抗胸腺素α原多克隆抗体及其制备方法与应用的制作方法

专利名称：抗胸腺素α原多克隆抗体及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗胸腺素α原多克隆抗体，尤其是涉及一种抗胸腺素α原多克隆抗体及其制备方法与应用。
背景技术：
世界范围内，膀胱癌发病率居恶性肿瘤的第9位，是泌尿系统中最常见的肿瘤。在美国，膀胱癌发病率居男性恶性肿瘤的第4位，位列前列腺癌、肺癌和结肠癌之后，在女性恶性肿瘤位居第9位。在我国占男性恶性肿瘤的第7位，女性居第10位，发病率约为7. 4/10 万。膀胱癌的恶性度不很高，早期诊治的5年存活率为93%，但若不能及时发现确诊治疗， 晚期病人的5年存活率仅为6%，死亡率远远大于恶性度高于膀胱癌的其它肿瘤。膀胱癌肿瘤细胞易于种植转移和复发，术后5年内的复发率高达70%，因此，定期随访并早期发现复发在膀胱癌的治疗中占有重要地位(许斌(综述)华立新(审校)膀胱癌流行病学进展，国际泌尿系统杂志，2007 (4) :469-476)。膀胱癌的诊断以尿液脱落细胞检查和膀胱镜活检为金标准。但是尿液细胞学检查，操作复杂，存在着样品收集次数多、量大、耗时长等缺点。检查结果受主观因素影响较大，阳性率低，对于I，II期病人阳性率不足50%。膀胱镜比前两者诊断率高，但是这种方法为侵入性创伤性检测，给病人带来痛苦，并且技术设备要求高， 同时有增加泌尿系统感染的机会，患者不易接受。而CT、B超和核磁共振用于早期诊断，在临床上主要用于肿瘤出现形态变化之后，当肿瘤较小时，容易漏检，且肿瘤的性质不容易判断。如核磁共振只有在病灶大于Icm时才能显示。而且设备昂贵，操作专业性强，不适于推广普及。肾肿瘤在我国泌尿外科肿瘤中占第二位，仅次于膀胱肿瘤，大约占恶性肿瘤的 2% 3%，但在小儿恶性肿瘤中达20%，是儿科常见的恶性肿瘤之一.我国各地区肾癌的发病率及死亡率差异也较大①肾癌的发病率和死亡率均有上升趋势。②男女比例约为2 1。③城市地区高于农村地区，二者最高相差43倍.发达国冢发病率高于发展中国家。20%初诊时既已发生转移，30%术后发生转移。对放化疗不敏感，晚期预后较差。临床诊断主要是通过影像学如B超、CT检查发现。目前多数是在健康查体时B超偶尔发现， 即所谓偶发癌，患者无任何自觉症状。但对于小于2cm的肿瘤诊断有时较困难，与良性肾肿物如囊肿、腺瘤、嗜酸性细胞瘤等鉴别较困难。肾肿瘤标记物对于肾癌的早期诊断、观察评价治疗效果及判断预后和复发具有重要意义。如核基质蛋白(NMP-2》已经被发现有组织特异性和肿瘤特异性，并且与RCC相关的特异性NMP已经被确认。Y -谷氨酰转肽酶 (Gamma-glutamy !transferase, Y-GGT)在疾病状态下，由于参与糖链代谢酶类的活力改变，引起糖链结构异常，这些糖链结构的异常如能反映在体液中，就有可能利用这一异常来诊断疾病。GGT是一种细胞膜上的糖蛋白，主要存在于肾脏和小肠等组织。在正常人尿中 GGT来源于肾脏，其N-糖链全部带有平分型N-乙酰氨基葡萄糖，而肾细胞癌患者尿中该型明显减少，使GGT和ConA的亲和力增高，因而可用于肾癌的诊断。Yoshida等研究发现在肾癌组织中GGT的糖链结构和正常肾皮质中的不同，且在RCC组织的活性显著增加。GGT的糖链结构在肾癌中的变异有待人们更深入的研究，可能成为诊断肾癌的一种有用的工具。此外，还有神经特异性烯醇化酶(Neuron-specific enolase，NSE)和丙酮酸激酶M2型同工酶 (M2-PK)，粘多糖(Glycosaminoglycan，GAG)和脂类相关唾液酸(Lipid-Associated sialic Acid, LASA)等被用于肾肿瘤标记物的研究，但是迄今为止，还没有理想的特异性标记物用于肾癌的早期诊断。前列腺癌(prostatecancenPCa)在欧美男性癌症中列第2位，肿瘤致死的原因中列第3位。我国男性中PCa发病率也逐年升高，1979年Wang等从前列腺组织中分离出前列腺特异抗原(prostatespecificantigen，PSA)，1982年证实与7_Sin在免疫学上一致，但二者相对分子质量不同，PSA为33000 34000 ；7-Sin为23000。