专利名称：一种丹参丹酚酸a的制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种丹参丹酚酸A的制备方法。
背景技术：
丹参是经典的活血化瘀的中药药味，其具有活血化瘀作用的化学成分主要为水溶性成分，丹参水溶性成分多具有酚酸性结构，即丹酚酸A、B、C、D、E等有效成分，丹参总酚酸中以丹酚酸B含量最高，因此，人们开发的重点集中于丹酚酸B，但是，丹参水溶性成分活性最好的是丹参酚酸A (杜冠华基础医学与临床，2000，20 (5) 10 14、胡义扬中药药理学报，1997，18 (5) 478-480])，可丹参丹酚酸A在丹参中含量很低，因为无法进行工业化生产而被人们忽略。本院申请的专利(申请号为200610145453. 9、200710099618. 8等)采用调PH值、高温反应的方法将丹参多酚酸或丹参丹酚酸B转化成丹酚酸A，该方法成功的将丹酚酸A的提取率从万分之五提高到千分之三左右(以丹酚酸A计)，使丹酚酸A具有成药研究的基础。丹酚酸A将成为创制新药，得率再次提高和得到质量均一的丹酚酸A是科研工作的重点之一。
发明内容
基于上述原因，本院的科研人员通过多次研究，继续优化工艺方法发现，调pH值、 高温反应后的反应液，在一定温度下离心不会导致沉淀裹挟丹酚酸A，大孔树脂纯化后，省去离心步骤，保持溶液的乙醇浓度，同样防止沉淀裹挟丹酚酸A，再经聚酰胺纯化等步骤，省略有机溶剂萃取的步骤(降低生产成本，减少环境污染)，得到丹酚酸A提取物，该提取物丹酚酸A含量大于96 %，以丹酚酸A计得率大于千分之五，该方法在保证丹酚酸A纯度的基础上，得率再度提高，节省了大量资源，降低了生产成本。将上述方法得到丹酚酸A提取物或现有技术得到的丹酚酸A提取物，经中压液相分离纯化，采用正相硅胶或反相硅胶，以二相溶剂为洗脱剂，采用等度或梯度洗脱方法，得到纯度大于98%的丹酚酸A，其中相关物质丹酚酸F和丹酚酸C含量均在0. 5%范围内，多批次实验确定该方法得到的丹酚酸A纯度较高，杂质含量均一，属于质量稳定的产品。本发明通过下述技术方案实现的。—种丹酚酸A提取物的制备方法，丹参水提取或乙醇提取，提取液浓缩或回收乙醇浓缩，调PH值3. 5-6. 0，1050C _140°C加热1-6小时，得到反应液，反应液在20°C _50°C时离心，经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，其中所述大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、 HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400 或 AB-8 ；先用水洗，弃去洗脱液， 再用10-30%乙醇洗脱，弃去洗脱液，再用30-70%浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至乙醇浓度为5% -50% ；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用30-70%乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用70-95%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物。
一种丹酚酸A的制备方法，取上述实验方法得到丹酚酸A或现有技术制备方法得到的丹酚酸A提取物经中压制备液相分离；洗脱柱填充剂为正相硅胶，洗脱溶剂二相，其中a溶剂为正己烷、石油醚、乙醚、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯、丙酮或丁酮，b溶剂为甲醇、乙醇或乙腈，洗脱分离时b溶剂的体积百分比大于0小于等于50% ；或者，a溶剂为正己烷、石油醚、乙醚、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯、丙酮或丁酮，b溶剂为甲醇、乙醇或乙腈，a或b溶剂中加入其体积百分比为大于0小于等于10%的甲酸、乙酸或磷酸，洗脱分离时b溶剂体积百分比大于0小于等于50% ；得到洗脱液，浓缩，干燥，得到丹酚酸A ；或者，洗脱柱填充剂为反相硅胶，洗脱溶剂为二相，其中a溶剂为水，b溶剂为甲醇、乙醇或乙腈，洗脱分离时b溶剂的体积百分比大于0小于等于50%，收集洗脱溶液，浓缩，干燥，得到丹酚酸A。一、检测方法实验方法色谱柱C18反相色谱柱，NUCLE0DUR, 250*4. 6謹，ODS ；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/ min ；柱温35°C;检测波长286nm ；理论板数按丹酚酸A计应不低于60000 ；以乙腈-0. 2%醋酸水溶液为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱，运行90分钟；0-15分钟时，乙腈的比例由10%升至20%，0. 2%醋酸水溶液的比例由90%降至80% ； 15-55分钟时，乙腈的比例由20%升至30%，0. 2%醋酸水溶液的比例由80%降至70% ；55-65分钟时，乙腈的比例由30%升至50%，0.2%醋酸水溶液的比例由70%降至50% ；65-72分钟时，乙腈的比例由50%升至80%，0. 