专利名称：一种三叶豆紫檀苷的制备方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及ー种采用高效液相制备色谱法从苦參药材中制备三叶豆紫檀苷的方法。
背景技术：
苦參是豆科槐属多年生落叶亚灌木植物苦參(Sophora flavescens Ait.)的干燥根，性味苦寒，归心、肝、脾、肾、大肠、小肠诸经。具有清热燥湿、杀虫利尿的功效，可作苦味健胃剤、利尿剤、消炎药、止泻药和驱虫药。苦參的主要功能性成分为黄酮类和生物碱类成分，近年来对苦參黄酮类成分研究 较多，并取得了相关的成果。现代临床研究表明苦參总黄酮具有抗菌消炎、减慢心率、抗心率失常功能。三叶豆紫檀苷为苦參中ー个主要的黄酮类成分，经Yagi A等研究已确定其具有很强的抗真菌作用。三叶豆紫檀苷，无色针状或棒状结晶；分子式C22H22Oltl,分子量446. 41,熔点142 144°C。难溶于苯，易溶于热甲醇。目前三叶豆紫檀苷主要是通过反复柱层析的方法制备。如温敏等发表的文献“白刺花的花中化学成分研究”，该文献公开的方法是75%こ醇回流提取，浓缩后用こ酸こ酯萃取，萃取液上硅胶柱层析，用石油醚-丙酮混合溶剂系统洗脱，洗脱液再上硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂系统洗脱，洗脱液最后经凝胶柱层析得到纯度较高的三叶豆紫檀苷，该方法步骤繁多，洗脱剂用量大，制备量小，周期长；再如朱丽君发表的硕士论文“苦參有效部位化学研究”，该论文采用的方法是こ醇回流提取，提取液浓缩后加水分散，离心除去上清液，残渣采用硅胶柱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，收集目标洗脱液，回收溶剂，最后用氯仿重结晶得到三叶豆紫檀苷，该方法步骤较简单但制得产品纯度不高。现有提取三叶豆紫檀苷的方法普遍存在着毒性有机溶剂用量大，エ艺步骤多，制备量少，产品纯度低等问题，因此提供一种高纯度三叶豆紫檀苷的制备方法是很有必要的。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种三叶豆紫檀苷的制备方法，该方法操作简单，制得产品含量高。本发明是通过以下技术方案实现的一种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于包含以下步骤I)提取取苦參药材粉碎，加40 70%甲醇提取2 3次，药材与溶剂比例为I (5 10)，合并提取液，浓缩成浸膏；2)酸水除杂向上述浸膏中加入5 12倍量的pHl 5的酸水，超声分散，弃去酸水层，固形物重复以上操作2 4次，得苦參总黄酮；3)制备高效液相进ー步分离纯化将上述苦參总黄酮用こ醇溶解，滤膜过滤，用高效液相制备色谱对其进行分离纯化，收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶；4)重结晶将上述结晶用甲醇热回流结晶2 3次得三叶豆紫檀苷产品。
所述步骤I)中的提取方法可选用加热回流法或超声提取法，提取温度控制在60 100。。。
所述步骤2)中的酸水可以是盐酸或硫酸水溶液。所述步骤3)中的滤膜孔径为O. 2 O. 45 μ m。所述步骤3)中的高效液相制备色谱是以反相键合硅胶为固定相，以甲醇水或こ腈水为流动相，紫外检测器监测收集目标流分。所述的反相键合硅胶是C-8或C-18键合硅胶，甲醇水或こ腈水是含量58 65%的甲醇或こ腈的水溶液。所述的紫外检测器的波长设定为310nm。本发明的积极效果是采用酸水除杂洗去苦參生物碱类杂质；制备高效液相进一歩分离纯化所用的反相高效液相制备色谱，具有分离度高、重现性好、分离时间短、制备量大等优点，分离的到产品纯度可达98%以上。本发明使用的溶剂系统较为简单，还具有低成本，回收率高的优点。下面将结合具体实施方式
进ー步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例I :取苦參药材lKg，粉碎，加10L40%甲醇加热回流提取2次，合并提取液，浓缩得浸膏62g，向浸膏中加入310mlpHl的盐酸水溶液超声分散，离心除去酸水层，固形物重复酸水洗涤2次，将所得固形物用少量こ醇溶解，经O. 2 μ m滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进ー步分离纯化，以C-8键合硅胶为固定相，58%甲醇水溶液为流动相，流速设定为20ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶2次，滤出晶体，干燥得到三叶豆紫檀苷2. 4g，含量98. 7%。实施例2 取苦參药材lKg，粉碎，加5L70%こ醇超声提取3次，合并提取液，浓缩得浸膏71g，向浸膏中加入800mlpH5的硫酸水溶液超声分散，离心除去酸水层，固形物重复酸水洗涤3次，将所得固形物用少量こ醇溶解，经O. 45 μ m滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进ー步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，60%こ腈水溶液为流动相，流速设定为30ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶3次，滤出晶体，得到三叶豆紫檀苷2. Ig,含量98. 3 %。实施例3 取苦參药材5Kg，粉碎，加40L50 %こ醇超声提取2次，合并提取液，浓缩得浸膏286g，向浸膏中加入2. 4LpH3的盐酸水溶液超声分散，离心除去酸水层，固形物重复酸水洗涤3次，将所得固形物用少量こ醇溶解经O. 3μπι滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进ー步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，62%甲醇水溶液为流动相，流速设定为60ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶2次，滤出晶体，得到三叶豆紫檀苷11. 4g，含量98. 5%。
