专利名称：一种以烟草为原料制备角鲨烯的方法
技术领域：
本发明属于化学技术领域，具体涉及一种从烟草中制备高纯度角鲨烯的方法。
背景技术：
角鲨烯是一种脂质不皂化物，为一种多不饱和烯烃(三十碳六烯)，最初是从鲨鱼的肝油中发现的，1914年被命名为Squalene，其化学名称为2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳六烯，属开链三萜，又称鱼肝油萜，参与人体胆固醇合成并能促进新陈代谢，具有提高体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、增强机体免疫能力、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种生理功能，是一种无毒性的具有防病治病作用的海洋生物活性物质。角鲨烯广泛存在于动植物体内。在动物中以深海鲨鱼肝脏中含量最高，主要是深海的铠鲨、小刺鲨、缘吻田氏鲨、新西兰乌鲨肝脏中，而其它江海鲨鱼的角鲨烯含量很低，普遍低于1.5%。在植物中则以橄榄油、苋菜子油和棕榈油中含量最高，如橄榄油含有角鲨烯 150 700mg/100g，米糠油中其含量为33ang/100g。深海鲨鱼是珍贵的保护动物，再加上其低生长率和低繁殖力，易过度捕捞，导致含角鲨烯的动物资源缺乏。目前发现含有角鲨烯的植物资源蓄积量少，开发利用有一定的难度。因而限制了角鲨烯的生产和使用。然而角鲨烯用途越来越广泛，市场需求量也越来越大，有限的角鲨烯资源已不能满足人们的需要，所以探索新的角鲨烯资源具有十分重要的意义。国内外的一些研究者正在寻求以合成的方法来制备角鲨烯，并已进行了一些尝试。至目前，角鲨烯的人工合成反应技术，不是存在步骤过多，反应复杂等缺点，就是实验规模过小，与实际应用尚有较大差距。我国广西师范大学陈全斌在专利申请号为200410022116. 1的专利申请中提供了一种从植物罗汉果的种仁或种籽中提取角鲨烯方法；华南农业大学彭万喜等在专利号为 ZL200610011358.X的专利中提供了一种从植物尾巨桉木材中提取角鲨烯的方法；中国热带农业科学院分析测试中心尹桂豪等在公开号为CN200710168225. 8的专利申请中提供了一种从植物糯米香茶中提取角鲨烯方法；上述文献中采用的原料分别是罗汉果、尾巨桉和糯米香茶，需要消耗具有较高应用价值的植物原料，而且采用的植物原料中的角鲨烯含量高，如罗汉果中角鲨烯含量为12. 5% ；尾巨桉中角鲨烯含量为18. 04% ；糯米香茶中角鲨烯含量为39. 4%ο根据目前相关研究报道，为适应环保和健康需求，在卷烟材料中开始尝试添加角鲨烯，采用的角鲨烯通常是深海鲨鱼角鲨烯。同时，在卷烟生产中产生大量的烟末废料，这些废料需要额外花费大量的人力物力以及场所来进行处置。本发明通过长期大量的实验研究，寻求变废为宝的途径，希望成功利用烟末废料制备得到角鲨烯。目前尚未见相关技术报道。
发明内容
本发明的目的在于填补现有角鲨烯制备技术以及烟末废料再利用的技术不足，提供一种新的制备角鲨烯的方法，从烟末废料这一资源中提取角鲨烯，以满足市场对角鲨烯的的需求，尤其是卷烟生产领域对角鲨烯的新需求，并同时解决烟草企业中烟末废料这一废物的处置问题。为了实现本发明的目的，本发明提供一种从烟草叶片中制备角鲨烯的方法，将烘干的烟末废料破碎，用有机溶剂浸取出脂溶性物质，除去脂溶性物质中的有机溶剂，即制得烟草角鲨烯粗品，经过纯化精制得到角鲨烯精品。与现有的角鲨烯植物提取报道不同的是，烟末废料(包括用于卷烟生产的烟叶) 中角鲨烯的含量低，例如广东五华上桔贰B2F含角鲨烯1.94%、五华中桔贰C3F含角鲨烯 1.02%、南雄BF 1. 04%、梅州大浦云烟87 BF 0. 92%、梅州大浦云烟87 CF 1.49%、乐昌K326 1.22%、乐昌 K326 C3F 0. 63%、07 津巴布韦 LJ0T2 74# 0. 44%、清远连州 B2F 0. 83%、清远连州C3F 0. 38%、河南C3F-B 0. 44%、云南沾益B2F 0. 30%。本发明针对烟叶低角鲨烯含量的特点，提供的制备方法具体包括如下步骤
(1)备料将烟叶原料或收集卷烟生产产生的烟未废料烘干粉碎后过筛，得烟草干粉； (2)提取与分离采用冷浸法、微波法或超声波法，用有机溶剂和水的混合溶剂从烟草干粉中提取角鲨烯，分离出溶剂层后，减压浓缩得到含有角鲨烯的粗提物；所述有机溶剂与水的体积比为5 10:1。其中步骤(1)中的烟草叶片干粉是将烟草叶片烘干后，用粉碎机粉碎，过60目筛， 未过筛的烟叶再通过粉碎机粉碎，直致全部通过60目筛网。或者收集卷烟生产车间的烟未废料烘干后，用粉碎机粉碎，过60目筛，未过筛的烟叶再通过粉碎机粉碎，直致全部通过60 目筛网。与现有技术使用单一的有机溶剂不同，本发明采用混合溶剂对烟末废料进行提取，通过大量实验研究总结得到，采用有机溶剂和水混合得到的混合溶剂可以获得较好的提取效果，成功实现从烟草原料中提取角鲨烯。优选地，有机溶剂单剂或两种混合溶剂与水的体积比为5 10:1。所述有机溶剂优选甲酸乙酯、石油醚(60 90°C)、正己烷、四氯化碳、乙酸乙酯、 苯、甲苯或二甲苯中的一种或两种的混合溶剂；若采用两种有机溶剂，两种溶剂的混合体积比优选为1:1 1:5。所述提取方法可采用冷浸法、微波法或超声波法。浸提温度低于所用溶剂沸点 5 10°C，浸提时间冷浸法为M 48h ;1 1. 