专利名称：一种紫杉醇木糖苷化合物的制备方法
技术领域：
本发明属于医药工业领域，具体涉及一种紫杉醇木糖苷化合物的制备方法。
背景技术：
紫杉醇(Paclitaxel,商品名Taxol)和多烯紫杉醇(Taxotere,商品名Docetaxel)因其具有独特的抗癌机理和广谱高效的抗癌活性，已成为临床上最重要的抗癌药物。目前，国际市场上规模化生产紫杉醇的途径主要有:⑴从红豆杉中直接提取紫杉醇；(2)半合成法一一从红豆杉植物中提取10-去乙酰巴卡亭IIK简写IO-DABIII)，用化学方法半合成紫杉醇、多烯紫杉醇等。世界上红豆杉资源种类繁多，欧洲有:欧洲红豆杉a baccata);北美有:太平洋短叶红豆杉Γ T，bre ri/b Jr ia入佛罗里达红豆杉Γ fl ori dana入加拿大红豆杉Γ 5Caaaofefl1Si1S入曼地亚红豆杉中国有:云南红豆杉yuimmwnsis)
杉(美丽红豆杉Chinesis rar airei),东北红豆杉ΓΓ, ciAspii/aie入喜马拉雅红豆杉(T，wallichiana)等。 在上述红豆杉属植物中，除含紫杉醇外，还共存大量其它有开发利用价值的紫杉烷:欧洲红豆杉枝叶中含有丰富的10-DAB III [J.Chromatogr.A 802(1998)]；加拿大红豆杉中含有的紫杉烷主要有9- 二氢-13-乙酰基-巴卡亭IIK简写9-DHB III)、Taxol及10-DAB III等，其中9-DHAB III的含量为Taxol的7 10倍，可作为新一类水溶性更强的半合成化疗药物的前体；中国的南方红豆杉中富含7-木糖-10-去乙酰紫杉醇(简写10-DAXT)，其总量O 0.05%每克干重)是紫杉醇的51倍，该化合物可以通过生物化学方法半合成紫杉醇。目前针对不同种类的红豆杉资源的开发利用以及紫杉醇木糖苷化合物的分离纯化工艺的研究有以下报道:
专利US5736366和US5453521介绍了从欧洲红豆杉分离10-DAB III的方法:用水提取枝叶，溶剂萃取或选择合适的载体(如大孔吸附树脂)吸附，再解吸，结晶得到IO-DAB III，或者甲醇提取后加水稀释，结晶得到纯度较高的IO-DAB III。专利US5969165和US6469186描述了从加拿大红豆杉中分离提取9-DHAB II1、Taxol等紫杉烷的方法:甲醇提取物氧化铝柱分离，溶剂沉淀、结晶，得到高纯度9-DHABIII ；母液(含其它紫杉烷)树脂柱或正相硅胶柱分离，分别得到10-DAB III和巴卡亭IIK简写Baccatin III)及紫杉醇和三尖杉宁碱两部分；10_DAB III和Baccatin III部分再进行一次正相硅胶柱分离，结晶得到高纯度的10-DAB IILBaccatin III ;紫杉醇和三尖杉宁碱部分，直接再进行一次反相树脂柱分离，或经过化学反应后再进行反相或正相硅胶柱分离，结晶得到高纯度紫杉醇。专利US6136989介绍了从太平洋红豆杉中分离纯化紫杉醇等紫杉烷的方法:甲醇提取物经溶剂分配，三次正相硅胶柱分离，一次沉淀，二次结晶得到高纯度紫杉醇。专利US5279949 提出了一个从 Ornamental 紫杉(Taxus media Hicksii)中用正相色谱法分离紫杉醇等紫杉烷的过程:70%乙醇萃取物脱色，溶剂沉淀，两次正相硅胶柱和一次反相色谱分离，结晶得到纯度很高的紫杉醇。专利EP1616868中描述了从Taxus media Hicksii中分离紫杉醇的方法:丙酮-水提取物经溶剂分配，三次正相硅胶柱和一次氧化铝柱分离，结晶得到高纯度紫杉醇。Senilh等从欧州红豆杉中分离紫杉烷木糖苷化合物使用了如下步骤:乙醇提取物经溶剂分配，三次硅胶柱色谱分离，结晶分别得到10-DAXTUO-DAXCUO-DAXT C和XT、XC, XT, C [J.Nat.Prod.47:131(1984)]。专利US5670673描述了从太平洋红豆杉中分离纯化紫杉烷木糖苷化合物的方法:乙醇提取物经溶剂分配，一次反相色谱柱分离和重结晶，分别得到高纯度10-DAXT、XT和IO-DAXC。专利US5856532描述了从西藏红豆杉中分离纯化紫杉烷木糖苷化合物的方法:甲醇提取物中加水稀释，沉淀经硅胶柱分离，结晶分别得到10-DAXT，IO-DAXC, 10DAXT, C。陈建民等人提出了从云南红豆杉中分离纯化紫杉烷木糖苷化合物的方法:氯仿提取，硅胶柱分离，结晶得到三种紫杉烷木糖苷化合物(分别是10-DAXT、10-DAXC、10-DAXT，C) [Nat.prod.Res, Vol.20，119-124 (2006)]。
