靶定补体蛋白c3b的抗体的组合物和方法

专利名称：靶定补体蛋白c3b的抗体的组合物和方法
靶定补体蛋白C3B的抗体的组合物和方法
背景技术：
年龄相关性黄斑变性(AMD)是进行性疾病，并且是美国年龄65岁及以上老年人视觉丧失和失明的主要原因。AMD主要影响黄斑；其为负责阅读或开车所需的高视敏度的视网膜的一部分。大多数AMD患者遭受该疾病的早期阶段，所述疾病的特征在于存在称为玻璃疣的细胞外视网膜沉积物。玻璃疣是细胞碎片的细胞外视网膜沉积物、炎症介质、和细胞外基质组分。AMD的晚期阶段表现为干涩或湿润形式，两者均与视觉丧失相关。干涩AMD， 也称为地图样萎缩，在检眼镜检查中呈现为界线清楚的区域，其对应于视网膜色素上皮细胞(RPE)丧失的局部区域。湿润AMD与脉络膜的新血管形成相关，引起Bruch’ s膜完整性受损和视网膜中脉管生长，其中它们经常出血。这种渗漏引起对视网膜细胞的永久性损伤， 它们相继死亡的，并在中央视觉区产生盲点。人先天性系统由补体途径组成。补体途径作用于防御化脓性细菌感染，桥接先天性和适应性免疫；并去除免疫复合体的产物和炎性损伤。补体是在血浆和细胞表面参与级联反应的多于30种蛋白质的系统。补体系统及其补体组分参与多种免疫过程。例如，补体 C5b-9复合体，也称为末端复合体或膜攻击复合体(MAC)，通过诱导膜通透性损伤而在细胞死亡中起重要作用。近期工作已经证明，补体组分C3和C5是AMD患者中玻璃疣的主要成分。Mulling， R.F. m (2000) FASEB J 14，835_46。已经推测它们以及膜攻击复合体(MAC) C5b_9和其它急性期反应蛋白在玻璃疣上RPF细胞中的存在参与了可激发补体激活和MAC形成的过程。 Johnson，L等Q001)Exp Eye Res 73，887-896。因此，越来越多的证据表明，补体组分不仅仅是先天性免疫的介体。已经建议营养干预用于抑制干涩AMD发展成湿润AMD。目前，仅FDA批准的湿润AMD的治疗包括光动力学疗法(PDT)、抗VEGF适体，如pegaptanib，和抗VEGF抗体 ranibizumab。这些药物或治疗通常向已患有重大视觉丧失的患者施用。仍然需要开发AMD的有效治疗，来替换或补充目前的治疗。尤其是，需要可以提供早期检测、预防或恢复视觉丧失的治疗。发明概述本发明涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人或猕猴补体C3b蛋白，其中所述抗体以低于或等于IOOpM的KD结合人C3b，并以低于或等于200pM的KD结合猕猴C3b。例如，此处描述的抗体或抗原结合片段可以低于或等于90pM、低于或等于80pM、 低于或等于70pM、低于或等于60pM、低于或等于50pM、低于或等于40pM、低于或等于30pM， 并优选高达低于或等于20、19、18、17、16、15、14、13、12或IlpM的KD结合人C3b。优选的是，抗体或其抗原结合片段以低于或等于IOpM的Kd结合人C3b。例如，抗体或其抗原结合片段可以低于或等于9pM、低于或等于8pM、低于或等于7pM、低于或等于6pM、低于或等于 5pM、低于或等于4pM、低于或等于3pM、低于或等于2pM，或高达低于或等于IpM的KD结合 C3b。此处描述的抗体或抗原结合片段可以低于或等于250pM、低于或等于MOpM、低于或等于230pM、低于或等于220pM、低于或等于210pM、低于或等于200pM、低于或等于190pM、低于
5或等于180pM、低于或等于170pM、低于或等于160pM、低于或等于150pM、低于或等于140pM、 低于或等于130pM、低于或等于120pM、低于或等于ΙΙΟρΜ、低于或等于ΙΟΟρΜ、低于或等于 90pM、低于或等于80pM、低于或等于70pM、低于或等于60pM、低于或等于50pM、低于或等于 40、39、38、37、36、35、34、33、32或3让] 、低于或等于3(^]\1、低于或等于20、19、18、17、16、15、 14、13、12或IlpM并优选高达低于或等于10、9、8、7、6、5、4、3、2或IpM的KD结合猕猴C3b。优选通过溶液平衡滴定(SET)测定此处描述的抗体的结合亲和力。SET的方法为本领域所知并在下文中进行了进一步的详细描述。本发明的抗体可用于抑制补体旁路。例如，此处描述的抗体或其片段如体外溶血测定所测定以低于或等于70nM、优选低于或等于65nM、优选低于或等于50nM、优选低于或等于40nM、30nM或20nM，并更优选低于或等于IOnM的IC50抑制补体旁路。此处描述的抗体或其片段如体外溶血测定所测定以低于或等于ΙΟΟηΜ、优选低于或等于90nM、优选低于或等于80nM、优选低于或等于75nM，并更优选低于或等于70nM的IC50抑制猕猴中的补体旁路。此处描述的抗体或其片段如体外Ob沉积所测定以低于或等于30nM、低于或等于25nM、 低于或等于20nM，并优选低于或等于IOnM的IC50抑制补体旁路。此处描述的抗体或其片段可如体外Ob沉积所测定以低于或等于70nM、低于或等于50nM、低于或等于40nM，并优选低于或等于30nM的IC50抑制猕猴中的补体旁路。此处描述的抗体或其片段如补体膜攻击复合体的沉积所测定以低于或等于5nM， 优选低于或等于4nM、3nM、2nM，并更优选低于或等于InM的IC50抑制补体旁路。此处描述的抗体或其片段如补体膜攻击复合体的沉积所测定以低于或等于20nM，优选低于或等于 19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM或13nM，并更优选低于或等于IOnM的IC50抑制猕猴中的补体旁路。此处描述的抗体或其片段如通过产生C3a和Cfe测定以低于或等于ΙΟΟηΜ，优选低于或等于90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM或20nM，并更优选低于或等于IOnM抑制
补体旁路。本发明描述的抗体或其抗原结合片段优选具有如表12中所示的Fab的结合特征。本发明还包括分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人或猕猴的补体C3b 蛋白，并与表1中描述的抗体交叉竞争。此处描述的抗体或其抗原结合片段可以是单克隆抗体、人或人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段、Fv片段、F(ab’ ) 2片段、或kFv片段、和/或IgG同种型。本发明的抗体可包括这样的构架，其中氨基酸已经替换成来自各人VH或VL种系序列的抗体构架。一方面，本发明的抗体以比所述抗体结合C3的亲和力高至少1000倍的亲和力结合 C3b0本发明包括具有表1中抗体9556的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明包括具有表1中抗体9611的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明包括具有表1中抗体9612的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表 1中抗体9609的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明包括具有表1中抗体 9610的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中抗体9674的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明又进一步包括具有表1中抗体9675的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明包括具有表1中抗体91M的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中抗体9397的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中抗体9398的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中抗体9136的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中抗体9141的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明又进一步包括具有表1中抗体9373的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中抗体9423的重链和轻链序列的抗体或其抗原结合片段。