专利名称：一种从溪黄草中提取溪黄草甲素的方法
技术领域：
本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种从溪黄草中提取溪黄草甲素的方法。
背景技术：
溪黄草甲素(rabdoserrinA)为对映贝壳杉烷型二萜化合物，化学名称1，14-二羟基-7，20,19，20- 二环氧-16-贝壳杉烯_15_酮，分子式C2tlH26O5,分子量346. 42，分子结构高纯度溪黄草甲素为无色片状结晶(氯仿-乙醇)，mp. 312 314°C，溶于甲醇、 乙醇、丙酮等，微溶于水、石油醚等。溪黄草甲素对Hela细胞具有显著的抑制作用，具有显著抗癌活性。其药理活性， 广被医学专家关注和认可。溪黄草为唇形科多年生草本溪黄草Rabdosia serra (Maxim. ) Hara的干燥全草。俗称熊胆草、血风草、黄汁草、溪沟草、香茶菜、土黄连等。溪黄草具有清热利湿、退黄祛湿、凉血散瘀的功效，用于治疗急性黄疸型肝炎、急性胆囊炎、痢疾、肠炎、跌打瘀痛等病症。溪黄草在广东各地临床应用普遍。现有公开的从溪黄草中提取溪黄草甲素方法，都为实验室分离，不是专属性工艺。 如金人玲等发表的“溪黄草甲素的结构研究”，该文献采用的方法为95%工业酒精回流提取，浓缩后，乙酸乙酯溶解浸膏，5%碳酸钠溶液振提，乙酸乙酯层酸洗中性，浓缩后硅胶柱层析，氯仿-丙酮洗脱得到8个化合物，其中包括溪黄草甲素。此类方法较为繁琐，分离过程工业“三废”较多，而且溪黄草甲素收率低，工艺专属性差。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术的不足和缺陷，提供一种从溪黄草中提取溪黄草甲素的方法。为了实现上述目的，本发明的技术方案如下一种从溪黄草中提取溪黄草甲素的方法，其特征在于包括以下步骤以溪黄草为原料，粉碎20-80目，加入萃取釜中，以95%乙醇为夹带剂，采用超临界(X)2萃取，收集萃取液，回收乙醇，得萃取物，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，采用高速逆流色谱分离萃取物，流分减压干燥即得溪黄草甲素。所述的超临界(X)2萃取条件为萃取温度为55-60°C，萃取压力为33_37MPa，分离釜I温度为60-65°C，压力为8-lOMPa，分离釜II温度为50-55°C，压力为5_6MPa，夹带剂用量为原料的1-2倍量。所述的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统比例为3 (4-5) (5-6) 3。本发明中超临界(X)2萃取时间控制在2-3小时，CO2流量控制在20_30L/h。本发明在高速逆流色谱分离萃取物时，是以溶剂上相为固定相，下相为流动相，乙酸乙酯溶解萃取物，设备转速控制在800-1200r/min，流动相流速为l-3ml/min。本发明采用超临界CO2萃取，具有提取时间短、效率高、能耗低、绿色环保的优点。 解决了传统提取工艺的高能耗、高污染、周期长的缺点。本发明采用高速逆流色谱分离溪黄草甲素，分离过程无产品损失，制备周期短，试剂可以重复利用，制备量大，无废弃物产生，克服了传统硅胶柱分离过程中样品死吸附、工艺繁琐、重现性差的技术缺陷。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 溪黄草药材粉碎80目，取500g原料加入超临界(X)2萃取釜中，开启设备，设定参数萃取温度为60°C，萃取压力为35MPa，分离釜I温度为65°C，压力为lOMPa，分离釜II温度为50°C，压力为5MPa。通入(X)2流体，达到上述参数后，以(X)2液体20L/h流量萃取，并夹带95%乙醇200ml/h，动态萃取3h，收集萃取液，回收乙醇，得到萃取物20g。