专利名称：中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及分子生物学和生物技术领域，具体为中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物及其制备方法和应用。
背景技术：
脊椎动物的促性腺释放激素(GnRH)是下丘脑分泌、由十个氨基酸组成的神经多肽激素，GnRH作为下丘脑-垂体-性腺轴关键信息分子，通过与脑垂体中的GnRH特异受体相结合，从而刺激促性腺激素(GSH)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)的产生与释放，刺激排卵、提高怀孕率及抑制卵巢发育障碍，起着调节生殖活动的作用。二十世纪七十年代研究人员开始GnRH的研究，1971年Schally等从猪的下丘脑中提纯出一种激素可以促进LH释放,经过6年的研究确定该激素是氨基酸序列为pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 的十肽，命名为促黄体释放激素(LHRH) (SCHALLY, ARIMURA, KASTIN，et al. Gonadotropin-releasing hormone one polypeptide regulates secretionof luteinizing and follicle-stimulating hormones[J] Science，1971，173(4001)1036-1038.)。在之后的几十年研究中又陆续发现多种GnRH类似物，同时证实其具有促进FSH释放功能，最终将这类多肽命名为GnRH。迄今为止，在脊椎动物中已经发现14种GnRH类型(0. Kah, C. Lethimonier,G. Somoza, L. G. Guilgur, C. Vaillant, J. J. Lareyre, GnRH and GnRH receptors inmetazoa a historical, comparative, and evolutive perspective, Gen. Comp.Endocrinol. 153(2007)346-364.)，采用首次发现物种对其命名。这些不同类型分别为哺乳类(mGnRH)、豚鼠(gpGnRH)、鸡(cGnRH-I)、鸡(cGnRH-II)、牛蛙(rGnRH)、鲷鱼(sbGnRH)、鲑鱼(sGnRH)、白鲑(WfGnRH)、青鏘(mdGnRH 或 p jGnRH)、鲶鱼(cfGnRH)、鲱鱼(hrGnRH)、鲨鱼(dfGnRH)、七鳃鳗(IGnRH-I)、七鳃鳗(IGnRH-II)、七鳃鳗(IGnRH-III)。根据生理、结构、分布的不同，将脊椎动物GnRH分为四类=GnRH-I在位于前脑的视前叶位置神经元中合成，转运到中间隆起位置，最后在下丘脑部位释放，通过刺激FSH与LH的合成与释放，对下丘脑-垂体-性腺轴进行最终调控；GnRH-II在中脑合成，推测其作用作为神经递质(Tsai, P.-S.,2006. Gonadotropin-releasing hormone in invertebrates-structure,function, and evolution. Gen. Comp. Endocrinol. 148,48-53.) ;GnRH_III 在端脑合成，参与调控交配等生殖过程(Fernald, R. D.，White, R. B. , 1999. Gonadotropin-releasinghormone genes phylogeny, structure, and functions.Front.Neuroendocrin.20,224-240.) ；GNRH-IV的代表类型为IGnRH-I和IGnRH-III，由间脑和脑室部位合成(Silver, M. R. , Kawauchi, H. , Nozaki, M. , Sower, S.A.,2004. Cloning andanalysis ofthe lamprey GnRH-III cDNA from eight species of lamprey representing the threefamilies of Petromyzoniformes. Gen. Comp. Endocrinol. 139,85-94.),在下丘脑部位释放，其功能还有待研究。