经过10年左右的临床应用，发现PSA筛查PCa显著优于PAP或PAP与PSA的联合应用。因此，自上世纪90年代以来，PSA被认为是PCa最重要的血清学标志物。随着科技的发展，前列腺癌的肿瘤标记物研究取得一定的进展，从基因表达水平，蛋白水平发现包括E-钙黏蛋白(E-cadherin，E-⑶)， P27，MMPS，血管内皮生长因子fVEGF)，环氧化酶(cyclooxygenase，C0X)以及新技术筛检 GSTPl基因有没有高度甲烷化的情形。90%前列腺癌患者都会有这种初期的基因变化。等标记物在前列腺癌中有高表达，但是目前尚不能确定出单一的，足够敏感和特异的标志物， 以PSA为例，其前列腺癌的阳性预示值只有37%，并且这些因子的检查都需要从血液或特殊仪器设备。寻找从尿液中发现新的标记物联合现有技术手段和标记物对于增加检出率， 简化检查方法具有重要现实意义。与上述泌尿系统肿瘤检测方法相比，尿液肿瘤标记物的检测无创伤，检测速度快， 成本低，操作简便快捷，适用于泌尿系统癌的流行病学调查及病人经过药物、手术治疗后的动态和疗效监测，同时为临床医生筛选泌尿镜检查适应人群，即应用该方法找出高度可疑的肿瘤癌患者。胸腺素α原G^oTa)是一个在哺乳动物细胞中广泛存在的小分子量酸性蛋白， 它除了具有促进机体免疫功能外，另一个重要功能是提高细胞的增殖能力，ProT α RNA只有在快速增值的细胞中大量出现。免疫组化研究结果证明，ftOTa在增值的细胞中高表达， 而在相对静止的细胞中则表达很少，ProT α可作为肿瘤转移和预后的指征。α的表达受到原癌基因C-myc编码的转录因子的调控作用，是C-myc作用的靶基因之一(Sasaki H， et al, Cancer Lett. 2001)。ProT α在乳癌组织中较非癌组织高17倍，增高的α蛋白水平提示有更高的淋巴转移、易于复发及预后不良倾向。利用免疫组化方法检测到I^roTa 的表达量在结肠癌、乳腺癌(Magdalena C, et al. Tumour prothymosin alpha content, a potential prognostic marker for primary breast cancer[J]. Br J Cancer,2000, 82(3) :584-590) IiLMiM^R (Wu C G，et al. Overexpression of hepatic prothymosin alpha, a novel marker for human hepatocellular carcinoma[J]. Br JCancer,1997, 76(9) :1199-1204)禾口神经母细胞瘤(Sasaki H, et al. Expression of the prothymosin aIphamRNA correlated with that of N_myc in neuroblastoma[J]. Cancer Lett,2001, 168(2) :191_195)，肺癌(Sasaki H, et al. Expression of the prothymosin-a gene as a prognostic factor in lung cancer [J]. Surg Today, 2001,1 (10) :936-938)，甲状腺瘤组织中均较临近正常组织中明显升高。正由于ftOTa没有二级结构，抗原性很弱，因此制备相应的抗体比较困难，以往
4常常采用与载体蛋白KLC等偶联后免疫动物，如兔子。此外，还有免疫鸡后再从鸡蛋中分离获得相应的抗体 IG-Y(Persefoni Klimentzou a, Development and immunochemical evaluation of antibodiesY for the poorly immunogenic polypeptide prothymosin alpha, peptides27(2006) 183-193)。斑点杂交技术属于免疫反应检测技术范畴，它是应用把检测的样品及抗原抗体反应在硝酸纤维素膜上进行，硝酸纤维素膜对蛋白质的吸附性能优于聚苯乙烯，可检出 IngProT α蛋白；检出抗原的敏感性较常规ELISA法高6 8倍；试剂用量少，比ELISA法至少节约10倍；操作简便快速，不需要特殊设备条件，适合基层单位使用；并可邮寄供现场流行病学调查使用；检测结果可长期保存，便于复查。该方法具有特异性强，假阳性较少； 敏感性高的特点。本申请人在中国专利200710009083. 0中公开了一种抗肿瘤融合蛋白的制备方法
