专利名称：一种从刺花椒中提取高纯度柄果脂素的方法
技术领域：
本发明属于天然药物领域，具体涉及一种从刺花椒中提取高纯度柄果脂素的方法。
背景技术：
柄果脂素(Adenostemmoic acid B),分子式为C25H28O6,分子量为424. 49，是一种木脂素类化合物，为白色颗粒状结晶，mp. 102°C (甲醇)。药理研究表明，柄果脂素具有中枢神经抑制作用。刺花椒，别名野花椒、岩椒，来源于芸香科刺花椒(Janthoxylum acanthopodium DC.)，以根、果入药。主要分布于云南，性味辛、麻，温。功能主治温中散寒，止痛，杀虫，避孕；主治胃痛，风湿关节痛，避孕，虫积腹痛。但刺花椒化学成分研究较少，现有文献中还没有检索到从刺花椒中提取制备高纯度柄果脂素的工艺报道。
发明内容
本发明的目的就是提供一种从刺花椒中提取高纯度柄果脂素的方法，以填补目前高纯度柄果脂素提取制备技术的空白。本发明的目的是通过以下技术方案实现的
1)乙醇提取将刺花椒根茎粉碎，投入提取罐，加入含有0.5 5%表面活性剂的60%-95% 的乙醇，采用回流提取2-4小时，收集提取液浓缩至无醇味；
2)大孔树脂吸附将所得浓缩液通过大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至流出液无色，再用水醇梯度洗脱，洗脱梯度依次为10%-20%乙醇、55%-80%乙醇，收集洗脱液减压回收乙醇，得到提取物；
3)高速逆流色谱纯化将所得提取物用高速逆流色谱法进一步纯化，采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，得到纯度95%以上的柄果脂素。步骤1)中表面活性剂亲水亲油平衡值(HLB)在14. (Tl8. O之间。步骤2)所述大孔吸附树脂可选AB-8、DlOU HPD100等极性或非极性大孔吸附树脂。步骤3)所述洗脱系统正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其体积比为(12-17) (15-25)(8-15):(7-15)。本发明的有益效果是
本发明加入表明活性剂参与提取，能够增加提取率，减少提取次数，工业操作可采用一次或最多两次提取，以价格便宜的大孔吸附树脂为载体，以乙醇为溶剂梯度洗脱，再通过高速逆流色谱进一步分离纯化，得到纯度大于95%的柄果脂素产品，本发明方法工序简单、快速、绿色环保，产品纯度高。
具体实施方式
实施例1
将刺花椒根茎粉碎，取5kg加入30L80%乙醇溶液(含0. 5%Tween 20)加热回流提取2 次，每次4小时，过滤，合并两次提取液，减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过预处理好的DlOl 大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液无色，再依次用20%乙醇、55%乙醇洗脱，收集 55%乙醇洗脱液，减压浓缩得到刺花椒提取物。将刺花椒提取物采用高速逆流色谱法进行纯化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(12:18:8:15)为溶剂系统，下相为流动相，上相为固定相，收集柄果脂素流分，回收溶剂得到柄果脂素，经HPLC法测定，其纯度为95. 4%。实施例2:
将刺花椒根茎粉碎，取5kg加入50L65%乙醇溶液(含P/oTween 80)加热回流提取2次， 每次3小时，合并两次提取液，减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过预处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液无色，再依次用10%乙醇、80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩得到刺花椒提取物。将刺花椒提取物采用高速逆流色谱法进行纯化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:20:15:7)为溶剂系统，下相为流动相，上相为固定相，收集柄果脂素流分，回收溶剂得到柄果脂素，经HPLC法测定，其纯度为94. 6%。实施例3:
将刺花椒根茎粉碎，取IOkg加入80L7^)乙醇溶液(含2%Tween 80)加热回流提取2 次，每次提取3小时，收集提取液，减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过预处理好的HPD100大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液无色，再依次用15%乙醇、75%乙醇洗脱，收集 75%乙醇洗脱液，减压浓缩得到刺花椒提取物。将刺花椒提取物采用高速逆流色谱法进行纯化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(14:23:12:10)为溶剂系统，下相为流动相，上相为固定相，收集柄果脂素流分，回收溶剂得到柄果脂素，经HPLC法测定，其纯度为96. 8%。实施例4:
将刺花椒根茎粉碎，取20kg加入100L95%乙醇溶液(含3%Tween 20)加热回流提取 4小时，过滤，滤渣再加入8L95%乙醇溶液回流提取2小时，过滤，合并两次提取液，减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过预处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液无色，再依次用20%乙醇、80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩得到刺花椒提取物。将刺花椒提取物采用高速逆流色谱法进行纯化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水 (17:25:13:9)为溶剂系统，下相为流动相，上相为固定相，收集柄果脂素流分，回收溶剂得到柄果脂素，经HPLC法测定，其纯度为95. m。实施例5:
将刺花椒根茎粉碎，取50kg加入300L60%乙醇溶液(含0. 8%Tween 20)索氏提取4小时，收集提取液，减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过预处理好的DlOl大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液无色，再依次用15%乙醇、75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得到刺花椒提取物。将刺花椒提取物采用高速逆流色谱法进行纯化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(13:15:10:15)为溶剂系统，下相为流动相，上相为固定相，收集柄果脂素流分，回收溶剂得到柄果脂素，经HPLC法测定，其纯度为96. 1%。
权利要求
1.一种从刺花椒中提取高纯度柄果脂素的方法，其特征在于包括以下步骤1)乙醇提取将刺花椒根茎粉碎，投入提取罐，加入含有0.5 5%表面活性剂的60%-95% 的乙醇，采用回流提取2-4小时，收集提取液浓缩至无醇味；2)大孔树脂吸附将所得浓缩液通过大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至流出液无色，再用水醇梯度洗脱，洗脱梯度依次为10%-20%乙醇、55%-80%乙醇，收集洗脱液减压回收乙醇，得到提取物；3)高速逆流色谱纯化将所得提取物用高速逆流色谱法进一步纯化，采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，得到纯度95%以上的柄果脂素。
2.根据权利要求1所述的提取高纯度柄果脂素的方法，其特征在于步骤1)中表面活性剂亲水亲油平衡值(HLB)在14. (Γ18. 0之间。
3.根据权利要求1所述的提取高纯度柄果脂素的方法，其特征在于步骤2)所述大孔吸附树脂可选AB-8、DlOU HPD100等极性或非极性大孔吸附树脂。
4.根据权利要求1所述的提取高纯度柄果脂素的方法，其特征在于步骤3)所述洗脱系统正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其体积比为(12-17) :(15-25) :(8-15) (7-15)。
全文摘要
本发明涉及一种从刺花椒中提取高纯度柄果脂素的方法，包括以下三个步骤1)乙醇提取将刺花椒根茎粉碎，加入0.5~5%表面活性剂，采用乙醇回流提取，提取液浓缩至无醇味；2)大孔树脂吸附将所得浓缩液通过大孔吸附树脂分离，水醇梯度洗脱，洗脱液减压回收乙醇，得到提取物；3)高速逆流色谱纯化将所得提取物用高速逆流色谱法进一步纯化，得到纯度95%以上的柄果脂素。本发明与传统提取工艺相比，加入表面活性剂后能提高提取率，减少提取次数，还可以得到澄清的溶液，上柱不会存在堵塞吸附柱的现象，具有简便、快速、制备量大、产品纯度高等优点，易于推广使用。
文档编号C07D493/04GK102391276SQ20111030360
公开日2012年3月28日 申请日期2011年10月10日 优先权日2011年10月10日
发明者刘东锋, 吴艳波 申请人:南京泽朗医药科技有限公司