专利名称：具有抑制细菌毒力作用的QseC配体衍生物的合成方法
技术领域：
本发明涉及新型广谱抗细菌毒力化合物QseC配体衍生物衍生物的合成方法及应用，尤其涉及QseC配体衍生物的合成方法。
背景技术：
群体感应系统(quorum sensing system,QSS)是一种细菌间信息传递系统。该系 统能够合成和分泌自诱导分子(autoinducer，Al)，AI经扩散或转运系统到达胞外，当AI浓 度随着细菌群体密度达到一定阈值，能被位于膜上的感受器蛋白识别，并感知其群体的细 胞密度，最终启动特定靶基因的表达，其表达产物能使细菌适应外界环境各种变化。QSS是 革兰氏阴性和阳性细菌调节多种生理活动最基本和必需的功能系统，在人类致病菌QSS系 统中，QseC作用尤为重要。QseC是2个跨膜结构域的膜蛋白，属组氨酸感受器激酶，同时也 是细菌肾上腺素能和芳香族信号自诱导剂3(aUt0indUcer 3，AI-3)的受体。当其与宿主肾 上腺素能信号分子及AI-3结合后，Qsec开始启动自磷酸化，随后又触发转录因子QseB (反 应调节器)的磷酸化过程，最终激活细菌中关键致病基因的转录。QseC广泛分布于肺炎 克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、流感嗜血杆菌、鼠疫耶尔森菌、志贺氏菌属、沙门 氏菌属、伯克氏菌属等至少21种人类致病菌细胞膜表面，其基因序列高度保守，不同细菌 QseC基因序列同源性高达89%。QseC与细菌的毒力(virulence)相关，Qsec缺失的细菌 生长不受影响，但其毒力相关致病性显著减弱。最新的一项研究，通过对15万个小分子有 机化合物的高通量筛选及结构修饰，筛选得到一个与QseC具有高度亲和力配体LED209，参 见 Rasko DA. , Moreira CG. , Li DR. , et al. Targeting QseC Signaling and Virulence forAntibiotic Development. Science. 2008 ；321 :1078-80。国际专利W02009/088549A2中，公布了 QseC配体筛选过程中LED209系列的化学 合成，以及其调控qseC-qseB-fliC-flhD基因通路，抑制细菌致病性毒力因子的合成释放， 降低细菌感染时细菌毒力和侵袭力的研究。已发现，供筛选QseC配体的LED209系列化合物 毒性大，水溶性极差，均为多异圆环连接产物(表1)，尚未在LED209自身结构基础上进行合 理构效关系优化改造；与此同时，筛选得到的化合物LED209，因其空间结构最类似于QseC 内源性配体AI-3或NE，使其可以与细菌膜蛋白QseC特异性结合，发挥拮抗AI-3或NE的作 用，但LED209在ρ. ο或iv给药时需制备成多组分聚合物以增强溶解度和生物利用度，临床 应用存在限制。表1 LED209系列化合物结构 wherein R is H or alkyl,or together with the nitrogen(s)forms a cyclic group，and wherein each R may be thesame or different
发明内容
本发明需要解决的技术问题是合成一系列4或3'取代的QseC配体衍生物，合成 设计是建立在QseC配体LED209自身结构基础之上的合理构效关系优化改造，使其对受体 QseC作用增强，选择性提高，增大溶解度，提高生物利用度，改善及扩大临床治疗的适应性。本发明需要解决的技术问题还包括优化QseC配体LED209的合成方法和研究4或 3'取代的LED209衍生物的合成方法，使其重现性好，操作工艺简化。为解决上述问题，本发明提供了如下技术方案具有抑制细菌毒力作用的QseC配体衍生物，其特征在于具有如下结构 化合物1为R1为H，R2为H ；化合物2为R1为COOH，R2为H ；化合物3为R1为OH，R2为H ；化合物4 为 R1SCLR2 为 H;化合物5为R1为H，R2为COOH ；化合物6为R1为H，R2为Cl ；其中化合物1为LED209，化合物2至6为其衍生物；
