一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法

专利名称：一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法
技术领域：
本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种快速从博落回中提取分 离五种生物碱的新方法。二、技术背 景
博落回系Il粟科(Papaveraceae )博落回属(Macleaya )植物，该属有博落回(麗cor data (Willd) R. Br.)和小果博落回(# microcarpa (Maxim) Fedde)两个种,在我国分布广泛，资源丰富，其性寒，味辛，苦涩，有清热解毒，抗菌消炎，杀虫止痒等功效，民间用于治疗疥廯，疗毒以及杀虫灭蛆等。博落回的富含生物碱成分，主要含有血根碱(sanguinarine)、白屈菜红碱(chelerythrine)、普罗托品(protopine)、隐品碱(cryptopine)和别隐品碱(Allocryptopine)等。博落回生物碱具有广泛而重要的药理活性，主要表现为为抗肿瘤活性、抗微生物活性和杀虫活性。博落回提取物或其生物碱可用于制备农用、动物用和人用杀虫剂和抗菌剂，亦可用于制备抗癌药物。博落回生物碱的重要应用为建立快速大量分离博落回生物碱各单体成分的方法和工艺提出了迫切的要求。血根碱和白屈菜红碱属于季铵型苯并菲啶类生物碱，二者分子结构和理化性质非常相似，而且都具有较高的化学活性，能够与碱、氨、胺、醇、丙酮、氧化剂和还原剂等物质反应，常规的分离方法很难将二者有效地分离开。普罗托品、别隐品碱和隐品碱同属普托品类生物碱，三者分子结构和色谱行为也极为相近，因此，其分离纯化同样存在一定的难度。范伏田等人曾报道了聚乙烯薄膜柱分离血根碱和白屈菜红碱的方法。陈波等人公开了一种使用大孔树脂玻璃柱层析分离制备血根碱和白屈菜红碱的方法(专利申请号03118201. I)。王春红等公开了一种使用自己合成的聚苯乙烯吸附树脂分离制备血根碱和白屈菜红碱的方法(专利申请号200610129355. 6)。李发旺等人报道了使用阳离子树脂和硅胶柱层析分离血根碱和白屈菜红碱的方法。马铭等人公开了一种液膜分离提取博落回中生物碱的方法(专利申请号CN200710035400.6)。曾建国公开了一种使用大孔树脂制备普托品类生物碱提取物的方法(专利申请号CN200810143628. I)。此外，还有不少人采用硅胶或氧化铝层析来分离少量血根碱和白屈菜红碱。以上分离方法的共同缺点是分离操作过程繁琐，分离周期长、劳动强度大、效率低、成本高，分离对象单一等。已报道或公开的方法都是针对博落回总生物碱的制备、血根碱和白屈菜红碱的分离或普罗托品类总生物碱的制备。目前，尚未见到有关大量制备博落回中五种生物碱单体的分离报道。
发明内容
本发明是为了解决上述技术背景的不足，提供一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法，此方法具有操作简单、效率高、成本低、产物纯度和回收率高以及适合于工业规模化生产的优点。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法，其特征在于所述的分离方法的步骤为1)对博落回干粉进行溶剂提取，得提取液；
2)依次用乙酸乙酯和正丁醇对提取液进行萃取，分别得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取
物； 3)对乙酸乙酯萃取物进行处理，得高纯度血根碱和白屈菜红碱；
