专利名称：含有2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末及其制造方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有2-0- α -D-葡萄糖基_L_抗坏血酸无水结晶的粉末及其制造方法 和用途，更具体地，涉及与已有物相比显著更难以固结的含有2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏 血酸无水结晶的粉末及其制造方法，以及以其作为食品原料、化妆品原料、准药品原料、药 品原料的用途。
背景技术：
由于L-抗坏血酸具有优异的生理活性及抗氧化作用，一直以来用于包括食品、化 妆品等的多种用途中。但是，L-抗坏血酸则由于具有直接还原性的原因而不稳定，存在易 于氧化分解、易于丧失生理活性的较大的缺点。为了消除L-抗坏血酸的缺点，本申请人作 为共同申请人中的一人在专利文件1中公开了在L-抗坏血酸的2位羟基上结合了 1分子 的D-葡萄糖得到2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(以下在本说明书中简称为“抗坏血酸 2-葡萄糖苷”)。这种抗坏血酸2-葡萄糖苷不具有直接还原性，很稳定，并且，具有在生物 体内原本存在的酶的作用下分解为L-抗坏血酸和D-葡萄糖，发挥L-抗坏血酸原本的生理 活性的划时代的特性。根据专利文献1公开的制造方法，含有L-抗坏血酸和α-葡萄糖基 糖化合物的溶液在环麦芽糖糊精葡聚糖转移酶(以下简称为“CGT酶”)或α-葡萄糖苷酶 等的糖转移酶作用下生成抗坏血酸2-葡萄糖苷。此外，本申请人在专利文献2中公开了从抗坏血酸2-葡萄糖苷的过饱和溶液中成 功析出抗坏血酸2-葡萄糖苷的晶体，得到抗坏血酸2-葡萄糖苷以及包含抗坏血酸2-葡萄 糖苷的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷结晶的粉末。并且，现阶段认为抗坏血酸2-葡萄糖苷结 晶仅存在无水结晶物。因此，在非专利文献1及2中，报道了用X射线解析抗坏血酸2-葡 萄糖苷结晶的结构的结果。此外，本申请人在专利文献3及4中公开了一种高含抗坏血酸2-葡萄糖苷的物 质的制造方法，其将含有酶反应生成的抗坏血酸2-葡萄糖苷的溶液进行使用强酸性阳离 子交换树脂的柱层析获得高喊抗坏血酸2-葡萄糖苷的级分。此外，本申请人在专利文献5 中公开了一种高含抗坏血酸2-葡萄糖苷的物质的制造方法，将含有酶反应生成的抗坏血 酸2-葡萄糖苷的溶液中用阴离子交换膜的电透析法除去L-抗坏血酸或糖类等夹杂物；在 专利文献6中公开了一种高含抗坏血酸2-葡萄糖苷的物质的制造方法，将含有抗坏血酸 2-葡萄糖苷的溶液接触阴离子交换树脂，可选择性除去阴离子交换树脂吸附的成分，得到 高含抗坏血酸2-葡萄糖苷的级分。此外，本申请人在专利文献7中公开了一种抗坏血酸2-葡萄糖苷的制造方法，含 有L-抗坏血酸与α-葡萄糖基糖化合物的溶液在α-异麦芽糖基葡萄糖(异麦芽糖基葡 萄糖)生成酶、或α-异麦芽糖基葡萄糖生成酶与CGT酶的作用下生成抗坏血酸2-葡萄 糖苷。此外，本申请人在专利文献8及9中还分别公开了 α-异麦芽糖基葡萄糖生成酶及 α -异麦芽糖基转移酶催化向L-抗坏血酸的糖转移，生成抗坏血酸2-葡萄糖苷。
同时，关于抗坏血酸2-葡萄糖苷的用途，例如专利文献10 四中示出了多种建 议。由于抗坏血酸2-葡萄糖苷具有的这些优异的特性，可用作食品原料、化妆品原料、准药 品原料或药品原料，与之前的L-抗坏血酸的用途相比，广泛使用在以往由于L-抗坏血酸不 稳定而不能将L-抗坏血酸进行使用的其它用途。由上述内容可知，目前已知以L-抗坏血酸和淀粉为原料利用多种糖转移酶可制 得抗坏血酸2-葡萄糖苷。然而，如果本申请人根据目前已知的知识，将认为用作为糖转移 酶的CGT酶来作用含有L-抗坏血酸和淀粉的溶液的方法是抗坏血酸2-葡萄糖苷的生成率 最高、可以成为工业上优选的方法。基于这种认识，本申请人根据用CGT酶作用于含有L-抗 坏血酸和淀粉的溶液的方法制造含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末，将其作为化 妆品·准药品原料以及食品原料，分别以商品名“AA2G” (株式会社林原生物化学研究所出 售)以及商品名“7 7 二 7 > 7(株式会社林原商社出售)进行出售(下文中，这些 作为化妆品·准药品原料以及食品原料出出售的现有的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结 晶的粉末简称为“准药品级的粉末”)。然而，准药品级的粉末是在制品规格上，抗坏血酸2-葡萄糖苷的纯度在98. 0质 量％以上的较高纯度的产品，尽管刚制得的粉末具有良好的流动性，但长期搁置于高温、高 湿度的环境下时将由于自重以及吸湿出现固结的缺点。鉴于这种缺点，将准药品级的粉末 各IOkg装入聚乙烯制的袋子中，与干燥剂一起装入附有盖子的钢制罐中作为商品形态进 行销售。但根据本发明人随后得到的认识，即使是这种商品形态的准药品级粉末在长期的 保存期间也通常出现固结，出现损坏粉末有效性的问题。一旦用作化妆品原料及准药品原 料或食品原料的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末出现固结，对原来以原材料是 具有流动性的粉末为前提设计的制造设备来说将在原材料输送、筛分、混合等步骤上出现
