专利名称：一种高纯度米卡芬净前体化合物的制备方法
技术领域：
本发明属于工业微生物技术领域，具体涉及一种高纯度米卡芬净前体化合物FR901379的制备方法。
背景技术：
近年来，随着广谱抗菌药物和免疫抑制剂的大量应用、肿瘤化疗、器官移植以及艾滋病的蔓延等，导致免疫系统受到抑制的人群不断增多，深部真菌感染的发病率开始呈现明显的上升趋势，且随着抗真菌药物的运用，真菌的耐药性也越来越强，使得抗真菌药物的应用有迅猛增加的趋势。因此，抗深部真菌感染的药物已成为抗感染药的研究热点之一，日益引起人们的关注。 棘白菌素是一类新型的抗真菌药，与目前临床常用抗真菌药物的作用机制明显不同，是β-1，3-葡聚糖合成酶的抑制剂，作用于真菌的细胞壁。细胞壁是真菌与哺乳动物细胞之间最大的差别，所以干扰细胞壁的合成，影响细胞壁的完整性将导致真菌细胞死亡而对人无伤害，因此副作用较小，安全性较高。目前棘白菌素类药物已经有3个品种上市，即卡泊芬净、米卡芬净和阿尼芬净。其中米卡芬净为日本藤泽公司研制开发，2005年通过美国FDA认证，是继卡泊芬净之后FDA批准的第2种棘白菌素类抗真菌药物。对念珠菌属、曲霉菌属引起的深部真菌感染有广泛抗菌作用；对耐唑类药物的白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和其他念珠菌均有良好的抗菌活性。同时，米卡芬净无肾毒性，并且与其他药物几乎无相互作用，因此有很好的临床应用前景。米卡芬净是一种水溶性半合成棘白菌素类抗真菌药物，由前体化合物FR901379经脱酰基化酶水解后合成得到。米卡芬净前体化合物FR901379是鞘茎点霉属(Coleophoma sp.)的发酵代谢产物,是合成米卡芬净的主要原料,其结构式如下
权利要求
1.一种高纯度米卡芬净前体化合物FR901379的制备方法，包括下述步骤 1)对米卡芬净前体化合物FR901379发酵液进行固液分离，得到固形发酵培养物； 2)固形发酵培养物中加入极性溶剂搅拌浸提，浸提完成后进行固液分离，得到米卡芬净前体化合物FR901379浸提液； 3)调低米卡芬净前体化合物FR901379浸提液中极性溶剂浓度，导入吸附树脂吸附； 4)吸附树脂用含极性溶剂的解吸液以梯度浓度解吸； 5)将米卡芬净前体化合物FR901379解吸液浓缩脱去极性溶剂，过滤，得米卡芬净前体化合物FR901379粗提物； 6)将米卡芬净前体化合物FR901379的粗提物进行硅胶层析分离，用混合溶剂洗脱； 7)硅胶层析洗脱液浓缩后，用溶剂结晶，经过滤、干燥，得到高纯度的米卡芬净前体化合物 FR901379。
2.根据权利要求I所述的方法，其中步骤2)、4)所述的极性溶剂为甲醇或乙醇。
3.根据权利要求I所述的方法，其中步骤2)所述的极性溶剂加入量与发酵液的体积比为 I : 2-1 : 5。
4.根据权利要求I所述的方法，其中步骤3)所述的极性溶剂浓度降低至20-40%。
5.根据权利要求I所述的方法，其中步骤3)所述的吸附树脂为孔隙半径20-300A的吸附树脂，优选为HZ-816或D312大孔吸附树脂。
6.根据权利要求I所述的方法，其中步骤4)所述的解吸液以梯度浓度解吸，过程为40-60%浓度的解吸液洗脱1-3倍柱体积后，70-90%浓度的解吸液洗脱至米卡芬净前体化合物FR901379全部洗脱完毕。
7.根据权利要求I所述的方法，其中步骤6)所述的混合溶剂为体积比7 3的乙酸乙酯-石油醚或体积比64的丙酮-石油醚。
8.根据权利要求I所述的方法，其中步骤7)所述的结晶使用的溶剂为石油醚或异丙醚，加入量为浓缩物重量的3-8倍。
9.根据权利要求I所述的方法，其中步骤7)所述的结晶温度为0-10°C。
全文摘要
本发明公开了一种利用鞘茎点霉属(Coleophoma sp.)发酵培养物制备米卡芬净前体化合物的方法。该方法包括对鞘茎点霉属发酵培养物进行过滤、浸提、树脂吸附、解吸、浓缩等步骤，得到FR901379的粗提物；再经硅胶层析对FR901379粗提物进一步纯化，得到高纯度的米卡芬净前体化合物FR901379产品。本发明的优点在于采用树脂吸附、硅胶层析提取分离FR901379，可以制备得到高纯度的米卡芬净前体化合物FR901379，工艺简单易行，适宜于工业化生产。
文档编号C07K1/22GK102952179SQ20111024430
公开日2013年3月6日 申请日期2011年8月24日 优先权日2011年8月24日
发明者李宁, 张雪霞, 李晓露, 王海燕, 林毅, 张金娟, 林旸, 张丽, 任风芝, 成晓迅, 陈书红, 张艳哲, 张艳立, 李岳, 段宝玲 申请人:华北制药集团新药研究开发有限责任公司