专利名称：从白木香叶和嫩枝中制备的高纯度芒果苷及其方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体为从白木香叶和嫩枝中制备的高纯度芒果苷及其方法。
背景技术：
SAquilaria sinensis (Lour.) Gilg,(Thymelaeaceae)自 (Aqui laria Lam.)常绿乔木，为我们特有树种，1999年被国务院批准为国家二级重点保护野生植物，《2000年世界自然保护联盟受威胁植物红色名录》将其列为易危植物。白木香具有较高的经济价值，主要用于生产白木香，其未结香木材可作普通用材或粉碎作为燃香的原料，白木香碎料可压制成香熏片，用于改善居室环境，对呼吸道疾病和心脏病、心绞痛也有很好的缓解、治疗作用(梅全喜等，2007)。其种子含油量达68.5%，远高于其他木本植物，可为我国的生物质燃料油工业提供丰富的可再生原料，且有缓泻作用，具有开发成天然减肥药和缓泻制剂的潜力(丽艳等，2008)。其花可以提取成香料或香精。其树皮可用于造纸。白木香的树叶已被开发成具有助睡眠、养颜美容、消胀气、排宿便、去油脂作用的白木香
ο白木香树形美观，树姿优雅，枝繁叶茂，四季常青，还是一种观赏价值很高的园林绿化树种(林伟强等，200幻。正是由于白木香树全身都是宝，具有非常大的经济价值和市场前景，加上各级政府部门的重视和大力支持，白木香人工种植成为热潮，现在已经在广东、广西、海南、福建、云南、台湾、四川等地大量人工种植，种植面积已达到十余万亩以上。 但白木香适宜刺激结香的树龄为7-8年以上，此期间除了进行少量的白木香茶生产和园林绿化用树外，基地在白木香树上几无收入。每年修剪下的数万吨枝叶被当着废弃物集中扔掉或者烧掉，造成了资源的严重浪费及环境污染。显然，科学地开发利用白木香枝叶废弃物具有重要意义。芒果苷(manifferin)，又称芒果素、莞知母宁，为四羟基吡酮碳糖苷，属双苯吡酮类化合物。文献报道芒果苷具有平喘止咳化痰，解热、镇静、消炎、止痛，抗氧化、抗高血脂、 保肝利胆，免疫调节、抗细菌、抗病毒，抗肿瘤、抗结核、抗糖尿病，抗肥胖、抗辐射、抗抑郁、 抗神经衰弱，防治高尿酸血症、痛风，抑制骨吸收等作用，广泛应用在医药、化妆品、保健品行业。(见(1)余胜民，钟鸣.芒果甙药理研究进展[J].中国中医药科技，1999,6(3) :F003 ； (2)吕红，吴雅红，周培蕾，等.芒果甙的药理研究进展.西北林学院学报，2004，1 Κ4) 146 ； (3)廖洪利，吴秋业，叶光明，等.芒果苷药理研究进展.天津药学，2005，17 O) 50 ；
(4)黄潇，彭志刚.芒果苷药理作用概况.中国药师，2007，10(1)73；(5)廖洪利，苏春丽， 胡小兰，等.芒果苷药理研究新进展.药学实践杂志，2008，沈(3) :161)。由于芒果苷具有广泛的用途，因此从天然产物中提取、分离、精制该化合物的专利较多。名称为《芒果叶总苷止咳中药制剂及其生产方法》的中国发明专利申请(申请号 03125270. 2)公开了一种以芒果叶或扁桃叶为原料，经粉碎、乙醇回流提取、非极性溶剂萃取、脱色、过滤、结晶等工艺，提取芒果叶总苷，并将其制备成具有止咳、化痰、平喘、抗炎作用是中药制剂的方法。名称为《芒果总甙制剂及其生产方法》的中国发明专利申请(申请号03U8M7.4)公布了一种以芒果叶或扁桃叶为原料，经乙醇水提取、非极性有机溶剂萃取、再用高浓度乙醇水提取得总苷混合物，该总苷混合物含量总和达到50%以上，可能含有异芒果苷、高芒果苷、新芒果苷和没食子酸，并以此总苷混合物为基础制备具有止咳祛痰作用的中药制剂的方法。名称为《一种提取芒果甙的方法》的中国发明专利申请(申请号 200510093658. 2)公布了一种以芒果叶、扁桃叶或含有芒果苷的植物为原料，经提取溶媒提取、浓缩、分离纯化、结晶、干燥得到芒果苷的方法，该发明以水或甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、 丁醇等作为溶媒，采用热回流、超声、微波等提取方法，得到的芒果苷含量60%以上。名称为 《高纯度芒果苷的制备方法》的中国发明专利申请(申请号200610079234. 