障碍。
现有技术文献
专利文献
专利文献1特开平3-139288号公报
专利文献2特开平3-135992号公报
专利文献3特开平3-18；3492号公报
专利文献4特开平5-117290号公报
专利文献5特开平5-208991号公报
专利文献6特开2002-088095号公报
专利文献7特开2004-065098号公报
专利文献8国际公开W002010361号单行本
专利文献9国际公开W001090338号单行本
专利文献10国际公开W005087182号单行本
专利文献11特开平4-046112号公报
专利文献12特开平4-182412号公报
专利文献13特开平4-182413号公报
专利文献14特开平4-18M19号公报
专利文献15特开平4-182415号公报
专利文献16特开平4-18M14号公报专利文献17特开平8-333260号公报专利文献18特开2005-239653号公报专利文献19国际公开W006033412号单行本专利文献20特开2002_3洸拟4号公报专利文献21特开2003-17U90号公报专利文献22特开2004-217597号公报专利文献23国际公开W005034938号单行本专利文献24特开2006-225327号公报专利文献25国际公开W006137U9号单行本专利文献沈国际公开W006022174号单行本专利文献27特开2007-063177号公报专利文献观国际公开W006132310号单行本专利文献四国际公开W007086327号单行本非专利文献非专利文献17 >夕· 4 夕力t 二等，「力一# /、J卜、l· 一卜·丨J寸一手」(碳 水化合物研究)，第232卷，197-205页(1992年)非专利文献24 乂々工 工夕力等，「4 >夕一于〉3于卟·夕弋一于卟 才 7·· · 7 7 — * 二一歹^夕7」(国际制药学期刊)，第331卷，38-45页(2007年)
发明内容
发明解决的课题为了解决上述缺点，本发明的要解决的技术问题是提供一种含有抗坏血酸2-葡 萄糖苷无水结晶的粉末及其制造方法和用途，该粉末要比常用的准药品级的含有抗坏血酸 2-葡萄糖苷无水结晶的粉末显著更难以固结。解决课题的技术手段为了解决上述课题，本发明人反复研究含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉 末的固结性，本申请人发现作为分析用标准试剂销售的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结 晶的粉末(商品名“抗坏血酸2-葡萄糖苷999”，代码编号AG124，株式会社林原生物化学 研究所销售)(以下简称“试剂级的粉末”)即使在准药品级的粉末固结的条件下仍不固 结，得以保持粉末的形状。这种试剂级的粉末与准药品级的粉末相同，均是经过CGT酶作用 于含有L-抗坏血酸和淀粉的溶液的步骤、纯化得到的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷的溶液、 浓缩、析出抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶、收集结晶制得的粉末，但与准药品级的粉末所 不同的，在通常的步骤中还加入了将一次得到的结晶溶解后再次析出晶体的再结晶步骤、 以及将再结晶步骤得到的结晶用经纯化水等反复洗净的洗净步骤，由此可以得到抗坏血酸 2-葡萄糖苷纯度在99. 9质量％以上的纯度极高级水平的粉末。因此，推测如果准药品级的 粉末中抗坏血酸2-葡萄糖苷纯度提高至99. 9质量％以上，是否也可以得到难以固结的含 有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末。然而，为了使抗坏血酸2-葡萄糖苷的纯度达到为99. 9质量％以上的高纯度，如上所述，在常规的制造步骤中必须加入再结晶步骤以及反复用经纯化水等洗净的步骤，这样 不仅将增加制造所花费的时间和劳力，并且在再结晶步骤及洗净步骤中还无法避免抗坏血 酸2-葡萄糖苷的损失，导致出现制品成品率低下、制造成本大幅上升的缺点。因此，为了得 到比准药品级的粉末更难以固结的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末的目的，单 纯地将抗坏血酸2-葡萄糖苷的纯度提高到99. 