专利名称：一种蛋白质稳定剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体的说，涉及一种保护蛋白质不会失活的蛋白质稳定剂及其制备方法。
背景技术：
蛋白质是一种具有复杂的空间立体结构的大分子物质，易受外界条件的影响发生变性。蛋白质稳定性与组成中的氨基酸种类有关系，例如含有巯基的氨基酸，最常见的是半胱氨酸，会降低蛋白质的稳定性，尤其在某些金属离子，Cu2 +、Zn2+等存在时，蛋白质对空气中的氧更为敏感，而易发生不可逆变性。蛋白质活性的保存已经成为生物技术领域的重大难题。目前，蛋白质的长期保存一般用真空冷冻干燥方法保存，该保存方法的优点是，活性保存效果理想，保存时间长，但是存在缺点是操作繁琐，需要特殊的仪器，成本高， 需要水做复溶剂等。
发明内容
为解决以上技术问题，本发明目的之一在于提供一种成本低廉，能长时间保护蛋白质活性的保护剂。本发明目的之二在于提供一种蛋白质稳定剂的制备方法。本发明目的是这样实现的
一种蛋白质稳定剂按重量份数由下列原料组成 PH值为7. 2的磷酸盐缓冲液100份 BSA (牛血清白蛋白)2 15份蔗糖1 8份二硫苏糖醇0. 1 1份乙二胺四乙酸0.2 1.2份。上述磷酸盐缓冲液按重量份数由磷酸氢二钠0. 07 0. 142份溶于100份纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾0. 068 0. 136份溶于100份纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20制得。磷酸盐缓冲液保持溶液的酸碱度，使用BSA，蔗糖给蛋白“穿上”一层蛋白外衣尽量隔断目标蛋白与空气结合，二硫苏糖醇的加入是中和溶液中的氧化物杂质，乙二胺四乙酸的加入是去除溶液中的重金属离子，通过以上各组分的综合作用达到保护蛋白活性的目的。上述磷酸氢二钠0. 07 0. 142份。上述磷酸二氢钾0. 068 0. 136份。一种蛋白质稳定剂的制备方法，其特征在于按如下步骤进行
(1)称取磷酸氢二钠0. 07 0. 142份溶于100份纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾0. 068 0. 136份溶于100份纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成磷酸盐缓冲液；
(2)量取磷酸盐缓冲液100份，称取BSA 2 15份，蔗糖1 8份，二硫苏糖醇(DTT) 0. 1 1份，乙二胺四乙酸(EDTA)O. 2-1. 2份加入磷酸盐缓冲液中，搅拌均勻，得到蛋白稳定剂。有益效果本发明能长时间保护蛋白质活性，是一种非常好的蛋白质保护剂，且稳定剂组成成分常见，价格相对便宜，整个制备也比较方便，制备工序简单容易操作。
具体实施例方式
实施例(1)称取磷酸氢二钠0. 07克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾 0. 068克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C 100毫升，称取BSA 2克，蔗糖1克，二硫苏糖醇(DTT)O. 1克，乙二胺四乙酸(EDTA) 0. 2克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂； 实施例2
(1)称取磷酸氢二钠0.09克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾0. 08 克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取BSA 4克，蔗糖2克，二硫苏糖醇(DTT)O. 2克，乙二胺四乙酸(EDTA) 0. 4克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂；
实施例3
(1)称取磷酸氢二钠0.1克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾0. 1 克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取BSA 5克，蔗糖3克，二硫苏糖醇(DTT)O. 3克，乙二胺四乙酸(EDTA)O. 5克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂；
实施例4
(1)称取磷酸氢二钠0.11克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾0. 11 克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取BSA 7克，蔗糖4克，二硫苏糖醇(DTT)O. 5克，乙二胺四乙酸(EDTA) 0. 7克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂；
实施例5
(1)称取磷酸氢二钠0.12克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾0. 12 克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取BSA 9克，蔗糖5克，二硫苏糖醇(DTT)O. 6克，乙二胺四乙酸(EDTA) 0. 8克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂；
实施例6
(1)称取磷酸氢二钠0.13克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾0. 13 克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取BSA 10克，蔗糖6克，二硫苏糖醇(DTT) 0. 7克，乙二胺四乙酸(EDTA) 0. 9克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂；实施例7