4)对正丁醇萃取物进行处理，得高纯度普罗托品、隐品碱、别隐品碱。所述的步骤I)中用乙醇作溶剂，对博落回干粉进行间歇式超声波辅助溶剂提取，料液比为1:7 1:10 (kg/L)，提取温度30 50°C，提取次数3次，每次提取时间30 60分钟，将三次提取液合并，减压浓缩至原液体积的1/10，静置后负压抽滤，除去不溶性杂质，得滤液A，将除杂后的滤液A再次浓缩至其体积的1/5，加入等体积的水得提取液。所述的步骤2)中依次用乙酸乙酯和正丁醇对提取液进行萃取，将乙酸乙酯和正丁醇萃取液分别减压浓缩至干，得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。对步骤3)乙酸乙酯萃取物进行处理，得高纯度血根碱和白屈菜红碱的具体步骤为用无水乙醇对乙酸乙酯萃取物进行溶解，边搅拌边加入硼氢化钠，每隔5-10分钟用薄层色谱(TLC)检测一次，当溶液中检测不出血根碱和白屈菜红碱时，减压蒸除溶剂，向残留物中加入二氯甲烷，搅拌5-10分钟后滤除不溶物，收集滤液B，向滤液B中加入柱层析硅胶，减压蒸除溶剂至干，将所得硅胶粉末进行硅胶柱层析，先用氯仿洗脱，分步收集洗脱液，当第一个主要生物碱成分洗脱完毕后(薄层色谱检测，碘化铋钾显色)，改用氯仿-丙酮混合液洗脱，直至第二个主要生物碱成分全部洗脱完毕为止，将含有第一个主要生物碱成分的流份合并得洗脱液F-I，将第二个主要生物碱成分的流份分别合并得洗脱液F-2，将洗脱液F-I减压蒸除溶剂，用无水乙醇溶解残留物，加入相当于残留物质量碘，加热搅拌回流2小时，然后使其冷却至室温，在搅拌下向其中滴加饱和亚硫酸钠，直至溶液棕色褪去为止，抽滤，用无离子水洗涤沉淀3-5次，收集沉淀，30 40 °C烘干，得到血根碱精品，用相同的处理洗脱液F-I的方法处理洗脱液F-2，得白屈菜红碱精品。步骤4)中对正丁醇萃取物进行处理得高纯度普罗托品、隐品碱、别隐品碱的具体步骤为用5%Na0H溶液溶解正丁醇萃取物，用二氯甲烷萃取，用无离子水和饱和食盐水洗涤二氯甲烷萃取液各I次，将二氯甲烷浓缩至其体积的1/6左右，然后向其中加入柱层析硅胶，减压蒸除溶剂，得负载有萃取物的硅胶粉末，对后者进行硅胶柱层析分离，乙酸乙酯为溶剂湿法装柱，乙酸乙酯-甲醇混合液(20:1，V/V)为洗脱剂，分步收集，薄层色谱对各流份进行检测，将含普罗托品、隐品碱和别隐品碱的各流份分别合并，蒸除溶剂，经甲醇或氯仿-甲醇混合液重结晶可得高纯度普罗托品、隐品碱、别隐品碱。所述的间歇式超声波提取的单次连续超声时间为5秒，两次超声之间的时间间隔为I秒，超声功率1600 W。所述的步骤I)中的提取液作为萃取溶剂可循环使用。所述的血根碱和白屈菜红碱是以血根碱碘化盐和白屈菜红碱碘化盐形式存在与血根碱和白屈菜红碱中。所述的高纯度为纯度彡95%。与现有技术相比，本发明具有的有点和效果如下(1)在提取博落回生物碱成分时，本发明采用了超声波辅助溶剂提取法。该法具有提取温度低、提取效率高和不易破坏目标成分的优点。
(2)在除去叶绿素方面，本发明采取的方法是将提取液浓缩至一定体积后静置沉淀。该法具有操作简单和除杂彻底的优点。(3)在萃取目标物方面，本发明采取的方法是将浓缩后的提取液用水稀释I倍，然后依次用乙酸乙酯和正丁醇依次提取。该方法不仅操作方便，而且能够将苯并菲啶类生物碱(血根碱和白屈菜红碱)和普罗托品类生物碱(普罗托品、隐品碱、别隐品碱)有效分开并分别富集，同时还可有效除去水溶性非生物碱成分。(4)在分离血根碱和白屈菜红碱方面，本发明采取的方法是先通过化学反应将二者转化成各自的二氢化合物，然后再对后者进行柱层析分离，最后再将二者的二氢化合物通过化学反应分别转化成碘化血根碱和碘化白屈菜红碱，纯度> 95%。此法可有效避免因血根碱和白屈菜红碱化学性质活泼而对其分离效果产生不利影响。同时，二氢血根碱和二氢白屈菜红碱具有化学性质稳定和易于分离的优点。(5)在三种普罗托品类生物碱的分离方面，本发明采用一次硅胶闪柱层析即可获得纯度较高的三种目标化合物。后者分别通过一次重结晶，即可获得三种高纯度化合物(纯度彡95%)。(6)本发明所建立的方法可用于有博落回分离制备高纯度的血根碱、白屈菜红碱、普罗托品、隐品碱和别隐品碱。所得产品可直接作为农药、动物药和人药的原料药。具体实施例方式 本发明的分离方法的步骤为
1)对博落回干粉进行溶剂提取，得提取液；
