上树脂柱分离后，采用的反渗透浓縮和冷冻干燥，都是低温操作，将对二 苯乙烯苷的破坏控制在最低限度。 3、进一步地，本发明向浓縮液中加入有机酸进行结晶和重结晶，一方面利用有机
酸改变析晶溶液的ra值，有利于晶体析出；另一方面有机酸还能很好的保护二苯乙烯不被破坏。 4、工艺简单，大大减少了提取溶剂的用量，既保证了产品的质量也降低了生产成 本；由本方法制得的二苯乙烯苷产品纯度可达99%以上(HPLC法测定)，产品收率可达 5.0%以上。
具体实施例方式
下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
以下实施例中乙醇浓度为体积浓度；用到的甲酸、乙酸和抗坏血酸为分析纯试齐U。
实施例1 1)取何首乌，粉碎至10目，称取50kg，先用1倍原料重量、20%的乙醇溶液润溶， 充分均匀后放置lh ;装入渗漉罐中，加盖浸渍30h，再用原料重量5倍、20%的乙醇常温渗漉 提取，渗漉速度为lBV/h，渗漉时间为6h ; 2)提取液过ADS-7大孔树脂柱，用3倍树脂重量、60%的乙醇洗脱，流速为lBV/h， 收集洗脱液； 3)将洗脱液反渗透浓縮至原料重量的0. 5倍； 4)向浓縮液中加入浓縮液质量0.3%的乙酸，放置24小时，析出的晶体在相同 条件下进行重结晶，冷冻干燥，得到白色针状晶体二苯乙烯苷2. 52kg， HPLC法检测纯度为 99. 53%。
实施例2 1)取何首乌，粉碎至20目，称取80kg，先用0. 75倍原料重量的水润溶，充分均匀 后放置2h ;装入渗漉罐中，加盖浸渍40h，再用原料重量10倍的水常温渗漉提取，渗漉速度 为0. 8BV/h，渗漉时间为10h ; 2)提取液过ADS-21大孔树脂柱，用2. 5倍树脂重量、55 %的乙醇洗脱，流速为 0. 8BV/h，收集洗脱液； 3)将洗脱液反渗透浓縮至原料重量的0. 8倍； 4)向浓縮液中加入浓縮液质量0.5%的甲酸，放置30小时，析出的晶体在相同 条件下进行重结晶，冷冻干燥，得到白色针状晶体二苯乙烯苷4. 16kg， HPLC法检测纯度为 99. 16%。
实施例3 1)取何首乌，粉碎至10目，称取100kg，先用1倍原料重量、30%的甲醇溶液润溶， 充分均匀后放置lh;装入渗漉罐中，加盖浸渍30h，再用原料重量14倍、30%的甲醇常温渗 漉提取，渗漉速度为0. 8BV/h，渗漉时间为5h ; 2)提取液过ADS-17大孔树脂柱，用3倍树脂重量、60 %的甲醇洗脱，流速为 0. 8BV/h，收集洗脱液； 3)将洗脱液反渗透浓縮至原料重量的0. 6倍； 4)向浓縮液中加入浓縮液质量0.4%的甲酸，放置32小时，析出的晶体在相同 条件下进行重结晶，冷冻干燥，得到白色针状晶体二苯乙烯苷5. 31kg， HPLC法检测纯度为 99. 42%。
实施例4 1)取何首乌，粉碎至15目，称取40kg，先用0. 5倍原料重量、50%的丁醇溶液润 溶，充分均匀后放置1. 5h ;装入渗漉罐中，加盖浸渍10h，再用原料重量3倍、50%的丁醇常 温渗漉提取，渗漉速度为0. lBV/h，渗漉时间为20h ; 2)提取液过ADS-F8大孔树脂柱，用5倍树脂重量、40%的丁醇洗脱，流速为2BV/ h，收集洗脱液； 3)将洗脱液反渗透浓縮至原料重量的0. 7倍； 4)将浓縮液中于常温下析晶，析出的晶体在相同条件下进行重结晶，冷冻干燥，得 到白色针状晶体二苯乙烯苷2. 12kg， HPLC法检测纯度为99. 28%。
实施例5 1)取何首乌，粉碎至10目，称取100kg，先用0. 6倍原料重量、70%的丙醇溶液润 溶，充分均匀后放置2h ;装入渗漉罐中，加盖浸渍7h，再用原料重量8倍、70%的丙醇常温渗 漉提取，渗漉速度为1. 5BV/h，渗漉时间为15h ; 2)提取液过ADS-4大孔树脂柱，用6倍树脂重量、70%的丁醇洗脱，流速为0. 5BV/ h，收集洗脱液； 3)将洗脱液反渗透浓縮至原料重量的1倍； 4)向浓縮液中加入浓縮液质量0. 35%的抗坏血酸酸，放置12小时，析出的晶体在 相同条件下进行重结晶，冷冻干燥，得到白色针状晶体二苯乙烯苷5. 29kg， HPLC法检测纯 度为99. 35%。