本发明包括具有表1中抗体9556的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明包括具有表1中抗体9611的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明包括具有表1中抗体9612的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。 本发明还包括具有表1中抗体9609的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明包括具有表1中抗体9610的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中抗体9674的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明又进一步包括具有表1中9675抗体的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。 本发明包括具有表1中91M抗体的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中9397抗体的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中9398抗体的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中9136抗体的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中9141抗体的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明又进一步包括具有表1中9373抗体的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还包括具有表1中9423抗体的重链和轻链可变域序列的抗体或其抗原结合片段。本发明还涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其包括选自SEQ IDNOs :1、15、29、 43、57、71、85、99、113、127、141、155、169和 183 的重链CDRl ；选自 SEQ ID NOs :2、16、30、44、
58、72、86、100、114、128、142、156、170和184 的重链CDR2 ；和选自 SEQ ID NOs :3、17、31、45、
59、73、87、101、115、129、143、157、171和185的重链CDR3，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段结合补体蛋白C3b。在其它方面，分离的抗体或其抗原结合片段还包括选自SEQ ID NOs :4、18、32、46、60、74、88、102、116、130、144、158、172 和 186 的轻链 CDRl ；选自 SEQ ID NOs :5、19、33、47、61、75、89、103、117、131、145、159、173和 187 的轻链 CDR2 ；和选自 SEQ ID NOs :6、20、34、48、62、76、90、104、118、132、146、160、174 和 188 的轻链 CDR3。本发明还涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其包括选自SEQ IDNOs :4、18、32、
46、60、74、88、102、116、130、144、158、172和 186 的轻链 CDRl ；选自 SEQ ID NOs 5、19、33、
47、61、75、89、103、117、131、145、159、173和187 的轻链CDR2 ；和选自 SEQ ID NOs 6、20、34、
48、62、76、90、104、118、132、146、160、174和188的轻链CDR3，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段结合补体蛋白C3b。本发明还涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其包括选自SEQ IDNOs :7、21、35、
49、63、77、91、105、119、133、147、161、175和 189 的重链可变域序列，还包括选自 SEQ ID NOs :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和 190 的轻链可变域序列，其中所
述分离的抗体或其抗原结合片段结合补体蛋白C3b。
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本发明还涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其包括选自SEQ IDNOs :8、22、36、 50、64、78、92、106、120、134、148、162、176和190的轻链可变域序列，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段结合补体蛋白C3b。本发明还涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其包括与选自SEQ IDNOs :7、21、35、
49、63、77、91、105、119、133、147、161、175和189的序列具有至少95%序列同一性的重链可变域，其中所述抗体结合C3b。一方面，分离的抗体或其抗原结合片段还包括与选自SEQ ID NOs 8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和 190 的序列具有至少 95%序列同
一性的轻链可变域。本发明还涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其包括与选自SEQ IDNOs 8、22、36、
50、64、78、92、106、120、134、148、162、176和190的序列具有至少95%序列同一性的轻链可变域，其中所述抗体结合Ob。本发明还进一步涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其包括与选自SEQ ID NOs 9、23、37、51、65、79、93、107、121、135、149、163、177和 191 的序列具有至少 95%序列同一性的重链，其中所述抗体结合C3b。一方面，分离的抗体或其抗原结合片段还包括与选自SEQ ID N0sl0、24、38、52、66、80、94、108、122、136、150、164、178 和 192 的序列具有至少 95%序列同一性的轻链。本发明进一步涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其包括与选自SEQID NOs 10、 24、38、52、66、80、94、108、122、136、150、164、178 和 192 的序列具有至少 95%序列同一性的轻链，其中所述抗体结合C3b。本发明还包括药物组合物，其包含此处描述的抗体组合物以及药学上可接受的载体。尤其是，本发明包括药物组合物，其包含表1的抗体或其抗原结合片段，例如抗体9556、 9611、9612、9609、9610、9674、9675、9124、9397、9398、9136、9141、9373 或 9423。本发明还包括药物组合物，其包含表1的两种或多种抗体或其抗原结合片段的组合。本发明还包括分离的核酸，其包含编码这样的多肽的序列，所述多肽包括与选自 SEQ ID NOs :7、21、35、49、63、77、91、105、119、133、147、161、175 和 189 的序列具有至少 95 %序列同一性的重链可变域。本发明还涉及分离的核酸，其包含编码这样的多肽的序列，所述多肽包括与选自 SEQ ID NOs 8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和 190 的序列具有至少 95 %序列同一性的轻链可变域。一方面，本发明还包括这样的载体，其包括一种或多种此处描述的核酸分子。本发明还包括分离的宿主细胞，其包括编码上文描述的抗体重链的重组DNA序列，和编码所述抗体轻链的第二个重组DNA序列，其中所述DNA序列有效连接启动子，并能够在宿主细胞中表达。期望抗体可以是人单克隆抗体。还期望宿主细胞是非人哺乳动物细胞。本发明还涉及治疗年龄相关性黄斑变性的方法，其中所述方法包括向需要治疗的受试者施用有效量的包含此处描述的抗体或其片段的组合物的步骤。期望受试者是人。本发明还提供在受试者中抑制补体旁路的方法，其中所述方法包括向需要抑制的受试者施用有效量的包含此处描述的抗体或其抗原结合片段的组合物的步骤。一方面，受试者是人。