及其应用。目前，有关ftOTa多克隆抗体采用该方法制备还未见报道。

发明内容
本发明的目的在于提供一种抗胸腺素α原多克隆抗体及其制备方法与应用。所述抗胸腺素α原多克隆抗体为采用GST-ProT α融合表达制备的融合蛋白免疫新西兰大白兔子后获得的多克隆抗GST-ProT α抗血清。所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法包括以下步骤1)制备融合蛋白GST-ProTa 2)制备抗体。在步骤1)中，所述制备融合蛋白GST-ProTa可采用以下方法(1)根据的基因序列，设计上游引物Pl和下游引物P2，将上游引物Pl引入BamHI酶切位点，将下游引物P2引入EcoRI酶切位点；(2)采用RT-PCR方法获得前胸腺素α原全长基因cDNA，将PCR产物纯化后与 PMD18-T Vector连接，重组载体命名为TP，转化DH5 α感受态细胞，将鉴定的阳性菌液测序；(3)用EcoRI和BamHI双酶切ftx)TaPCR产物，将ftx)Ta基因片断插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX 6P-1中，命名为PP，转化大肠杆菌BL21，用LB培养基培养， 加入IPTG，诱导表达，菌液离心后的沉淀用上样缓冲液溶解，沸水浴后离心取上清，进行 SDS-PAGE电泳，获得GST-Pro α融合蛋白；(4)将经过转化的转基因BL21菌株超声破碎后，离心所获得的上清中含有可溶性的融合蛋白GST-Proa ；(5)将上清经过GST亲和层析柱分离纯化获得高纯度的GST-Pro α融合蛋白。在步骤1)的(1)中，所述上游引物Pl和下游引物P2分别为上游引物P1 5，-GCGGATCCATGTCAGACGCAGCCGTA-3，，下游引物P2 5，-GCGAATCCCTAGTCATCCTCGTCGGTC-3，。在步骤1)的(3)中，所述用LB培养基培养的温度可为37°C，所述诱导表达的温度可为37"C。
在步骤幻中，所述制备抗体的具体步骤可为(1)融合蛋白与福氏完全佐剂混合后，分3次脊柱两旁皮下注射，后5次用不完全福氏佐剂同样位置注射；(2)最后一次注射结束后测效价，当效价达到50000以上时，取血分离血清，得抗胸腺素α原多克隆抗体，分装后保存。在步骤2)的(1)中，所述分3次脊柱两旁皮下注射，每次间隔可为7天；所述后5 次用不完全福氏佐剂同样位置注射，每次间隔可为7天。在步骤2、的O)中，所述最后一次注射结束后测效价可在最后一次注射结束后7 天测效价；所述分装后保存可保存在-20°C冰箱。所述抗胸腺素α原多克隆抗体可用于膀胱癌病人的诊断。本发明效价高、特异性强、能用于进行各种含α成分的样品及细胞，组织内源ftx)Ta的免疫印迹、ELISA免疫分析。将该抗体应用检测尿液中的α水平可以进行膀胱癌，肾癌和前列腺癌等泌尿系統腫瘤的诊断。采用该方法获得的抗体，效价高，特异性强。能检测含I^oTa的各种样品。应用该方法制备的抗体，以尿液中胸腺素α原为肿瘤标记物，采用斑点杂交方法进行泌尿系統癌诊断。所有反应在一张硝酸纤维素膜上进行，硝酸纤维素膜事先用铅笔将膜划分为若干个小方格，经过点样，固定，一抗，二抗反应后显色。 总过程不超过4h。样品需要量小，只要1 μ 1，样品在-20°C冰箱可以长期保存，检测结果不受影响，同时检测结果可以长期保存，便于复查。该方法敏感性好，特异性与准确性高，无创伤，成本低，所需时间适中，在4h之内，一次检测数量可以根据实际样品数量增加或减少。本发明的突出优点和技术效果如下1.本发明采用在载体中与GST融合表达后，分离纯化融合蛋白GST-ProTa与佐剂混合后，免疫兔子，其中前3次采用完全福氏佐剂，后5次采用不完全福氏佐剂的方法，脊柱两旁皮下多点注射的方法，获得效价高，特异性强，灵敏度好的兔抗多克隆抗体。