注射用黄芪皂苷中单体化合物的分离方法

专利名称：注射用黄芪皂苷中单体化合物的分离方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种注射用黄芪皂苷中单体化合物的分离方法。
背景技术：
近年来中药注射剂的不良反应越来越受到公众的关注，中药注射剂的质量亟待提高，与西药注射剂相比，中药注射剂主要存在化学物质基础不明确的问题，这给质量控制带来了困难。经文献检索，未见对注射用黄芪皂苷中单体化合物的分离鉴定报道，一般只是用黄芪甲苷标准品对其中的黄芪甲苷进行定性和定量检测。

发明内容
本发明的目的在于提供一种注射用黄芪皂苷中的单体化合物的分离方法。本发明注射用黄芪皂苷中单体化合物的分离方法如下按专利申请号为CN200510020402. 9的专利中的方法制备注射用黄芪皂苷。将药物原料黄芪用体积浓度为40% -95%的含水乙醇回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇体积含量至40% -95%进行沉淀和过滤，滤液调节至pH 6. 0-11. 0 后进行沉淀过滤，将滤液调节至PH 6. 0-8. 0后，按原料药/水重量比为0. 5-3/1的量加水混合，在保持不冻结的低温条件下沉淀后过滤，滤液用大孔吸附树脂吸附，用浓度为 50% -90%的含水乙醇解吸附洗脱并收集，将除去乙醇后的解吸附浓缩溶液调节pH至 9. 0-13.0后，用经水饱和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮和乙醚中的至少一种进行沉淀，分离沉淀物为供注射剂用的黄芪皂苷；其中所述的黄芪原料回流提取所用的含水乙醇优选浓度为60% -80% ；其中所述的除去乙醇后的回流提取液重新加入乙醇进行沉淀的混合溶液乙醇体积含量优选为70% -90% ；其中所述的除去乙醇后的回流提取液重新加入乙醇进行沉淀和过滤后，优选将滤液调节至PH 8. 0-10. 0沉淀过滤；其中所述的经乙醇沉淀和过滤后的滤液调节至PH 6. 0-8. 0后，优选按原料药/水重量比为1-2/1的量加水混合；其中所述的按原料药/水重量比为0. 5-3/1的量加水混合后，优选在0°C -10°c条件下沉淀后过滤；其中所述的滤液用大孔吸附树脂吸附，大孔吸附树脂为制药生产中常用的大孔吸附树脂，如平均孔径为0. 02-0. 03 μ m,比表面积彡400m2/g的常用的D-10U DiaionHP-20、 D-201、AB-8、DM-301 等型号。取黄芪皂苷100-300重量份，用5-10重量倍的水分散，用分析纯的乙酸乙酯萃取 2-5次，每次用量为2-5重量倍，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物15-50重量份；萃取后的水相用分析纯的正丁醇萃取2-5次，每次用量为2-5重量倍，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇得到正丁醇萃取物60-200重量份；将乙酸乙酯萃取物15-50重量份经正相硅胶柱层析分离，体积比为 95-100 0-5 — 50-65 35-50的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为5_10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为10-20 0.8-1. 2和2-6 0. 8-1. 2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前1. 25-2. 5 倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份A，依次接下来的0. 75-1. 5倍柱体积、0. 5-1倍柱体积、0. 5-1倍柱体积、0. 75-1. 5倍柱体积、1. 25-2. 5倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份B、组份C、组份D、组份E和组份F，回收溶剂后，分别得到组份A 0. 1-0. 5重量份、组份Bi. 2-4. 8重量份、组份C 2-9重量份、组份D4-13重量份、组份E1-5重量份、组份 F1-6重量份6个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VI B ；将正丁醇萃取物60-200重量份经正相硅胶柱层析分离，以体积比为 85-90 10-15 — 30-35 65-70氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为5_10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为8-12 0.8-1. 2和2-5 0. 8-1. 2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前1. 5-3倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份G，依次接下来的1-2倍柱体积、0. 5-1倍柱体积、 0. 5-1倍柱体积、1. 5-3倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份H、组份I、组份J和组份K，回收溶剂后，得到组份G1-5重量份、组份H 3-12重量份、组份I 8_30重量份、组份 J12-40重量份、组份K 2-9重量份5个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VI B ；将组份A 0. 1-0. 5重量份经正相硅胶柱层析分离，用分析纯的氯仿洗脱，洗脱液用量为8-12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为8-12 0.8-1.2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前 3. 2-4. 8倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份A-1，依次接下来的0. 8-1. 2倍柱体积、 4-6倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份A-2和组份A-3，将其中组分A-2回收溶剂后，得到单体化合物10-50mg，经结构鉴定为10-甲氧基美迪紫檀素，其化学式如下
权利要求