用乙醇作溶剂，对博落回干粉进行间歇式超声波辅助溶剂提取，料液比为1:7 1:10(kg/L)，提取温度30 50°C，提取次数3次，每次提取时间30 60分钟，单次连续超声时间为5秒，两次超声之间的时间间隔为I秒，超声功率1600 W，将三次提取液合并，减压浓缩至原液体积的1/10，静置后负压抽滤，除去不溶性杂质，得滤液A，将除杂后的滤液A再次浓缩至其体积的1/5，加入等体积的水得提取液，提取液作为萃取溶剂可循环使用。2)依次用乙酸乙酯和正丁醇对提取液进行萃取，分别得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；
用乙酸乙酯和正丁醇对提取液进行萃取，将乙酸乙酯和正丁醇萃取液分别减压浓缩至干，得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。3)对乙酸乙酯萃取物进行处理，得高纯度血根碱和白屈菜红碱；
用无水乙醇对乙酸乙酯萃取物进行溶解，边搅拌边加入硼氢化钠，每隔5-10分钟用薄层色谱(TLC)检测一次，当溶液中检测不出血根碱和白屈菜红碱时，减压蒸除溶剂，向残留物中加入二氯甲烷，搅拌5-10分钟后滤除不溶物，收集滤液B，向滤液B中加入柱层析硅胶，减压蒸除溶剂至干，将所得硅胶粉末进行硅胶柱层析，先用氯仿洗脱，分步收集洗脱液，当第一个主要生物碱成分洗脱完毕后(薄层色谱检测，碘化铋钾显色)，改用氯仿-丙酮混合液洗脱，直至第二个主要生物碱成分全部洗脱完毕为止，将含有第一个主要生物碱成分的流份合并得洗脱液F-1，将第二个主要生物碱成分的流份分别合并得洗脱液F-2，将洗脱液F-I减压蒸除溶剂，用无水乙醇溶解残留物，加入相当于残留物质量碘，加热搅拌回流2小时，然后使其冷却至室温，在搅拌下向其中滴加饱和亚硫酸钠，直至溶液棕色褪去为止，抽滤，用无离子水洗涤沉淀3-5次，收集沉淀，30 40 °C烘干，得到血根碱精品，用相同的处理洗脱液F-I的方法处理洗脱液F-2，得白屈菜红碱精品。4)对正丁醇萃取物进行处理，得高纯度普罗托品、隐品碱、别隐品碱。用5%Na0H溶液溶解正丁醇萃取物,用二氯甲烧萃取,用无离子水和饱和食盐水洗涤二氯甲烷萃取液各I次，将二氯甲烷相浓缩至其体积的1/6左右，然后向其中加入柱层析硅胶，减压蒸除溶剂，得负载有萃取物的硅胶粉末，对后者进行硅胶柱层析分离，乙酸乙酯为溶剂湿法装柱，乙酸乙酯-甲醇混合液(20:1，V/V)为洗脱剂，分步收集，薄层色谱对各流份进行检测，将含普罗托品、隐品碱和别隐品碱的各流份分别合并，蒸除溶剂，经甲醇或氯仿-甲醇混合液重结晶可得高纯度普罗托品、隐品碱、别隐品碱。所述的血根碱和白屈菜红碱是以血根碱碘化盐和白屈菜红碱碘化盐形式存在与血根碱和白屈菜红碱中。所述的高纯度为纯度彡95%。实施例
(I)取1.0 kg博落回干燥粉末(全草或种子或地上部分或根)，按照料液比为1:7 1:10 (kg/L)加入工业乙醇。采用间歇式超声波辅助进行提取，提取温度30 50°C，提取次数3次，每次提取时间30 60分钟，单次连续超声时间为5秒，两次超声之间的时间间隔为I秒，超声功率1600 W。(2)将提取液采用负压或离心过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至约1.0 L，静置过夜。(3)将上述浓缩液减压滤除沉淀物。再将滤液浓缩至0. 2 L，补加0.2 L无离子水摇匀，依次用乙酸乙酯(3X0. 2 L)和正丁醇(3X0. 2 L)萃取。分别减压乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液至干，得固体状乙酸乙酯萃取物(I )(主要含有血根碱和白屈菜红碱)和粘稠状正丁醇萃取物(II)(主要含普罗托品、隐品碱、别隐品碱)。(4)将萃取物(I )用0. 2 L无水乙醇溶解，在室温搅拌下每隔10 min加入一次硼氢化钠(3X0. 3 g)，期间用TLC跟踪检测反应体系。约30 min后，TLC显示溶液中已无血根碱和白屈菜红碱。停止搅拌，减压滤除沉淀，收集滤液。将滤液减压蒸除溶剂，加入0.2L 二氯甲烷，搅拌或超声波处理5-10分钟，减压滤除沉淀，收集滤液。向滤液(B)中加入约5-10 g柱层析硅胶，减压蒸除溶剂，得粉末状载样硅胶。