本发明还提供抑制Ob结合因子B、P或H的方法，其包括使Ob与此处描述的抗 C3b抗体或其片段接触。本发明还提供抑制C3转变酶、C4转变酶和Ob-Ob 二聚体形成的方法，其包括使 C3b与抗Ob抗体或其片段接触。本发明还包括分离的抗体或其抗原结合片段，其包含与选自SEQ IDNOs :1、2、3、4、 5、6、15、16、17、18、19、20、29、30、31、32、33、34、43、44、45、46、47、48、57、58、59、60、61、62、 71、72、73、74、75、76、85、86、87、88、89 和 90 的序列具有至少 80%,85%,90%,以及高达至少95%的序列同一性的至少一个互补性决定区(CDR)序列，其中所述抗体结合补体蛋白 C3b。本发明还包括分离的抗体或其抗原结合片段，其包含选自SEQ IDNOs :1、2、3、15、 16、17、29、30、31、43、44、45、57、58、59、71、72、73、85、86 和 87 的至少一个重链 CDR序列，其中所述抗体结合C3b。本发明还包括分离的抗体或其抗原结合片段，其包含选自SEQ IDNOs :4、5、6、18、
19、20、32、33、34、46、47、48、60、61、62、74、75、76、88、89和 90 的至少一个轻链 CDR 序列，其中所述抗体结合C3b。本发明还包括分离的抗原结合多肽，其包含选自SEQ ID NOs :1、15、29、43、57、71 和 85 的重链 CDRl ；选自 SEQ ID NOs :2、16、30、44、58、72 和 86 的重链 CDR2 ；和选自 SEQ ID NOs :3、17、31、45、59、73和87的重链CDR3，其中所述抗原结合多肽结合补体蛋白C3b。本发明还包括抗原结合多肽，其包含选自SEQ ID NOs :4、18、32、46、60、74和88的轻链 CDRl ；选自 SEQ ID NOs 5、19、33、47、61、75 和 89 的轻链 CDR2 ；和选自 SEQ ID NOs 6、
20、34、48、62、76和90的轻链CDR3，其中所述抗原结合多肽结合补体蛋白C3b。除了包括上文指出的重链CDR序列的抗原结合多肽外，抗原结合多肽还包括选自 SEQ ID NOs :4、18、32、46、60、74 和 88 的轻链 CDRl ；选自 SEQ ID NOs 5、19、33、47、61、75 和 89 的轻链 CDR2 ；和选自 SEQID NOs 6、20、34、48、62、76 和 90 的轻链 CDR3。此处描述的抗体结合多肽以低于或等于ΙΟΟρΜ，优选低于或等于ΙΟρΜ，优选低于或等于2pM的KD结合C3b。此外，优选地，抗原结合多肽结合人和猕猴C3b。本发明还包括调节C3b的方法，其包括向需要调节的受试者施用有效量的抗体、 其抗原结合片段或此处描述的抗原结合多肽。任何上述抗体或其抗原结合片段可以是单克隆抗体或其抗原结合片段。定义除非另有定义，此处所用的所有技术和科技术语具有本发明所属领域中普通技术人员通常理解的相同意思。如此处所用的术语“抗体”包括完整抗体及其任何抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或单链。天然存在的“抗体”是包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白。每一重链包含重链可变区(此处缩写为VH)和重链恒定区。所述重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2和CH3。每一轻链包含轻链可变区(缩写为VL)和轻链恒定区。所述轻链恒定区包含一个结构域CL。VH和VL区可进一步细分成高变区，称为互补决定区(CDR)，它们散布着称为构架区(FR)的更保守的区域。每一 VH和VL由以下面顺序从氨基末端到羧基末端排列的三个CDR和四个FR组成FR1、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的多种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一个组分(Clq)的结合。如此处所用，术语抗体的“抗原结合部分”指完整抗体的一个或更多片段，其保留与给定抗原(例如C3b)特异性结合的能力。可通过完整抗体的片段进行抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合部分”中包括的结合片段的实例包括Fab片段，其为VL、VH、 CL和CHl结构域组成的单价片段；F (ab) 2片段，其为包含在铰链区通过二硫键连接的两个 Fab片段的二价片段；由VH和CHl结构域组成的Fd片段；由抗体单条臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；单结构域抗体(dAb)片段(Ward等，1989Nature 341 :544-546)，其由VH结构域或VL结构域组成；和分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但可使用重组方法， 通过人工肽接头将它们连接，所述人工肽接头使得它们能够制备成单条蛋白质链，其中VL 和VH区域配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参阅例如Bird等，1988 Science 242 423-426 ；和 Huston 等，1988Proc. Natl. Acad. Sci. 85 :5879-5883)。此类单链抗体包括抗体的一个或更多“抗原结合部分”。使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段， 并筛选所述片段，以与完整抗体相同的方式使用所述片段。抗原结合部分也可掺入到单结构域抗体、巨型抗体(maxibodies)、微型抗体 (minibodies)、胞内抗体、双抗体、三抗体、四抗体、v-NAR和bis-scFv (参阅例如Hollinger 和 Hudson，2005，Nature Biotechnology，23，9，1126-1136)。抗体的抗原结合部分可移植到基于多肽如III型纤连蛋白0^3)的支架中(参阅美国专利号6，703，199，其描述了纤连蛋白多肽单抗体体)。抗原结合部分可掺入到包含一对串联Fv区段(VH-CH1-VH-CH1)的单链分子中， 所述串联Fv区段与互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区(Zapata等，1995 Protein Eng. 8(10) :1057-1062 ；和美国专利号 5，641，870)。如此处所用，术语“亲和力”指抗体与抗原在单个抗原位点上相互作用的强度。在每一抗原位点中，抗体“臂”的可变区与抗原在许多位点上通过弱的非共价力相互作用；相互作用越多，亲和力越强。如此处所用，术语“亲合力”指抗体-抗原复合物的总稳定性或强度的信息化量度。其受三个主要因素控制抗体表位亲和力；抗原与抗体两者的效价；和相互作用部分的结构排列。最终这些因素决定了抗体的特异性，即特定抗原结合精确抗原表位的可能性。