目前采用该方法制备抗胸腺素α原多克隆抗体还未见报道。2.本发明采用病人尿液为检测对象，检测方法简便，快速，容易操作，样品需要量少，紧需要 μ 1的尿液，对人体无任何危害。3.检出率高，对经过3甲医院诊断确诊为膀胱癌的早期和晚期病人共17例，其中 1例早期，肾癌13例，前列腺癌2例。经过本发明方法检测全部为阳性。检出率为100%。4.特异性高，对经过3甲医院体检证明正常人尿液共60例，其中正常的53例，隐血的病人7例。结果均为阴性。5.经标准品实验证明可以检测到纳克级，灵敏度高。与常规ELISA相比高6 8 倍，而且检测结果可以长期保存，便于复查。操作简便快速，不需要特殊设备条件，适合基层单位使用；并可邮寄供现场流行病学调查使用。6.应用本发明设计的方法所制备的抗体，采用斑点杂交的方法以尿液中ftOTa 作为肿瘤标记物，用于诊断膀胱癌病人，该方法敏感性好，特异性与准确性高，无创伤，成本低，所需时间适中，在4h之内，一次检测数量可以根据实际样品数量增加或减少。


图1为中国人外周血淋巴总RNA电泳图。在图1中，55，185，观3代表不同沉降系数的RNA。图2为本发明实施例检测RT-PCR获得的产物。在图2中，2000bp，IOOObp，750bp， 500bp, 300bp, 250bp, IOObp 分别代表 DNA 大小，M 代表标准 DNA。图3为α的PCR扩增结果。在图3中，1为PCR产物，M代表标准DNA。图4为质粒PUCT-α限制性酶切分析。图5为质粒pGEX-ProT α的PCR鉴定结果。图6为质粒pGEX-α限制性酶切分析。图7为表达载体pGEX- α构建流程图。图8为融合蛋白表达SDS-PAGE。图9为融合蛋白表达纯化的SDS-PAGE分析。图10为抗胸腺素α原多克隆抗体的鉴定，抗原梯度的斑点杂交。图11为斑点杂交检测膀胱癌病人尿液中的a。图12为斑点杂交检测肾癌病人尿液中的a。图13为斑点杂交检测前列腺癌病人尿液中的a。图14为正常人和临床诊断为隐血的病人的尿液。
具体实施例方式以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明。所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法包括以下步骤DGST-ProTa融合蛋白的制备(1)根据的基因序列，设计上游引物Pl和下游引物P2，上游引物Pl和下游引物P2分别为上游引物P1 5，-GCGGATCCATGTCAGACGCAGCCGTA-3，，下游引物P2 5，-GCGAATCCCTAGTCATCCTCGTCGGTC-3，，将上游引物P1引入BamHI酶切位点，将下游引物P2引入EcoRI酶切位点。(2)采用RT-PCR方法获得前胸腺素α原全长基因cDNA，将PCR产物纯化后与 PMD18-T Vector连接，重组载体命名为TP，转化DH5 α感受态细胞，将鉴定的阳性菌液测序。(3)用EcoRI和BamHI双酶切I^roT α PCR产物，将I^roT α基因片断插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX 6P-1中，命名为PP，转化大肠杆菌BL21，LB培养基，37°C培养， 加入IPTG，37°C诱导表达，菌液离心后的沉淀用上样缓冲液溶解，沸水浴后离心取上清，进行SDS-PAGE电泳，获得GST-Pro α融合蛋白。(4)将4经过转化的转基因BL21菌株超声破碎后，离心所获得的上清中含有可溶性的融合蛋白GST-Proa。(5)将上清经过GST亲和层析柱分离纯化获得高纯度的GST-Pro α融合蛋白。2)抗体的制备如下(1)融合蛋白与福氏完全佐剂混合后，分3次脊柱两旁皮下注射，每次间隔7天，后 5次用不完全福氏佐剂同样位置注射，间隔时间与前面相同。(2)最后一次注射结束后7天测效价，效价达到50000以上，取血分离血清，分装后