(5)取100 200 g柱层析硅胶(粒度200 300目)，以三氯甲烷为溶剂，湿法装柱(04X40 cm)。将上述(4)所得的粉末状载样硅胶加到装好的硅胶柱柱面上，在加压下用三氯甲烷进行洗脱，分步收集，每份20 ml (约为柱体积的1/10)。洗脱速度为每分钟流出的洗脱液体积约为柱体积的1/10。用TLC检测各流份(石油醚-乙酸乙酯，5:1，二氢血根碱R,0. 61，二氢白屈菜红碱& 0. 51 ;三氯甲烷，二氢血根碱&0. 64，二氢白屈菜红碱& 0.29)。当第一个主要生物碱成分(二氢血根碱)全部流出柱子后，改用氯仿-丙酮(50:1，V/V)洗脱，直至第二个主要生物碱成分(二氢白屈菜红碱)全部洗脱下来。将含有二氢血根碱和二氢白屈菜红碱的流份分别合并，减压蒸除溶剂后，分别得二氢血根碱和二氢白屈菜红碱。(6)用约30 mL无水乙醇溶解二氢血根碱，加入相当于二氢血根碱质量3 5倍的碘，加热搅拌回流2小时，然后使其冷却至室温，在搅拌下向其中滴加饱和亚硫酸钠，直至溶液棕色褪去为止。抽滤，用无离子水洗涤沉淀3-5次，收集沉淀，30 40 °C烘干，得到血根碱碘化盐(sanguinarine iodide)精品(纯度彡95%)。同法(5)中所得的二氢白屈菜红碱，得白屈菜红碱碘化 盐(chelerythrine iodide)精品(纯度> 95%)。(7)用0. I L 5%Na0H溶解(3)中所得的正丁醇萃取物(II)，用3X0. I L 二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷萃取液，用少量无离子水洗涤2次，饱和食盐水洗涤I次。向二氯甲烷溶液中加入5-10克柱层析硅胶(粒度200 300目)，减压蒸除溶剂后得粉末状载样硅胶。(8)以乙酸乙酯为溶剂，以柱层析硅胶为吸附剂(粒度200 300目)进行湿法装柱(04X40 cm)。将(7)中所得粉末状载样硅胶加到硅胶柱柱面上。仿照(5)的方法，用乙酸乙酯-甲醇(20:1，V/V)混合液进行洗脱，分步收集，用TLC检测各流份(乙酸乙酯-甲醇，3:1，普罗托品R, 0.42，隐品碱R, 0. 25，别隐品碱R, 0. 16 ;氯仿-甲醇，5: 1，普罗托品R, 0. 51，隐品碱R, 0. 44，别隐品碱& 0. 33)。分别合并含有相同成分的流份，减压蒸除溶剂，分别得较高纯度的普罗托品、隐品碱、别隐品碱。将三种生物碱分别用甲醇或甲醇-氯仿混合溶液重结晶，可得普罗托品、隐品碱、别隐品碱的精品(纯度>95%)
碘化血根碱橙红色结晶，熔点244 0C -245 0C (H2O-MeOH) ; ES I-MS (+) m/z\ 332[M] + ;13C-MMR(125 MHz, CD3OD) S 107. 2 (C-I), 150.6(02)，150.6(03)，105.2(C-4), 121.8(C-4a), 133. 0(C-4b), 150.7(06)，111. I (C-6a), 148.1(07)，149. 3(C-8), 121. 4(C-9), 118. 4(C-IO), 128. 9(C-IOa), 127. 4(C-IOb), 119. 8(C-Il),133. 0(C-12), 133. 9(C-12a), 104. 3(2，3-0CH20-)，06. 5 (7，8-0CH20_)，53. 2 (N-Me). 1HNMR (CDOD3, TMS) S 9.95 (1H, s, H_6)，8. 57 (1H, d, /8.9 Hz, H-I I), 8.48 (1H,d, /8.8 Hz, H-10), 8.19(1H, d, /8.9 Hz, H-12), 8.13(1H, s, H_4)，7.95 (1H,d, /8.8 Hz, H-9), 7. 55 (1H, s, H_l), 6. 54 (2H, s, I, 2-OCH20-), 6. 30 (2H, s,7，8-0CH20-)，4. 49 (3H, s, N-CH3).