1. 一种注射用黄芪皂苷中单体化合物的分离方法，其特征在于该方法包括如下步骤 将药物原料黄芪用体积浓度为40% -95%的含水乙醇回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇体积含量至40% -95%进行沉淀和过滤，滤液调节至pH6. 0-11. 0后进行沉淀过滤，将滤液调节至pH 6. 0-8. 0后，按原料药/水重量比为 0. 5-3/1的量加水混合，在保持不冻结的低温条件下沉淀后过滤，滤液用大孔吸附树脂吸附，用浓度为50% -90%的含水乙醇解吸附洗脱并收集，将除去乙醇后的解吸附浓缩溶液调节PH至9. 0-13.0后，用经水饱和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮和乙醚中的至少一种进行沉淀，分离沉淀物为供注射剂用的黄芪皂苷；取黄芪皂苷100-300重量份，用5-10重量倍的水分散，用分析纯的乙酸乙酯萃取 2-5次，每次用量为2-5重量倍，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物 15-50重量份；萃取后的水相用分析纯的正丁醇萃取2-5次，每次用量为2-5重量倍，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇得到正丁醇萃取物60-200重量份；将乙酸乙酯_物15" M份经正相娃胶ttM析分离，体积比为95-100 0^-50-65 35^0 的氯仿_甲醇梯度湖兌，湖兌删量为5-10倍柱体积，在湖兌过程中，一边湖兌一边以每次0.1个柱体积的湖盗碰行正相娃胶薄层层析检查，以体积比为1Ο"20 0.8-1. 2和24 0.8-1. 2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前1. 25-2. 5倍柱体积的灘液的斑点相近，收集为组份A，依次接下来的0. 75-1. 5 倍柱体积、0. 5-1倍柱体积、0. 5-1倍柱体积、0. 75-1. 5倍柱{本积、、1. 25-2. 5倍柱体积的M液斑点相近， 分别收集为组份B、组份C、组份D、组份E和组份F，回收输眤，分别得到组份A 0.1-0. 5麗份、组份 Bi. 2-4 8重量份、组份C 2- 重量份、组份M-13重量份、组份El^重量份、组份F 1-6重量份6个组份，其中腿的正相娃胶薄层层析检查参照仲国药典》2005年版一部附录VIB ；将正Tim(物60"200麗傲证綱交腺斤分离，以術只比为_ 1(M5-30-35 ■ 氯仿_甲_度M，MM量为Fio倍柱m只，在Mil程中，一边M—边以每次0.1个柱m只的湖盗縦行正才_交薄层层析检查，以体积比为8-12 0.8-1.2和抖0.8-1.2的氯仿甲醇为展开 结果显示，前1. ^-3倍柱術只的灘液的斑点相近，收集为组份G，依次接下来的1-2倍柱体积、0. 倍柱体积、0. 倍柱 材只、1. ^-3倍柱体积的_兌？—王点相近，分别收集为组份H、组份I、组份J和组份 K，回收湔昵，得到组份G Ii麗份、组份H 3-12麗份、组份I 8-30麗份、组份J12^40麗份、组份 K 2- 麗份5杉且份，其中臓的正才_交薄层层析检查参照仲国药典》2005年版 1附录Vffi ；将组份A 0. 1-0. 5重量份经正相硅胶柱层析分离，用分析纯的氯仿洗脱，洗脱液用量为8-12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为8-12 0.8-1.2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前 3. 2-4. 8倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份A-1，依次接下来的0. 8-1. 2倍柱体积、 4-6倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份A-2和组份A-3，将其中组分A-2回收溶剂后，得到单体化合物10-50mg，经结构鉴定为10-甲氧基美迪紫檀素，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份B 1.2-4. 8重量份经正相硅胶柱层析分离，以体积比为95-100 0-5-50-65 35-50 的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为8-12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1 个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为4-8 0.8-1. 2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3. 2-4. 8倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份B-1，依次接下来的1. 6-2. 4 倍柱体积、3. 2-4. 8倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份B-2和组份B-3,将其中组分B-2回收溶剂后，再用80-120体积份甲醇重结晶得到单体化合物90-320mg，经结构鉴定为胡萝卜苷； 其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C 2-9重量份经正相硅胶柱层析分离，以体积比为95-100 0-5 — 50-60 40-50 的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为8-12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次 0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为4-8 0.8-1.2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前2. 4-3. 6倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-1，依次接下来的2. 4-3. 6倍柱体积、3. 2-4. 8倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-2和组份C-3， 回收溶剂后，得到组份C-I 0.2-1. 2重量份、组份C-2 0.5-1. 5重量份、组份C-3 1_4重量份 3个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C-I 0. 2-1. 2重量份经kphadex LH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为10-15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为4-8 0.8-1. 2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3-4. 5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-1-1，依次接下来的1-1. 5倍柱体积、6-9倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-1-2和组份C-1-3，将其中组分 C-1-2回收溶剂后，得到单体化合物50-200mg，经结构鉴定为乙酰黄芪皂苷I，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C-2 0. 