实施例4 取苦參药材5Kg，粉碎，加35L55%こ醇加热回流提取3次，合并提取液，浓缩得浸膏308g，向浸膏中加入3LpH4的硫酸水溶液超声分散，过滤除去酸水层，固形物重复酸水洗涤4次，将所得固形物用少量こ醇溶解，经O. 45 μ m滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进ー步分离纯化，以C-8键合硅胶为固定相，65%こ腈水溶液为流动相，流速设定为40ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶3次，滤出晶体，得到三叶豆紫檀苷12. 9g，含量98. 2%。实施例5 取苦參药材10Kg，粉碎，加60L65 %こ醇超声提取2次，合并提取液，浓缩得浸膏546g,向浸膏中加入5LpH3的盐酸水溶液超声分散，过滤除去酸水层，固形物重复酸水洗涤3次，将所得固形物用少量こ醇溶解，经O. 2 μ m滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进ー步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，58%こ腈水溶液为流动相，流速设定为45ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶2次，滤出晶体，得到三叶豆紫檀苷20. 5g，含量98. 6%。实施例6:取苦參药材10Kg，粉碎，加70L40%甲醇加热回流提取2次，合并提取液，浓缩得浸膏708g，向浸膏中加入12LpH2的硫酸水溶液超声分散，过滤除去酸水层，固形物重复酸水 洗涤2次，将所得固形物用少量こ醇溶解，经O. 45 μ m滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进ー步分离纯化，以C-8键合硅胶为固定相，62%甲醇水溶液为流动相，流速设定为60ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶3次，滤出晶体，得到三叶豆紫檀苷22. 8g，含量98. 8%。
权利要求
1.一种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于包含以下步骤 1)提取取苦參药材粉碎，加40 70%甲醇提取2 3次，药材与溶剂比例为I: (5 10)，合并提取液，浓缩成浸膏； 2)酸水除杂向上述浸膏中加入5 12倍量的pHl 5的酸水，超声分散，弃去酸水层，固形物重复以上操作2 4次，得苦參总黄酮； 3)制备高效液相进ー步分离纯化将上述苦參总黄酮用こ醇溶解，滤膜过滤，用高效液相制备色谱对其进行分离纯化，收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶； 4)重结晶将上述结晶用甲醇热回流结晶2 3次得三叶豆紫檀苷产品。
2.如权利要求I所述的ー种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于所述步骤I)中的提取方法可选用加热回流法或超声提取法，提取温度控制在60 100°C。
3.如权利要求I所述的ー种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的酸水可以是盐酸或硫酸水溶液。
4.如权利要求I所述的ー种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于所述步骤3)中的滤膜孔径为O. 2 O. 45 μ m。
5.如权利要求I所述的ー种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于所述步骤3)中的高效液相制备色谱是以反相键合硅胶为固定相，以甲醇水或こ腈水为流动相，紫外检测器监测收集目标流分。
6.如权利要求5所述的ー种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于所述的反相键合硅胶是C-8或C-18键合硅胶。
全文摘要
本发明属于天然产物分离领域，提供了一种三叶豆紫檀苷的制备方法。制备方法包括甲醇提取，酸水除杂得总黄酮，再经高效液相制备色谱纯化，最后用甲醇热回流结晶得高纯度的三叶豆紫檀苷。本发明制得产品纯度高，质量好。
文档编号C07H17/065GK102649802SQ20111004514
公开日2012年8月29日 申请日期2011年2月25日 优先权日2011年2月25日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司