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、7K，按比例为3 :5:5: 3混合，取上相注入色谱管内做固定相，开启高速逆流色谱仪，调节转速为900r/min，流动相流速调节为2ml/min，平衡后注入乙酸乙酯溶解的萃取物，紫外检测器监测，收集溪黄草甲素流分，连续分离，合并流分减压干燥得溪黄草甲素，高效液相检测，含量96.4%，收率87.6%。实施例2 溪黄草药材粉碎20目，取IOOOg原料加入超临界0)2萃取釜中，开启设备，设定参数萃取温度为55°C，萃取压力为37MPa，分离釜I温度为60°C，压力为8MPa，分离釜II温度为55°C，压力为6MPa。通入(X)2流体，达到上述参数后，以(X)2液体25L/h流量萃取，并夹带95 0Z0乙醇1000ml/h，动态萃取2h，收集萃取液，回收乙醇，得到萃取物210g。取石油醚、 乙酸乙酯、甲醇、7K，按比例为3 :4:6: 3混合，取上相注入色谱管内做固定相，开启高速逆流色谱仪，调节转速为800r/min，流动相流速调节为3ml/min，平衡后注入用乙酸乙酯的萃取物，紫外检测器监测，收集溪黄草甲素流分，连续分离，合并流分减压干燥得溪黄草甲素，高效液相检测，含量95.2%，收率91.6%。实施例3 溪黄草药材粉碎60目，取2000g原料加入超临界(X)2萃取釜中，开启设备，设定参数萃取温度为60°C，萃取压力为33MPa，分离釜I温度为60°C，压力为9MPa，分离釜II温度为50°C，压力为6MPa。通入(X)2流体，达到上述参数后，以(X)2液体30L/h流量萃取，并夹带95 0Z0乙醇1000ml/h，动态萃取3h，收集萃取液，回收乙醇，得到萃取物398g。取石油醚、 乙酸乙酯、甲醇、7K，按比例为3 :4:5: 3混合，取上相注入色谱管内做固定相，开启高速逆流色谱仪，调节转速为1200r/min，流动相流速调节为lml/min，平衡后注入乙酸乙酯溶解的萃取物，紫外检测器监测，收集溪黄草甲素流分，连续分离，合并流分减压干燥得溪黄草甲素，高效液相检测，含量93. 1 %，收率90. 6 %。
权利要求
1.一种从溪黄草中提取溪黄草甲素的方法，其特征在于包括以下步骤以溪黄草为原料，粉碎20-80目，加入萃取釜中，以95%乙醇为夹带剂，采用超临界(X)2萃取，收集萃取液， 回收乙醇，得萃取物，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，采用高速逆流色谱分离萃取物，流分减压干燥即得溪黄草甲素。
2.根据权利要求1所述从溪黄草中提取溪黄草甲素的方法，其特征在于所述超临界 CO2萃取条件为萃取温度为55-60°C，萃取压力为33-37MPa，分离釜I温度为60_65°C，压力为8-lOMPa，分离釜II温度为50_55°C，压力为5_6MPa，夹带剂用量为原料的1_2倍量。
3.根据权利要求1所述从溪黄草中提取溪黄草甲素的方法，其特征在于所述的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统比例为3 (4-5) (5-6) 3。
全文摘要
本发明属于天然药物化学领域，涉及一种从溪黄草中提取溪黄草甲素的方法。本发明采用超临界CO2萃取和高速逆流色谱分离技术，解决了传统提取工艺污染严重、产品收率低的技术缺陷，方法步骤如下以溪黄草为原料，粉碎20-80目，加入萃取釜中，以95％乙醇为夹带剂，采用超临CO2萃取，收集萃取物，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，采用高速逆流色谱分离，流分减压干燥即得溪黄草甲素。本方法适合工业化生产。
文档编号C07D493/18GK102241688SQ201110117528
公开日2011年11月16日 申请日期2011年5月6日 优先权日2011年5月6日
发明者刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司