5KW功率条件下微波法萃取10 30min， 超声频率为40KHz的超声波条件下提取30 60min。例如有机溶剂选用苯，浸提温度优选 20 40"C。步骤(2)采用液液分配法分离出溶剂层。将抽提物过滤，滤液用分液漏斗分离出有机溶剂层，除去溶剂，即得含有角鲨烯的粗提物，角鲨烯的含量在35% 45%之间。得到的角鲨烯的粗提物经过纯化步骤可制得角鲨烯精品。本发明提供优选的纯化方法，具体是将粗提物过硅胶柱层析，用有机溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩制得角鲨烯精品。所述硅胶柱层析纯化，是将步骤(2)得到的含有角鲨烯的粗提物加入装有硅胶的层析柱中，粗提物与硅胶的质量比为1:20，再用有机溶剂石油醚(30 60°C)或正己烷洗脱， 收集洗脱液无色部分，并将收集到的无色洗脱液用减压蒸馏法除去有机溶剂，即制得角鲨烯精品，其中角鲨烯的含量在95 98%之间。
将制得的角鲨烯粗提物和角鲨烯精品用高效液相色谱法测定，其图谱上的峰保留时间与角鲨烯标样图谱完全一致。本发明制得的角鲨烯精品具有角鲨烯标样相同的特有香味，粗品中含有角鲨烯量大于35%，精品中角鲨烯含量大于95%，完全可以替代从深海鲨鱼肝脏中提取的角鲨烯，因此从烟草叶片中提取角鲨烯具有巨大的社会效益和经济效益。本发明有益效果如下
本申请人经过长期大量的实验研究发现我国产烟草叶片中含有角鲨烯，但是含量都很低，针对烟草较低的角鲨烯含量这一特殊的植物资源，本申请人寻找到合适的溶剂和提取制备方法及条件，将烘干的烟叶原料或烟末废料破碎，用适宜的混合溶剂浸取出脂溶性物质，除去脂溶性物质中的有机溶剂，即制得烟草角鲨烯粗品；再将烟草角鲨烯粗品过硅胶层析柱，用有机溶剂洗脱，收集洗脱液，并用减压蒸馏法除去有机溶剂，即制得角鲨烯精品。 采用本发明方法制备得到的角鲨烯粗品中含角鲨烯量大于35%，精品中角鲨烯含量大于 95%。烟草资源丰富，本发明方法制备角鲨烯可满足工业化的需求；本发明还可以充分利用废弃的烟草和卷烟生产中的烟未废料制备角鲨烯，本发明为烟草角鲨烯的开发利用提供技术基础，具有巨大的社会效益和经济效益。总体来说，本发明具有以下显著的进步
(1)本发明为低含量植物资源中提取角鲨烯提供了技术方案；
(2)本发明以烟叶或烟末废料为原料提取角鲨烯，可充分利用烟草生产中废弃烟叶和卷烟生产中余下的烟未废料，可明显增加烟草的附加值，具有重要的经济效益；经进一步应用试验证明，本发明制备得到的角鲨烯添加于烟丝中生产烟支获得很好的评吸成绩；
(3)本发明提供的制备角鲨烯的方法成本低，操作方便、收率高，我国的卷烟生产中废弃烟叶和烟叶角料资源丰富，既可以满足工业化的需求，又可以延长烟草工业产业链，具有极高的推广价值。
图1角鲨烯标样高效液相色谱图2本发明粗提物中角鲨烯高效液相色谱图； 图3本发明过柱后的收集液中角鲨烯高效液相色谱图。
具体实施例方式通过下面给出的本发明的具体实施例可以进一步清楚地理解本发明，但下述实施例并不是对本发明的限定。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法； 所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。本发明实施例中采用的烟叶原料全部采用烟末废料，不过本发明方法方法可应用于其他烟叶原料。本发明所有实施例中角鲨烯含量的检测采用高效液相色谱(HPLC)法进行测定，定量采用外标法，检测条件如下
色谱柱4. 6 mmX150 mm,填料为5 Mm ODS柱，流动相V^1 V甲醇为60 40， 0. 45 Mm有机系微孔滤膜过滤；检测波长为210 nm ；柱温30°C ；流速2. 0 mL /min。粗提物中角鲨烯含量的测定称取粗提物约0.3g，用25mL正己烷稀释配成待测溶液，放入冰箱中待用。液相分析进样量为10 μ L。柱色谱中角鲨烯含量的测定过柱后的收集液挥干溶剂，称取约O.Olg，用25mL正己烷稀释至刻度，配成待测溶液，放入冰箱中。液相分析进样量为10yL。实施例1
将卷烟生产车间的烟未废料烘干后，用粉碎机粉碎，过60目筛，未过筛的烟叶再通过粉碎机粉碎，直致全部通过60目筛网。取过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入300mL甲酸乙酯和 60mL蒸馏水，采用冷浸法，每Ih震荡一次，在常温下浸提8h，过滤，收集滤液，滤渣再加300 mL甲酸乙酯和60mL蒸馏水再次浸提，如此重复3次，合并3次浸提滤液，滤液用分液漏斗分层，收集甲酸乙酯层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 7g，经检测角鲨烯含量为 45%ο取角鲨烯粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22X200mm)中，用石油醚 (30 60°C)洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除石油醚，即得角鲨烯精品0. 4g， 经检测含角鲨烯97%。实施例2