9质量％以上的选择项是不现实的。因而，本发明人着重研究了含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末的固结性， 重复了多种尝试错误的结果，发现尽管含有抗坏血酸2-葡萄糖苷的无水结晶的粉末中抗 坏血酸2-葡萄糖苷的纯度与之前的准药品级的粉末水平相同；或者，即使没有达到试剂级 的纯度水平，只要使含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末中抗坏血酸2-葡萄糖苷无 水结晶的结晶度也达到90%以上；或者，粉末的动态水分吸附量为0.01质量％以下，则该 粉末就比准药品级的粉末湿著更难以固结。此外，本发明人进一步研究了结晶度及动态水分吸附量达到上述水平的含有抗坏 血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末的工业规模的制造方法，结果发现，含有L-抗坏血酸与淀 粉的溶液在CGT酶和葡萄糖淀粉酶的依次作用下，溶液中能按35质量％以上的高生成率生 成抗坏血酸2-葡萄糖苷，纯化该溶液，直至溶液中抗坏血酸2-葡萄糖苷的含量按无水物换 算时超过86质量％时，从该溶液中析出含抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末，可以较 为容易地获得结晶度在90%以上、粉末的动态水分吸附量为0. 01质量％以下的抗坏血酸 2-葡萄糖苷无水结晶。此外，本发明人发现，含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的结晶度90%以上或动 态水分吸附量0.01质量％以下的抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末与之前的准药品级 粉末相比显著更难以固结，易于用作食品原料、化妆品原料、准药品原料以及药品原料，具 有重大意义和价值，由此完成本发明。即，本发明提供了一种含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末，其特征是按 无水物换算含有超过98. 0质量％不足99. 9质量％的抗坏血酸2-葡萄糖苷，且基于粉末X 射线衍射曲线算出的抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的结晶度为90%以上，由此解决了上 述课题。此外，本发明提供了一种含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末，其特征是 按无水物换算含有超过98. 0质量％不足99. 9质量％的抗坏血酸2-葡萄糖苷，且氮气流下 除去粉末中的水分后，在温度25°C、相对湿度35质量％的条件下保持12小时时其动态水分 吸附量为0. 01质量％以下，由此解决了上述课题。在优选的一种情况中，本发明的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末含有 占粉末全体70质量％以上的粒径不足150 μ m的粒子以及占粉末全体40 60质量％的 粒径53 μ m以上不足150 μ m的粒子。此外，在优选的一种情况中，本发明的含有抗坏血酸 2-葡萄糖苷无水结晶的粉末含有L-抗坏血酸和/或D-葡萄糖，且粉末全体的还原能力不 足1质量％。此外，在更优选的一种情况中，本发明的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶 的粉末中L-抗坏血酸量按无水物换算为0. 1质量％以下。如上所述的本发明的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末，典型的是从经 过CGT酶作用于含有L-抗坏血酸和淀粉的溶液的步骤得到的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷的 溶液制得的粉末。
此外，本发明还提供了一种含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末的制造方 法，其特征是包括含有L-抗坏血酸和淀粉的溶液经CGT酶和葡萄糖淀粉酶的依次作用，得 到抗坏血酸2-葡萄糖苷生成率35质量％以上的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷的溶液的步骤； 纯化得到的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷的溶液，使抗坏血酸2-葡萄糖苷的含量按无水物换 算超过86质量％的步骤；从按无水物换算含有超过86质量％的抗坏血酸2-葡萄糖苷的溶 液中析出抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的步骤；收集析出的抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结 晶的步骤；对收集的抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶老化、干燥、根据需要而粉碎的步骤。