2%醋酸水溶液的比例由50%降至 20% ；72-77分钟时，乙腈的比例80%,0. 2%醋酸水溶液的比例20% ；77-80分钟时，乙腈的比例由80%降至10%，0. 2%醋酸水溶液的比例由20%升至90%;80-90分钟时，保持乙腈-0. 2%醋酸水溶液以10 90的比例进行洗脱；对照品溶液的配制精密称取丹酚酸A对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇勻，并稀释至刻度；样品溶液的配制取样品，加入甲醇溶解摇勻；或精密量取或称取制剂，加甲醇溶解摇勻，并稀释至刻度；测定法精密吸取对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图；精密吸取样品溶液，注入液相色谱仪，计算峰面积比。上述方法测定本发明丹酚酸A提取物丹酚酸A含量大于96 %。上述方法测定本发明丹酚酸A纯度大于98 %，相关物质丹酚酸F和丹酚酸C含量均在0. 5%范围内。 二、不同方法得到丹酚酸A提取物得率实验实验方案1 按照专利申请号为200610145453. 9的实施例1得到丹酚酸A提取物；实验方案2 按照本发明丹酚酸A提取物制备方法得到丹酚酸A提取物，丹参水乙醇提取，提取液回收乙醇浓缩，调pH值4. 0，120°C加热3小时，得到反应液，反应液在 250C时离心，经AB-8大孔树脂柱层析分离，先用水洗，弃去洗脱液，再用20 %乙醇洗脱，弃
4去洗脱液，再用40%浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至乙醇浓度为10% ；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用40%乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用80%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物。实验方法按照上述实验方案得到丹酚酸A提取物，按照上述检测分析方法计算丹酚酸A的得量，计算得率。实验结果见表1。表1不同方法得率比较结果
权利要求
1.一种丹酚酸A提取物的制备方法，其特征在于丹参水提取或乙醇提取，提取液浓缩或回收乙醇浓缩，调pH值3. 5-6. 0，105 0C _140°C加热1_6小时，得到反应液，反应液在20°C -50°C时离心，经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，其中所述大孔树脂柱为 HPD-100, HPD-100A, HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400 或 AB-8 ； 先用水洗，弃去洗脱液，再用10-30%乙醇洗脱，弃去洗脱液，再用30% -70%浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至乙醇浓度为5% -50% ；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用 30% -70%乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用70% -95%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物。
2.一种丹酚酸A的制备方法，其特征在于取丹酚酸A提取物经中压制备液相分离； 洗脱柱填充剂为正相硅胶，洗脱溶剂为二相，其中a溶剂为正己烷、石油醚、乙醚、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯、丙酮或丁酮，b溶剂为甲醇、乙醇或乙腈，洗脱分离时 b溶剂的体积百分比大于0小于等于50% ；或者，a溶剂为正己烷、石油醚、乙醚、三氯甲烷、 二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯、丙酮或丁酮，b溶剂为甲醇、乙醇或乙腈，a或b溶剂中加入其体积百分比为大于0小于等于10%的甲酸、乙酸或磷酸，洗脱分离时b溶剂体积百分比大于0小于等于50% ；得到洗脱液，浓缩，干燥，得到丹酚酸A ；或者，洗脱柱填充剂为反相硅胶，洗脱溶剂为二相，其中a溶剂为水，b溶剂为甲醇、乙醇或乙腈，洗脱分离时b溶剂的体积百分比大于0小于等于50%，收集洗脱溶液，浓缩，干燥，得到丹酚酸A。
全文摘要
本发明公开了一种丹酚酸A的提取方法，其特征在于采用新的工艺方法得到丹酚酸A提取物，该方法丹酚酸A提取物以丹酚酸A计得率超过千分之五，节省了大量资源；本发明还公开了丹酚酸A的制备方法，采用中压液相制备方法，洗脱剂为两相，等度或梯度洗脱，得到相关物质丹酚酸F、丹酚酸C含量低于0.5％的高纯度丹酚酸A，该方法得到丹酚酸A质量更加均一、稳定。
文档编号C07C69/732GK102219685SQ201010148488
公开日2011年10月19日 申请日期2010年4月16日 优先权日2010年4月16日
发明者孙学伟, 孙德杰, 渠守峰, 郝华, 郭小鹏, 顾群 申请人:北京本草天源药物研究院