碘化白屈菜红碱淡黄色针状晶体；熔点199°C _200°C (H2O-MeOH) ; ESI-MS (+)m/z\ 348 [M] + ; 13C NMR (125 MHz, CD3OD) S 107. 3 (C-I), 151.0(02)，150.9(03)，105. 3(C-4), 121. 8(C-4a), 133. 5(C-4b), 152.1(06)，120. I (C-6a), 147.6(07)，151. 8(C-8), 127. 6(C-9), 120. 9(C-IO), 130. I (C-IOa), 127. 2(C-IOb), 119. 7(C-Il),63. 2(7-0Me), 57. 8 (8-OMe), 132.8(012)，134. 3 (C_12a)，104. 5 (2，3-0CH20_)，53. 2 (N-Me). 1H NMR (CDOD3, TMS) S 9.92 (1H, s, H_6)，8.60 (1H, d, /9.0 Hz,H-10), 8. 56 (1H, d, /9.0 Hz, H-I I), 8.10(1H, d, /9.0 Hz, H-12), 8.08(1H, s,H-4), 8.10(1H, d, /9.0Hz, H-9), 7.49 (1H, s, H_l), 6.26(2 s, -OCH2O-), 4.97(3H, s, N-CH3), 4. 27 (3H, s, 7-OCH3), 4.12(3H, s, 8_0CH3)
普罗托品无色结晶(氯仿-甲醇)，UV Amax (nm, EtOH) : 210, 230, 286. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) 8 (ppm) : 6.9 (s, 1H, H-1)，6.65 (s, 1H, H-4)，2. 56 (br, 4H,H-5, H-6), I. 92 (s, 3H, N-CH3), 3. 59 (br, 2H, H—8)，6. 67 (d, /8.0Hz, 1H, H-I I),6. 68 (d, /8.0 Hz, 1H, H-12), 3. 92 (br, 2H, H-13), 5. 95 (s, 2H, 2，3-0CH20_)，5. 93 (s, 2H, 9, IO-OCH2O-) ; 13C 匪R (100MHz, CDCl3) S (ppm) : 195. 0 (C-14)，148. 0 (C_
3), 146. 3(C-2), 146.0 (C-9), 145. 8 (C-IO), 136. I(C_14a)， 132. 7(C-4a), 128. 9 (C12a), 125.0(C-12), 118. 0(C-8a), 110.5(04)， 108. 2 (C-I), 106. 7 (C-ll),100. 8(2，3-0CH20-)，101.2 (9，IO-OCH2O-)，57.7(C-6)，50.8(C-8)，46.4(013)，41. 4 (N-CH3), 31. 7 (C-5). EI-MS (相对丰度 ) 353 [M+] (2)，338 [M-CH3] (I),309(1)，281(2)，267(7)，25 (4)，223(2)，209(5)，190(10), 163(20)，148(100)，134(12)，91(13)
别隐品碱无色结晶(氯仿-甲醇)，熔点170°C 171°C . UV Amax (nm, EtOH) : 210，292. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 8 (ppm) : 6. 95 (s, 1H, H-1), 6. 91 (d, /8.0Hz, 1H,H-12), 6. 79 (d, /8.0Hz, 1H, H-I I), 6. 63 (s, 1H, H-4), 5. 92 (s, 2H, 2，3-0CH20_)，3. 84 (s, 3H, -0CH3)，3. 77 (s, 3H, -OCH3)，3. 74 (br, 2H, H_8)，3. 2 3. 4 (br, 2H,H-13), 2. 