术语“氨基酸”指天然发生的和合成的氨基酸，以及与天然发生的氨基酸以相似方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然发生的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及稍后被例如羟脯氨酸、Y-羧基谷氨酸和0-磷酸丝氨酸修饰的那些氨基酸。氨基酸类似物指这样的化合物，其与天然发生的氨基酸具有相同的基本化学结构，即与氢结合的α碳、羧基、氨基和R基团，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲锍。此类类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留了与天然发生的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物指具有与氨基酸的一般化学结构不同结构的化合物，但它以与天然发生的氨基酸类似的方式起作用。如此处所用，术语“结合特异性”指各抗体结合位点与仅一个抗原决定簇相互作用的能力。抗体的结合部位位于分子的Fab部分，并从重链和轻链的高变区构建。抗体的结合亲和力是单个抗原决定簇与抗体上单个结合部位之间反应的强度。其为抗原决定簇与抗体结合部位之间起作用的吸引力和排斥力的总和。两个实体之间的特异性结合表示平衡常数(KA)为至少1χ107Μ-1、108M-1、 109M-1、1010M-1、1011M-1、1012M-1、1013M-1 的结合。短语与抗体(例如，C3b 结合抗体) 的“特异性(或选择性)结合”指决定近亲抗原(例如人Ob或猕猴C3b)在蛋白质和其它生物产品的异质群体中的存在的结合反应。除了上文指出的平衡常数(KA)，本发明的C3b 结合抗体通常还具有约Ixl0-k-l、lxl0-3s-l、lxl04s-l、IxlOIs-I或更低的解离速率常数(Kd)，并且以比其结合非特异性抗原(例如C3)的亲和力至少10倍，优选100倍，或高达1000倍或更高的亲和力结合C3b。。短语“识别抗原的抗体”和“对抗原特异的抗体”此处可与“特异性结合抗原的抗体”互换使用。如此处所用，“neo-表位”或“neo-抗原”可互换使用，并且是蛋白水解切割C3后 C3b上存在的蛋白质的抗原部分。这些neo-表位在未切割的C3上不容易接近。术语“与黄斑变性相关的状况或病症”指任何多种这样的状况，其中例如因黄斑细胞生长降低引起视网膜黄斑变性或无功能，增加了黄斑细胞(例如RPE细胞)的死亡或重排、正常生物学功能的丧失，或这些事件的组合。黄斑变性导致细胞组织结构的完整性和/ 或正常黄斑的胞外基质的缺失和/或黄斑细胞的功能缺失。黄斑变性相关病症的实例包括 AMD、北卡罗来纳黄斑营养不良、Sorsby' s眼底营养不良、隐性黄斑营养不良、模式营养不良、卵黄状黄斑变性、显性玻璃疣，和malattia leventinese (辐射玻璃疣)。该术语还包括黄斑异常和/或变性之前或之后发生的黄斑外改变。因此，术语“黄斑变性相关病症”还广泛地包括改变或损坏黄斑完整性或功能的任何状况(例如，RPE或Bruch' s膜的损伤)。 例如，该术语包括视网膜脱落、脉络膜视网膜变性、视网膜变性、光感受器退化、RPE变性、粘多糖病、视杆-视椎营养不良、视椎-视杆营养不良和视椎变性。术语“补体组分”、“补体蛋白”或“补体组分蛋白”指参与激活补体系统的分子。经典途径组分包括，例如Clq、Clr、Cls、C4、C2、C3、C5、C6、C7、C8、C9和C5b_9复合体(膜攻击复合体MAC)。旁路途径组分包括，例如因子B、因子D、备解素、H和I。术语“调节”或“调节”在此处互换使用，指活性或生物学过程(例如，补体过程) 的上调(即，激活或刺激(例如，通过激动或加强))和下调(即，抑制或阻遏(例如，通过拮抗、降低或抑制))。“调节”旨在描述过程的上调或下调。可通过刺激物的拮抗剂抑制通过该刺激物上调的过程。相反地，可通过修饰剂的激动剂抑制通过该修饰剂下调的过程。术语“补体途径相关分子”、“补体途径分子”和“补体途径相关蛋白，，可互换使用， 并指在补体激活和响应激活的补体系统介导的或激活的补体系统触发的下游细胞活性中起作用的多种分子。它们包括补体途径的起始物(即，直接或间接触发补体系统激活的分子)、在补体激活过程中产生的或起作用的分子(例如，补体蛋白/酶，如C3、C5、C5b-9、因子B、因子D、MASP-1和MASP-2)、补体受体或抑制剂(例如，簇蛋白、玻连蛋白、CRl或CD59)， 和激活的补体系统调节或触发的分子(例如，膜攻击复合体抑制因子、MACIF ；参阅例如， ugita等，J Biochem, 106 =589-92,1989) 因此，除了此处指出的补体蛋白，补体途径相关分子还包括，例如C3/C5转变酶调节子(RCA)，如补体受体类型1 (也称为CRl或⑶35)、补体受体类型2 (也称为CR2或⑶21)、膜辅因子蛋白(MCP或⑶46)，和C4bBP ；MAC调节子，如玻连蛋白、簇蛋白(也称为“3 40，40”)、0^丄059，和同源限制因子(HRF)；免疫球蛋白链， 如 Ig κ、IgX 或 Ig γ ；Cl 抑制剂；和其它蛋白质，如 CR3、CR4 (CDl lb/18)和 DAF (CD 55)。术语“补体途径调节的细胞活性”包括因以下引起的细胞损伤(恥-9攻击复合体、血管通透性改变、平滑肌细胞的收缩和迁移、T细胞增殖、免疫粘着、树突状细胞、单核细胞、粒细胞和血小板的聚集、嗜中性粒细胞(PMN)和巨噬细胞的吞噬、迁移和激活。此外，补体途径的激活导致补体途径中副产物产生的促炎症反应的增加。与补体途径激活相关的病症包括肾炎、哮喘、再灌注损伤、血液透析、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、牛皮癣、多发性硬化症、移植、阿尔茨海默氏病、aHUS、MPGN II或任何其它补体介导的疾病。与黄斑变性相关的病症包括AMD、北卡罗来纳黄斑营养不良、Sorsby' s眼底营养不良、隐性黄斑营养不良、模式营养不良、卵黄状黄斑变性、显性玻璃疣，和malattia Ieventinese (辐射玻璃疣)、黄斑异常和/或变性之前或之后发生的黄斑外改变、视网膜脱落、脉络膜视网膜变性、视网膜变性、光感受器退化、RPE变性、粘多糖病、视杆-视椎营养不良、视椎-视杆营养不良和视椎变性粘多糖病。如此处所用，术语“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有的非人脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，如非人灵长类、啮齿类、兔、绵羊、狗、猫、马、奶牛、鸟、两栖动物、爬行动物等。术语“嵌合抗体”是这样的抗体分子，其中(a)恒定区或其部分被改变、替换或交换，使得抗原结合位点(可变区)连接不同种类或改变种类的恒定区、效应功能和/或物种，或赋予嵌合抗体新性质的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等；或 (b)可变区或其部分被具有不同或改变抗原特异性的可变区改变、替换或交换。例如，可通过来自人免疫球蛋白的恒定区替换小鼠恒定区来修饰小鼠抗体。由于用人恒定区进行替换，嵌合抗体在识别抗原中可保留其特异性，同时与最初的小鼠抗体相比，在人中具有降低的抗原性。术语“补体Ob蛋白”或“Ob”互换使用，并指不同物种中的Ob蛋白。例如，人 C3b 具有 SEQ ID NO :197(A链)和 198(B链)中阐明的序列。可从 Complement Technology Inc. (Tyler, TX)获得人C3b。如下文实施例部分阐明产生猕猴C3b。术语“保守修饰的变体”应用到氨基酸和核酸序列。对于特定核酸序列，保守修饰的变体指编码相同或基本相同氨基酸序列的那些核酸，或者其中所述核酸不编码氨基酸序列，则指基本相同的序列。因为遗传密码的简并性，大量功能相同的核酸编码任何给定的蛋白质。例如，密码子GCA、GCC、GCG和G⑶均编码氨基酸丙氨酸。因此，在每一位置上(其中密码子确定丙氨酸)，可将所述密码子改变成任何所述相应的密码子，而不改变所编码的多肽。此类核酸变异是“沉默变异”，其为保守修饰变异的一种。此处编码多肽的每一核酸序列也描述了所述核酸的每一种可能的沉默变异。本领域技术人员将认识到可修饰核酸中的每一密码子(除了 AUG，其通常是甲硫氨酸的唯一密码子，和TGG，其通常是色氨酸的唯一密码子)，以产生功能上相同的分子。