专利名称：一种蟾蜍噻咛的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种提取方法，具体涉及一种蟾蜍噻咛的提取方法。
背景技术：
蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo garfgarizans Cantor或黑眶蟾蜍 Bufomelanostictus Schneider的干燥全皮。干蟾皮具有清热解毒、消肿止痛、活血化瘀、 软坚散结的作用，主要含有蟾毒灵(buffalin)、脂蟾毒配基(resibufogenin)、华蟾酥毒基 (cinobufagin)等内酯类成分,蟾蜍色胺(bufotenldine)、5_轻色胺(serotonine)、蟾蜍噻口宁(bufothionine)、去氢蟾餘色氨氢溴酸(dehydrobufoteinine hydrobromide)等水溶性蟾毒色胺类成分，蟾蜍环酰胺B、蟾蜍环酰胺C、蟾蜍环酰胺D等其他胺类成分，胆甾醇、 7 α -羟基胆甾醇、7 β -羟基胆甾醇、β -谷甾醇、麦角甾醇及菜油甾醇等甾族化合物、以及氨基酸、有机酸、肾上腺素、吗啡、多肽及多糖等其他成份。目前，以蟾皮水溶性成分为主开发的制剂主要有华蟾素注射液、华蟾素片剂、华蟾素口服液等。这些制剂在提取分离纯化的过程中，许多内酯类成分都被除去了，而含量较高的蟾蜍噻咛可能是华蟾素起作用的主要成分。以往华蟾素仅仅对总生物碱进行含量控制，而大量蟾蜍噻咛并没有进行有效控制。采用高效液相色谱法测定蟾蜍噻咛的含量，作为华蟾素的成分控制指标，不失为一种较好的方法。由于采用高效液相色谱法测定蟾蜍噻咛的含量需要用蟾蜍噻咛作为对照，因此如何提取蟾蜍噻咛单体并达到含量测定对照品的要求已成为关键。在干蟾皮药材中，蟾蜍噻咛的得率是较高的，大约20kg药材中可以提取500mg， 远远超过蟾蜍环酰胺B(10 mg)、蟾蜍环酰胺C (6mg)、去氢蟾蜍色氨氢溴酸盐((20 mg)等其他成份。我们进行了相关文献检索发现，从蟾皮中提取分离蟾蜍噻咛单体的方法尚未进行报道，本发明提供了一种蟾蜍噻咛单体的提取分离方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种从蟾皮中提取蟾蜍噻咛的方法，该方法产品纯度和收率较高，工艺成熟，成本低，易于大量提取蟾蜍噻咛。本发明提供的所述蟾蜍噻咛分子式=C12H14N2O4S,分子量282. 07，所述蟾蜍噻咛结构式如下
权利要求
1. 一种蟾蜍噻咛的提取方法，其中所述蟾蜍噻咛的分子式C12H14N2O4S,分子量 282. 07，所述蟾蜍噻咛的结构式如下
2.水提物上大孔树脂柱，用水洗脱，之后用下述有机溶剂中的一种或多种与水作为洗脱剂进行梯度洗脱乙醇、甲醇和丙酮，收集洗脱部分，减压浓缩，干燥，经硅胶柱层析、ODS 柱层析分离，合并蟾蜍噻咛流份，结晶，得蟾蜍噻咛纯品。
3.如权利要求I所述的方法，其特征在于所述的蟾皮原料为中华大蟾蜍Bufobufo gargarizans Can tor 0
4.如权利要求I所述的方法，其特征在于水提取次数为两次，提取时间第一次45分钟，第二次30分钟，浸泡时间60分钟，加水量第一次为蟾皮5 6倍，第二次为蟾皮6 7 倍。
5.如权利要求I所述的方法，其特征在于乙醇沉淀次数为两次，沉淀时间第一次为24 小时，第二次为48小时，乙醇浓度第一次为60%，第二次为85%。