具有抑制细菌毒力作用的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于以对乙酰胺基苯磺酰氯为起始反应物，分别通过磺酰胺化及硫脲化反应制得相应 化合物2至6。具有抑制细菌毒力作用的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于制备如下1 至6化合物， 其中化合物1为QseC配体，化合物2至6为其衍生物；以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，通过与4-取代基苯胺反应，进而去乙酰氨 化，快速硅胶柱层析分离得中间产物后与异硫氰酸苯酯反应，产物经快速硅胶柱层析分离， 分别得化合物1至3 ；以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，通过与苯胺反应，进而去乙酰 氨化，快速硅胶柱层析分离得中间产物后与3’ -取代基异硫氰酸苯酯反应反应，产物经快 速硅胶柱层析分离，分别得化合物4至6。所述的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于4_取代基苯胺分别为对氨基 苯甲酸、对羟基苯胺和对氯苯胺；3’ _取代基异硫氰酸苯酯分别为3-羧基异硫氰酸苯酯和 3-氯异硫氰酸苯酯。所述的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与苯胺在含醋酸钠的乙醇反应，室温搅拌 过夜后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流2_4h，产物 经后处理得第二步中间产物，进而与异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流24h，产物经快速硅胶 柱层析分离，洗脱液为丙酮正己烷=1 4，梯度洗脱，收集洗脱液组分，得化合物1。以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与对氨基苯甲酸在含醋酸钠的乙醇反应， 室温搅拌过夜后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流 2-4h，产物经后处理得第二步中间产物，进而与异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流48h，产物 经快速硅胶柱层析分离，洗脱液为乙酸乙酯环己烷=3 2，梯度洗脱，收集洗脱液组分， 得化合物2。所述的LED209及其衍生物的制备方法，其特征在于以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与对羟基苯胺在含醋酸钠的乙醇反应， 室温搅拌过夜后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流 2-4h，产物经后处理得第二步中间产物，进而与异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流48h，产物 经快速硅胶柱层析分离，洗脱液为乙酸乙酯环己烷=1 1，梯度洗脱，收集洗脱液组分， 得化合物3。以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与对氯苯胺在含醋酸钠的乙醇反应，室温 搅拌过夜后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流2-4h， 产物经后处理得第二步中间产物，进而与异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流48h，产物经快速 硅胶柱层析分离，洗脱液为乙酸乙酯环己烷=4 1，梯度洗脱，收集洗脱液组分，得化合物4。以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与苯胺在含醋酸钠的乙醇反应，室温搅拌过夜后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流2-4h，产物 经后处理得第二步中间产物，进而与3-羧基异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流48h，产物经 快速硅胶柱层析分离，洗脱液为二氯甲烷甲醇=30 1，梯度洗脱，收集洗脱液组分，得 化合物5。以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与对氯苯胺在含醋酸钠的乙醇反应，室温 搅拌过夜后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流2-4h， 产物经后处理得第二步中间产物，进而与3-氯异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流48h，产物 经快速硅胶柱层析分离，洗脱液为二氯甲烷甲醇=20 1，梯度洗脱，收集洗脱液组分， 得化合物6。重复操作文献LED209合成方法并加以研究后，我们优化了其合成方法；分析QseC 三维空间结构及其内源性配体AI-3及NE的化学结构，我们选择LED209两侧苯环4位和3 ‘ 位为主要结构优化改造的修饰位置，为了探索此位置取代对药效、药动学影响，我们制备了 两类苯环上(4位或3'位)具有不同取代基的LED209衍生物5个，相应结构参数见表1。