GnRH作为一种关键性生殖调控因子，其氨基酸序列组成上具有高度保守性，其中I、4、9、10位氨基酸序列完全相同，在2及3位氨基酸除了 gpGnRH与IGnRH-I之外的类似物均一样。第I 3位是与效应细胞上的受体结合点，并经过细胞膜的Ca2+通道进入细胞，第4-10位氨基酸残基参与受体结合。由第2和第6位氨基酸作为主要活性基团决定其功能，同时，在促性腺激素合成及释放中，第8位氨基酸为调控的关键位点(P. S. Tsai，L. Zhang,Theemergence and loss of gonadotropin-releasing hormone in protostomes orthology,phylogeny, structure, and function, Biol. Reprod. 79 (2008) 798-805.)。通过改造 GnRH多肽结构，现在已经开发出超过2000种GnRH类似物，例如，在动物繁殖控制中GnRH-A已经开始商品化广泛应用。在鱼类水产养殖中，应用GnRH诱导鱼类产卵成为了鱼类人工繁育中普遍采用的方法，为水产养殖业带来了巨大经济效益。GnRH是一种古老的多肽家族，在尾索动物亚门的被囊类中已发现9种GnRH类似物，这些GnRH类似物同样为十肽结构并且与脊椎动物具有相同的氨基酸保 守位置。免疫鉴定研究表明在头索动物、半索动物、棘皮动物、节肢动物、扁形动物、软体动物等非脊椎动物中都存在GnRH类似物(方永强，黄威权，陈蕾.GnRH在文昌鱼脑和哈氏窝的分布[J].动物学报，1999,45(1) :106-11 ；RAST0GI R K，DI FIORE M M, D ANIELL0 A,et al. GnRH in the invertebrates onoverview[J]. Prog Brain Res,2002,141,19-29 ;ANCTIL M，TEKAYA S. Gonadotropin-releasing hormone-like immunoreactivity in theplanarian delloura Candida(Platyhelminthes，Tricladida)[J]. Invert Bio,2005,1124 :11-17.)。与脊椎动物GnRH相似，非脊椎动物GnRH类似物也具有调控生殖的作用。在田螺(Helisoma trivolvls)中证实合成的mGnRH能剌激产卵量增加(YOUNG, CHANG,GOLDBERG. Gonadotropin-releasing hormone neuronal system of the freshwatersnails Helisoma trivolvis and Lymnaea stagnalis !possible involvement inreproduction[J]. J Comp Neurol，1999，404(4) :427-437.)，被囊类(Ciona intestinalis)的性腺进行离体培养时加入mGnRH和cGnRH_I能够促进性腺类固醇激素的释放，t GnRH-11 可以剌激半索动物(Saccoglossus bromopheno Iosus)配子释放(Di FI0RE，RAST0GI，CECILIANI，et al. Mammalian and chicken I forms of gonadotropin-releasinghormone in the gonads of a protochordate, Ciona intestinalis [J].Proc NatlAcad Sci U S A, 2000,97 (5) :2343-2348.)。在斑节对虾中注射 LHRH、sGnRH、IGnRH-I后具有明显促进卵巢成熟作用，推测甲壳类动物卵巢发育也是通过GnRH类似物进行调控(NGERNSOUNGNERN， NGERNSOUNGNERN， WEERACHATYANUKUL， et al.The existence ofgonadotropin-releasing hormone (GnRH)immunoreactivity in the ovary and theeffects of GnRHs on the ovarian maturation in the black tiger shrimp Penaeusmonodon[J]. Aquaculture，2008，279(1-4) :197-203.)。迄今在章鱼(Octopusvulgaris)、海兔(Aplysia californica)、海胆(Strongylocentrotus purpuratus)、帽贝(Lottia gigantea)、海螺虫(Capitellateleta)、水虫至(Helobdella robusta)以及 3 种被囊类(Chelyosoma productum、Cionaintestinalis、Ciona savignyi)中共发现 15 种非脊椎动物 GnRH 类似物(R0CH，BUSBY，SHERWOOD. Evolution of GnRH diving deeper[J]. Gen Comp Endocrinol，2011，171(I)1-16.)