5-1. 5重量份经kphadex LH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为10-15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3-8 0.8-1. 2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前5-7. 5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-2-1，依次接下来的2-3倍柱体积、3-4. 5倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-2-2和组份C-2-3，将其中组分 C-2-2回收溶剂后，得到单体化合物100-420mg，经结构鉴定为2_羟基-3，4-二甲氧基异黄烷-7-0- β -D吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版-部附录VIB;将组份C-3 1-4重量份经正相硅胶柱层析分离，以体积比为90-100 0-10 - 50-55 45-50 的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为10-15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3-8 0.8-1. 2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3-4. 5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-3-1，依次接下来的 2. 5-3. 75倍柱体积、4. 54. 75倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-3-2和组份C-3-3， 将其中组分C-3-2回收溶剂后，得到单体化合物0. 3-1. 5g，经结构鉴定为:9，10- 二甲氧基紫檀烷Hii-D-吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB;将组份E 1-5重量份经40-60体积份的甲醇重结晶得到单体化合物0. 5-2. 5g，经结构鉴定为毛蕊异黄酮-7-0-β -D-吡喃葡萄糖苷；将组份F 1-6重量份经正相硅胶柱层析分离，以体积比为90-100 0-10 — 50-55 45-50 的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为8-12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1 个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为2-6 0.8-1. 2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3. 6-5. 4倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份F-1，依次接下来的1.2-1. 8倍柱体积、3. 2-4. 8倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份F-2和组份F-3，将组分F-2回收溶剂后，得到单体化合物0. 5-3. 5g，经结构鉴定为黄芪甲苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份H 3-12重量份经80-120体积份的甲醇重结晶得到单体化合物1.5_6g，经结构鉴定为芒柄花苷；将组份K 2-9重量份经kphadex LH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为8-12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为2-5 0.8-1. 2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前.4.8-7. 2倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K-1，接下来的3. 2-4. 8倍柱体积的洗脱液斑点相近，收集为组份K-2，回收溶剂后，得到组份K-I 1-3重量份、组份K-20. 5-3重量份2个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份K-I 1-3重量份经反相C18硅胶柱层析分离，以体积比为10-15 8540 — 8540 10-15 的甲醇_7jC梯度洗脱，洗脱液用量为10-15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为2-5 0.8-1. 2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前44倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K-1-1，依次接下来的0. 8-1. 25倍柱体积、.5.2-7. 75倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份K-1-2和组份K-1-3，将组分K-1-2回收输Ij 后，得到单体化合物90-340mg，经结构鉴定为(yclocanthoside E ；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份K-2 0.5-3_份经反相(18娃胶^^析分离，以体积比为10"15 85-90 - 85-90 10-15 的甲醇_ 7K梯度洗脱，洗脱液用量为1(M5倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相娃胶薄层层析检查，以体积比为好0.8-1. 2的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3. 54. 2倍柱体积的M液的斑点相近，收集为组份K-2-1，依次接下来的1. 2-1.8倍柱体积、 5. 3-8倍柱体积的湖兌液斑点相近，分别收集为组份K-2-2和组份K-2-3，将组分K-2-2回收输U后，得至IJ单体化^t/60"25Qie，经结构鉴定为黄鶴苷VI ；其中臓的正相娃胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB。
