专利名称：黄芪中毛蕊异黄酮苷的提取与纯化方法
技术领域：
本发明涉及一种中药材对照品制备方法，具体是一种黄芪中毛蕊异黄酮苷的提取与纯化方法。
背景技术：
2008年我国首次把中药标准物质研究列入国家科技计划，建立我国中药材标准物质、中药材物质标准、中药材标准分析方法技术规范和国际上通行的中药标准是实现中药现代化的关键。黄芪作为非常中药的一味补气中药，具有益气固表、敛汗固脱、托疮生肌、利水消肿之功效。临床上应用非常广泛，主要用于治疗气虚乏力，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，痈疽难馈，久溃不敛，血虚萎黄，内热消渴，慢性肾炎，蛋白尿，糖尿病等病症。 自2010版药典以来，有关黄芪药材的质量控制在原有对照品黄芪甲苷的基础上又引进黄芪毛蕊异黄酮苷作为质量控制的标准，但目前还没有此对照品制备方法的相关报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种高效率、低成本中药材对照品黄芪中毛蕊异黄酮苷的提取与纯化方法。本发明以如下技术方案解决上述技术问题本发明黄芪中毛蕊异黄酮苷的提取与纯化方法，包括以下步骤(1)称取黄芪药材粉末，按每10公斤粉末加入100L的体积浓度为70-85 %乙醇提取，过滤，滤液浓缩至无醇味，过大孔树脂，先用蒸馏水水洗至澄清，再用体积浓度为 70-85%的乙醇洗脱，收集含毛蕊异黄酮苷的组份，回收乙醇，在水浴锅上浓缩得浸膏；(2)称取浸膏，用适量甲醇溶解后加入100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脱，收集样品，点板，合并含有毛蕊异黄酮苷斑点的组分，再将其蒸干；(3)用适量甲醇溶解后再加入100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脱，收集样品，点板，合并含有毛蕊异黄酮苷斑点的组分，蒸干得毛蕊异黄酮苷化合物粗品；(4)粗品用适量甲醇溶解后加入2倍甲醇体积的石油醚萃取，弃去石油醚层，甲醇层有白色沉淀析出，过滤，滤渣依次用石油醚、甲醇洗涤，得米白色沉淀；(5)米白色沉淀再经100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为 9:1: 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脱，收集样品，合并含有毛蕊异黄酮苷的组份，用甲醇重结晶，得到纯的毛蕊异黄酮苷，挥干，保存。采用本发明方法可制取中药材对照品黄芪毛蕊异黄酮苷，而且效率高、成本低。
图1是本发明方法的工艺流程图。
具体实施例方式以下通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。实施例1称取黄芪药材粉末(过50目筛)10公斤，加入100L的体积乙醇提取，过滤，滤液浓缩至无醇味，过D-101大孔树脂(HG2-885-76)，再用体积浓度为70 %的乙醇洗脱，收集含毛蕊异黄酮苷的组份浓缩，回收乙醇，在水浴锅上浓缩得浸膏。称取浸膏，用适量甲醇溶解后加入100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液进行洗脱，收集合并含有毛蕊异黄酮苷斑点的组分。再用适量甲醇溶解后加入100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液进行洗脱，得粗品毛蕊异黄酮苷。将粗品用适量甲醇溶解后加入石油醚O倍甲醇体积量)萃取，弃去石油醚层，甲醇层有白色沉淀析出，过滤，滤渣依次用石油醚、甲醇洗涤，得米白色沉淀。此米白色沉淀再经100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液进行洗脱，收集，合并含有毛蕊异黄酮苷的组份，用甲醇重结晶，得到纯度为98. 8% (HPLC面积-归一法测定)的毛蕊异黄酮，挥干，保存。实施例2称取黄芪药材粉末(过50目筛)20公斤，加入200L的体积浓度为80 % 的乙醇提取，过滤，滤液浓缩至无醇味，过D-101大孔树脂(HG2-885-76)，，再用体积浓度为80%的乙醇洗脱，收集含毛蕊异黄酮苷的组份浓缩，回收乙醇，在水浴锅上浓缩得浸膏。称取浸膏，用适量甲醇溶解后加入100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液进行洗脱，收集合并含有毛蕊异黄酮苷斑点的组分。再用适量甲醇溶解后加入100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为 9:1: 0.05的氯仿-甲醇-水溶液进行洗脱，得粗品毛蕊异黄酮苷。将粗品用适量甲醇溶解后加入石油醚O倍甲醇体积量)萃取，弃去石油醚层，甲醇层有白色沉淀析出，过滤， 滤渣依次用石油醚、甲醇洗涤，得米白色沉淀。此米白色沉淀再经100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液进行洗脱，收集，合并含有毛蕊异黄酮苷的组份，用甲醇重结晶，得到纯度为98.8% (HPLC面积-归一法测定)的毛蕊异黄酮，挥干，保存。