专利名称：一种升麻单体成分的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种升麻单体成分的制备方法，尤其涉及一种应用高速逆流色谱法从升麻粗提物中分离制备升麻单体成分的方法。
背景技术：
升麻是毛茛科升麻属(Cimicifugeae S. I.)植物，包括大三叶升麻 (Cimicifugaheracleifolia Kom.)、兴安升麻(Cimicifuga dahurica (Turcz.)Maxim.) 以及升麻(Cimicifuga foetida L.)。升麻族植物多以地下部分入药。升麻具有发表透疹，清热解毒，升举阳气的功效，用于风热头痛，齿痛，口疮，咽喉肿痛，麻疹不透，阳毒发斑， 脱肛，子宫脱垂等症。升麻根茎含升麻甙(Cimi-cifugoside)、升麻醇木糖甙(Cimigenol xyloside)、水杨酸(Salicylic acid)、鞣质(Tannin)、树脂(Resin)、咖啡酸(Caffeic acid)、阿魏酸(Ferulic acid)、异阿魏酸(Isoferulic acid)、升麻碱(Cimicifu-gine) 等。兴安升麻根茎含升麻素(Cimitin)、甙、生物碱(Alkaloid)、糖类、树脂、异阿魏酸、阿魏酸和咖啡酸，尚离析得β-谷留醇(β-Sitosterol)、升麻醇(Cimigenol)、升麻醇木糖甙。 大三叶升麻含升麻甙、升麻素、升麻醇木糖甙、生物碱、异阿魏酸等。近几年来的研究表明，升麻中主要活性成分是皂苷类化合物。升麻的总皂苷可提高去势大鼠血清雌二醇水平，而使黄体生成激素浓度降低，并能抑制由于内分泌紊乱、雌激素缺乏而引起的骨质疏松和更年期综合症。升麻皂苷类单体成分的制备对于升麻系列药物的开发、质量控制具有重要的意义。目前，已有升麻单体成分的分离方法多是硅胶柱和凝胶柱相结合，方法繁琐，重现性差，制备量较小，专属性低。如“中药升麻的化学成分”，采用硅胶柱LH-20 柱纯化制备，制备量较小，操作繁复。高速逆流色谱技术(HSCCC)是一种不需任何载体的液液分配分离技术，利用单向流体动力学平衡原理，基于样品在旋转螺旋管内的相对移动而互不混溶的两相中分配系数的不同而实现分离，其分离效率和速度可以与HPLC相媲美。HSCCC分离效率高，产品纯度高，不存在载体对样品的吸附和污染，制备量大和溶剂消耗少，操作简单，能从极复杂的混合物中分离出特定的组分。它与一般色谱的分离方式不同，特别适用于制备级的分离，已被广泛应用于中药与天然产物的分离纯化过程中。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种升麻单体成分的制备方法。本发明是通过以下技术方案实现的一种升麻单体成分的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)将升麻药材粉碎用60-80%醇溶液提取1-3次，每次l_2h，减压浓缩得到浓缩液；(2)将浓缩液加碱调pH至8-11，用有机溶剂萃取，萃取物采用硅胶柱层析，用氯仿-甲醇洗脱，收集流分浓缩干燥得到粗提物；(3)粗提物应用高速逆流色谱进行分离，将己烷-氯仿-甲醇-水组成的溶剂系统在分液漏斗中充分振荡后静置，分层，上相为固定相，下相为流动相，根据检测器紫外光谱图进行收集，合并相同成分，得到升麻苷A、升麻苷B、升麻苷C、升麻苷D和升麻醇木糖苷单体。所述步骤(1)中提取方法可选超声波提取或回流提取，醇溶液为乙醇溶液。所述步骤O)中有机溶剂为正丁醇，氯仿-甲醇的体积比为5-7 2。所述步骤(3)中己烷-氯仿-甲醇-水的体积比为2-3 4-7 5-8 1_4。本发明的优点在于1、步骤少，耗时短，得率高，易于规模化生产；2、工序简单，易于控制，且同时得到多种产品，原料利用率高，分离效率高；3、本发明采用高速逆流色谱法，没有可逆吸附，样品无损失；4、本发明制备得到的高纯度的单体成分可作为对照品使用。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1将升麻药材粉碎用5倍量(V/W) 60 %乙醇溶液超声提取2次，每次lh，减压浓缩至无醇得到浓缩液，浓缩液加碱调PH至10，用正丁醇萃取，回收正丁醇，萃取物采用硅胶柱层析，用氯仿-甲醇溶液洗脱，氯仿-甲醇的体积比为7 2，收集流分浓缩干燥得到粗提物； 将己烷、氯仿、甲醇、水按体积比为2 :5:6: 2配置，置于分液漏斗中充分振荡后静置， 分层，上相为固定相，下相为流动相，是进样阀处于进样状态，将固定相以lOml/min的流速灌满逆流色谱仪的色谱分离柱，开启速度控制器，使螺旋管柱顺时针方向旋转，当色谱仪转速为850r/min时，以流速为2. 