2.如权利要求1所述的一种注射用黄芪皂苷中单体化合物的分离方法，其特征在于该方法包括如下步骤取黄芪药材20kg，切片，加体积浓度为70%的含水乙醇8倍回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇体积含量至65%进行沉淀和过滤，滤液调节至pH9. 0 后沉淀过滤，滤液调节至pH7. 0左右，按原料药/水为1. 5/1的量加水混合后，在5°C低温下沉淀后过滤，滤液用大孔吸附树脂D-101吸附，以30%浓度的含水乙醇洗脱至洗脱液几乎无色除杂，再以75%浓度的含水乙醇解吸附洗脱并收集，将除去乙醇后的解吸附浓缩溶液调节PH至10.0后，用经水饱和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮-乙醚(1 1) 进行沉淀，分离沉淀物为供注射剂用的黄芪皂苷；取黄芪皂苷IOOg先用水IOOOml分散，用分析纯的乙酸乙酯萃取3次，每次500ml，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物15g ；萃取后的水相用分析纯的正丁醇萃取3次，每次500ml，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇得到正丁醇萃取物65g ；将乙酸乙酯萃取物15g经正相硅胶柱层析分离，体积比为95 5 — 65 35的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为8倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为15 1和4 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前2倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份A，依次接下来的1. 2倍柱体积、 0. 8倍柱体积、0. 8倍柱体积、1. 2倍柱体积、2倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份 B、组份C、组份D、组份E和组份F，回收溶剂后，分别得到组份A :0. lg、组份B:1.4g、组份C: 2. Sg、组份D 4. 0g、组份E 1. 5g、组份F :1. 8g 6个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将正丁醇萃取物65g经正相硅胶柱层析分离，体积比为85 15 — 30 70的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为10 1和3 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份G，依次接下来的2倍柱体积、1倍柱体积、1倍柱体积、3倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份H、组份I、组份 J和组份K，回收溶剂后，得到组份G :1. 4g、组份H :3. 2g、组份I 9. 5g、组份J :12. 0g、组份 K :2. 5g 5个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录 VIB ；将组份A 0. Ig经正相硅胶柱层析分离，用分析纯的氯仿洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为10 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前4. 8倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份A-1，依次接下来的1. 2倍柱体积、6倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份A-2和组份A-3，将其中组分A-2回收溶剂后，得到单体化合物10mg，经结构鉴定为10-甲氧基美迪紫檀素，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份B 1.4g经正相硅胶柱层析分离，以体积比为95 5 —65 35的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示， 前4倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份B-1，依次接下来的2倍柱体积、4倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份B-2和组份B-3，将其中组分B-2回收溶剂后，再用 120ml甲醇重结晶得到单体化合物95mg，经结构鉴定为胡萝卜苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C 2. 8g经正相硅胶柱层析分离，以体积比为100 0 — 60 40的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为8倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前 2. 4倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-1，依次接下来的2. 4倍柱体积、3. 2倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-2和组份C-3，回收溶剂后，得到组份C-I 0. 3g、 组份C-2 0. 5g、组份C-3 1. 2g 3个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB;将组份C-10. 3g经kphadex LH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前4. 5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-1-1，依次接下来的1. 5倍柱体积、9倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-1-2和组份C-1-3，将其中组分C-1-2回收溶剂后，得到单体化合物50mg，经结构鉴定为乙酰黄芪皂苷I ；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C-2LH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为5 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前7.5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-2-1，依次接下来的3倍柱体积、4. 5倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-2-2和组份C-2-3，将其中组分C-2-2回收溶剂后，得到单体化合物105mg，经结构鉴定为2-羟基-3，4- 二甲氧基异黄烷_7_0- β -D-吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C-3 1. 