取过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入288mL甲酸乙酯和72mL 蒸馏水，采用冷浸法，每Ih震荡一次，在常温下浸提8h，过滤，收集滤液，滤渣再加^SmL甲酸乙酯和72mL蒸馏水再次浸提，如此重复3次，合并3次浸提滤液，滤液用分液漏斗分层， 收集甲酸乙酯层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 3g，经检测角鲨烯含量为 35%。取角鲨烯粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22X200mm)中，用石油醚 (30 60°C)洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除石油醚，即得角鲨烯精品 0. 35g,经检测含角鲨烯95%。实施例3
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入300mL石油醚(60 900C )和50mL蒸馏水，采用冷浸法，每Ih震荡一次，常温下浸提10h，过滤，收集滤液，滤渣再加300mL石油醚(60 90°C )和50mL蒸馏水再次浸提，如此重复3次，合并3次浸提滤液，滤液用分液漏斗分层，收集石油醚层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物4. Og, 经检测角鲨烯含量为40. 9%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22X200mm)中，用正己烷洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除正己烷，即得角鲨烯精品0. 38g，经检测含角鲨烯98%。实施例4:
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入^OmL石油醚(60 900C )和70mL蒸馏水，采用冷浸法，每Ih震荡一次，常温下浸提10h，过滤，收集滤液，滤渣再加^OmL石油醚(60 90°C)和70mL蒸馏水再次浸提，如此重复3次，合并3次浸提滤液，滤液用分液漏斗分层，收集石油醚层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物4. 5g， 经检测角鲨烯含量为33%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22X200mm)中，用正己烷洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除正己烷，即得角鲨烯精品0. 35g，经检测含角鲨烯97%。实施例5
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入300mL甲苯和30mL蒸馏水，采用冷浸法，每Ih震荡一次，常温浸提12h，过滤，收集滤液，滤渣再加300 mL甲苯和30mL蒸馏水再次浸提，如此重复3次，合并3次浸提滤液，滤液用分液漏斗分层，收集甲苯层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 6g，经检测角鲨烯含量为36. 7%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22X200mm)中，用石油醚(30 60°C)洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除石油醚，即得角鲨烯精品0. 34g，经检测含角鲨烯96%。实施例6
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入330mL甲苯和30mL 蒸馏水，采用冷浸法，每Ih震荡一次，常温浸提12h，过滤，收集滤液，滤渣再加330 mL甲苯和30mL蒸馏水再次浸提，如此重复3次，合并3次浸提滤液，滤液用分液漏斗分层，收集甲苯层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 8g，经检测角鲨烯含量为35%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22 X 200mm)中，用石油醚(30 60°C)洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除石油醚，即得角鲨烯精品0. 35g，经检测含角鲨烯97%。实施例7
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入300mL石油醚(60 90°C)与苯的混合溶剂(Vw_/V苯=5:1)和30mL蒸馏水，采用冷浸法，每Ih震荡一次，常温浸提16h，过滤，收集滤液，滤渣再加300mL石油醚(60 90°C )与苯的混合溶剂(V ￠=5:1)和30mL蒸馏水再次浸提，如此重复3次，合并3次浸提滤液，滤液用分液漏斗分层， 收集石油醚与苯层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 8g，经检测角鲨烯含量为 44. 取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22 X 200mm)中，用正己烷洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除正己烷，即得角鲨烯精品0. 42g，经检测含角鲨烯98%。实施例8
