专利名称：一种蓝萼甲素的提取方法
技术领域：
本发明属于中药提取领域，具体涉及一种以蓝萼香茶菜药材为原料制备高纯度蓝 萼甲素的方法。
背景技术：
蓝萼甲素为蓝萼香茶菜的活性成分，蓝萼甲素具有显著的药理活性，蓝萼甲素可 抑制卡西霉素刺激的兔血小板生成血小板活化因子，能抑制花生四烯酸诱导的兔血小板血 栓素A2生成，并同时升高前列腺素E2，能显著抑制ADP，AA, PAF等诱导的兔血小板聚集， 显著升高血小板内 cAMP 7ΚΨ (参见Zhang B, Long K. Effects of glaucocalyxin A on aggtegation and cAMP levels of rabbit platelets in vitro. Acta Pharmacologica Sinica 1993,14(4) :347.)蓝萼甲素具有细胞毒作用，对艾氏腹水癌有一定抑制作用，体 内对S180实体瘤抑制率达30.4% (10mg/kg，7天)，蓝萼甲素对DNA、RNA和蛋白质合成具 有可逆性抑制作用，并呈剂量相关性(参见张淑香等，蓝尊甲素在体外对DNA，RNA和蛋 白质生物合成的影响药学情报通讯1990，8(3) :238.)。蓝萼甲素对A549 (人肺癌细胞)、 L0V0(人肠癌细胞)、6T-CEM(人T细胞白血病细胞)、HL_60(人白血病细胞)具有较强的 细胞毒活性，可用于制备抗癌药物(参见陈海生等，蓝萼香茶菜中二萜类化合物在制备抗 癌药物中的应用CN101455652-3320283)。现有技术中，从药材蓝萼香茶菜中提取蓝萼甲素的方法不仅步骤繁琐，得率偏低， 普遍低于10%，而且由于采用对生物体具有毒性的溶剂，残留的有毒溶剂不符合药典要求， 具体包括以下步骤(1)采集药材蓝萼香茶菜地上部分并粉碎，在常压下，用体积百分数85% 95% 乙醇水溶液回流提取2 3次，每次回流提取2小时，合并提取液，减压回收溶剂，至每毫升 溶剂含原药材3 IOg ；(2)用等体积的石油醚萃取三次，石油醚层弃去，水层再用等体积氯仿萃取三次， 合并氯仿层并浓缩，得到氯仿萃取液；(3)向步骤(2)所得氯仿萃取液中加入硅胶搅拌均勻，减压干燥，进行硅胶柱层 析；以氯仿甲醇200 1或氯仿甲醇100 1洗脱，以薄层层析对照，收集含有蓝萼甲 素的洗脱液，将洗脱液回收溶剂；(4)以无水乙醇或甲醇反复结晶，得蓝萼甲素，测试纯度，计算得率。采用上述技术方案所得蓝萼甲素的纯度一般在90%以上，但得率一般为7% 9%，而且过程中使用了有毒的溶剂，氯仿、甲醇，并且残留的有毒溶剂会影响蓝萼甲素作为 药物的使用，不符合药典要求。
发明内容
本发明目的是提供一种蓝萼甲素的提取方法，在提高纯度和得率的同时，避免使 用有毒的溶剂，使提取的蓝萼甲素符合药典要求。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案是一种蓝萼甲素的提取方法，提取、硅 胶柱层析洗脱色素和杂质、纯化步骤，具体包括以下步骤(1)采集原药材蓝萼香茶菜地上部分并粉碎，在常压下，用体积百分数75 80% 乙醇水溶液回流提取2 3次，每次回流提取2 3小时，合并提取液，减压除去部分溶剂， 得浓缩提取液；(2)向步骤(1)所得浓缩提取液中加入硅胶并搅拌均勻，减压干燥，进行硅胶柱层 析以硅胶柱体积为1体积份，首先以2 3份体积份的洗脱液A洗脱脂溶性色素，再以4 6份体积份的洗脱液B洗脱杂质，最后以10 15份体积份的洗脱液C洗脱；收集洗脱液， 浓缩后放置，析出晶体；其中，所述洗脱液A为石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按体积比，石油醚乙酸 乙酯=8 1 ；所述洗脱液B为石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按体积比，石油醚乙酸 乙酯=4 1 ；所述洗脱液C为石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按体积比，石油醚乙酸 乙酯=2:1;(3)无水乙醇重结晶，得蓝萼甲素晶体。