权利要求
从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，其特征在于取何首乌，粉碎，用水或低碳醇渗漉提取，提取液经大孔树脂柱层析、反渗透浓缩、析晶、重结晶、冷冻干燥即得。
2. 根据权利要求1所述的从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，其特征在于包括以 下步骤1) 取何首乌，粉碎，用原料重量的3 15倍的水或低碳醇渗漉提取，渗漉速度为0. l 2BV/h，渗漉时间4 24h ;2) 提取液过大孔树脂柱，用体积浓度为40 70%的低碳醇洗脱，收集洗脱液；3) 将洗脱液反渗透浓縮，得浓縮液；4) 浓縮液于常温下析晶，重结晶，冷冻干燥即得。
3. 根据权利要求2所述的从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，其特征在于向浓 縮液中加入有机酸后放置12 72h析晶，有机酸的加入量为浓縮液质量的0. 3 0. 5%。
4. 根据权利要求3所述的从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，其特征在于所述 的有机酸为甲酸、乙酸或抗坏血酸。
5. 根据权利要求1 4中任何一项所述的从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，其 特征在于提取用低碳醇的体积浓度为10 75%。
6. 根据权利要求5所述的从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，其特征在于低碳 醇的体积浓度为50 70%。
7. 根据权利要求1 4中任何一项所述的从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，其 特征在于所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇或丁醇。
8. 根据权利要求1 4中任何一项所述的从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，其 特征在于所述大孔树脂的型号为ADS-21、ADS-7、ADS-17、ADS-4或ADS-F8。
9. 根据权利要求1 4中任何一项所述的从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，其 特征在于洗脱用低碳醇的用量为树脂重量的2 6倍，洗脱流速为0. 5 2BV/h。
10. 根据权利要求2 4中任何一项所述的从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，其 特征在于洗脱液反渗透浓縮至原料重量的0. 5 0. 8倍。
全文摘要
本发明公开了一种从何首乌中提取分离二苯乙烯苷的方法，它是取何首乌，粉碎，用水或低碳醇渗漉提取，提取液经大孔树脂柱层析、反渗透浓缩、析晶、重结晶、冷冻干燥即得。与现有技术相比，本发明采用常温渗漉提取，在具备提取溶剂用量少、杂质少、操作方便等优点外，还能避免在高温条件下进行提取对二苯乙烯苷的破坏；后续采用的反渗透浓缩和冷冻干燥，都是低温操作，将对二苯乙烯苷的破坏控制在最低限度；进一步地，在浓缩液中加入有机酸进行结晶和重结晶，一方面可改变析晶溶液的PH值，有利于晶体析出；另一方面还能很好的保护二苯乙烯不被破坏；由本方法制得的产品纯度可达99％以上(HPLC法测定)，产品收率可达5.0％以上。
文档编号C07H15/18GK101787060SQ20101013395
公开日2010年7月28日 申请日期2010年3月26日 优先权日2010年3月26日
发明者卢昶年, 卢照凯 申请人:卢昶年;卢照凯