4 2.8 (br, 4H, H-5, H-6), I. 85 (s, 3H, NCH3) ; 13C NMR (125 MHz, CDCl3)8 (ppm) : 193.1(C-14), 151. 5 (C-9), 148.0(03)，147. 2 (C-IO), 146.0(02)，135. 9 (C-4a), 132. 83 (C_14a)，129.5 (C_12a), 128. 3 (C-8a), 127.7(012)，110.5(C-11), 110. 4(C-4), 109. 3 (C-I), 101.2(015)，60. 7 (9_0CH3)，57. 4 (C_6)，55. 5 (IO-OCH3), 50. I (C-8), 46.2(013)，41. 2 (N-CH3), 32. 3 (C-5). EI-MSm/z (相对丰度)369 [M+] (4)，354. 0 [M+-CH3] (4. 5), 338 [M+-OCH3]⑷，283(11)，206(21)，164(100)，163(31)，149(28)，134(15).
隐品碱无色结晶(氯仿-甲醇)，熔点221°C 223°C ASI-MS ( + ) m / z 370 [M+ H ] +。1 H-NMR (CDCl3，500MHz) 8 I. 90 ( 3H, s, N-CH3 )，2. 57 ( 2H, br, H-6),2.95 ( 2H, br, H-5 )，3.64 ( 2H, br, H_8 )，3.76 ( 2H, br, H-13 ) , 3.89 (6H, s, OCH3 X 2 )，5.93 ( 2H, s, -OCH2O-) , 6.67 ( 1H, s, H-4 ) , 6. 70 ( 2H, m,H-ll, 12)，7.00 (1H, s, H-1) . 13 C-NMR (CDCl3 , 125 MHz) 8 106.8 (C-I)，146.4(C-2)，149.5 (C-3)，112.3 (C_4)，134.7 (C_4a)，32. 2 (C-5)，57. 6 (C_6)，41.4 OV -CH3 )，50. 5 (C-8)，129.4 (C_8a)，147.3 (C-9)，146.1(C_10 )，113.6(C-Il )，125.0 ( C-12 )，117.5 ( C-12a)，46. I (C—13)，131.2 (C_14a)，100.9(-0CH20-9, 10)，56.0 (0CH3-2)，55.9 (0CH3_3)，198. 5 ( -C =0)。
权利要求
1.一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法，其特征在于所述的分离方法的步骤为 1)对博落回干粉进行溶剂提取，得提取液； 2)依次用乙酸乙酯和正丁醇对提取液进行萃取，分别得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； 3)对乙酸乙酯萃取物进行处理，得高纯度血根碱和白屈菜红碱； 4)对正丁醇萃取物进行处理，得高纯度普罗托品、隐品碱、别隐品碱。
2.根据权利要求I所述的一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法，其特征在于所述的步骤I)中用乙醇作溶剂，对博落回干粉进行间歇式超声波辅助溶剂提取，料液比为1:7 1:10 (kg/L)，提取温度30 50°C，提取次数3次，每次提取时间30 60分钟，将三次提取液合并，减压浓缩至原液体积的1/10，静置后负压抽滤，除去不溶性杂质，得滤液A，将除杂后的滤液A再次浓缩至其体积的1/5，加入等体积的水得提取液。
3.根据权利要求2所述的一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法，其特征在于所述的步骤2)中依次用乙酸乙酯和正丁醇对提取液进行萃取，将乙酸乙酯和正丁醇萃取液分别减压浓缩至干，得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。