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入300mL石油醚(60 90°C)与苯的混合溶剂(Vw_/V苯=6:1)和30mL蒸馏水，采用冷浸法，每Ih震荡一次，常温浸提16h，过滤，收集滤液，滤渣再加3001^石油醚与苯的混合溶剂(￥；^_八；￥=6:1)和30mL 蒸馏水再次浸提，如此重复3次，合并3次浸提滤液，滤液用分液漏斗分层，收集石油醚与苯层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 6g，经检测角鲨烯含量为35. 6%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22X200mm)中，用正己烷洗脱，收集洗液的无色部分， 用减压蒸馏法去除正己烷，即得角鲨烯精品0. 36g，经检测含角鲨烯95%。实施例9
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入300mL 二甲苯和 40mL蒸馏水，采用微波法，微波萃取条件为温度70°C，萃取功率为1KW，萃取时间为lOmin， 过滤，收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集二甲苯层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物4. 02g,经检测角鲨烯含量为39%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析 (22 X 200mm)中，用石油醚(30 60°C )洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除石油醚，即得角鲨烯精品0. 37g，经检测含角鲨烯95%。实施例10
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入350mL 二甲苯和 30mL蒸馏水，采用微波法，微波萃取条件为温度70°C，萃取功率为1KW，萃取时间为lOmin， 过滤，收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集二甲苯层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯
7的粗提物3. Sg,经检测角鲨烯含量为37%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析 (22 X 200mm)中，用石油醚(30 60°C )洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除石油醚，即得角鲨烯精品0. 36g，经检测含角鲨烯95. 5%。实施例11:
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入300mL甲酸乙酯和50mL蒸馏水，采用微波法，微波萃取条件为温度45°C，萃取功率为1.5KW，萃取时间为 20min，过滤，收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集甲酸乙酯层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 9g，经检测角鲨烯含量为44%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22X 200mm)中，用正己烷洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除正己烷，即得角鲨烯精品0. 44g，经检测含角鲨烯97. 5%。实施例12:
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入300mL正己烷与四氯化碳的混合溶剂(Viags/V0IH =3:1)和60mL蒸馏水，采用微波法，微波萃取条件为温度 40°C，萃取功率为1KW，萃取时间为30min，过滤，收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集溶剂层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 8g，经检测角鲨烯含量为45%。取粗提物 Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22X200mm)中，用石油醚(30 60°C )洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除石油醚，即得角鲨烯精品0. 43g，经检测含角鲨烯96. 8%。实施例13:
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入500mL正己烷与四氯化碳的混合溶剂(=10 1)和30mL蒸馏水，采用微波法，微波萃取条件为温度 40°C，萃取功率为1KW，萃取时间为30min，过滤，收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集溶剂层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 2g，经检测角鲨烯含量为35%。取粗提物 Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22X200mm)中，用石油醚(30 60°C )洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除石油醚，即得角鲨烯精品0. 40g，经检测含角鲨烯93. 4%。实施例14:
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入300mL乙酸乙酯与甲苯的混合溶剂(Vii^ffiAVi=H)和40mL蒸馏水，采用微波法，微波萃取条件为温度 500C，萃取功率为1. 5KW，萃取时间为20min，过滤，收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集溶剂层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物4. 3g，经检测角鲨烯含量为40%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22 X 200mm)中，用石油醚(30 60°C )洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除石油醚，即得角鲨烯精品0. 37g，经检测含角鲨烯95. 8%。实施例15:
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入330mL乙酸乙酯与甲苯的混合溶剂(Viig^iAVi=H)和30mL蒸馏水，采用微波法，微波萃取条件为温度 500C，萃取功率为1. 5KW，萃取时间为20min，过滤，收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集溶剂层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物4. 0g，经检测角鲨烯含量为36%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22 X 200mm)中，用石油醚(30 60°C )洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除石油醚，即得角鲨烯精品0. 35g，经检测含角鲨烯92. 1%。实施例16:取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入300mL甲酸乙酯和50mL蒸馏水，采用超声波法，萃取条件为温度45°C，超声频率为40KHz，萃取时间为 30min，过滤，收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集溶剂层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物4. lg，经检测角鲨烯含量为43%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析 (22 X 200mm)中，用石油醚(30 60°C )洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除石油醚，即得角鲨烯精品0. 42g，经检测含角鲨烯97. 8%。实施例17:
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入300mL甲苯和50mL蒸馏水，采用超声波法，萃取条件为温度70°C，超声频率为40KHz，萃取时间为50min，过滤， 收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集溶剂层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物 3. 9g，经检测角鲨烯含量为45%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22 X 200mm) 中，用正己烷洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除正己烷，即得角鲨烯精品 0. 43g，经检测含角鲨烯96. 7%。实施例18:
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入400mL石油醚(60 90°C)与苯的混合溶剂(VWM/V￥=3:1)和50mL蒸馏水，采用超声波法，萃取条件为温度 30°C，超声频率为40KHz，萃取时间为40min，过滤，收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集溶剂层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 5g，经检测角鲨烯含量为43. 8%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22 X 200mm)中，用正己烷洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除正己烷，即得角鲨烯精品0. 44g，经检测含角鲨烯97. 3%。实施例19:
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入200mL石油醚(60 90°C)与苯的混合溶剂(VWM/V￥=8:1)和IOOmL蒸馏水，采用超声波法，萃取条件为温度 30°C，超声频率为40KHz，萃取时间为40min，过滤，收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集溶剂层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 2g，经检测角鲨烯含量为33. 5%。取粗提物Ig加入装有20g硅胶的硅胶层析(22X200mm)中，用正己烷洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除正己烷，即得角鲨烯精品0. 32g，经检测含角鲨烯92. 3%。实施例20:
取粉碎过60目筛的烟未废料干粉IOOg于IOOOmL三角瓶中，加入甲酸乙酯与二甲苯的混合溶剂(V /V二_ =5 1)和50mL蒸馏水，采用超声波法，萃取条件为温度30°C，超声频率为40KHz，萃取时间为60min，过滤，收集滤液，滤液用分液漏斗分层，收集溶剂层，减压蒸馏除去溶剂，得含有角鲨烯的粗提物3. 8g，经检测角鲨烯含量为44. 6%。取粗提物Ig 加入装有20g硅胶的硅胶层析(22X200mm)中，用正己烷洗脱，收集洗液的无色部分，用减压蒸馏法去除正己烷，即得角鲨烯精品0. 45g，经检测含角鲨烯96. 4%。将本发明实施例制得的角鲨烯粗提物和角鲨烯精品用高效液相色谱法测定，其图谱上的峰保留时间与角鲨烯标样图谱完全一致，请见附图1、附图2、附图3所示，附图中横坐标为时间，单位为分钟(min)，纵坐标为峰高mAU。本发明制得的角鲨烯精品具有角鲨烯标样相同的特有香味，粗品中含有角鲨烯量大于35%，精品中角鲨烯含量大于95%，完全可以替代从深海鲨鱼肝脏中提取的角鲨烯，因此从烟草叶片中提取角鲨烯具有巨大的社会效益和经济效益。 实施例21应用实验
评吸方法将制备的角鲨烯溶于70%乙醇水溶液中，角鲨烯的含量为60%。用CMB120卷烟机将烟叶组卷成同一规格的烟支。用CIJECT0R香精注射机将制备的角鲨烯乙酸溶液按每100克烟丝中加1克角鲨烯乙醇溶液注入卷制好的烟支中，放在恒温恒湿箱[(22士 1) 0C、( 60士幻％ ]中平衡4 后，请专家从香气的质和量、余味及有无杂气与烟香是否协调、是否有刺激感等方面进行评吸、评价。以分别注射相同量深海鲨鱼肝脏中提取的角鲨烯和70%乙醇水溶液的烟支为对照。 表1每100克烟丝中加1克组合物评吸结果
权利要求
1.一种以烟草为原料制备角鲨烯的方法，其特征在于包括如下步骤(1)备料将烟叶原料或收集卷烟生产产生的烟未废料烘干粉碎后过筛，得烟草干粉；(2)提取与分离采用冷浸法、微波法或超声波法，用有机溶剂和水的混合溶剂从烟草干粉中提取角鲨烯，分离出溶剂层后，减压浓缩得到含有角鲨烯的粗提物；所述有机溶剂与水的体积比为5 10 1 ；所述的有机溶剂为甲酸乙酯、石油醚(60 90°C )、正己烷、四氯化碳、乙酸乙酯、苯、甲苯或二甲苯中的一种或两种。
2.如权利要求1所述的制备角鲨烯的方法，其特征在于还包括纯化步骤，是将角鲨烯的粗提物过硅胶柱层析，粗提物与硅胶的质量比为1 20，再用有机溶剂石油醚(30 60°C ) 或正己烷洗脱，收集洗脱液无色部分，并将收集到的无色洗脱液用减压蒸馏法除去有机溶剂，即制得角鲨烯精品。
3.如权利要求1所述的制备角鲨烯的方法，其特征在于步骤(1)所述过筛为过60目筛。
4.如权利要求1所述的制备角鲨烯的方法，其特征在于步骤(2)所述两种有机溶剂的混合体积比为1:1 1:5。
5.一种权利要求2所述方法制备得到的角鲨烯的应用，其特征在于是将所述角鲨烯溶解后添加于烟丝中制备卷烟烟支。
全文摘要
本发明提供了一种以烟草为原料制备角鲨烯的方法。将烘干的烟叶原料破碎，用有机溶剂浸取出脂溶性物质，除去脂溶性物质中的有机溶剂，即制得烟草角鲨烯粗品；再将烟草角鲨烯粗品过硅胶层析柱，用有机溶剂洗脱，收集洗脱液，并用减压蒸馏法除去有机溶剂，即制得角鲨烯精品。采用本发明方法制备得到的角鲨烯粗品中含角鲨烯量大于35％，精品中角鲨烯含量大于95％。烟草资源丰富，可满足工业化的需求，本发明还可以充分利用废弃的烟草和卷烟生产中的烟未废料制备角鲨烯，本发明为烟草角鲨烯的开发利用尤其是在卷烟生产方面的应用提供技术基础，具有巨大的社会效益和经济效益。
文档编号C07C7/12GK102161611SQ20111005848
公开日2011年8月24日 申请日期2011年3月11日 优先权日2011年3月11日
发明者万树青, 张丹丹, 李茂军, 江定心, 王军, 罗福命, 陈伟明, 陈泽鹏 申请人:中国烟草总公司广东省公司, 华南农业大学