因此，在每一所述序列中暗含了编码多肽的核酸的每一沉默变异。对于多肽序列，“保守修饰的变体”包括对多肽序列的各替换、缺失或添加，其导致对氨基酸用化学上类似的氨基酸进行替换。提供功能上类似的氨基酸的保守替换表为本领域所熟知。此类保守修饰变体除了并且不排斥本发明的多态性变体、种间同源物和等位基因。以下8组含有彼此为保守替换的氨基酸1)丙氨酸㈧、甘氨酸(G) ；2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E) ；3)天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q) ；4)精氨酸(R)，赖氨酸(K) ；5)异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，甲硫氨酸(M)，缬氨酸(V) ；6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W) ；7)丝氨酸(S)， 苏氨酸(T)；和8)半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)(参阅例如，Creighton, Proteins (1984)) 0 在一些实施方案中，术语“保守序列修饰”用于指不显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体的结合特征的氨基酸修饰。术语“交叉-阻断”、“交叉-阻断的”在此处可互换使用，表示抗体或其它结合剂在标准的竞争性结合测定中干扰其它抗体或结合剂与C3结合的能力。可使用标准竞争结合测定法来测定抗体或其它结合剂能够干扰另一抗体或结合分子与C3结合的能力或程度，并因此是否可以被称为本发明的交叉阻断。一种合适的测定法包括使用Biacore技术(例如通过使用BIAcore3000仪器(Biacore，Uppsala，Sweden))， 其可以使用表面等离振子共振技术测量相互作用的程度。用于测量交叉阻断的另一测定法使用基于ELISA的方法。术语“表位”表示能够特异性结合抗体的蛋白质决定簇。表位一般由分子的化学活性表面基团，如氨基酸或糖侧链组成，并一般具有特定的三维结构特征，以及比电荷特征。 构象和非构象表位可以区分开，因为在变性溶剂的存在下失去与前者的结合，而不失去与后者的结合。如此处所用，术语IgG抗体或其片段(例如，Fab片段)的“高亲和力”指对靶抗原具有10-8M或更低、10-9M或更低、10-10M、或10-11M或更低、或10-12M或更低、或10-13M 或更低的KD的抗体。然而，“高亲和力”结合对于其它抗体同种型可以发生变化。例如，对于IgM同种型的“高亲和力”结合指具有10-7M或更低，或10-8M或更低的KD的抗体。一方面，此处描述的抗Ob抗体或其抗原结合片段具有低于或等于InM，优选低于或等于200pM， 更优选低于或等于ΙΟΟρΜ，并甚至更优选低于或等于IOpM的KD。如此处所用，术语“人抗体”旨在包括具有可变区的抗体，在所述可变区中构架和 CDR区均来自人来源的序列。此外，如果抗体含有恒定区，所述恒定区也来自此类人序列，例如人种系序列，或突变形式的人种系序列。本发明的人抗体可包括不由人序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。术语“人单克隆抗体”指具有可变区的显示单一结合特异性的抗体，在所述可变区中构架和CDR区均来自人序列。在一个实施方案中，所述人单克隆抗体由杂交瘤产生，所述杂交瘤包括从转基因非人动物，例如转基因小鼠中获得的B细胞，所述转基因非人动物具有融合到无限增殖细胞中的包含人重链转基因和轻链转基因的基因组。“人源化”抗体是保留非人抗体的反应性，而在人中具有更低免疫原性的抗体。 例如这可通过保留非人⑶R区并用它们的人类对应物替换抗体剩余部分(即，恒定区以及可变区的构架部分)来实现。参阅例如，Morrison等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA,81 6851-6855，1984 ；Morrison 禾口 Oi，Adv. Immunol. ,44 :65-92,1988 ；Verhoeyen 等，Science, 239 :1534-1536,1988 ；Padlan, Molec. Immun. ,28 :489-498,1991 ；禾口 Padlan，Molec. Immun. ,31 169-217，1994。人工程化技术的其它实例包括，但不限于在US5，766，886中公开的Xoma技术。在两条或更多核酸或多肽序列的上下文中，术语“相同的”或百分比“同一性”指相同的两条或更多序列或子序列。当使用以下的序列比较算法或通过手工比对和视觉检查测定，比较并比对在比较窗内或指定区域内用于最大对应时，如果两条序列具有特定百分比(即，在特定区域上或当不指定时，在全长序列上60%同一性，任选地65 %、70%、75 %、 80 %、85 %、90 %、95 %或99 %同一性)的相同氨基酸残基或核苷酸，那么两条序列“基本相同”。任选地，同一性存在于长度至少约50个核苷酸(或10个氨基酸)的区域，或更优选地在长度至少100到500或1000或更多核苷酸(或20、50、200或更多氨基酸)的区域。对于序列比较，通常一条序列作为参考序列，测试序列与其进行比较。当使用序列比较算法时，将测试和参考序列输入计算机，如果需要，指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。可使用默认程序参数，或可指定可选参数。所述序列比较算法然后基于程序参数计算测试序列相对于参考序列的百分比序列同一性。如此处所用，“比较窗口”包括参考选自20到600、一般约50到约200，更一般约100到约150的任何一定数量相邻位置的区段，其中可在两条序列进行最佳比对后将序列与相同数量相邻位置的参考序列进行比较。用于比较的序列比对方法为本领域所熟知。例如通过Smith和Waterman(1970)Adv. Appl. Math. 2 :482c的局部同源性算法，通过 Needleman 和 Wunsch，J. Mol. Biol. 48 :443,1970 的同源性比对算法，通过搜索 Pearson 禾口 Lipman, Proc. Nat，1. Acad. Sci. USA 85 :2444,1988的相似性方法，通过这些算法的计算机化实现(Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr.，Madison, WI中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)，或通过手工比对和视觉检查(参阅，例如 Brent 等，Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley&Sons, Inc. (Ringbou编辑，2003))进行序列最佳比对用于比较。适合于测定百分比序列同一性和序列相似性的算法的两个实例是BLAST和BLAST 2. 0 算法，其分别描述于 Altschul 等，Nuc. Acids Res. 25 :3389-3402,1977 ；和 Altschul 等，J. Mol. Biol. 215 :403_410，1990 中。用于进行 BLAST 分析的软件通过 National Center for Biotechnologyhformation公开获得。该算法包括首先通过鉴定查询序列中长度为W 的短字来鉴定高得分序列对(HSPs)，当在数据库序列中用相同长度的字比对时，所述短字匹配或满足某一正值阈值得分Τ。T称为邻近字得分阈值(Altschul等，上文)。这些初始邻近字命中作为起始搜索的种子，以发现含有它们的更长HSI^s。只要可增加累积比对得分， 则沿每一序列的两个方向延伸字命中。对于核苷酸序列，使用参数M(对一对匹配残基的奖赏得分；总>0)和N(对错配残基的罚分；总<0)计算累积得分。对于氨基酸序列，使用得分矩阵来计算累积得分。当所述累积比对得分从其最高达到值跌落X量；因一个或更多负得分残基比对累积，所述累积比对得分到达零或以下；或到达任何一条序列的末端时， 停止字命中在每一方向上的延伸。