在本发明的制造方法中使用的CGT酶只要能使含有L-抗坏血酸和淀粉的溶液在 CGT酶和葡萄糖淀粉酶的依次作用下能按照生成率35质量％以上的高生产率生成抗坏血 酸2-葡萄糖苷的酶，其起源和来源没有特别限制，可以是天然的酶，也可以是基因重组得 到的酶。但是，从抗坏血酸2-葡萄糖苷的生成率观点出发，优选下述的经基因重组技术变 异的来自嗜热脂肪土芽孢杆菌(GecAacillus stearother mophilus) Tc_62株的CGT酶、来 自嗜热脂肪土芽孢杆菌Tc-27株的CGT酶、或来自嗜热脂肪土芽孢杆菌Tc-91株的CGT酶 得到的变异CGT酶，其中，嗜热脂肪土芽孢杆菌Tc-62株产生的CGT酶由于能获得较高的 抗坏血酸2-葡萄糖苷的生成率，因此最为优选。使用的葡萄糖淀粉酶没有特别限制，只要能使含有L-抗坏血酸和淀粉的溶液在 CGT酶和葡萄糖淀粉酶的依次作用下能按照生成率35质量％以上的高生产率生成抗坏血 酸2-葡萄糖苷的酶即可，其起源和来源没有特别限制，可以是天然的酶，也可以是基因重 组得到的酶。也依赖于作为原料使用的淀粉的种类，也可以在含有L-抗坏血酸和淀粉的溶液 经CGT酶作用时，使异淀粉酶或支链淀粉酶等淀粉脱支酶与CGT酶一同作用来提高抗坏血 酸2-葡萄糖苷生成率。且，在本发明的制造方法的优选的一种情况中，上述纯化含有抗坏血酸2-葡萄糖 苷的溶液至抗坏血酸2-葡萄糖苷含量按无水物换算超过86质量％的步骤中，将经过滤、脱 盐的酶反应液接触阴离子交换树脂，使其吸附抗坏血酸2-葡萄糖苷和L-抗坏血酸，用经纯 化水洗脱除去D-葡萄糖等糖类后，向层析柱中加入不足0. 5N的盐酸或盐类的水溶液作为 洗脱液，洗脱抗坏血酸2-葡萄糖苷和L-抗坏血酸，浓缩洗脱液，进行使用阳离子交换树脂 或多孔性合成树脂的柱层析，用洗脱液洗脱的方法。特别地，在用强酸性阳离子交换树脂为 填充剂的模拟移动床式作为使用阳离子交换树脂的柱层析时，能高效地、较好收率地获得 目的抗坏血酸2-葡萄糖苷的含量超过86质量％的级分，因此优选这种情况。在此之上，本发明还提供了包含本发明的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的 粉末的粉末状的食品原料、化妆品原料、准药品原料或药品原料，由此解决了上述课题。本发明的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末可有利地用于食品原料，所 述食品原料例如可分别举出维生素C强化剂、胶原产生强化剂、美白剂、味道改善剂、品质 改善剂、防止黑变剂、酸味剂、赋形剂、增量剂、抗氧化剂等；可有利地用于化妆品原料，所述 例如化妆品原料可分别举出美白剂、细胞赋活剂、胶原产生强化剂、维生素C强化剂、味道 改善剂、品质改善剂、防止黑变剂、酸味剂、赋形剂、增量剂、稳定剂、抗氧化剂等；可有利地 用于准药品原料，所述准药品原料例如可分别举出美白剂、细胞赋活剂、胶原产生强化剂、 维生素C强化剂、味道改善剂、品质改善剂、防止黑变剂、酸味剂、赋形剂、增量剂、稳定剂、抗氧化剂等；以及，可有利地用于药品原料，所述药品原料例如可分别举出美白剂、细胞 赋活剂、胶原产生强化剂、脏器保护剂、自由基障碍抑制剂、维生素C强化剂、防止黑变剂、 赋形剂、增量剂、稳定剂、抗氧化剂等。发明的效果由于与之前作为化妆品原料、准药品原料、食品原料等市售的准药品级粉末相比， 本发明的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末显著更难以固结，因此在保存、保管时 及流通时粉末的流动性不容易收到影响，具有容易处置的优点。此外，尽管本发明的含有抗 坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末比之前的准药品级粉末显著更难以固结，但由于抗坏 血酸2-葡萄糖苷的纯度也没必要高至试剂级粉末的水平，因此制造时没必要增加再结晶 步骤和重复洗净结晶的步骤。因此，不会大幅降低制品的成品率，还具有可廉价地进行制造 的优点。同时，本发明的制造方法具有以下优点通过使用本发明的制造方法，以L-抗坏 血酸和淀粉为原料，根据与之前的准药品级粉末的制造方法的步骤不发生变化的制造方法 也可制得本发明的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末，只需要花费与之前准药品 级粉末的制造所必需的时间、劳动力、制造设备及成本相差不大的时间、劳动力、制造设备 及成本，即可制得比准药品级粉末显著更难以固结的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶 的粉末。