2g经正相硅胶柱层析分离，以体积比为100 0 — 55 45的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为5 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3. 6倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-3-1，依次接下来的3倍柱体积、5. 4 倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-3-2和组份C-3-3，将其中组分C-3-2回收溶剂后，得到单体化合物310mg，经结构鉴定为9，10- 二甲氧基紫檀烷-3-0-β -D-吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份E 1.5g经甲醇50ml重结晶得到单体化合物800mg，经结构鉴定为毛蕊异黄酮-7-0-β-D-吡喃葡萄糖苷；将组份F 1.8g经硅胶柱层析分离，以体积比为90 10 —55 45的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为4 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前4. 5 倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份F-1，依次接下来的1. 5倍柱体积、4倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份F-2和组份F-3，将组分F-2回收溶剂后，得到单体化合物 750mg，经结构鉴定为黄芪甲苷，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005 年版一部附录VIB;将组份H 3. 2g经甲醇IOOml重结晶得到单体化合物1. 8g，经结构鉴定为芒柄花苷； 将组份KLH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前6倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K-1，接下来的4倍柱体积的洗脱液斑点相近，收集为组份K-2， 回收溶剂后，得到组份K-I 1. lg、组份K-2 0. Sg 2个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份K-I 1. Ig经反相C18硅胶柱层析分离，以体积比为15 85 — 85 15的甲醇-水梯度洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前4. 8倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K-1-1，依次接下来的1倍柱体积、 6. 2倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份K-1-2和组份K-1-3，将组分K-1-2回收溶剂后，得到单体化合物95mg，经结构鉴定为CyCl0Canth0Side E ；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份K-2 0.8g经反相C18硅胶柱层析分离，以体积比为15 85 — 90 10的甲醇-水梯度洗脱，洗脱液用量为15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前5. 2倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K-2-1，依次接下来的1. 8倍柱体积、8倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份K-2-2和组份K-2-3，将组分K-2-2回收溶剂后，得到单体化合物70mg，经结构鉴定为黄芪皂苷VI ；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB。
3.如权利要求1所述的一种注射用黄芪皂苷中单体化合物的分离方法，其特征在于该方法包括如下步骤取黄芪药材50kg，切片，加体积浓度为80%的含水乙醇8倍回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇体积含量至50%进行沉淀和过滤，滤液调节至pH9. 0 后沉淀过滤，滤液调节至PH 7-8，按原料药/水为1. 5/1的量加水混合后，在5°C低温下沉淀后过滤，滤液用大孔吸附树脂D-201吸附，以30%浓度的含水乙醇洗脱至洗脱液几乎无色除杂，再以80%浓度的含水乙醇解吸附洗脱并收集，将除去乙醇后的解吸附浓缩溶液调节pH至11.0后，用经水饱和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮-乙醚(1 2)进行沉淀，分离沉淀物为供注射剂用的黄芪皂苷，按注射剂标准检验，所得黄芪皂苷经全检完全符合注射用要求；将黄芪皂苷300g先用水1500ml分散，用分析纯的乙酸乙酯萃取3次，每次1000ml，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物50g ；萃取后的水相用分析纯的正丁醇萃取3次，每次1000ml，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇得到正丁醇萃取物200g ；将乙酸乙酯萃取物50g经正相硅胶柱层析分离，体积比为95 5 — 50 50的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为5倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为15 1和4 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前1. 25倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份A，依次接下来的0. 75倍柱体积、0. 5倍柱体积、0. 5倍柱体积、0. 75倍柱体积、1. 25倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份B、组份C、组份D、组份E和组份F，回收溶剂后，分别得到组份A 0. 5g、组份 B 4. 5g、组份C 9. 0g、组份D 12. 5g、组份E :4. 8g、组份F :5. lg6个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将正丁醇萃取物200g经正相硅胶柱层析分离，体积比为90 10 — 35 65的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为5倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为10 1和3 1的氯仿甲醇为展开剂， 结果显示，前1. 