BLAST算法参数W、T和X决定了比对的灵敏度和速度。 BLASTN程序(对于核苷酸序列)使用默认字长(W) 11、期望值(E) 10、M = 5、N = -4和两条链的比较。对于氨基酸序列，BLASTP程序使用默认字长3，和期望值(E) 10和BL0SUM62 得分矩阵(参阅 Henikoff 和 Henikoff，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 :10915,1989)比对 (B) 50、期望值(E) 10、M= 5、N = -4和两条链的比较。BLAST算法也进行两条序列之间相似性的统计学分析(参阅例如，Karlin和 Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U SA 90:5873-5787,1993)。BLAST 算法提供的一种相似性测量是最小总和概率(P(N))，其提供两条核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配的概率的指示。例如，如果测试核酸与参考核酸的比较中最小总和概率低于约0. 2，更优选低于约 0. 01，并最优选低于约0. 001，那么认为核酸与参考序列相似。也可使用已经整合到ALIGN算法(版本2. 0)的E. Meyers和W. Miller (Comput. Appl.Biosci.，4 :11-17,1988)的算法，使用PAMl20加权残基表，空位长度罚分12和空位罚分4测定两条氨基酸序列之间的百分比同一性。此外，可使用已经整合到GCG软件包(可在 www. gcg. com 上获得)中的 GAP 程序的 Needleman 和 1Wunsch (J. Mol，Biol. 48 :444-453, 1970)算法，使用Blossom 62矩阵或PAM250矩阵，以及空位加权16、14、12、10、8、6或4和长度加权1、2、3、4、5或6来测定两条氨基酸序列之间的百分比同一性。除了上文指出的序列同一性的百分比，两条核酸序列或多肽基本相同的另一指示是第一条核酸编码的多肽与针对第二条核酸编码的多肽产生的抗体免疫交叉反应，如下文描述。因此，多肽通常与第二条多肽基本相同，例如，其中两条肽仅因保守替换而不同。两条核酸序列基本相同的另一指示是两个分子或其互补序列在严格条件下彼此杂交，如下文描述。两条核酸序列基本相同的又一指示是可使用相同的引物来扩增所述序列。术语“分离的抗体”指抗体，其基本不含具有不同抗原特异性的其它抗体(例如， 特异性结合Ob的分离的抗体基本不含特异性结合除Ob外的抗原的抗体)。然而，特异性结合C3b的分离的抗体可对其它抗原具有交叉反应性。此外，分离的抗体可基本不含其它细胞物质和/或化学品。术语“同种型”指重链恒定区基因提供的抗体种类(例如，IgM、IgE、IgG如IgGl 或IgG4)。同种型也包括这些种类中一种的修饰形式，其中已经进行修饰以改变Fc功能，例如来增强或减弱效应功能或与Fc受体的结合。如此处所用，术语“Kassoc”或“Ka”旨在指特定抗体-抗原相互作用的结合速率， 而如此处所用，术语“Kdis”或“Kd”旨在指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。如此处所用，术语“KD”旨在指解离常数，其获得于Kd与Ka的比值(即Kd/Ka)并表达为摩尔浓度 (M)。可使用本领域熟知的方法测定抗体的KD值。用于测定抗体KD的方法是通过使用表面等离振子共振，或使用生物传感器系统如Biacore 系统。如此处所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”指单个分子组合物的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物对特定表位显示单一结合特异性和亲和力。术语“核酸”此处与术语“多核苷酸”可互换使用，并指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。所述术语包括含有已知核苷酸类似物或修饰的骨架残基或键的核酸，其为合成的、天然发生的和非天然发生的，其与参考核酸具有相似的结合性质，并且其以与参考核苷酸相似的方式进行代谢。此类类似物的实例包括，但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性-甲基膦酸酯、2-0-甲基核糖核苷酸、肽核酸(PNA)。除非另有指出，特定核酸序列也暗中包括其保守修饰的变体(例如简并密码子替换)和互补序列，以及明确指出的序列。尤其是，如下文详细描述，可通过产生这样的序列完成简并密码子替换，其中用混和碱基和/或脱氧肌苷残基替换一个或更多所选(或全部) 密码子的第三个位置(Batzer 等，Nucleic Acid Res. 19 :5081,1991 ；Ohtsuka 等，J. Biol. Chem. 260 :2605-2608,1985 ；禾口 Rossolini 等，Mol. Cell. Probes 8 :91-98,1994)。术语“有效连接”指两个和更多多核苷酸(例如DNA)区段的功能关系。通常，其指转录调节序列与转录序列之间的功能关系。例如，如果启动子或增强子序列刺激或调节
15编码序列在适当宿主细胞或其它表达系统中的转录，那么该启动子或增强子序列有效连接编码序列。一般地，有效连接转录序列的启动子转录调节序列与转录序列在物理空间上邻近，即它们是顺式作用。然而，一些转录调节序列，如增强子不需要与编码序列(增强子增强其转录)在物理空间上邻近或位于其附近。如此处所用，术语“优化的”表示已经使用生产细胞或生物，一般是真核细胞，例如毕赤酵母细胞、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)或人细胞中优选的密码子改变核苷酸序列，以编码氨基酸序列。将优化的核苷酸序列改造以完全或最大可能地保留起始核苷酸序列(其也称为“亲本”序列)最初编码的氨基酸序列。已经改造了此处的优化序列以具有哺乳动物细胞中优选的密码子。然而，此处也考虑其它真核细胞或原核细胞中这些序列的优化表达。 优化的核苷酸序列编码的氨基酸序列也称为优化的。术语“多肽”和“蛋白质”此处互换使用来指氨基酸残基的聚合物。所述术语应用到氨基酸聚合物，其中一个或更多氨基酸残基是相应天然发生氨基酸的人工化学模拟物， 还应用到天然发生的氨基酸聚合物和非天然发生的氨基酸聚合物。除非另有指出，特定的多肽序列也暗中包括其保守修饰的变体。如此处所用，术语“重组人抗体”包括通过重组方法制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如从对人免疫球蛋白基因转基因或转染色体的动物(例如小鼠)或从中制备的杂交瘤中分离的抗体、从经转化以表达人抗体的宿主细胞，例如从转染瘤中分离的抗体、从重组、组合人抗体库文中分离的抗体，和通过任何其它手段制备、表达、产生或分离的抗体，所述手段包括将全部或部分人免疫球蛋白基因、序列剪切成其它DNA序列。此类重组人抗体具有可变区，其中构架和CDR区均来自人种系免疫球蛋白序列。然而在某些实施方案中，此类重组人抗体可进行体外诱变(或者，当使用人Ig序列转基因的动物时，进行体内体细胞诱变)，因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是当来自并与人种系VH和VL序列相关时可能在体内人抗体种系所有组成成分中不天然存在的序列。术语“重组宿主细胞”(或简单地“宿主细胞”)指已经向其中引入重组表达载体的细胞。应理解此类术语不仅旨在指特定受试者细胞，还指此细胞的后代。因为某些修饰可能因突变或环境影响而在后代中出现，所以该后代实际上可能与亲本细胞不相同，但仍然包括在此处所用术语“宿主细胞”的范围内。术语“受试者”包括人和非人动物。非人动物包括所有的脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，如非人灵长类、羊、狗、奶牛、鸡、两栖动物和爬行动物。除了指出时，术语“患者”或“受试者”此处可互换使用。术语“治疗”包括施用组合物或抗体，以防止或延迟症状、并发症或疾病(例如 AMD)的生物化学指征的开始，缓解症状或阻止或抑制疾病、状况或病症的进一步发展。治疗可以是预防性的(以防止或延迟疾病开始，或防止其临床或亚临床症状的表现)或在疾病表现后治疗性抑制或缓解症状。