此外，由本发明的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末构成的粉末状的食 品原料、化妆品原料、准药品原料以及药品原料具有以下优点由于构成粉末状原料的含 有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末显著更难以固结，因此在保存、保管方面容易处置 些，可使用以流动性粉末为原料为前提制作的制造设备，在原料的输送、筛分、混合等步骤 中不会出现障碍。同时，本发明的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末具有以下优点由于容 易调整为食品原料等所希望的粒度分布，即，粒径不足150 μ m的粒子占粉末全体的70质 量％以上，且粒径53 μ m以上不足150 μ m的粒径占粉末全体的40 60质量％的粒径分 布，因此将其用作食品原料、化妆品原料、准药品原料或药品原料无需改变之前的制造过程 和原料规格，可直接使用从前的方法。此外，本发明的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶 的粉末还具有以下优点当含有L-抗坏血酸和/或D-葡萄糖且粉末全体的还原能力不足 1质量％时，尽管是以L-抗坏血酸和淀粉为原料制得的粉末，但即使混合氨基酸及蛋白质 等分子内具有氨基的其他成分也不会出现变色等品质降低的现象。更具体地，当本发明的 含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末中L-抗坏血酸含量按无水物换算为0. 1质量％ 以下时，即使将本发明的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末作为单独粉末长时间 保存，粉末自身也不会出现淡褐色的着色，可作为实质上无着色的白色粉末用作食品原料、 化妆品原料、准药品原料及药品原料。
图1依据基本上由抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶构成的含有抗坏血酸2-葡萄 糖苷无水结晶的粉末的特性X射线得到的粉末X射线衍射曲线的一个例子。图2依据基本上由无定形部分构成的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷的粉末的特性X射线得到的粉末X射线衍射曲线的一个例子。图3依据基本上由抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶构成的含有抗坏血酸2-葡萄 糖苷无水结晶的粉末的同步加速器辐射得到的粉末X射线衍射曲线的一个例子。图4依据基本上由无定形部分构成的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉 末的同步加速器辐射得到的粉末X射线衍射曲线的一个例子。图5示出了来自属于土芽孢杆菌属的微生物的CGT酶的高级结构的模式图。图6示出了来自属于土芽孢杆菌属的微生物的CGT酶的催化剂残基及保守区域 的模式图。图7示出了本发明使用的包含来自属于土芽孢杆菌属的微生物的CGT酶基因的 重组DNA “pRSET-iBTC12”的结构及限制性切酶位点的图。
具体实施例方式1.措辞的定义本说明书中下述措辞具有以下含义。<结晶度>本说明书中的“关于抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的结晶度”指的是下式1定 义的数值。式1数1
结晶度(%)= Hs"H° x 100 Hoo “ H0Hltltl 根据基本上由抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶构成的含有抗坏血酸2-葡萄糖 苷无水结晶的粉末标准样品的粉末X射线衍射曲线计算的结晶度的解析值Htl 根据基本上由无定形部分构成的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末标 准样品的粉末X射线衍射曲线计算的结晶度的解析值Hs:根据作为被检样品的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷的粉末的粉末X射线衍射曲线 计算的结晶度的解析值。在式1中，作为计算H1(I(I、HQ、HS的基础的粉末X射线衍射曲线(profile)通常 可用配备了反射式或透射式的光学系统的粉末X射线衍射装置测得。