(1)称取磷酸氢二钠0.14克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾0. 13 克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取BSA 11克，蔗糖7克，二硫苏糖醇(DTT) 0. 8克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 0克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂；
实施例8
(1)称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾 0. 136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取BSA 12克，蔗糖8克，二硫苏糖醇(DTT) 0. 9克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 1克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂；
实施例9
(1)称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾 0. 136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取BSA 13克，蔗糖8克，二硫苏糖醇(DTT) 1. 0克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 2克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂；
实施例10
(1)称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾 0. 136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取BSA 13克，蔗糖8克，二硫苏糖醇(DTT) 1. 0克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 2克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂；
实施例11
(1)称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾 0. 136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取BSA 14克，蔗糖8克，二硫苏糖醇(DTT) 1. 0克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 2克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂；
实施例12
(1)称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾 0. 136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取BSA 15克，蔗糖8克，二硫苏糖醇(DTT) 1. 0克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 2克加入溶液C中，搅拌均勻，配成蛋白稳定剂；
表1是本发明实施例1-12的测试部分结果
表1中用于测试的原料分别为
抗原胱抑素C (上海蓝韵生物技术有限公司生产)
BSA =Roche公司生产
检测试剂胱抑素C检测试剂盒(重庆中元生物技术有限公司生产)
所用的一般化学试剂均为分析纯级别
测试时把胱抑素C加入蛋白质活性保护剂中，在奥林巴斯生化分析仪AU400上用胱抑素C检测试剂盒检测胱抑素C的浓度，然后进行数据分析。
表1:测试结果
权利要求
1.一种蛋白质稳定剂按重量份数由下列原料组成 PH值为7. 2的磷酸盐缓冲液100份BSA 2 15份蔗糖1 8份二硫苏糖醇0. 1 1份乙二胺四乙酸0.2 1.2份。
2.根据权利要求1所述一种蛋白质稳定剂，其特征在于所述磷酸盐缓冲液按重量份数由磷酸氢二钠0. 07 0. 142份溶于100份纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾 0. 068 0. 136份溶于100份纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20制得。
3.根据权利要求2所述一种蛋白质稳定剂，其特征在于所述磷酸氢二钠0.07 0. 142 份。
4.根据权利要求2所述一种蛋白质稳定剂，其特征在于所述磷酸二氢钾0.068 0. 136 份。
5.一种如权利要求1或2所述蛋白质稳定剂的制备方法，其特征在于按如下步骤进行(1)称取磷酸氢二钠0.07 0. 142份溶于100份纯化水中，配成溶液A ；称取磷酸二氢钾0. 068 0. 136份溶于100份纯化水中，配成溶液B ；用溶液B调溶液A至pH7. 20，配成磷酸盐缓冲液；(2)量取磷酸盐缓冲液100份，称取BSA2 15份，蔗糖1 8份，二硫苏糖醇0.1 1份，乙二胺四乙酸0. 2-1. 2份加入磷酸盐缓冲液中，搅拌均勻，得到蛋白稳定剂。
全文摘要
本发明公开了一种蛋白质稳定剂及其制备方法，按重量份数磷酸氢二钠0.07～0.142份溶于100份纯化水中，配成溶液A；磷酸二氢钾0.068～0.136份溶于100份纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成磷酸盐缓冲液；磷酸盐缓冲液100份、BSA2～15份、1～8份、二硫苏糖醇0.1～1份，乙二胺四乙酸0.2-1.2份加入磷酸盐缓冲液中，搅拌均匀，得到蛋白稳定剂。本发明能长时间保护蛋白质活性，是一种非常好的蛋白质保护剂，且稳定剂组成成分常见，价格相对便宜，整个制备也比较方便，制备工序简单容易操作。
文档编号C07K1/00GK102229642SQ20111014110
公开日2011年11月2日 申请日期2011年5月30日 优先权日2011年5月30日
发明者吉权, 李民友, 潘能科 申请人:吉权, 李民友