上述技术方案中，步骤(1)中，减压除去的部分溶剂可以回收再循环使用；除去部 分溶剂的量取决于浓缩提取液的浓度，浓缩提取液的浓度为浓缩提取液的体积原药材 的质量=Iml 3 4g ；例如，原药材的质量为1200g，则浓缩提取液的体积对应为300 400ml ο由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点蓝萼香茶菜药材(经高效液相法测得药材中蓝萼甲素含量在0. )经本方法得 到的蓝萼甲素的纯度在95 100%，纯度高，适于制备各种剂型，得率在10%以上，得率高， 方法的重现性强，按照2010版药典附录中有机溶剂残留测定方法测定，无有机溶剂残留， 并且适用的有机溶剂无毒性，符合2010版药典要求。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步描述实施例一取蓝萼香茶菜地上部分10kg，经粉碎，在常压回流提取装置中，用75%乙醇回流 提取2次，每次回流提取2小时，合并提取液，减压回收溶剂浓缩提取液，浓缩后的体积为 3300毫升，加入1650克硅胶搅拌均勻，减压干燥，进行硅胶柱层析；硅胶柱体积为17600毫 升，以52800毫升的石油醚乙酸乙酯8 1洗脱脂溶性色素，再以105600毫升的石油醚 乙酸乙酯4 1洗脱杂质，最后以264000毫升的石油醚乙酸乙酯2 1洗脱，收集洗脱 液，浓缩至20毫升，放置，析晶，最后以无水乙醇20毫升重结晶，得蓝萼甲素1.5克，其纯度 为96.0%，得率15%，并且按照2010版药典附录中有机溶剂残留测定方法测定，无有机溶 剂残留。实施例二取蓝萼香茶菜地上部分10kg，经粉碎，在常压回流提取装置中，用80%乙醇回流 提取3次，每次回流提取3小时，合并提取液，减压回收溶剂浓缩提取液，浓缩后的体积为 3250毫升，加入1600克硅胶搅拌均勻，减压干燥，进行硅胶柱层析；硅胶柱体积为18000毫升，以54000毫升的石油醚乙酸乙酯8 1洗脱脂溶性色素，再以108000毫升的石油醚 乙酸乙酯4 1洗脱杂质，最后以270000毫升的石油醚乙酸乙酯2 1洗脱，收集洗脱 液，浓缩至20毫升，放置，析晶，最后以无水乙醇20毫升重结晶，得蓝萼甲素1.4克，其纯度 为95.6%，得率14%，并且按照2010版药典附录中有机溶剂残留测定方法测定，无有机溶 剂残留。以下实施例为采用现有技术的对比实施例实施例三取蓝萼香茶菜地上部分1kg，经粉碎，在常压回流提取装置中，用85%乙醇回流提 取2次，每次回流提取2小时，合并提取液，减压回收溶剂浓缩提取液，浓缩后的体积为250 毫升，先用等体积的石油醚萃取三次，石油醚层弃去，水层再用等体积氯仿萃取三次，合并 氯仿层并浓缩至10毫升，加入20克硅胶搅拌均勻，减压干燥，进行硅胶柱层析；氯仿甲醇 200 1洗脱，以薄层层析对照，收集含有蓝萼甲素的洗脱液，将洗脱液回收溶剂，以无水乙 醇反复结晶，得蓝萼甲素0. 07克，其纯度为90 %，得率7 %。实施例四蓝萼香茶菜地上部分1kg，经粉碎，在常压回流提取装置中，用95%乙醇回流提取 3次，每次回流提取2小时，合并提取液，减压回收溶剂浓缩提取液，浓缩后的体积为100毫 升，先用等体积的石油醚萃取三次，石油醚层弃去，水层再用等体积氯仿萃取三次，合并氯 仿层并浓缩至10毫升，加入20克硅胶搅拌均勻，减压干燥，进行硅胶柱层析；氯仿甲醇 100 1洗脱，以薄层层析对照，收集含有蓝萼甲素的洗脱液，将洗脱液回收溶剂，以甲醇反 复结晶，得蓝萼甲素0. 