粉末X射线衍射曲 线中涵盖了被检样品或标准样品中包含的抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的衍射角和衍射 强度，从粉末X射线衍射曲线确定结晶度的解析值的方法例如可举出Harmans法、7才> ” 法等。这些解析方法中，用Harmans法更为简便和精确。目前，这些解析方法都已经计算机 软件化，因此配备搭载了任一种计算机软件的解析装置的粉末X射线衍射装置都是很适宜 的。此外，计算解析值Hltltl的“基本上由抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶构成的含有抗 坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末的标准样品”使用的是抗坏血酸2-葡萄糖苷纯度在 99.9质量％以上(以下，如果没有特别限制，本说明书中质量％将略写为“％”。然而，本说 明书中结晶度所使用的％不限于此。)的粉末或单结晶，在粉末X射线衍射曲线中示出了抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶特有的衍射峰，基本上为由抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶构 成的物质。这种粉末或单结晶可举出上述试剂级的粉末或将其再结晶化得到的含有抗坏血 酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末，或抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的单结晶。因此，基本上 由抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶构成的上述含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末的 标准样品的粉末X射线衍射曲线根据Harmans法用计算机软件解析时的解析值Hltltl通常为 70. 2 70. 5%。另一方面，计算解析值Htl的“基本上由无定形部分构成的含有抗坏血酸2-葡萄糖 苷的粉末的标准样品”使用的是抗坏血酸2-葡萄糖苷纯度在99. 以上的粉末，该粉末 X射线衍射曲线中仅由来自无定形部分的〃 口一构成，而且基本上不示出抗坏血酸2-葡萄 糖苷无水结晶特有的衍射峰。这种粉末例如可举出将上述计算解析值Hito的标准样品溶解 在适量经纯化水中、浓缩后、冻干，经卡尔费休法确定水分含量至2.0%以下再经真空干燥 得到的粉末。实施这种处理时，经验上可知能够得到基本上由无定形部分构成的粉末。因 此，基本上由无定形部分构成的上述含有抗坏血酸2-葡萄糖苷的粉末的标准样品的粉末X 射线衍射曲线根据Harmans法用计算机软件解析时的解析值Htl通常为7. 3 7. 6%。且，对计算解析值Htl的标准样品来说，虽然优选抗坏血酸2-葡萄糖苷纯度高，但 在自计算解析值Hito的标准样品按如上所述制备计算解析值Htl的标准样品中，如后述实验 1-1所示，计算解析值Hito的标准样品中抗坏血酸2-葡萄糖苷纯度可以高至99. 9 %的极高， 也可低至99. 1%。因此，“基本上由无定形部分构成的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶 的粉末的标准样品”的抗坏血酸2-葡萄糖苷纯度，如上所述，为99. 1 %以上。<动态水分吸附量>本说明书中的“动态水分吸附量”指的是用水分吸附解吸测定装置，在温度 25°C、相对湿度0%的条件下，在氮气流中保持12小时，除去样品中游离的水分，称量除去 后的样品后，将样品在温度25°C、相对湿度35%的条件下相同的氮气流下保持12小时，立 刻再度称量，基于得到的两个称量值根据下式2算出的值。式2数2
权利要求
1.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末，其特征在于 按无水物换算含有超过98. O质量％不足99. 9质量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 坏血酸，且 基于粉末X射线衍射曲线算出的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的结晶 度为90%以上。
2.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末，其特征在于 按无水物换算含有超过98. 0质量％不足99. 9质量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 坏血酸，且 氮气流下除去粉末中的水分后，在温度25°C、相对湿度35质量％的条件下保持12小 时时其动态水分吸附量为0. 01质量％以下。