。虽然在非脊椎动物发现多种GnRH类似物，但是大多并未实际分离出多肽，仅是在mRNA水平获得相应序列进行推断氨基酸序列，只有在章鱼(Octopus vulgaris)应用反向高压液相色谱(RP-HPLC)技术首次分离出无脊椎动物GnRH类似物octGnRH，经N-端及C-端氨基酸测序表明该类似物为十二个氨基酸短肽，氨基酸序列为pGlu-ASn-Tyr-HiS-Phe-Ser-Asn-Gly-Trp-His-Pro-Gly-NH2,与脊椎动物GnRH具有相似氨基酸保守位点，人工合成的octGnRH可以促进鹌鹑细胞LH释放，具有脊椎动物GnRH功能特征(IWAKOSHIE，TAKUffA-KURODAK, FUJISAffAY, et al. Isolation and characterization of a GnRH-Iikepeptide from Octopus vulgaris[J]. Biochem Biophys Res Commun,2002,291 :1187-1193.)。近期国外学者在多种十足类甲壳动物应用免疫组化定位实验中证实有GnRH类似物存在。在斑节对it!下中央神经系统(CNS)中发现有GNRH类似物存在证据,实验表明，很可能存在 oct-GnRH、IGnRH-III 类似物(NGERNSOUNGNERN，NGERNSOUNGNERN, KAVANAUGH, etal.The presence and distribution of gonadotropin-releasing hormone-liked factorin the central nervous system of the black tiger shrimp,Penaeus monodon[J].GenCompEndocrinol，2008，155 (3) :613-622.)。在罗氏沼虾的 CNS 中存在两种 GnRH 类似物，分别与 IGnRH-III 与 oct-GnRH 相类似(NGERNSOUNGNERN，NGERNSOUNGNERN, KAVANAUGH, etal.The identification and distribution of gonadotropin-releasing hormone-likepeptides in the central nervous system and ovary of the giant freshwaterprawn, Macrobrachium rosenbergii[J]. Invert Neurosci，2008，8(I) :49-57.)。 在日本囊对虾中将RP-HPLC、时间分辨荧光分析法(TR-FIA)以及免疫组织化学法相结合，结果也证实存在 GnRH 类似物(AMANO, OKUMURA, OKUBO, et al. Biochemical analysis andimmunohistochemical examination of a GnRH-Iike immunoreactive peptide in thecentral nervous system of a decapod crustacean, the kuruma prawn (Marsupenaeusjaponicus) [J], Zoolog Sci，2009，26 (12) :840-845.)，但是至今在甲壳动物还没有相关GnRH分离纯化的报道。
发明内容
本发明旨在提供一种促性腺释放激素(GnRH)类似物，是中华绒螯蟹的促性腺释放激素类似物。本发明还提供上述中华绒螯蟹的促性腺释放激素类似物的制备方法和应用。中华绒螯蟹的促性腺释放激素类似物，氨基酸序列分别为QSYHFSHGWKP与QAYHFSHGffKP0这种中华绒螯蟹的促性腺释放激素类似物可用于人工催熟蟹类卵母细胞。本发明首次以反向高效液相色谱法(RP-HPLC)为分离手段，从中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)脑组织中提取促性腺释放激素类似物(GnRH),使用章鱼促性腺释放激素抗体(anti-octGnRH)对分离组分进行免疫斑点印迹实验鉴定，获得了免疫反应呈阳性分离组分。使用基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱(MALDI-T0F/T0F MS)对分离组分进行分析，发现2种亚型GnRH类似物，氨基酸序列分别为QSYHFSHGWKP与QAYHFSHGffKP (如序列表 SEQ ID No. I 和 No. 2 所示)。从中华绒螯蟹脑组织中提取制备上述GnRH类似物的方法包括以下步骤