7保存在_20°C冰箱待用。以下给出所述抗胸腺素α原多克隆抗体的鉴定1)硝酸纤维素膜用铅笔画IcmX Icm的网格。2)将标准ftOT α蛋白按1 μ g/mL, 5 μ g/mL和10 μ g/mL梯度用包被液稀释，微量加样于硝酸纤维素膜网格上，置于37V经20min，边上分别设置空白对照和阴性对照，干燥孵育。3)将膜浸于封闭液中，37°C封闭lh。4)0. 05% Tween-20，用磷酸缓冲液配制，洗涤3次，每次5min。5)加一抗血清，37°C，lh。6)洗涤 3 次。7)加用PBS稀释的羊抗兔-HRP标记二抗，37°C封闭lh。8)洗涤4次，加DAB显色剂显色5到lOmin，水洗终止反应，晾干后拍照，即完成对所述抗胸腺素α原多克隆抗体的鉴定。结果见图1。抗胸腺素α原多克隆抗体在诊断膀胱癌病人中的应用如下。以下给出膀胱癌病人，临床诊断为隐血的病人尿液和正常人尿液α检测方法1)硝酸纤维素膜用铅笔画IcmX Icm的网格。2)将待测样品，膀胱癌病人尿液，健康人尿液和隐血病人尿液用包被液稀释，微量加样于硝酸纤维素膜网格上，置于37°C经20min，干燥孵育。3)将膜浸于封闭液中，37°C封闭Ih。4) PBST 洗涤 3 次，每次 5min。5)加兔抗 ProT α 抗体，37 °C，Ih。6)洗涤 3 次。7)加用PBS稀释的羊抗兔-HRP标记二抗，37°C封闭lh。8)洗涤4次，加DAB显色剂显色5到lOmin，水洗终止反应，晾干后拍照，即完成膀胱癌病人，临床诊断为隐血的病人尿液和正常人尿液α检测。结果见图2和3。质粒PUCT- α限制性酶切分析参见图4。在图4中，1 =PUCT- α /BamHI+EcoRI双酶切结果 O.6Kb，300bp) ；Μ:标准 DNA DL2000 (bp) ；2 :pMD18-T_Vector 质粒。质粒pGEX-ProTa的PCR鉴定结果参见图5。在图5中，1、2 :PCR产物(300bp)， 3 阴性对照，M =M代表标准DNA，DL2000 (bp)。质粒pGEX-a限制性酶切分析参见图6。在图6中，1、2 :pGEX_a/ BamHI+EcoRI (4. 9kb, 300bp)，M 代表标准 DNA，DL2000 (bp)。表达载体pGEX-α构建流程图参见图7。在图7中，将proT基因克隆到质粒pUCT 载体中，并用EcoRI和BamHI双酶切，同时用与之相同的两种酶双酶切载体pEGX6p_l，在 T4连接酶作用下连接构建成表达载体，连接产物在Amp+抗性板筛选阳性克隆子。EcoRI， BamHI, XhoI, NotI, SmaI, Sail等代表多克隆酶切位点。融合蛋白表达SDS-PAGE参见图8。在图8中，1.沉淀；2.上清；3.全蛋白；4诱导前对照；5.空载体诱导后；6.空载体诱导前；M蛋白标准；116KDa，66. 2KDa，45. OKDa, 37KDa, 35. OKDa, 26KDa, 25. OKDa, 18. 8KDa, 14. 4KDa分别代表不同分子量大小标准蛋白。
融合蛋白表达纯化的SDS-PAGE分析参见图9。在图9中，1和3为纯化的蛋白；2 为空载体诱导前；4为重组载体诱导后上清；97. 2，66. 4，44. 3，35，25代表不同分子量大小标准蛋白。抗胸腺素α原多克隆抗体的鉴定，抗原梯度的斑点杂交参见图10。在图10中， 1为阴性对照(以阴性兔血清作为一抗)；2为空白对照(以PBS代替ftOTa) ；3为标准 ProT α (1 μ g/mL) ；4 为标准 ProT α (5 μ g/mL) ；5 为标准 ProT α (10 μ g/mL)。斑点杂交检测膀胱癌病人尿液中的α参见图11。在图11中，1为膀胱癌病人(晚期)尿液；2为膀胱癌病人(早期)尿液；3为健康人尿液。斑点杂交检测肾癌病人尿液中的α参见图12。斑点杂交检测前列腺癌病人尿液中的α参见图13。正常人和临床诊断为隐血的病人的尿液参见图14。在图14中，第1、2排为正常人尿液，第3排为临床诊断为隐血的病人尿液。
权利要求
1.抗胸腺素α原多克隆抗体，其特征在于为采用GST-ProTα融合表达制备的融合蛋白免疫新西兰大白兔子后获得的多克隆抗GST-ProT α抗血清。
2.如权利要求1所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)制备融合蛋白GST-ProTa2)制备抗体。