3.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末，其特征在于 按无水物换算含有超过98. 0质量％不足99. 9质量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 坏血酸， 基于粉末X射线衍射曲线算出的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的结晶 度为90%以上，并且 眷含有■占粉末全体70质量％以上的粒径不足150 μ m的粒子，以及 ■占粉末全体40 60质量％的粒径53 μ m以上不足150 μ m的粒子。
4.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末，其特征在于 按无水物换算含有超过98. 0质量％不足99. 9质量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 坏血酸， 氮气流下除去粉末中的水分后，在温度25°C、相对湿度35质量％的条件下保特12小 时时其动态水分吸附量为0. 01质量％以下，并且 眷含有■占粉末全体70质量％以上的粒径不足150 μ m的粒子，以及 ■占粉末全体40 60质量％的粒径53 μ m以上不足150 μ m的粒子。
5.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末，其特征在于 按无水物换算含有超过98. 0质量％不足99. 9质量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 坏血酸， 基于粉末X射线衍射曲线算出的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的结晶 度为90%以上， 含有L-抗坏血酸和/或D-葡萄糖，且 粉末全体的还原能力不足1质量％。
6.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末，其特征在于 按无水物换算含有超过98. 0质量％不足99. 9质量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 坏血酸， 氮气流下除去粉末中的水分后，在温度25°C、相对湿度35质量％的条件下保持12小 时时其动态水分吸附量为0. 01质量％以下， 含有L-抗坏血酸和/或D-葡萄糖，且 粉末全体的还原能力不足1质量％。
7.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末，其特征在于 按无水物换算含有超过98. O质量％不足99. 9质量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 坏血酸， 基于粉末X射线衍射曲线算出的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的结晶 度为90%以上， 眷含有■占粉末全体70质量％以上的粒径不足150 μ m的粒子，以及 ■占粉末全体40 60质量％的粒径53 μ m以上不足150 μ m的粒子，同时 还含有L-抗坏血酸和/或D-葡萄糖，且 粉末全体的还原能力不足1质量％。
8.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末，其特征在于 按无水物换算含有超过98. 0质量％不足99. 9质量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 坏血酸， 氮气流下除去粉末中的水分后，在温度25°C、相对湿度35质量％的条件下保持12小 时时其动态水分吸附量为0. 01质量％以下，并且 眷含有■占粉末全体70质量％以上的粒径不足150 μ m的粒子，以及 ■占粉末全体40 60质量％的粒径53 μ m以上不足150 μ m的粒子，同时 还含有L-抗坏血酸和/或D-葡萄糖，且 粉末全体的还原能力不足1质量％。
9.如权利要求1 8任一项记载的含有2-0-α -D-葡萄糖基_L_抗坏血酸无水结晶的 粉末，其特征在于，按无水物换算L-抗坏血酸的量为0. 1质量％以下。
10.如权利要求1 9任一项记载的含有2-0-α -D-葡萄糖基_L_抗坏血酸无水结晶 的粉末，其特征在于，该粉末是从经过环麦芽糖糊精葡聚糖转移酶作用于含有L-抗坏血酸 和淀粉的溶液的步骤得到的含有2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的溶液制得的粉末。
