专利名称：一种从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素a的方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法。
背景技术：
蔓性千斤拔素A (flemiphilippinin A)为黄酮类物质，分子式C30H3206，分子量488，结构式
研究发现，蔓性千斤拔素A具有较强清除人体自由基作用和抗肿瘤作用。千斤拔，别名蔓性千斤拔、一条根、钻地风等。为豆科千斤拔属植物千斤拔，以根入药。具有祛风利湿，消瘀解毒功效。通过文献检索，未发现有制备蔓性千斤拔素A专一方法。如文献“蔓性千斤拔总黄酮的提取与分析”，该文献研究的包括蔓性千斤拔素A在内的多种黄酮混合物提取方法。再如文献“千斤拔异戊烯基黄酮研究”和文献“千斤拔化学成分研究”以及文献“蔓性千斤拔化学成分与质量控制研究”，都是以多种成分为研究对象，采用萃取和固体填充柱分离。如上所述，这些传统制备方法多存在溶剂用量大、收率低、制备量小、污染严重、能耗高等诸多缺陷，不利于蔓性千斤拔素A应用和更广泛的药理研究。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的快速、简便的方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素 A的方法，其特征在于以下步骤
a取千斤拔药材粉碎40-80目，加入超临界萃取釜中，在萃取压力20-30MPa、温度 40-60°C的条件下，通入液态C02和夹带剂超临界萃取2-3小时，在压力5_10MPa，温度 50-60°C解析得萃取物；
b上述萃取物用适量饱和石灰水溶解，离心，离心液调节ph2-5，加氯仿萃取，收集萃取液回收试剂得粗提物；
c把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器检测，收集目标成分，减压干燥得蔓性千斤拔素A。
所述的夹带剂可选甲醇、乙醇、丙酮或氯仿溶液，用量为原料的1-3倍量。所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统可选三元溶剂体系，优选氯仿、甲醇、水，比例为3-7 2-3 2-5，下相为流动相，上相为固定相。所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统可选四元溶剂体系，优选正己烷、乙酸乙酯、 甲醇、水，比例为1-5:1-10:2-7:1-5，下相为流动相，上相为固定相。所述的高速逆流色谱分离时主机转速可为700-1000rpm，流动相流速为Hml/
mirio本发明的优点是
1.方法采用超临界C02萃取，减少了有机试剂用量，提取效率高，不造成污染，提取时间短；
2.方法还采用了高速逆流色谱分离，分离速度快、周期短，样品无损失，溶剂可以循环使用，不产生废弃物，产品纯度高。
具体实施例方式下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明。实施例1
千斤拔药材后粉碎60目，取2kg加入超临界萃取釜中，通入液态C02，设置在萃取压力 20MPa、温度40°C，达到上述参数后，调整液态C02流速为20kg/h，并以2L/h流速通入90% 甲醇溶液，动态萃取3小时，在压力5MPa，温度50°C调件下解析，回收试剂得到萃取物100g。 萃取物加200ml饱和石灰水溶解，过滤，滤液盐酸调节ph2，加等体积氯仿萃取2次，萃取液回收氯仿，得到Ilg粗提物。取氯仿、甲醇、水按4:3:2混合，混合后充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱， 同时开转主机SOOrpm，泵入下相，待系统平衡后，流速调节为3ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标流分，连续制备，浓缩干燥得黄色粉末蔓性千斤拔素Al. 3g，经HPLC检测，纯度98. 2%。实施例2:
千斤拔药材后粉碎80目，取2kg加入超临界萃取釜中，通入液态C02，设置在萃取压力 30MPa、温度60°C，达到上述参数后，调整液态C02流速为23kg/h，并以2L/h流速通入95% 乙醇溶液，动态萃取2小时，在压力7MPa，温度60°C调件下解析，回收试剂得到萃取物84g。 萃取物加150ml饱和石灰水溶解，过滤，滤液盐酸调节ph5，加等体积氯仿萃取2次，萃取液回收氯仿，得到7. 5g粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按2:4:3:2混合，混合后充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机700rpm，泵入下相，待系统平衡后，流速调节为2ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标流分，连续制备，浓缩干燥得黄色粉末蔓性千斤拔素Al. 5g，经HPLC检测，纯度96. 9%。实施例3:
千斤拔药材后粉碎80目，取2kg加入超临界萃取釜中，通入液态C02，设置在萃取压力 25MPa、温度55°C，达到上述参数后，调整液态C02流速为2^g/h，并以lL/h流速通入氯仿溶液，动态萃取2小时，在压力9MPa，温度50°C调件下解析，回收试剂得到萃取物45g。萃取物加80ml饱和石灰水溶解，过滤，滤液盐酸调节ph5，加等体积氯仿萃取2次，萃取液回收氯仿，得到5g粗提物。 取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按2:4:3:1混合，混合后充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机IOOOrpm，泵入下相，待系统平衡后，流速调节为lml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标流分，连续制备，浓缩干燥得黄色粉末蔓性千斤拔素Al. Ig,经HPLC检测，纯度98. 9%。
权利要求
1.一种从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于以下步骤a取千斤拔药材粉碎40-80目，加入超临界萃取釜中，在萃取压力20-30MPa、温度 40-600C的条件下，通入液态C02和夹带剂超临界萃取2-3小时，在压力5_10MPa，温度 50-60°C解析得萃取物；b上述萃取物用适量饱和石灰水溶解，离心，离心液调节ph2-5，加氯仿萃取，收集萃取液回收试剂得粗提物；c把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器检测，收集目标成分，减压干燥得蔓性千斤拔素A。
2.根据权利要求1所述的从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于步骤a 中所述的夹带剂可选甲醇、乙醇、丙酮或氯仿溶液，用量为原料的1-3倍量。
3.根据权利要求1所述的从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于步骤 c中所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统可选三元溶剂体系，优选氯仿、甲醇、水，比例为 3-7 2-3 2-5，下相为流动相，上相为固定相。
4.根据权利要求1所述的从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于步骤c 中所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统可选四元溶剂体系，优选正己烷、乙酸乙酯、甲醇、 水，比例为1-5 1-10 2-7 1-5，下相为流动相，上相为固定相。
5.根据权利要求1所述的从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于步骤c 中所述的高速逆流色谱分离时可调节主机转速为700-1000rpm，流动相流速为Uml/min。
全文摘要
本发明公开了一种从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于以下步骤a取千斤拔药材粉碎40-80目，加入超临界萃取釜中，在萃取压力20-30MPa、温度40-60℃的条件下，通入液态CO2和夹带剂超临界萃取2-3小时，在压力5-10MPa，温度50-60℃解析得萃取物；b上述萃取物用适量饱和石灰水溶解，离心，离心液调节ph2-5，加氯仿萃取，收集萃取液回收试剂得粗提物；c把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器检测，收集目标成分，减压干燥得蔓性千斤拔素A。本发明的方法步骤操作简便，效率高，污染少，周期短，所得产品纯度高，易于规模化制备。
文档编号C07D493/04GK102391275SQ20111030355
公开日2012年3月28日 申请日期2011年10月10日 优先权日2011年10月10日
发明者刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司