表2苯环取代(4位或3 ‘位)的LED209衍生物的化学结构 上述苯环取代(4位或3'位)QseC配体衍生物的合成路线(1)苯环取代(3'位)QseC配体衍生物的合成路线 (2)苯环取代(4位)QseC配体衍生物的合成路线 化合物2-6的取代基R1和R2参见表2。本发明合成一系列苯环取代(4或3'取代)的QseC配体衍生物，设计合成是对 QseC配体LED209自身结构的合理优化改造，使其对受体QseC作用增强，选择性提高，增大 溶解度，提高生物利用度，改善及扩大临床治疗的适应性。本发明研究的QseC配体LED209苯环取代(4或3 ‘取代)衍生物的合成方法重现 性好，操作工艺简化。
图1苯环取代(4或3 ‘取代)QseC配体衍生物(200 μ Μ)细胞毒性测定结果图2苯环取代(4或3 ‘取代)QseC配体衍生物(50 μ Μ)对细菌生长影响测定结果图3不同剂量苯环取代(4或3'取代)QseC配体衍生物5(LEDii)对细菌 qseC-qseB-fliC-flhD基因通路RNA表达水平影响测定结果
具体实施例方式实施例1制备N- (4- (N-苯基氨磺酰基)苯基)乙酰胺将对乙酰胺基苯磺酰氯(55g，236mmol)分批加入O °C的含醋酸钠(48. 4g， 590mmol)和对苯二胺(22mL，200mmol)的乙醇(300mL)溶液中，室温搅拌过夜后将反应物倒 入冰水(1.5L)中强力搅拌lh，过滤收集析出的白色固体，冰水洗涤，真空干燥，热乙醇重结晶得到白色固体N-(4-(N-苯基氨磺酰基)苯基)乙酰胺(38g，60%)；
实施例2制备4-氨基苯磺酰苯胺将无水盐酸(6N，40mL)搅拌下加入N_(4_(N_苯基氨磺酰基)苯基)乙酰胺中(20g,55mmol)的乙醇(SOmL)溶液，加热回流3h，减压蒸干反应混合物，将剩余物溶于水，用 IN氨水将溶液pH值调至8-9，搅拌lh，过滤收集析出的白色固体，冰水洗涤，真空干燥，热乙 醇重结晶得到白色固体4-氨基苯磺酰苯胺(10g，65% )。实施例3制备N-苯基-4- (3-苯基硫脲基)苯磺酰胺(即化合物1)将三乙胺(0. 07mL,0. 5mmol)和异硫氰酸苯酯(Ph_NCS，2. ImL, llmmol)分别加入 4-氨基苯磺酰苯胺(2. 48g，IOmrnol)的干燥丙酮(30mL)溶液中，加热回流24h，真空除去易 挥发物质，快速硅胶柱层析(正己烷丙酮=4 1)分离，得到白色固体N-苯基-4-(3-苯 基硫脲基)苯磺酰胺。实施例4制备N- (4-羧基苯基)-4- (3_苯基硫脲基)苯磺酰胺(即化合物2)将对乙酰胺基苯磺酰氯(0. 5g，2. 13mmol)分批加入0°C的含醋酸钠(0. 44g， 5. 36mmol)和对胺基苯甲酸(0. 34g，2. 5mmol)的乙醇(50mL)溶液中，室温搅拌过夜后将反 应物倒入冰水(0.5L)中强力搅拌lh，过滤收集析出的白色固体，冰水洗涤，真空干燥，热乙 醇重结晶得到白色固体N-(4-(N-苯基)氨磺酰基)苯基)乙酰胺(0.24g，70%)；后步骤与 实施例2、3相同，终产物经快速硅胶柱层析分离，洗脱液为(乙酸乙酯环己烷=3 2)， 梯度洗脱，收集洗脱液组分，，得到白色固体N- (4-羧基苯基)-4- (3-苯基硫脲基)苯磺酰 胺。实施例5制备N- (4-羟基)苯基-4- (3_苯基硫脲基)苯磺酰胺(即化合物3)将对乙酰胺基苯磺酰氯(0. 5g，2. 13mmol)分批加入0°C的含醋酸钠(0. 44g， 5. 36mmol)和对羟基苯胺(0. 27g，2. 5mmol)的乙醇(300mL)溶液中，室温搅拌过夜后将反应 物倒入冰水(0.5L)中强力搅拌lh，过滤收集析出的白色固体，冰水洗涤，真空干燥，热乙醇 重结晶得到白色固体N-(4-(N-苯基氨磺酰基)苯基)乙酰胺(0. 199g,65%)；后步骤与实 施例2、3相同，终产物经快速硅胶柱层析分离，洗脱液为(乙酸乙酯环己烷=1 1)，梯 度洗脱，收集洗脱液组分，得到白色固体N- (4-羟基苯基)-4- (3-苯基硫脲基)苯磺酰胺。实施例6制备N- (4-氯)苯基-4- (3_苯基硫脲基)苯磺酰胺(即化合物4)将对乙酰胺基苯磺酰氯(0. 5g，2. 13mmol)分批加入0°C的含醋酸钠(0. 44g， 5. 36mmol)和对氯苯胺(0. 316g，2. 5mmol)的乙醇(300mL)溶液中，室温搅拌过夜后将反应 物倒入冰水(0.5L)中强力搅拌lh，过滤收集析出的白色固体，冰水洗涤，真空干燥，热乙醇 重结晶得到白色固体N-(4-(N-苯基氨磺酰基)苯基)乙酰胺(0. 195g,60%)；后步骤与实 施例2、3相同，终产物经快速硅胶柱层析分离，洗脱液为(乙酸乙酯环己烷=4 1)，梯 度洗脱，收集洗脱液组分，得到白色固体N- (4-羟基苯基)-4- (3-苯基硫脲基)苯磺酰胺。实施例7制备N-苯基-4-(3-(3’-羧基)苯基硫脲基)苯磺酰胺(即化合物5)将三乙胺(0. 07mL,0. 5mmol)和3_羧基异硫氰酸苯酯(2. 5mL, llmmol)分别加入 4-氨基苯磺酰苯胺(2. 48g，IOmrnol)的干燥丙酮(30mL)溶液中，加热回流24h，真空除去易 挥发物质，快速硅胶柱层析(二氯甲烷甲醇=30 1)纯化所得粗品，得到白色固体N-苯 基-4-(3-(3’ -羧基)苯基硫脲基)苯磺酰胺。实施例8制备N-苯基_4-(3-(3’ -氯)苯基硫脲基)苯磺酰胺(即化合物6)