11.如权利要求1 10任一项记载的含有2-0-α -D-葡萄糖基_L_抗坏血酸无水结晶 的粉末的制造方法，其特征在于包括眷含有淀粉和L-抗坏血酸的溶液经环麦芽糖糊精葡聚糖转移酶和葡萄糖淀粉酶 的依次作用，得到2-0-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸生成率为35质量％以上的含有 2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的溶液的步骤； 纯化得到的含有2-0-α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的溶液，使2-0-α -D-葡萄糖 基-L-抗坏血酸的含量按无水物换算超过86质量％的步骤； 从按无水物换算含有超过86质量％的2-0- α -D-葡萄糖基_L_抗坏血酸的溶液中 析出2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的步骤； 收集析出的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的步骤； 对收集的2-0-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶老化、干燥、根据需要而粉碎的 步骤。
12.如权利要求11记载的制造方法，其特征在于，在含有淀粉和L-抗坏血酸的溶液经环麦芽糖糊精葡聚糖转移酶和葡萄糖淀粉酶的依次作用而得到含有2-0-α -D-葡萄糖 基-L-抗坏血酸的溶液的步骤中，使淀粉脱支酶与环麦芽糖糊精葡聚糖转移酶一同作用。
13.如权利要求11或12记载的制造方法，其特征在于，纯化上述得到的含 有2-0-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的溶液而获得按无水物换算超过86质量％的 2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸含量的步骤包括 通过用阴离子交换树脂的柱层析除去糖类的步骤，和 进行用阳离子交换树脂作为填充剂的模拟移动床式柱层析的步骤。
14.如权利要求11或12记载的制造方法，其特征在于，纯化上述得到的含 有2-0-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的溶液而获得按无水物换算超过86质量％的 2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸含量的步骤包括 通过用阴离子交换树脂的柱层析除去糖类的步骤，和 进行用强酸性阳离子交换树脂或多孔性树脂的柱层析的步骤。
15.粉末状的食品原料，其含权利要求1 10任一项记载的含有2-0-α-D-葡萄糖 基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末。
16.粉末状的化妆品原料，其含权利要求1 10任一项记载的含有2-0-α-D-葡萄 糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末。
17.粉末状的准药品原料，其含权利要求1 10任一项记载的含有2-0-α-D-葡萄 糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末。
18.粉末状的药品原料，其含权利要求1 10任-项记载的含有2-0-α -D-葡萄糖 基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末。
全文摘要
含有2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶的粉末及其制造方法和用途。本发明的课题是提供一种比之前常用的准药品级的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末更难以固结的含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末及其制造方法，以及用途。提供了一种含有抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的粉末，该粉末按无水物换算含有超过98.0质量％不足99.9质量％的抗坏血酸2-葡萄糖苷，基于粉末X射线衍射曲线算出抗坏血酸2-葡萄糖苷无水结晶的结晶度为90％以上，或氮气流下除去粉末中的水分后，在温度25℃、相对湿度35％的条件下保持12小时时其动态水分吸附量为0.01质量％以下，还提供了它的制造方法以及用途。
文档编号C07H17/04GK102093448SQ201010571709
公开日2011年6月15日 申请日期2010年9月3日 优先权日2009年9月3日
发明者三宅俊雄, 伊泽精祐, 涩谷孝, 福田惠温, 西本友之 申请人:株式会社林原生物化学研究所