(I)取中华绒螯蟹的脑组织粗提液，用RP-HPLC法分级分离，采用二元流动相梯度洗脱法洗脱，其中流动相A为lwt%。三氟乙酸水溶液；流动相B为lwt%。三氟乙酸乙腈溶液，且0 45分钟内流动相B在流动相中体积含量从5%线性增加至35%;RP-HPLC流量Iml/ml，柱温25°C ;收集章鱼GnRH免疫反应呈阳性的组分；优选收集第17 22min分离组分；(2)取步骤(I)产物，用RP-HPLC法进行第二次分级分离，采用二元流动相梯度洗脱法洗脱，其中流动相A为lwt%。三氟乙酸水溶液；流动相B为lwt%。三氟乙酸乙腈溶液，且0 50分钟内流动相B在流动相中体积含量从I %线性增加至10% ;RP-HPLC流量lml/ml，柱温25°C ;收集章鱼GnRH免疫反应呈阳性的组分；优选收集第28 29. 5min分离组分；(3)取步骤(2)产物，用RP-HPLC法进行第三次分级分离，采用二元流动相梯度洗脱法洗脱，其中流动相A为lwt%。三氟乙酸水溶液；流动相B为lwt%。三氟乙酸乙腈溶液，且0 50分钟内流动相B在流动相中体积含量从0%线性增加至10% ;RP-HPLC流量lml/ml，柱温25°C ;收集章鱼GnRH免疫反应呈阳性的组分；优选收集第33 35min分离组分。中华绒螯蟹的脑组织粗提液制备方法包括如下步骤取雌性性成熟健康中华绒螯蟹脑组织，加入lwt%。三氟乙酸水溶液0 4°C匀浆，12000 18000rpm离心2015 20min，取上清液。分离得到的这两种中华绒螯蟹的促性腺释放激素类似物与其他物种GnRH进行进行氨基酸序列比对，结果显示，具有相似的氨基酸保守位点，序列结构与无脊椎动物GnRH相类似。这两种中华绒螯蟹的促性腺释放激素类似物也可以人工合成。根据该类似物氨基酸序列人工合成两种GnRH类似物多肽，通过活体注射实验验证其生物学功能。结果表明，两种类似物都可以显著刺激中华绒螯蟹卵母细胞生发泡破裂(GVBD)、对卵母细胞的成熟具有明显的促进作用。虽然无脊椎动物不存在脑垂体，但以上结果提示，无脊椎动物GnRH作为一种调控因子在性腺发育、配子释放过程中也起到重要作用，可能作为一种上游调控因子，调控下游激素释放。中华绒螯蟹GnRH类似物的获得及其生理功能的验证，为该物质应用于蟹类人工催熟奠定基础。本发明利用RP-HPLC技术结合免疫学方法分离鉴定了中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)脑组织中GnRH类似物，是继章鱼之后第二个在蛋白质水平分离鉴定的无脊椎动物GnRH类似物，同时也是甲壳类动物中首次获得的GnRH多肽，为该类似物进一步应用于蟹
类人工催熟奠定基础。本研究建立中华绒螯蟹GnRH类似物的分离制备方法，首次分离鉴定了中华绒螯蟹GnRH类似物，测定了其氨基酸序列，发现了两种亚型的GnRH，活体注射实验实验结果表明，两种亚型的GnRH都具有与脊椎动物的GnRH相似的功能，可以刺激卵母细胞生发泡破裂，对蟹卵母细胞最终成熟有显著促进作用，对于中华绒螯蟹人工催熟具有重要应用价值。
图I为中华绒螯蟹脑组织粗提液经RP-HPLC分离的色谱图；1_9为主要分离 峰；方框内的7号峰，经免疫鉴定呈阳性分离组分，保留时间为19-20min。图2为中华绒螯蟹脑组织粗提液经RP-HPLC分离后第7号峰(保留时间19-20min)的免疫斑点印迹实验。
图3为RP-HPLC制备含有GnRH类似物(保留时间17_22min)的分离产物。图4中华绒螯蟹脑组织粗提液初次分离后所得第7号峰(保留时间19-20min)再经RP-HPLC分离的色谱图；1-11为主要分离峰；方框内是免疫鉴定呈阳性分离组分，保留时间为 29-30min。图5为第二次分离中三个分离组分(保留时间分别为28-28. 5min、28. 5_29min、29-29. 5min)免疫反应呈阳性的实验结果(免疫斑点印记实验)。图6第二次分离中三个分离组分(保留时间28-28. 5min、28. 5_29min、29-29. 5min)的RP-HPLC分离谱图，1_5为主要分离峰。方框内为免疫鉴定呈阳性分离组分， 保留时间为33-34min。图7免疫斑点印迹实验结果表明第三次分离中两个分离组分(保留时间33-33. 5min、33. 5_34min)免疫反应呈阳性。图8为RP-HPLC检测GnRH类似物的结果。图9为一级质谱检测RP-HPLC分离样品中GnRH类似物的分子量。图10分子量为1373. 63Da的GnRH类似物二级质谱图。图11分子量为1356. 63DaGnRH类似物二级质谱图。图12实验获得与人工合成标GNRH类似物准物质保留时间对比，具有相同保留时间；其中，I-实验获得GNRH类似物，2-氨基酸序列为QSYHFSHGWKP人工合成多肽，3-氨基酸序列为QAYHFSHGWKP人工合成多肽。