术语“载体”旨在指能够转运已经连接另一多核苷酸的多核苷酸分子。一种类型的载体是“质粒”，其指已经连接额外DNA片段的环形双链DNA环。另一类型的载体是病毒载体，如腺伴随病毒载体(AAV或AAV2)，其中额外的DNA区段可连接到病毒基因组内。某些载体能够在其中引入载体的宿主细胞中进行自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。其它载体(例如非游离型哺乳动物载体)可在引入宿主细胞后整合到宿主细胞的基因组中，并由此与所述宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导它们有效连接的基因的表达。此类载体此处称为“重组表达载体”(或简单地，“表达载体”)。一般而言，在重组DNA技术中有用的表达载体经常是质粒的形式。在本说明书中， “质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是载体的最常用形式。然而，本发明旨在包括此类其它形式的表达载体，如病毒载体(例如，复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒)， 其起等同的功能。如此处所用，术语“C!3b活性”表示Ob产生下游的补体旁路的活性，包括但不限于例如C3转变酶的活性，C5转变酶的活性。可使用此处描述的测定，如但不限于溶血测定， 测定C3a和Cfe产生的测定、Ob沉积测定，和膜攻击复合体(MAC)沉积测定来测定Ob活性。如此处所用，“Ob活性的改变”或“C!3b活性的调节”指通过一种或多种此处描述的测定法测定Ob活性，其中Ob活性相对于相关对照增加或降低至少10%。例如，当存在抗体或片段的情况下Ob活性相对于缺少抗体或片段情况下C3b的活性降低或增加至少10% 时，可以说本发明的抗体或抗原结合片段调节Ob活性。如此处所用，术语“cyno”或“猕猴”指猕猴(Macaca fascicularis)。附图简述

图1显示，C3b抗体以相对于C3高至少1000倍的选择性结合C3b。图2显示了在10%人或猕猴血清中抗C!3b抗体抑制溶血的能力的实例。图3显示了 C!3b抗体抑制C!3b产生为C3分解产物的能力的实例。图4显示了证明C!3b抗体抑制MAC沉积的能力的示例性数据。图5显示，C3b抗体通过抑制产生C3a和C5a阻断旁路途径驱动的补体激活。图6A显示了 SDS-PAGE凝胶，其显示了 tick-over转变酶活性的抑制。图6B显示了 6A凝胶中对Ob产生的抑制的定量。图6C显示了抗Ob抗体抑制预形成的C3转变酶活性。图7显示抗体c;3b抗体体外抑制C5转化酶活性。图8A显示了通过C!3b抗体抑制因子B结合C3b。图8B显示了通过C!3b抗体抑制因子P结合C3b。图8C显示了通过C!3b抗体抑制因子H结合C3b。图8D显示了通过C3b 抗体抑制C!3b-C;3b 二聚体形成。图9显示了针对C3d的抗体交叉反应性测定的结果。图10显示了针对C5的抗体交叉反应性测定的结果。图11显示了测定Ob抗体是否结合i Ob或C3c的结合测定的结果。图12显示了物种交叉反应性研究的结果。图12A显示了大鼠交叉反应性。图12B 显示了兔交叉反应性。图12C显示了猪交叉反应性。图12D显示了小鼠交叉反应性。图 12E显示了豚鼠交叉反应性。图12F显示了狗交叉反应性。发明详述本发明部分基于这样抗体分子的发现，所述抗体分子特异性结合人和猕猴C3b。本发明涉及全长IgG形式的抗体(参阅例如，抗体9556、9611、9612、9609、9610、9674和9675) 以及其抗原结合片段，如Fab片段(例如，参阅抗体9124、9397、9398、9136、9141、9373和 9423)。因此，本发明提供特异性结合补体Ob蛋白(例如，人C3b，猕猴C3b)的抗体、药物组合物、生产方法和使用此类抗体和组合物的方法。C!3b 抗体本发明提供特异性结合C3b (例如，人C3b，猕猴C3b)的抗体。在一些实施方案中， 本发明提供特异性结合人和猕猴C3b的抗体。本发明的抗体包括，但不限于如实施例中所述分离的人单克隆抗体。本发明提供特异性结合Ob蛋白质(例如，人和/或猕猴C3b)的抗体，所述抗体包含具有 SEQ ID NO :7、21、35、49、63、77、91、105、119、133、147、161、175 和 189 的氨基酸序列的VH结构域。本发明还提供特异性结合Ob蛋白质(例如，人和/或猕猴C3b)的抗体，所述抗体包含具有下文表1中列出的任何一个VH CDRs的氨基酸序列的VH CDR0具体而言， 本发明提供特异性结合Ob蛋白质(例如，人和/或猕猴C3b)的抗体，所述抗体包含(或者，组成为)具有下文表1中列出的任何一个VH CDRs的氨基酸序列的一个、两个、三个、四个、五个或更多VH⑶Rs。本发明提供特异性结合C!3b蛋白质(例如，人和/或猕猴C3b)的抗体，所述抗体包含具有 SEQ ID NO :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176和 190 的氨基酸序列的VL结构域。本发明还提供特异性结合Ob蛋白质(例如，人和/或猕猴C3b)的抗体，所述抗体包含具有下文表1中列出的任何一个VL CDRs的氨基酸序列的VL CDR0具体而言， 本发明提供特异性结合Ob蛋白质(例如，人和/或猕猴C3b)的抗体，所述抗体包含(或者，组成为)具有下文表1中列出的任何一个VL CDRs的氨基酸序列的一个、两个、三个或更多 VL CDRs。本发明的其它抗体包括已经突变的氨基酸，其在CDR区中仍然与表1所述序列中描述的⑶R区具有至少百分之60、70、80、85、90或95的同一性。在一些实施方案中，其包括突变氨基酸序列，其中当与表1所述序列中描述的CDR区比较时CDR区中不超过1、2、3、 4或5个氨基酸已经发生突变。本发明还提供编码特异性结合C3b蛋白质(例如，人和/或猕猴C3b)的抗体的 VH、VL、全长重链和全长轻链的核酸序列。可优化此类核酸序列用于在哺乳动物细胞中表达(例如，表 1 显示了抗体 9556、9611、9612、9609、9610、9674 和 9675，以及 Fab 片段 9124、 9397、9398、9136、9141、9373和9423的重链和轻链的优化核酸序列)。表1.本发明C!3b抗体、Fabs与C3b蛋白质的实例表权利要求
1.分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人或猕猴补体C!3b蛋白，其中所述抗体以低于或等于IOOpM的KD结合人C3b。
2.权利要求1的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段也以低于或等于250pM的KD结合猕猴C3b。
3.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以低于或等于IOpM的KD结合人C3b。
4.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以低于或等于2pM的KD结合人C3b。
5.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体如通过体外溶血测定法所测定以低于或等于65nM的IC50抑制人补体旁路。
6.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体如通过体外Ob沉积所测定以低于或等于50nM的IC50抑制人补体旁路。
7.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体如通过补体膜攻击复合体的沉积所测定以低于或等于5nM的IC50抑制人补体旁路。
8.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体如通过产生C3a和Cfe所测定以低于或等于IOOnM的IC50抑制补体旁路。
9.权利要求1的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合人或猕猴的补体C3b蛋白，并与表1中描述的抗体交叉竞争。
10.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