4.根据权利要求3所述的一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法，其特征在于对步骤3)乙酸乙酯萃取物进行处理，得高纯度血根碱和白屈菜红碱的具体步骤为用无水乙醇对乙酸乙酯萃取物进行溶解，边搅拌边加入硼氢化钠，每隔5-10分钟用薄层色谱(TLC)检测一次，当溶液中检测不出血根碱和白屈菜红碱时，减压蒸除溶剂，向残留物中加入二氯甲烷，搅拌5-10分钟后滤除不溶物，收集滤液B，向滤液B中加入柱层析硅胶，减压蒸除溶剂至干，将所得硅胶粉末进行硅胶柱层析，先用氯仿洗脱，分步收集洗脱液，当第一个主要生物碱成分洗脱完毕后(薄层色谱检测，碘化铋钾显色)，改用氯仿-丙酮混合液洗脱，直至第二个主要生物碱成分全部洗脱完毕为止，将含有第一个主要生物碱成分的流份合并得洗脱液F-1，将第二个主要生物碱成分的流份分别合并得洗脱液F-2，将洗脱液F-I减压蒸除溶剂，用无水乙醇溶解残留物，加入相当于残留物质量碘，加热搅拌回流2小时，然后使其冷却至室温，在搅拌下向其中滴加饱和亚硫酸钠，直至溶液棕色褪去为止，抽滤，用无离子水洗涤沉淀3-5次，收集沉淀，30 40 °C烘干，得到血根碱精品，用相同的处理洗脱液F-I的方法处理洗脱液F-2,得白屈菜红喊精品。
5.根据权利要求4所述的一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法，其特征在于步骤4)中对正丁醇萃取物进行处理得高纯度普罗托品、隐品碱、别隐品碱的具体步骤为用5%NaOH溶液溶解正丁醇萃取物,用二氯甲烧萃取,用无离子水和饱和食盐水洗漆二氯甲烷萃取液各I次，将二氯甲烷浓缩至其体积的1/6左右，然后向其中加入柱层析硅胶，减压蒸除溶剂，得负载有萃取物的硅胶粉末，对后者进行硅胶柱层析分离，乙酸乙酯为溶剂湿法装柱，乙酸乙酯-甲醇混合液(20:1，V/V)为洗脱剂，分步收集，薄层色谱对各流份进行检测，将含普罗托品、隐品碱和别隐品碱的各流份分别合并，蒸除溶剂，经甲醇或氯仿-甲醇混合液重结晶可得高纯度普罗托品、隐品碱、别隐品碱。
6.根据权利要求5所述的一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法，其特征在于所述的间歇式超声波提取的单次连续超声时间为5秒，两次超声之间的时间间隔为I秒，超声功率1600 W。
7.根据权利要求6所述的一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法，其特征在于所述的步骤I)中的提取液作为萃取溶剂可循环使用。
8.根据权利要求7所述的一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法，其特征在于所述的血根碱和白屈菜红碱是以血根碱碘化盐和白屈菜红碱碘化盐形式存在与血根碱和白屈菜红碱中。
9.根据权利要求8所述的一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法，其特征在于所述的高纯度为纯度> 95%。
全文摘要
本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种快速从博落回中提取分离五种生物碱的新方法。其提取分离方法的步骤为1)对博落回干粉进行溶剂提取，得提取液；2)依次用乙酸乙酯和正丁醇对提取液进行萃取，分别得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；3)对乙酸乙酯萃取物进行处理，得高纯度血根碱和白屈菜红碱；4)对正丁醇萃取物进行处理，得高纯度普罗托品、隐品碱、别隐品碱。本发明具有操作简单、效率高、成本低、产物纯度和回收率高以及适合于工业规模化生产的优点。
文档编号C07D491/056GK102617583SQ20121005891
公开日2012年8月1日 申请日期2012年3月8日 优先权日2012年3月8日
发明者周乐, 潘萌, 苗芳, 郑峰 申请人:西北农林科技大学