5)公布了一种以含有芒果苷的植物为提取原料，优选芒果叶和扁桃叶及知母，经甲(乙)醇水溶液提取、 提取液经树脂脱色、浓缩干燥、重结晶等提取出芒果苷的方法，该发明得到的芒果苷纯度 >90%。名称为《提取芒果苷的一种方法》的中国发明专利申请(申请号2007100663M.6) 公布了一种以芒果叶或扁桃叶为原料，经高温高压溶媒提取、膜浓缩、大孔树脂分离纯化等步骤提取芒果苷的方法，该发明得到的芒果苷纯度达60%以上，所采用的溶媒为水或甲醇、 乙醇、丙醇、丁醇(水)溶液。名称为《芒果苷的制备方法》的中国发明专利申请(申请号 200910175781.7)公布了一种以芒果叶为原料，经粉碎、酶处理、石油醚脱脂、乙醇水提取、 喷雾干燥、溶解、离心过滤、浓缩干燥、重结晶2次等步骤获得芒果苷的方法；该发明得到的芒果苷纯度可到98%。名称为《一种芒果苷的制备方法》的中国发明专利申请(申请号 200910234065. 1)公布了一种以芒果叶或扁桃叶为原料，采用饱和石灰水溶液浸泡提取、大孔树脂吸附、水和不同浓度乙醇溶液分段洗脱、减压浓缩结晶、甲醇调酸重结晶等工艺提取芒果苷的方法；该工艺所得芒果苷纯度达95%以上。以上所述现有公开的芒果苷生产工艺存在的主要问题1.普遍采用芒果叶、扁桃叶、知母等芒果苷含量低、杂质种类多的原料，单位重量原料得率低、成本高、利润低；2.普遍采用芒果叶为原料，因该树易长虫，农药使用常常超标，导致制备出的芒果苷含有有机农残；3.普遍采用芒果叶为原料，因该原料含有大量的有机酸过敏原，使其提取的芒果苷产品的在医药、保健品、化妆品行业的应用受到很大的限制；4.提取工艺普遍采用有毒有机溶剂如丁醇、石油醚等，污染环境，制备出的芒果苷产品残留有机溶剂，影响安全性；5.普遍得到的芒果苷产品纯度较低，仅一项专利达到了 98%，但该专利所用工艺流程复杂、成本较高。综上所述，现尚未见利用白木香叶或嫩枝提取芒果苷的报道。现有芒果苷工艺流程均较复杂，操作难度大；多种有机溶剂及大孔树脂等的使用显著增加了生产成本，并影响了安全性。
发明内容
本发明的目的是针对以上所述现有技术存在的不足，提供一种以作为废物的白木香叶和嫩枝做为原料的从白木香叶和嫩枝中制备的高纯度芒果苷。
本发明的另一目的是提供一种从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法以及给出整个工艺控制和纯度检测手段、功能与用途。为解决上述技术问题，本发明主要采用下列技术方案从白木香叶和嫩枝中制备的高纯度芒果苷，是以白木香叶和/或嫩枝作为原料提取的。从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法，其步骤包括以白木香叶和/或嫩枝为原料，用乙醇溶液或者甲醇溶液进行提取，然后回收乙醇或甲醇。从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法，其步骤包括以白木香叶和/或嫩枝为原料，加入体积比浓度为40% -90%的乙醇溶液或者甲醇溶液，温度在40-90°C，得到含芒果苷的提取液；将提取液第一次减压回收乙醇或甲醇后静置，去除沉淀以除去叶绿素等脂溶性杂质；继续第二次减压回收至小体积，然后加入适量无水乙醇或甲醇，静置，去除沉淀以除去多糖等水溶性杂质，得到含芒果苷的上清液；上清液减压回收乙醇或甲醇至晶体析出为止，静置，抽滤，依次用无水乙醇或甲醇、蒸馏水洗涤沉淀，干燥即得芒果苷粗
P
ΡΠ O所述芒果苷粗品用体积比浓度为40% -90%的乙醇溶液或者甲醇溶液溶解，调节 PH值至1-5，重结晶，既得有效含量在98%以上芒果苷纯品。所述白木香叶和/或嫩枝，可以是其中一种也可以是两种的混合体，可以是干品也可以是湿品，优选干品，切细或打碎备用。所述乙醇溶液或者甲醇溶液作为溶媒对原料进行提取和对粗品进行重结晶，乙醇溶液或者甲醇溶液浓度范围优选60% -70%。提取方法为热回流、热浸渍、渗漉中的一种， 提取时温度为40-90°C，优选热回流和渗漉。所述提取时乙醇溶液或者甲醇溶液用量范围在所述白木香叶和/或嫩枝重量的10-30倍投药量之间，优选15-20倍。所述第一次减压回收到乙醇或甲醇的体积比浓度在15%以下，优选0-5%。第二次减压回收后剩余浓缩液量控制在所述白木香叶和/或嫩枝重量的0. 