11.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是人或人源化抗体。
12.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
13.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是单链抗体。
14.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是Fab片段或kFv片段。
15.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是IgG同种型。
16.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体包含这样的构架，其中氨基酸已经替换到来自各人VH或VL种系序列的抗体构架。
17.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体以比所述抗体结合C3的亲和力高至少1000倍的亲和力结合C3b。
18.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自 SEQ ID NOs :1、15、29、43、57、71、85、99、113、127、141、155、169 和 183 的重链 CDRl ；选自 SEQ ID NOs :2、16、30、44、58、72、86、100、114、128、142、156、170 和 184 的重链 CDR2 ；和选自 SEQ ID NOs :3、17、31、45、59、73、87、101、115、129、143、157、171 和 185 的重链CDR3，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段结合补体蛋白C3b。
19.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自 SEQ ID NOs :4、18、32、46、60、74、88、102、116、130、144、158、172 和 186 的轻链 CDRl ；选自 SEQ ID NOs :5、19、33、47、61、75、89、103、117、131、145、159、173 和 187 的轻链 CDR2 ；和选自 SEQ ID NOs :6、20、34、48、62、76、90、104、118、132、146、160、174 和 188 的轻链CDR3，其中所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段结合补体蛋白C3b。
20.权利要求18的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体还包含选自SEQ ID NOs :4、18、32、46、60、74、88、102、116、130、144、158、172 和 186 的轻链 CDRl ；选自 SEQ ID NOs :5、19、33、47、61、75、89、103、117、131、145、159、173和 187 的轻链CDR2 ；和选自 SEQ ID NOs :6、20、34、48、62、76、90、104、118、132、146、160、174 和 188 的轻链 CDR3。
21.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自 SEQ ID NOs :7、21、35、49、63、77、91、105、119、133、147、161、175 和 189 的重链可变域序列，还包括选自 SEQID NOs :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和190的轻链可变域序列，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段结合补体蛋白C3b。
22.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含与选自 SEQ ID NOs :7、21、35、49、63、77、91、105、119、133、147、161、175 和 189 的序列具有至少95%序列同一性的重链可变域，其中所述抗体结合C3b。
23.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含与选自 SEQ ID NOs :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和 190 的序列具有至少95%序列同一性的轻链可变域，其中所述抗体结合C3b。
24.权利要求20-23的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段还包含与选自 SEQ ID NOs :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和 190 的序列具有至少95%序列同一性的轻链可变域。
25.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含与选自 SEQ ID NOs :9、23、37、51、65、79、93、107、121、135、149、163、177 和 191 的序列具有至少95%序列同一性的重链，其中所述抗体结合C3b。
26.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含与选自 SEQ ID NOs :10、24、38、52、66、80、94、108、122、136、150、164、178和 192 的序列具有至少95%序列同一性的轻链，其中所述抗体结合C3b。
27.权利要求25的分离的抗体或其抗原结合片段，其还包含与选自SEQID NOs=IO, 24、38、52、66、80、94、108、122、136、150、164、178 和 192 的序列具有至少 95%序列同一性的轻链。
28.药物组合物，其包含任一前述权利要求的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。
29.分离的核酸，其包含编码这样的多肽的序列，所述多肽包含与选自SEQID NOs :7、21、35、49、63、77、91、105、119、133、147、161、175和189 的序列具有至少 95%序列同一性的重链可变域。
30.分离的核酸，其包含编码这样的多肽的序列，所述多肽包含与选自SEQID NOs :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176和 190 的序列具有至少 95%序列同一性的轻链可变域。
31.载体，其包含权利要求27或观的核酸。
32.分离的宿主细胞，其包含编码任一前述权利要求的抗体或其抗原结合片段的重链的重组DNA序列，和编码任一前述权利要求的抗体或其抗原结合片段的轻链的第二条重组 DNA序列，其中所述DNA序列有效连接启动子，并能够在宿主细胞中表达。
33.权利要求30的分离的宿主细胞，其中所述抗体是人单克隆抗体。
34.权利要求30的分离的宿主细胞，其中所述宿主细胞是非人哺乳动物细胞。
35.治疗年龄相关性黄斑变性的方法，其包括向需要治疗的受试者施用有效量的包含权利要求1-27的抗体或其抗原结合片段的组合物。
36.权利要求33的方法，其中所述受试者是人。
37.在受试者中抑制补体旁路的方法，其包括向需要抑制的受试者施用有效量的包含权利要求1-27的抗体或其抗原结合片段的组合物。
38.权利要求35的方法，其中所述受试者是人。
全文摘要
本发明涉及结合人和猕猴补体蛋白C3b的抗体及其抗原结合片段，以及使用其的组合物和方法。
文档编号C07K16/18GK102459334SQ201080026538
公开日2012年5月16日 申请日期2010年5月5日 优先权日2009年5月6日
发明者A·克劳泽, B·C·吉尔德, B·埃特马德-吉尔博特逊, I·克拉格, I·斯普劳斯基, K·赵, M·罗古斯卡, Y-I·金 申请人:诺瓦提斯公司