3.如权利要求2所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤1)中， 所述制备融合蛋白GST-ProTa采用以下方法(1)根据I^roTa的基因序列，设计上游引物Pl和下游引物P2，将上游引物Pl引入 BamHI酶切位点，将下游引物P2引入EcoRI酶切位点；(2)采用RT-PCR方法获得前胸腺素α原全长基因cDNA，将PCR产物纯化后与pMD18_T Vector连接，重组载体命名为TP，转化DH5ci感受态细胞，将鉴定的阳性菌液测序；(3)用EcoRI和BamHI双酶切ftx)TaPCR产物，将ftx)Ta基因片断插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX 6P-1中，命名为PP，转化大肠杆菌BL21，用LB培养基培养，加入IPTG， 诱导表达，菌液离心后的沉淀用上样缓冲液溶解，沸水浴后离心取上清，进行SDS-PAGE电泳，获得GST-Pro α融合蛋白；(4)将经过转化的转基因BL21菌株超声破碎后，离心所获得的上清中含有可溶性的融合蛋白GST-Pro α ；(5)将上清经过GST亲和层析柱分离纯化获得高纯度的GST-Proα融合蛋白。
4.如权利要求3所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤1)的 (1)中，所述上游引物Pl和下游引物P2分别为上游引物 Pl :5’ -GCGGATCCATGTCAGACGCAGCCGTA-3，， 下游引物 P2 :5，-GCGAATCCCTAGTCATCCTCGTCGGTC-3，。
5.如权利要求3所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤1)的 (3)中，所述用LB培养基培养的温度为37°C，所述诱导表达的温度为37°C。
6.如权利要求3所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤2)中， 所述制备抗体的具体步骤为(1)融合蛋白与福氏完全佐剂混合后，分3次脊柱两旁皮下注射，后5次用不完全福氏佐剂同样位置注射；(2)最后一次注射结束后测效价，当效价达到50000以上时，取血分离血清，得抗胸腺素α原多克隆抗体，分装后保存。
7.如权利要求6所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤2)的(1)中，所述分3次脊柱两旁皮下注射，每次间隔为7天；所述后5次用不完全福氏佐剂同样位置注射，每次间隔为7天。
8.如权利要求6所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤2)的(2)中，所述最后一次注射结束后测效价是在最后一次注射结束后7天测效价。
9.如权利要求6所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤2)的 (2)中，所述分装后保存是保存在-20°C冰箱。
10.如权利要求1所述抗胸腺素α原多克隆抗体在膀胱癌病诊断中的应用。
全文摘要
抗胸腺素α原多克隆抗体及其制备方法与应用，涉及一种抗胸腺素α原多克隆抗体。所述抗胸腺素α原多克隆抗体为采用GST-ProTα融合表达制备的融合蛋白免疫新西兰大白兔子后获得的多克隆抗GST-ProTα抗血清。先制备融合蛋白GST-ProTα，后制备抗体。能用于进行各种含ProTα成分的样品及细胞，组织内源ProTα的免疫印迹、ELISA免疫分析。将该抗体应用检测尿液中的ProTα水平可以进行膀胱癌，腎癌和前列腺癌等泌尿系統腫瘤的诊断。抗体的效价高，特异性强。能检测含ProTα的各种样品。以尿液中胸腺素α原为肿瘤标记物，进行泌尿系統癌诊断。总过程不超过4h，样品需要量小。
文档编号C07K16/26GK102295701SQ20111020067
公开日2011年12月28日 申请日期2011年7月18日 优先权日2011年7月18日
发明者刘升发, 吴汉洲, 周克夫, 张亭, 张长弓, 李伟, 杨彩霞, 王世媛, 邢金春, 韩伟, 高吉青 申请人:厦门大学