5-2倍投药量之间，投加的无水乙醇或甲醇的量为第二次回收后浓缩液体积的4-8倍，优选5倍。第一次减压回收乙醇或甲醇后静置时间为2-Mh，第二次减压回收，然后加入无水乙醇或甲醇，静置2-6h，上清液减压回收乙醇或甲醇，静置12-24h。分别用无水乙醇或甲醇、蒸馏水依次洗涤沉淀，以流出液无色为止。调节PH值用盐酸、硫酸、磷酸中的一种，PH值范围为1-5。优选盐酸，所述PH值优选3。从白木香叶和嫩枝中制备的高纯度芒果苷，具有平喘止咳化痰，解热、镇静、消炎、 止痛，抗氧化、抗高血脂、保肝利胆，免疫调节、抗细菌、抗病毒，抗肿瘤、抗结核、抗糖尿病， 抗肥胖、抗辐射、抗抑郁、抗神经衰弱，防治高尿酸血症、痛风，抑制骨吸收等作用，可以广泛应用在医药、化妆品、保健品行业。与现有的技术相比，本发明具有如下优点1.本发明采用白木香叶和嫩枝为原料，含有丰富的芒果苷，且其它杂质成分的种类和数量均较少，该原料不含有过敏成分，原料生产过程中不使用农药，制备出的产品为无过敏原、无有机农残的高品质高纯度芒果苷，可广泛应用于医药、保健品、化妆品行业；2.本发明整个工艺流程可以均以乙醇水为溶剂，对环境无污染，制备出的产品无有害有机残留，安全性更高；
3.本发明整个工艺流程采用溶剂法分离技术，工艺步骤简单、稳定、可行，生产周期短、人力耗费少、成本低廉；4.本发明工艺流程最终获得的芒果苷产品纯度达到98%，且得率大、产能高，大大降低了生产成本，提高了市场竞争力，该工艺简单可行，适合大生产，易形成产业化。
图1为本发明从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法的工艺流程图；图2为本发明从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的紫外吸收光谱图；图3为本发明从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的HPLC-DAD 3D图；图4为本发明从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的1H-NMR谱图；图5为本发明从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的13C-NMR谱图；图6为白木香叶的HPLC色谱图；图7为本发明从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的HPLC色谱图。
具体实施例方式以下结合附图和具体实施例对本发明进行详细的说明。经研究发现，从白木香叶和嫩枝中含有丰富的芒果苷，如图6所示。本发明从白木香叶和嫩枝中制备的高纯度芒果苷，是以白木香叶和/或嫩枝作为原料提取的。其中，白木香叶和/或嫩枝，可以是其中一种也可以是两种的混合体，可以是干品也可以是湿品，优选干品，切细或打碎后经乙醇溶液或甲醇溶液提取而得到的。从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法，如图1所示，其步骤包括以白木香叶和/或嫩枝为原料，加入体积比浓度为40% -90%的乙醇溶液或者甲醇溶液，得到含芒果苷的提取液；将提取液第一次减压回收乙醇或甲醇后静置2-Mh，去除沉淀以除去叶绿素等脂溶性杂质；继续第二次减压回收至小体积，然后加入适量无水乙醇或甲醇，静置 2_6h，去除沉淀以除去多糖等水溶性杂质，得到含芒果苷的上清液；上清液减压回收乙醇或甲醇至晶体析出为止，静置12-24h，抽滤，依次用无水乙醇或甲醇、蒸馏水洗涤沉淀，60°C干燥即得芒果苷粗品。所述芒果苷粗品用体积比浓度为40% -90%的乙醇溶液或者甲醇溶液溶解，调节PH值至1-5，重结晶，既得有效含量在98%以上芒果苷纯品。所述乙醇溶液或者甲醇溶液作为溶媒对原料进行提取和对粗品进行重结晶，乙醇溶液或者甲醇溶液的浓度范围优选60% _70%。提取方法为热回流、热浸渍、渗漉中的一种，优选热回流和渗漉。所述提取时乙醇溶液或者甲醇溶液用量范围在所述白木香叶和/或嫩枝重量的10-30倍投药量之间，优选15-20倍。所述第一次减压回收乙醇或甲醇到体积比含量在15%以下，优选0-5%。 所述第一次减压回收乙醇或甲醇的温度60-80°C，优选70°C。第二次减压回收后剩余浓缩液量控制在所述白木香叶和/或嫩枝重量的0. 5-2倍投药量之间，投加的无水乙醇或甲醇为第二次减压回收后所剩体积的5-8倍，优选6倍。用无水乙醇或甲醇和蒸馏水依次洗涤沉淀，以流出液无色为止。调节PH值用盐酸、硫酸、磷酸中的一种，PH值范围为1-5。优选盐酸，所述PH值优选3。从白木香叶和嫩枝中制备的高纯度芒果苷的整个工艺流程控制和纯度检测采用 RP-HPLC色谱技术日立D2000型高效液相色谱仪(LM55检测器、L2130泵、L-2200自动进