5ml/min泵入流动相，将粗提物用下相溶解，并通过进样阀进样，每次进样量为150mg，根据检测器紫外光谱图进行收集，合并相同成分，得到升麻苷A、 升麻苷B、升麻苷C、升麻苷D和升麻醇木糖苷单体，经HPLC检测，升麻苷A、升麻苷B、升麻苷C、升麻苷D、升麻醇木糖苷的纯度分别为98. 2%,98. 0%,98. 3%,98. 4%,98. 5%。实施例2将升麻药材粉碎用8倍量(V/W) 80 %乙醇溶液回流提取1次，每次池，减压浓缩至无醇得到浓缩液，浓缩液加碱调PH至8，用正丁醇萃取，回收正丁醇，萃取物采用硅胶柱层析，用氯仿-甲醇溶液洗脱，氯仿-甲醇的体积比为3 1，收集流分浓缩干燥得到粗提物； 将己烷、氯仿、甲醇、水按体积比为2 :4:5: 4配置，置于分液漏斗中充分振荡后静置， 分层，上相为固定相，下相为流动相，是进样阀处于进样状态，将固定相以lOml/min的流速灌满逆流色谱仪的色谱分离柱，开启速度控制器，使螺旋管柱顺时针方向旋转，当色谱仪转速为750r/min时，以流速为2. 5ml/min泵入流动相，将粗提物用下相溶解，并通过进样阀进样，每次进样量为200mg，根据检测器紫外光谱图进行收集，合并相同成分，得到升麻苷A、 升麻苷B、升麻苷C、升麻苷D和升麻醇木糖苷单体，经HPLC检测，升麻苷A、升麻苷B、升麻苷C、升麻苷D、升麻醇木糖苷的纯度分别为98. 3%,98. 2%,98. 1%,98. 2%,98. 3%。
实施例3将升麻药材粉碎用6倍量(V/W) 70 %乙醇溶液回流提取3次，每次lh，减压浓缩至无醇得到浓缩液，浓缩液加碱调PH至11，用正丁醇萃取，回收正丁醇，萃取物采用硅胶柱层析，用氯仿-甲醇溶液洗脱，氯仿-甲醇的体积比为5 2，收集流分浓缩干燥得到粗提物； 将己烷、氯仿、甲醇、水按体积比为3 :7:8: 2配置，置于分液漏斗中充分振荡后静置， 分层，上相为固定相，下相为流动相，是进样阀处于进样状态，将固定相以lOml/min的流速灌满逆流色谱仪的色谱分离柱，开启速度控制器，使螺旋管柱顺时针方向旋转，当色谱仪转速为950r/min时，以流速为2. 5ml/min泵入流动相，将粗提物用下相溶解，并通过进样阀进样，每次进样量为200mg，根据检测器紫外光谱图进行收集，合并相同成分，得到升麻苷A、 升麻苷B、升麻苷C、升麻苷D和升麻醇木糖苷单体，经HPLC检测，升麻苷A、升麻苷B、升麻苷C、升麻苷D、升麻醇木糖苷的纯度分别为98. 0%、98. 2%、98. 4%、98. 4%、98. 3%。
权利要求
1.一种升麻单体成分的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)将升麻药材粉碎用60-80%醇溶液提取1-3次，每次l-2h，减压浓缩得到浓缩液；(2)将浓缩液加碱调pH至8-11，用有机溶剂萃取，萃取物采用硅胶柱层析，用氯仿-甲醇洗脱，收集流分浓缩干燥得到粗提物；(3)粗提物应用高速逆流色谱进行分离，将己烷-氯仿-甲醇-水组成的溶剂系统在分液漏斗中充分振荡后静置，分层，上相为固定相，下相为流动相，根据检测器紫外光谱图进行收集，合并相同成分，得到升麻苷A、升麻苷B、升麻苷C、升麻苷D和升麻醇木糖苷单体。
2.根据权利要求1中所述的一种升麻单体成分的制备方法，其特征在于所述步骤(1) 中提取方法可选超声波提取或回流提取，醇溶液为乙醇溶液。
3.根据权利要求1中所述的一种升麻单体成分的制备方法，其特征在于所述步骤(2) 中有机溶剂为正丁醇，氯仿-甲醇的体积比为5-7 2。
4.根据权利要求1中所述的一种升麻单体成分的制备方法，其特征在于所述步骤(3) 中己烷-氯仿-甲醇-水的体积比为2-3 4-7 5-8 1-4。
全文摘要
本发明涉及一种升麻单体成分的制备方法将升麻药材用60-80％醇溶液提取，提取液浓缩，浓缩液加碱调pH至8-11，有机溶剂萃取，萃取物采用硅胶柱层析，用氯仿-甲醇洗脱，收集流分粗提物，粗提物应用高速逆流色谱进行分离，得到升麻苷A、升麻苷B、升麻苷C、升麻苷D和升麻醇木糖苷单体。本发明所得产品纯度高于98％。
文档编号C07J53/00GK102180933SQ20111007482
公开日2011年9月14日 申请日期2011年3月28日 优先权日2011年3月28日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司