Qing-Wen Shi等人开发了一种从日本红豆杉中分离紫杉烧木糖苷化合物的方法，过程包括:甲醇提取，硅胶柱分离，结晶分别得到10-DAXT，IODAXC0 [Can.J.Chem.90:64 74 (2003)]。Chattopadhyay 等人(US 6028206, 2000, EP1028116B1)用高碘酸盐氧化法将 C-7木糖基转化为C-7羟基，利 用该方法可将C-7木糖类紫杉醇A，B，AND C转化为紫杉醇A，B，AND CoHanson等人(US5700669)利用酶水解的方法将C_7糖基紫杉烷转化为C_7羟基紫杉烷。杨凌等人(专利ZL200710010742.2，ZL200710010739.0)开发了 10 去乙酰紫杉醇
ClO乙酰化方法。可按如下方法进行:含10去乙酰紫杉醇(10DAT)的样品溶解于四氢呋喃溶液中，依次加入硝酸铺，乙酸酐，二者与样品的比例分别为1:5:10,20度反应3h后加入饱和碳酸氢钠熄灭反应，随后加入双氧水(双氧水量占总反应体系量的20%)，20度反应5小时后，用乙酸乙酯萃取反应液三次，蒸干乙酸乙酯相后得到紫杉醇产品。
发明内容
本发明的目的是提供一种紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，该制备方法操作简单、重复性好、成本低，具有高选择性、高收率，可充分利用红豆杉资源。本发明提供了紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，该方法步骤包括溶剂提取、液液萃取、柱色谱分离、结晶纯化；具体步骤如下:(I)溶剂提取:以可再生红豆杉的植物或细胞培养物或微生物发酵物为原料，将原料浸泡在低级醇或含低级醇的水溶液中1(T36 h，合并提取液并浓缩得到醇提取物；(2)液液萃取:将上述醇提取物加水，用正己烷萃取2次，水:正己烷=1:Γ1:5 ;然后水相用二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯的有机溶剂继续萃取，合并后的有机相脱水后浓缩成浸膏；(3)柱色谱分离:将上述浓缩浸膏进行色谱柱I分离，色谱柱填料选用硅胶或氧化铝；流动相选用乙酸乙酯/正己烷、二氯甲烷/甲醇或二氯甲烷/乙醇；用流动相梯度洗脱，分别得到紫杉醇组分和7-木糖-10-去乙酰紫杉醇组分；将上述含7-木糖-10-去乙酰紫杉醇组分，进行色谱柱II分离，色谱柱II填料选用硅胶键合辛烷基CS或硅胶键合十八烷基C18 ;流动相选用甲醇/水，乙醇/水或乙腈/水；用流动相梯度洗脱，收集液经浓缩、干燥得到含量较高的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇化合物；(4)结晶纯化:将上述含量较高的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇，加入甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或者它们的水溶液，搅拌溶解、结晶，得到含量90%以上的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇。本发明提供的紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，所述可再生红豆杉的植物为南方红豆杉、云南红豆杉、西藏红豆杉、中华红豆杉、或者上述四种红豆杉的遗传变种的枝叶、根须。本发明提供的紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，所述溶剂提取过程中，低级醇选择为甲醇或乙醇。本发明提供的紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，所述色谱分离过程中，色谱柱I材质为玻璃柱或不锈钢柱，优选不锈钢柱，采用低压或中压(压力范围为(T30bar);色谱柱I所选用填料平均粒径100 800目，色谱柱径高比为1:1 1:10o 本发明提供的紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，所述色谱分离过程中，
所述色谱分离过程中，色谱柱II材质为玻璃柱或不锈钢柱，优选不锈钢柱，采用中压或高压(压力范围为2(Tl00bar);色谱柱II所选用填料平均粒径1(Γ50微米，色谱柱径高比为1:3 I:10ο本发明的目标物包括天然存在和人工合成的紫杉烷木糖苷化合物，具有如下结构通式:
权利要求