6.如权利要求I所述的方法，其特征在于所述的大孔树脂为下述类型的大孔树脂 SP207、SP825、HP-20、HP-2MG、XAD1600, D-101、AB-8、MCI 或 HPD。
7.如权利要求I所述的方法，其特征在于所述的大孔树脂的径长比为1:5 1:50;大孔树脂的用量为上样量的30 130倍。
8.如权利要求I所述的方法，其特征在于将粗提物上大孔树脂柱的上样方法为湿法上样，以O. I 5倍柱体积/小时的流速上样进柱,上样温度为10 60°C。
9.如权利要求I所述的方法，其特征在于所述水的用量为I 8倍柱体积，用水洗脱的流速为I 5倍柱体积/小时，梯度洗脱的温度为10 60°C。
10.如权利要求I所述的方法，其特征在于所述的梯度洗脱的洗脱梯度在体积比0% 有机溶剂和体积比为100%有机溶剂的浓度范围内选择，每个梯度的洗脱液的用量为5 20 柱体积，洗脱的流速为I 5倍柱体积/小时，梯度洗脱的温度为10 60°C。
11.如权利要求I所述的方法，其特征在于所述的大孔树脂为SP825大孔树脂，所述的梯度洗脱中，洗脱梯度依次为5%乙醇水溶液，40%乙醇水溶液，纯乙醇，收集40%乙醇水溶液的洗脱部分；或者，所述的大孔树脂为DlOl型大孔树脂，所述的梯度洗脱中，洗脱梯度依次为5%丙酮水溶液，40%丙酮水溶液，纯丙酮，收集40%丙酮水溶液的洗脱部分；或者，所述大孔树脂为HP-20大孔树脂，所述的梯度洗脱中，洗脱梯度依次为20%甲醇水溶液，40%甲醇水溶液,纯甲醇,收集20%甲醇水溶液的洗脱部分，以及部分40%甲醇水溶液的洗脱部分；或者所述大孔树脂为SP207大孔树脂，所述的梯度洗脱中，洗脱梯度依次为10%甲醇水溶液，50%甲醇水溶液,纯甲醇,收集10%甲醇水溶液的洗脱部分，以及部分50%甲醇水溶液的洗脱部分；百分比为体积百分比。
12.如权利要求I所述的方法，其特征在于所得大孔树脂洗脱液经硅胶柱层析，收集以体积比为80:20:2. 5的氯仿、甲醇、水为展开剂，硅胶薄层层析板上Rf值为O. 2 O. 5的洗脱部分。
13.如权利要求I所述的方法，其特征在于所得硅胶柱层析洗脱液经ODS柱层析，依次用纯水，5% 10%乙腈水溶液，50%乙腈水溶液梯度洗脱，收集5% 10%乙腈水溶液洗脱部分，结晶，得到蟾蜍噻咛纯品。
全文摘要
本发明公开了一种提取蟾蜍噻咛的方法，具体包括如下步骤取干蟾皮洗净，加水5～8倍，煎煮二次，第一次45分钟，第二次30分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.1～1.2(85±5℃)，冷却至40℃，加乙醇使含醇量达60%，搅匀，静置24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，加乙醇使含醇量达85%，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇至稠膏。水提物上大孔树脂柱，用水洗脱，之后用下述有机溶剂中的一种或多种与水作为洗脱剂进行梯度洗脱乙醇、甲醇和丙酮，收集洗脱部分，减压浓缩，干燥，经硅胶柱层析、ODS柱层析分离，合并蟾蜍噻咛流份，结晶，得蟾蜍噻咛纯品。本发明所得蟾蜍噻咛纯度和收率较高，且工艺简单，易于大量生产。
文档编号C07D471/06GK102603742SQ20121003950
公开日2012年7月25日 申请日期2012年2月22日 优先权日2012年2月22日
发明者罗川, 高波 申请人:安徽金蟾生化股份有限公司