5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份G，依次接下来的1倍柱体积、 0. 5倍柱体积、0. 5倍柱体积、1. 5倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份H、组份I、组份J和组份K，回收溶剂后，得到组份G 4. 6g、组份H :10. 3g、组份I :29. 4g、组份J :37. 7g、 组份K 8. 2g 5个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份A 0. 5g经正相硅胶柱层析分离，用分析纯的氯仿洗脱，洗脱液用量为8倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为10 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3. 2倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份A-1，依次接下来的0. 8倍柱体积、4倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份A-2和组份A-3，将其中组分A-2回收溶剂后，得到单体化合物45mg，经结构鉴定为10-甲氧基美迪紫檀素，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份B 4. 5g经正相硅胶柱层析分离，以体积比为95 5 — 60 40的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为8倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示， 前3. 2倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份B-1，依次接下来的1. 6倍柱体积、3. 2倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份B-2和组份B-3，将其中组分B-2回收溶剂后，再用IOOml甲醇重结晶得到单体化合物310mg，经结构鉴定为胡萝卜苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C 9. Og经正相硅胶柱层析分离，以体积比为95 5 —60 40的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示， 前3倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-1，依次接下来的3倍柱体积、4倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-2和组份C-3，回收溶剂后，得到组份C-I 1. lg、组份C-2 1. 4g、组份C-3 3. 7g 3个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》 2005年版一部附录VIB ；将组份C-I 1.LH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-1-1，依次接下来的1倍柱体积、6倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-1-2和组份C-1-3，将其中组分C-1-2回收溶剂后，得到单体化合物180mg，经结构鉴定为乙酰黄芪皂苷I ；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C-2 1. 4g经kphadex LH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为5 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-2-1，依次接下来的2倍柱体积、3倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-2-2和组份C-2-3，将其中组分C-2-2回收溶剂后，得到单体化合物 415mg，经结构鉴定为2-羟基-3，4-二甲氧基异黄烷-7-0-β-D-吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C-3 3. 7g经正相硅胶柱层析分离，以体积比为90 10 — 50 50的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为5 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-3-1，依次接下来的2. 5倍柱体积、4. 5 倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-3-2和组份C-3-3，将其中组分C-3-2回收溶剂后，得到单体化合物1. 5g，经结构鉴定为9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β -D-卩比喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份E 4. Sg经甲醇50ml重结晶得到单体化合物2. 5g，经结构鉴定为毛蕊异黄酮-7-0-β-D-吡喃葡萄糖苷；将组份F 5. Ig经硅胶柱层析分离，以体积比为100 0 —55 45的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为4 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前4. 5 倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份F-1，依次接下来的1. 5倍柱体积、4倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份F-2和组份F-3，将组分F-2回收溶剂后，得到单体化合物 3. lg，经结构鉴定为黄芪甲苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005 年版一部附录VIB;将组份H 10. 3g经甲醇IOOml重结晶得到单体化合物5. 7g，经结构鉴定为芒柄花苷； 将组份KLH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前7. 2倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K-1，接下来的4. 8倍柱体积的洗脱液斑点相近，收集为组份 K-2，回收溶剂后，得到组份K-I :3.(^、组份1(-2 2. 