1.种紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，其特征在于:该方法步骤包括溶剂提取、液液萃取、柱色谱分离、结晶纯化；具体步骤如下: (1)溶剂提取:以可再生红豆杉的植物或细胞培养物或微生物发酵物为原料，将原料浸泡在低级醇或含低级醇的水溶液中1(T36 h，合并提取液并浓缩得到醇提取物； (2)液液萃取:将上述醇提取物加水，用正己烷萃取2次，水:正己烷=1:Γ1:5 ;然后水相用二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯的有机溶剂继续萃取，合并后的有机相脱水后浓缩成浸膏； (3)柱色谱分离:将上述浓缩浸膏进行色谱柱I分离，色谱柱填料选用硅胶或氧化铝；流动相选用乙酸乙酯/正己烷、二氯甲烷/甲醇或二氯甲烷/乙醇；用流动相梯度洗脱，分别得到紫杉醇组分和7-木糖-10-去乙酰紫杉醇组分； 将上述含7-木糖-10-去乙酰紫杉醇组分，进行色谱柱II分离，色谱柱II填料选用硅胶键合辛烷基C8或硅胶键合十八烷基C18 ;流动相选用甲醇/水，乙醇/水或乙腈/水；用流动相等度洗脱，收集液经浓缩、干燥得到含量较高的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇化合物； (4)结晶纯化: 将上述含量较高的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇，加入甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或者它们的水溶液，搅拌溶解、结晶，得到含量大于90%的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇。
2.照权利要求1 所述紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，其特征在于:所述可再生红豆杉的植物为南方红豆杉、云南红豆杉、西藏红豆杉、中华红豆杉、或者上述四种红豆杉的遗传变种的枝叶、根须。
3.照权利要求1所述紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，其特征在于:所述溶剂提取过程中，低级醇选择为甲醇或乙醇。
4.照权利要求1所述紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，其特征在于:所述柱色谱分离过程中，色谱柱I所选用填料平均粒径100 ^800目，色谱柱径高比为I I:10ο
5.照权利要求1所述紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，其特征在于:所述柱色谱分离过程中，色谱柱I材质为玻璃柱或不锈钢柱，采用低压或中压，压力范围为(T30bar。
6.照权利要求5所述紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，其特征在于:所述柱色谱分离过程中，色谱柱I材质为不锈钢柱。
7.照权利要求1所述紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，其特征在于:所述柱色谱分离过程中，色谱柱II所选用填料平均粒径1(Γ50微米，色谱柱径高比为1:3 1:10。
8.照权利要求1所述紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，其特征在于:所述柱色谱分离过程中，色谱柱II材质为玻璃柱或不锈钢柱，采用中压或高压，压力范围为2(Tl00bar。
9.照权利要求8所述紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，其特征在于:所述柱色谱分离过程中，色谱柱II材质为不锈钢柱。
全文摘要
本发明涉及一种紫杉醇木糖苷化合物的制备方法，该方法是从可再生红豆杉资源中制备7-木糖10-去乙酰紫杉醇化合物，以高产7-木糖10-去乙酰紫杉醇化合物的可再生红豆杉如南方红豆杉(Taxus Chinesis var mairei)的植物或细胞培养物或微生物发酵物为原料，通过溶剂提取、液液萃取、柱色谱分离、结晶纯化等步骤获得7-木糖10-去乙酰紫杉醇化合物，所得7-木糖10-去乙酰紫杉醇化合物可转化为抗癌药物紫杉醇。
文档编号C07H17/04GK103087127SQ201110332280
公开日2013年5月8日 申请日期2011年10月28日 优先权日2011年10月28日
发明者杨凌, 刘兴宝, 栾宏伟, 杜逊甫 申请人:中国科学院大连化学物理研究所