将三乙胺(0. 07mL，0. 5mmol)和3_氯异硫氰酸苯酯(1. 44mL, llmmol)分别加入 4-氨基苯磺酰苯胺(2. 48g，lOmmol)的干燥丙酮(30mL)溶液中，加热回流48h，真空除去易 挥发物质，快速硅胶柱层析(二氯甲烷甲醇=20 1)纯化所得粗品，得到白色固体N-苯 基-4-(3-(3’ -氯)苯基硫脲基)苯磺酰胺。实施例9苯环取代(4或3 ‘取代)QseC配体衍生物细胞毒性测定^^ 1.取无菌96孔板2个，取非边缘的10行X6列=60孔，每行分别标记为“细胞 生长对照、LED209衍生物2、3、4、5、6 (1 ii M和50 ii M) ”，每组取10个复孔。2.每孔分别加入200 ill含5X 103个细胞(胃粘膜上皮细胞GES)的DMEM悬液 (含10%血清)，37°C、5% 0)2培养超过24h。3. 90%以上细胞已牢固贴壁生长后吸出所有孔中200 ill DMEM悬液(含10%血 清)，细胞生长对照组每孔分别加入200 u 1 DMEM悬液(含10%血清)，LED209衍生物2、 3、4、5、6组(liiM和50 uM)每孔分别加入200 yl含对应药物浓度的DMEM悬液(含10% 血清)，37°C、5% C02 孵育 4h。4.吸出所有孔中200 u 1 DMEM悬液(含10%血清)，每孔分别加入200 u 1 DMEM 悬液(含10%血清)，再每孔分别加入20iU新配制的MTT(20iig/ml于无菌PBS溶液)， 37°C,5% C02孵育4h，吸出孔中所有液体，每孔分别加入150 ill DMS0，微孔震荡器上充分 振荡lOmin后置于酶标仪测定0D■，取每组10孔0D值平均值和对应时间绘制关系曲线。结论如图1所示，苯环取代(4或3 ‘取代)QseC配体衍生物在受试高浓度(200 u M)均
无细胞毒性。实施例10苯环取代(4或3 ‘取代)QseC配体衍生物对细菌生长影响测定^^ 1.取无菌96孔板2个，取非边缘的10行X6列=60孔，每行分别标记为“受试 菌生长对照、QseC配体衍生物2、3、4、5、6 (50 ii M) ”。2.每组取5个复孔，受试菌生长对照组每孔分别加入50 ill M-H营养肉汤，LED209 衍生物2、3、4、5、6组分别加入50iil 100 yM含药M-H营养肉汤。3.挑受试菌株(E. coli MG1655)生长于M_H琼脂平板上的单克隆于2ml LB肉汤 中摇菌至对数生长期，吸取适量菌液用M-H营养肉汤按2倍倍比稀释至0D62(i约为0. 1 (0. 5 麦氏比浊标准)，此稀释倍数下细菌浓度约为5X 107 8个/ml，再稀释500倍后按50 u 1/ 孔加入96孔板中。4.微孔震荡器上充分振荡lmin后置于37°C培养，每lh于酶标仪测定0D62(I1次至 16h，取5孔0D值平均值和对应时间绘制关系曲线。Mrk 如图2所示，苯环取代(4或3 ‘取代)QseC配体衍生物在受试高浓度(50 u M)均 对细菌生长无影响。实施例11 PCR引物的设计与合成依据 GeneBank 中报道的 Escherichia coli str. K-12substr. MG1655 基因 qseC、 qseB、fliC、flhD及16s rRNA的基因序列，用软件PrimerPremier5. 0设计了 5对特异性扩增引物。引物均经BLAST软件验证具有高度特异性，并由Invitrogen生物工程技术服务有 限公司合成，序列见表2。表2设计合成的扩增引物 实施例12 RT-PCR法检测QseC配体衍生物5对细菌qseC-qseB-f liC_f lhD基因 通路mRNA表达变化的影响1.取实施例10中16h每孔受试菌生长对照和QseC配体衍生物5 (1 i M和50 i M) 每孔菌液50 u 1作为受试样本。2.提取细菌总RNA (1)冰浴5min后的菌液5000rpm离心lOmin，弃去上清，收集细菌沉淀；(2)细菌沉淀中加入100 ill裂解液，37°C孵育30min，每隔lOmin振荡1次，以充