实施例3称取黄芪样药材粉末(过50目筛)30公斤，加入300L体积浓度为85 % 的乙醇提取，过滤，滤液浓缩至无醇味，过D-101大孔树脂(HG2-885-76)，，再用体积浓度为85%的乙醇洗脱，收集含毛蕊异黄酮苷的组份浓缩，回收乙醇，在水浴锅上浓缩得浸膏。称取浸膏，用适量甲醇溶解后加入100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析。采用体积比为9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液进行洗脱，收集合并含有毛蕊异黄酮苷斑点的组分。再用适量甲醇溶解后加入100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为 9:1: 0.05的氯仿-甲醇-水溶液进行洗脱，得粗品毛蕊异黄酮苷。将粗品用适量甲醇溶解后加入石油醚O倍甲醇体积量)萃取，弃去石油醚层，甲醇层有白色沉淀析出，过滤， 滤渣依次用石油醚、甲醇洗涤，得米白色沉淀。此米白色沉淀再经100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液进行洗脱，收集，合并含有毛蕊异黄酮苷的组份，用甲醇重结晶，得到纯度为98.8% (HPLC面积-归一法测定)的毛蕊异黄酮，挥干，保存。以下为结构鉴定和纯度检测学实验资料
1样品纯度检测1.1 TLC 法检测取适量制备所得的供试品以尽可能大的量点于硅胶G板上，以毛蕊异黄酮苷对照品溶液为对照，分别以乙酸乙酯-二丁酮-甲酸-水(体积比为10 :1:1: 1)、正丁醇-醋酸-水(体积比为4 5 1)及氯仿-甲醇(体积比为8 2)为展开剂，展开，晾干，在紫外灯254nm下观察。结果在供试品色谱中，仅在于对照品色谱相应位置上显一个黄色斑点，碘熏显色为黄色。1.2 HPLC 法检测色谱条件色谱柱BDS C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)，流动相A相是体积比为2 26 的乙腈-甲醇溶液，B相是体积浓度为0. 5%的磷酸水，梯度洗脱0-30min，15-60% A，检测波长为254nm，柱温为25°C，流速为0. 7mL/min,进样量体积为10 μ L，纯度98. 8%2结构鉴定
权利要求
1.黄芪中毛蕊异黄酮苷的提取与纯化方法，包括以下步骤(1)称取黄芪药材粉末，按每10公斤粉末加入100L的体积浓度为70-85%乙醇提取， 过滤，滤液浓缩至无醇味，过大孔树脂，先用蒸馏水水洗至澄清，再用体积浓度为70-85%的乙醇洗脱，收集含毛蕊异黄酮苷的组份，回收乙醇，在水浴锅上浓缩得浸膏；(2)称取浸膏，用适量甲醇溶解后加入100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脱，收集样品，点板，合并含有毛蕊异黄酮苷斑点的组分，再将其蒸干；(3)用适量甲醇溶解后再加入100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为 9:1: 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脱，收集样品，点板，合并含有毛蕊异黄酮苷斑点的组分，蒸干得毛蕊异黄酮苷化合物粗品；(4)粗品用适量甲醇溶解后加入2倍甲醇体积的石油醚萃取，弃去石油醚层，甲醇层有白色沉淀析出，过滤，滤渣依次用石油醚、甲醇洗涤，得米白色沉淀；(5)米白色沉淀再经100-200目的硅胶拌样进行硅胶柱层析，采用体积比为 9:1: 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脱，收集样品，合并含有毛蕊异黄酮苷的组份，用甲醇重结晶，得到纯的毛蕊异黄酮苷，挥干，保存。
全文摘要
本发明公开了黄芪中毛蕊异黄酮苷的提取与纯化方法，该方法包括以下步骤(1)将黄芪药材粉末用乙醇提取，过滤，再经蒸馏水、乙醇洗脱，收集含毛蕊异黄酮苷的组份，浓缩得浸膏；(2)进行硅胶柱层析，采用体积比为9∶1∶0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脱，收集样品，点板，合并含有毛蕊异黄酮苷斑点的组分，蒸干；(3)再进行硅胶柱层析，得毛蕊异黄酮苷化合物粗品；(4)加入石油醚萃取，弃去石油醚层，甲醇层有白色沉淀析出，过滤，滤渣用石油醚、甲醇洗涤，得米白色沉淀；(5)米白色沉淀再进行硅胶柱层析，合并含有毛蕊异黄酮苷的组份，重结晶，得到纯的毛蕊异黄酮苷，挥干，保存。本发明方法制取黄芪毛蕊异黄酮苷，效率高、成本低。
文档编号C07H1/08GK102532221SQ20111045243
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月29日 优先权日2011年12月29日
发明者刘振杰, 周小雷, 王硕, 袁经权, 龚小妹 申请人:广西壮族自治区药用植物园