6样器、D2000 Elite HPLC 管理系统)，Cromasil C-18 (5 μ m，250mmX 4. 6mm)，乙腈-0. 4%磷酸水梯度洗脱，柱温25°C，检测波长258nm，流速lmL/min，梯度条件如下
权利要求
1.从白木香叶和嫩枝中制备的高纯度芒果苷，其特征在于，是以白木香叶和/或嫩枝作为原料提取的。
2.从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法，其特征在于，其步骤包括以白木香叶和/或嫩枝为原料，用乙醇溶液或者甲醇溶液进行提取，然后回收乙醇或甲醇。
3.根据权利要求2所述从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法，其特征在于， 其步骤包括以白木香叶和/或嫩枝为原料，加入体积比浓度为40% -90%的乙醇溶液或者甲醇溶液，提取得到含芒果苷的提取液；将提取液第一次减压回收乙醇或甲醇后，静置，去除沉淀；继续第二次减压回收，然后加入无水乙醇或甲醇，静置，去除沉淀，得到含芒果苷的上清液；所述上清液继续减压回收乙醇或甲醇至晶体析出为止，静置，抽滤，用无水乙醇或甲醇和蒸馏水洗涤沉淀，干燥即得芒果苷粗品。
4.根据权利要求3所述从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法，其特征在于， 所述芒果苷粗品用体积比浓度为40% -90%的乙醇溶液或者甲醇溶液溶解，调节PH值至 1-5。
5.根据权利要求3所述从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法，其特征在于， 所述乙醇溶液或者甲醇溶液用量范围为所述白木香叶和/或嫩枝重量的10-30倍投药量之间。
6.根据权利要求3所述从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法，其特征在于， 所述第一次减压回收到乙醇或甲醇的体积比浓度在15%以下。
7.根据权利要求6所述从白木香叶和嫩枝中制备的高纯度芒果苷的方法，其特征在于，所述第一次减压回收乙醇或甲醇的温度为60-80°C。
8.根据权利要求3所述从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法，其特征在于， 第二次减压回收后剩余浓缩液量控制在所述白木香叶和/或嫩枝重量的0. 5-2倍投药量之间，投无水乙醇或甲醇的量为第二次减压回收后所剩浓缩液体积的5-8倍。
9.根据权利要求3所述从白木香叶和嫩枝中制备高纯度芒果苷的方法，其特征在于， 第一次减压回收乙醇或者甲醇后静置时间为2-Mh，第二次减压回收，然后加入无水乙醇或甲醇，静置2-6h，上清液减压回收乙醇或甲醇后，静置12-24h。
全文摘要
本发明公开了一种从白木香叶和嫩枝中制备的高纯度芒果苷及其方法，主要包括以白木香叶和/或嫩枝作为原料，醇溶液提取，减压回收醇后，经水沉、醇沉、析晶等步骤，得到芒果苷粗品，再经重结晶，制备出高纯度芒果苷。本发明的优点是采用白木香叶和嫩枝为原料，其芒果苷含量大，杂质成分种类和数量均较少，且不含有过敏成分，最终产品品质高，可广泛应用于医药、保健品、化妆品行业；制备工艺步骤简单、稳定、可行，生产周期短、人力耗费少、成本低廉。
文档编号C07D407/04GK102424678SQ201110411308
公开日2012年4月25日 申请日期2011年12月9日 优先权日2011年12月9日
发明者帅欧, 林励, 肖凤霞, 邓超明, 陈地灵 申请人:林励