分裂解细菌；(3)加入 1ml Trizol reagent,室温放置 5min 后加氯仿 0. 2ml/ml Trizol reagent,盖紧离心管，用手轻柔混勻离心管；(4)吸取水相上清转移至一新的离心管中，加入异丙醇0. 5ml/ml Trizol reagent，盖紧离心管，用手轻柔混勻，室温放置20min，13000rpm、4°C离心20min ；(5)弃去上清，加入75%乙醇lml/ml Trizol reagent，用手剧烈摇荡使RNA充分 溶解，8000rpm、4°C离心 lOmin ；(6)弃去上清，然后置于清洁环境挥干乙醇lOmin，但不要干燥过分，以免降低RNA 的溶解度。将RNA溶于DEPC处理过的水中作为RT模板(必要时可在55 60°C孵育助 溶)，或于-20°C冻存。3.RT:用DU800核酸蛋白分析仪测总RNA的浓度及纯度。反应体系20iil: 5 X RTbuffer 10 ii 1 (含 Mg2+)，2. 5mmol/l. 28ml dNTP 5u 1,随机引物 1 yl，模板 RNA lu g,RNase inhibitor 1 yl，10U/yl 反转录酶 AMV 1 yl，用 DEPC 处理过的水补足 20 yl。 反应条件30°C 15min,85°C 30sec,25°C lmin，冰浴后进行 PCR 或 _20°C保存 cDNA。4. PCR 反应体系 25ii 1 :Takara Premix Taq 12. 5 ii 1，0. 1 ii mol/L 弓 |物各 1 ii 1， 模板cDNA 1 yl，用DEPC处理过的水补足25 ill。反应条件95 °C变性30sec，55 °C退火 30seC，72°C延伸45sec，循环数取32，最后一个循环的延伸条件为72°C 7min。5. PCR产物分析取5 ill PCR反应产物加入含0. 5 i g/ml溴化乙啶的1. 0%的琼 脂糖凝胶的点样孔中，5V/cm进行电泳。电泳结束后用凝胶成像仪进行观察照相并进行光密度扫描，测条带密度值(Integral density value，IDV)。因为16srRNA在细菌中稳定表 达，所以本发明以16srRNA作为内参照。结论 如图3 所示，E.coli MG1655 的 qseC、qseB、fliC、flhD 和 16s rRNA 的 RT-PCR 的扩 增产物的电泳结果显示，各组分别在140bp、253bp、213bp、132bp及407bp处出现特异性扩 增条带。与正常对照组相比，化合物5(LEDii)在小剂量(lyM)时即显著抑制qseC、qseB、 fliC、flhD的mRNA表达，随浓度增加(50 ii M) qseC、qseB、fliC、flhD的mRNA表达量稍有降 低，且抑制效力强于QseC配体LED209。
权利要求
具有抑制细菌毒力作用的QseC配体衍生物，其特征在于具有如下结构化合物1为R1为H，R2为H；化合物2为R1为COOH，R2为H；化合物3为R1为NH2，R2为H；化合物4为R1为Cl，R2为H；化合物5为R1为H，R2为COOH；化合物6为R1为H，R2为Cl；其中化合物1为QseC配体，化合物2至6为其衍生物。FSA00000120320000011.tif
2.具有抑制细菌毒力作用的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于以对乙酰胺基苯磺酰氯为起始反应物，分别通过磺酰胺化及硫脲化反应制得相应化合 物QseC配体衍生物。
3.具有抑制细菌毒力作用的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于 制备如下1至6化合物， 化合物1为队为H，R2为H ； 化合物2为队为C00H, R2为H ； 化合物3为队为0H，R2为H ； 化合物4为队为Cl，R2为H ； 化合物5为队为H，R2为C00H ； 化合物6为队为H，R2为C1 ；其中化合物1为QseC配体，化合物2至6为其衍生物；以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，通过与4-取代基苯胺反应，进而去乙酰氨化， 快速硅胶柱层析分离得中间产物后与异硫氰酸苯酯反应，产物经快速硅胶柱层析分离，分 别得化合物1至3 ；以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，通过与苯胺反应，进而去乙酰氨 化，快速硅胶柱层析分离得中间产物后与3’ -取代基异硫氰酸苯酯反应反应，产物经快速 硅胶柱层析分离，分别得化合物4至6。
4.根据权利要求3所述的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于4_取代基苯胺分 别为对氨基苯甲酸、对羟基苯胺和对氯苯胺；3’ _取代基异硫氰酸苯酯分别为3-羧基异硫 氰酸苯酯和3-氯异硫氰酸苯酯。