09克，其纯度为92 %，得率9 %。实施例五蓝萼香茶菜地上部分1kg，经粉碎，在常压回流提取装置中，用95%乙醇回流提取 3次，每次回流提取2小时，合并提取液，减压回收溶剂浓缩提取液，浓缩后的体积为100毫 升，先用等体积的石油醚萃取三次，石油醚层弃去，水层再用等体积氯仿萃取三次，合并氯 仿层并浓缩至15毫升，加入30克硅胶搅拌均勻，减压干燥，进行硅胶柱层析；以氯仿洗脱色 素，再以氯仿甲醇200 1洗脱，以薄层层析对照，收集含有蓝萼甲素的洗脱液，将洗脱液 浓缩，加入十倍量的甲醇，放置，过滤，以甲醇重结晶，得蓝萼甲素0. 07克，其纯度为96%， 得率7%。
权利要求
一种蓝萼甲素的提取方法，提取、硅胶柱层析洗脱色素和杂质、纯化步骤，其特征在于，具体包括以下步骤(1)采集原药材蓝萼香茶菜地上部分并粉碎，在常压下，用体积百分数75～80％乙醇水溶液回流提取2～3次，每次回流提取2～3小时，合并提取液，减压除去部分溶剂，得浓缩提取液；(2)向步骤(1)所得浓缩提取液中加入硅胶并搅拌均匀，减压干燥，进行硅胶柱层析以硅胶柱体积为1体积份，首先以2～3份体积份的洗脱液A洗脱脂溶性色素，再以4～6份体积份的洗脱液B洗脱杂质，最后以10～15份体积份的洗脱液C洗脱；收集洗脱液，浓缩后放置，析出晶体；其中，所述洗脱液A为石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按体积比，石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1；所述洗脱液B为石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按体积比，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1；所述洗脱液C为石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按体积比，石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1；(3)无水乙醇重结晶，得蓝萼甲素晶体。
2.根据权利要求1所述蓝萼甲素的提取方法，其特征在于步骤(1)中，减压除去的部 分溶剂的量取决于浓缩提取液的浓度，浓缩提取液的浓度为浓缩提取液的体积原药材 的质量=Iml 3 4g。
全文摘要
本发明属于中药提取领域，具体涉及一种以蓝萼香茶菜药材为原料制备高纯度蓝萼甲素的方法，包括以下步骤(1)采集原药材蓝萼香茶菜地上部分并粉碎，在常压下，用75～80％乙醇水溶液回流提取2～3次，每次回流提取2～3小时，合并提取液，减压回收溶剂，得浓缩提取液(2)向步骤(1)所得浓缩提取液中加入硅胶并搅拌均匀，减压干燥，进行硅胶柱层析；(3)无水乙醇重结晶，得蓝萼甲素晶体。经本方法得到的蓝萼甲素的纯度在95～100％，纯度高，适于制备各种剂型，得率在10％以上，得率高，方法的重现性强，按照2010版药典附录中有机溶剂残留测定方法测定，无有机溶剂残留，并且适用的有机溶剂无毒性，符合2010版药典要求。
文档编号C07C45/79GK101914002SQ201010264658
公开日2010年12月15日 申请日期2010年8月27日 优先权日2010年8月27日
发明者吴双庆, 孙群, 张健, 徐乃玉, 沈晓丹 申请人:苏州大学;苏州利元医药科技有限公司