6g 2个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份K-I 3. Og经反相C18硅胶柱层析分离，以体积比为15 85 — 90 10的甲醇-水梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前4倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K-1-1，依次接下来的0. 8倍柱体积、 5. 2倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份K-1-2和组份K-1-3，将组分K-1-2回收溶剂后，得到单体化合物320mg，经结构鉴定为CyCl0Canth0Side E ；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份K-22.6g经反相C18硅胶柱层析分离，以体积比为10 90 — 85 15的甲醇-水梯度洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前4. 16倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K-2-1，依次接下来的1.44倍柱体积、6. 4倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份K-2-2和组份K-2-3，将组分K-2-2回收溶剂后，得到单体化合物MOmg，经结构鉴定为黄芪皂苷VI ；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB。
4.如权利要求1所述的一种注射用黄芪皂苷中单体化合物的分离方法，其特征在于该方法包括如下步骤取黄芪药材30kg，切片，加体积浓度为50%的含水乙醇10倍回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇体积含量至85%进行沉淀和过滤，滤液调节至pH9. O 后沉淀过滤，滤液调节至PH 6. 5-7. 5，按原料药/水为1. 8/1的量加水混合后，在5°C低温下沉淀后过滤，滤液用大孔吸附树脂D-IOl吸附，以30%浓度的含水乙醇洗脱至洗脱液几乎无色除杂，再以75%浓度的含水乙醇解吸附洗脱并收集，将除去乙醇后的解吸附浓缩溶液调节PH至12.0后，用经水饱和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮-乙醚O 1) 进行沉淀，分离沉淀物为供注射剂用的黄芪皂苷，按注射剂标准检验，所得黄芪皂苷经全检完全符合注射用要求；将黄芪皂苷150g先用水IOOOml分散，用分析纯的乙酸乙酯萃取3次，每次750ml，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物22g ；萃取后的水相用分析纯的正丁醇萃取3次，每次750ml，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇得到正丁醇萃取物99g ；将乙酸乙酯萃取物22g经正相硅胶柱层析分离，体积比为100 0 — 65 35的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为15 1和4 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前2. 5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份A，依次接下来的1. 5 倍柱体积、1倍柱体积、1倍柱体积、1. 5倍柱体积、2. 5倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份B、组份C、组份D、组份E和组份F，回收溶剂后，分别得到组份A 0. 2g、组份B . 2.0g、组份C 4. 4g、组份D 5. 9g、组份E :2. 4g、组份F :2. 5g 6个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将正丁醇萃取物65g经正相硅胶柱层析分离，体积比为85 15 — 35 65的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为8倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为10 1和3 1的氯仿甲醇为展开剂， 结果显示，前2. 4倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份G，依次接下来的1. 6倍柱体积、0. 8倍柱体积、0. 8倍柱体积、2. 4倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份H、组份 I、组份J和组份K，回收溶剂后，得到组份G 2. 3g、组份H 5. 0g、组份I :15g、组份J :20. 5g、 组份K 3. 9g 5个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份A 0.2g经正相硅胶柱层析分离，用分析纯的氯仿洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为10 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前4倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份A-1，依次接下来的1倍柱体积、5倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份A-2和组份A-3，将其中组分A-2回收溶剂后，得到单体化合物20mg，经结构鉴定为 10-甲氧基美迪紫檀素，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份B 2. Og经正相硅胶柱层析分离，以体积比为100 0 — 60 40的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示， 前4. 8倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份B-1，依次接下来的2. 4倍柱体积、4. 8倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份B-2和组份B-3，将其中组分B-2回收溶剂后，再用80ml甲醇重结晶得到单体化合物150mg，经结构鉴定为胡萝卜苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C 4. 4g经正相硅胶柱层析分离，以体积比为95 5 — 50 50的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前.3.6倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-1，依次接下来的3. 6倍柱体积、4. 8倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-2和组份C-3，回收溶剂后，得到组份C-I 0. 5g、组份C-2 0. 9g、组份C-3 2. 3g 3个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB;将组份C-ILH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3. 6倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-1-1，依次接下来的1. 2倍柱体积、7. 2倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-1-2和组份C-1-3，将其中组分C-1-2回收溶剂后，得到单体化合物8%ig，经结构鉴定为乙酰黄芪皂苷I ；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C-2LH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为5 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前6倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-2-1，依次接下来的2. 4倍柱体积、3. 6倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-2-2和组份C-2-3，将其中组分C-2-2回收溶剂后，得到单体化合物186mg，经结构鉴定为2-羟基-3，4-二甲氧基异黄烷-7-0-i3-D-卩比喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份C-3 2. 3g经正相硅胶柱层析分离，以体积比为90 10 — 55 45的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为5 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前4. 5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C-3-1，依次接下来的3. 75倍柱体积、 6. 75倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C-3-2和组份C-3-3，将其中组分C-3-2 回收溶剂后，得到单体化合物740mg，经结构鉴定为9，10- 二甲氧基紫檀烷-3_0_β -D-吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ； 将组份E 2. 4g经甲醇50ml重结晶得到单体化合物1. 3g，经结构鉴定为毛蕊异黄酮-7-0-β-D-吡喃葡萄糖苷；将组份F 2. 5g经硅胶柱层析分离，以体积比为90 10 —50 50的氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为4 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前 5. 4倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份F-1，依次接下来的1. 8倍柱体积、4. 8倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份F-2和组份F-3，将组分F-2回收溶剂后，得到单体化合物1. 4g，经结构鉴定为黄芪甲苷；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份H 5. Og经甲醇IOOml重结晶得到单体化合物2. 8g，经结构鉴定为芒柄花苷； 将组份KLH-20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为8倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前4. 8倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K-1，接下来的3. 2倍柱体积的洗脱液斑点相近，收集为组份 K-2，回收溶剂后，得到组份K-I :1.7g、组份K-2:1.5g 2个组份，其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份K-I 1.7g经反相Cw硅胶柱层析分离，以体积比为10 90 — 85 15的甲醇-水梯度洗脱，洗脱液用量为15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前6倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K-1-1，依次接下来的1.25倍柱体积、 7. 75倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份K-1-2和组份K-1-3，将组分K-1-2回收溶剂后，得到单体化合物148mg，经结构鉴定为CyCl0Canth0Side E ；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB ；将组份K-2 1.5g经反相Cw硅胶柱层析分离，以体积比为15 85 — 85 15的甲醇-水梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0. 1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3 1的氯仿甲醇为展开剂，结果显示，前3. 5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K-2-1，依次接下来的1. 2倍柱体积、5. 3倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份K-2-2和组份K-2-3，将组分K-2-2回收溶剂后，得到单体化合物115mg，经结构鉴定为黄芪皂苷VI ；其中所述的正相硅胶薄层层析检查参照《中国药典》2005年版一部附录VIB。
全文摘要
本发明公开了一种注射用黄芪皂苷中单体化合物的分离方法，本发明分离得到的单体化合物通过标准品比对、质谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱等常规手段进行了结构鉴定，本发明所述的黄芪皂苷单体化合物可以用于注射用黄芪皂苷的质量控制，使该注射剂的化学物质基础更清楚，提高用药安全。
文档编号C07D493/04GK102241685SQ20101016941
公开日2011年11月16日 申请日期2010年5月11日 优先权日2010年5月11日
发明者丁立生, 傅予, 彭树林, 梁隆, 胡思玉, 谭兴根 申请人:四川科伦药业股份有限公司