5.根据权利要求3至4所述的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与苯胺在含醋酸钠的乙醇反应，室温搅拌过夜 后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流2-4h，产物经后处理得第二步中间产物，进而与异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流24h，产物经快速硅胶柱层 析分离，洗脱液为丙酮正己烷=1 4，梯度洗脱，收集洗脱液组分，得化合物1。
6.根据权利要求3至4所述的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与对氨基苯甲酸在含醋酸钠的乙醇反应，室温 搅拌过夜后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流2-4h， 产物经后处理得第二步中间产物，进而与异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流48h，产物经快速 硅胶柱层析分离，洗脱液为乙酸乙酯环己烷=3 2，梯度洗脱，收集洗脱液组分，得化合 物2。
7.根据权利要求3至4所述的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与对乙二胺在含醋酸钠的乙醇反应，室温搅拌 过夜后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流2-4h，产物 经后处理得第二步中间产物，进而与异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流48h，产物经快速硅胶 柱层析分离，洗脱液为乙酸乙酯环己烷=1 1，梯度洗脱，收集洗脱液组分，得化合物3。
8.根据权利要求3至4所述的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与对氯苯胺在含醋酸钠的乙醇反应，室温搅拌 过夜后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流2-4h，产物 经后处理得第二步中间产物，进而与异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流48h，产物经快速硅胶 柱层析分离，洗脱液为乙酸乙酯环己烷=4 1，梯度洗脱，收集洗脱液组分，得化合物4。
9.根据权利要求3至4所述的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与苯胺在含醋酸钠的乙醇反应，室温搅拌过夜 后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流2-4h，产物经后 处理得第二步中间产物，进而与3-羧基异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流48h，产物经快速 硅胶柱层析分离，洗脱液为二氯甲烷甲醇=30 1，梯度洗脱，收集洗脱液组分，得化合 物5。
10.根据权利要求3至4所述的QseC配体衍生物的制备方法，其特征在于以对乙酰氨基苯磺酰氯为起始反应物，与对氯苯胺在含醋酸钠的乙醇反应，室温搅拌 过夜后产物经后处理得第一步中间产物，进而在含盐酸的乙醇溶液中加热回流2-4h，产物 经后处理得第二步中间产物，进而与3-氯异硫氰酸苯酯在丙酮中加热回流48h，产物经快 速硅胶柱层析分离，洗脱液为二氯甲烷甲醇=20 1，梯度洗脱，收集洗脱液组分，得化 合物6。
全文摘要
本发明属于具有抑制细菌毒力的QseC配体衍生物的合成方法及应用。QseC配体衍生物是细菌膜表面蛋白QseC的配体，可与之特异性结合并反向调控qseC-qseB-fliC-flhD基因通路，抑制细菌致病性毒力因子的释放，降低细菌感染时细菌毒力和侵袭力，从而达到控制细菌感染危害的作用，但QseC配体衍生物不影响细菌正常的生长繁殖，因而不会引发细菌耐药压力。QseC配体衍生物具有抗菌效果好、毒性低、稳定性好及不易耐药的优点。本发明公开QseC配体的优化合成方法及其衍生物的化学合成方法，本发明合成的QseC配体衍生物可用于制备抗多重耐药菌感染的新型广谱抗菌药物。
文档编号C07C335/16GK101857562SQ201010170229
公开日2010年10月13日 申请日期2010年5月12日 优先权日2010年5月12日
发明者侯征, 周颖, 孟静茹, 桑国君, 白卉, 罗晓星, 薛小燕 申请人:中国人民解放军第四军医大学