图13中华绒螯蟹GnRH类似物氨基酸序列与其他物种GnRH氨基酸序列对比图黑色和灰色部分分别表示完全相同和相似的氨基酸残基。图14为未成熟和成熟的卵母细胞，a :未成熟卵母细胞，生发泡未发生破裂，可以明显观察到细胞核(N:细胞核)；b :成熟卵母细胞，生发泡发生破裂，观察不到细胞核。图15在第一阶段30天实验周期内中华绒螯蟹GnRH类似物注射后实验组(左侧柱状图为GnRH类似物-I型，右侧柱状图为GnRH类似物-II型)、阴性对照组(PBS组)、空白对照组GVBD个体比例之间比较；其中，纵坐标GVBD比例％，横坐标实验分组Cp < 0. 05，**p < 0. 01)。图16为第二阶段30天实验周期内中华绒螯蟹GnRH类似物注射后实验组、阴性对照组(PBS组)、空白对照组GVBD个体比例之间比较，进一步证实GnRH类似物可以显著促进卵母细胞生发泡破裂；纵坐标=GVBD比例％，横坐标组分，(*p < 0. 05)。
具体实施例方式实施例I中华绒螯蟹GnRH类似物分级分离、免疫鉴定及串联质谱分析I材料与方法I. I实验材料多肽分离实验中华绒螯蟹购于上海本地养殖场，选取四肢健全、活力较强，体重100-150g的雌性性成熟个体暂养于上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室，养殖箱(50cmX60cm)内构建遮蔽物，24小时充氧，隔天换水，每日投喂饲料两次。I. 2实验方法I. 2. I蟹脑粗提液制备
选取雌性性成熟健康个体，冰上迅速解剖脑组织，每50只蟹脑组织加入lwt%。三氟乙酸水溶液10ml，冰上匀浆，4°C 15000rpm离心20min，取上清液，浓缩后_80°C保存备用I. 22RP-HPLC 分离实验应用日本岛津(SHIMADZU)Prominence高效液相系统对蟹脑组织粗提液进行分级分离，采用二元流动相梯度洗脱法进行洗脱，即流动相A :lwt%。三氟乙酸水溶液；流动相B lwt%。三氟乙酸乙腈溶液。所用流动相均预先超声处理,系统流速lml/min ;色谱柱岛津VP-0DS(150LX4. 6)C-18色谱柱，柱温25°C，进样量150 yl。使用自动组分收集器分别收集每分钟分离组分，收集组分浓缩后-40°C保存。I. 2. 3免疫斑点印迹实验将硝酸纤维素膜(NC膜)浸泡于EBM缓冲液(2. 5X 10_2mol/L三羟甲基氨基甲烷，0. 2mol/L甘氨酸,5. Omol/L甲醇)中15min,室温晾干约5min后,将I ii I样品依次水平点在NC膜上，样点相距Icm左右，每个样品设3个平行实验；放置室温干燥60min，浸入小牛血清(I 10)封闭60min，弃去血清，用TTBS (0. lmol/L三羟甲基氨基甲烷，0. 15mol/L氯化钠，2. 8X 10-4mol/L吐温80，用盐酸溶液调节pH至7. 5)漂洗3次，每次8min ;随后浸入含有章鱼GnRH抗体(由美国科罗拉多大学Tsai Pei-San教授赠送)的TTBS缓冲液中孵育，放置于水平摇床，室温低速摇晃过夜；次日用TTBS漂洗3次，每次8min，加入含有HRP标记二抗，室温孵育60min ；TTBS漂洗3次，每次8min，最后用DAB-H2O2显色。阴性对照组使用正常兔血清代替一抗(章鱼GnRH抗体)，空白对照组不使用任何血清。2实验结果2. I中华绒螯蟹脑组织GnRH类似物初步分离及免疫鉴定为了获得蟹脑组织粗提液中的GnRH类似物，本实验采用RP-HPLC方法对其进行分级分离。对RP-HPLC的梯度洗脱条件进行优化(表I)，最终确定参数为50min内流动相B在洗脱相中的体积含量从5%到35%按线性关系增长时获得分离效果最佳。RP-HPLC色谱图显示粗提液分离后主要分为9个峰(如图I，中华绒螯蟹脑组织粗提液经RP-HPLC分离的色谱图，1-9为主要分离峰)，使用自动组分收集器收集每分钟RP-HPLC分离产物。对每一收集组分进行免疫斑点印迹鉴定，结果表明只有19-20min收集组分免疫反应呈阳性(免疫斑点印迹实验结果如图2，A :免疫斑点印迹实验组；B :空白对照实验组；C :阴性对照实验组)，其余分离组分免疫反应均呈阴性，空白对照组与阴性对照组免疫反应也均为阴性。实验中19-20min分离组分对应色谱图中方框内的第7号峰，这表明该分离峰内含有GnRH类似物。表I : RP-HPLC实验参数
参数项目实验参数—
紫外检测器波长238nm
RP-HPLC 流量lml/min
0056流动相洗脱梯度0-50min内流动相B的体积浓度由5%上升至35% 洗脱时间70mm
柱温_25V_2. 2初次获得GnRH类似物RP-HPLC分离及免疫鉴定根据初步分离实验条件下获得数据，通过液相系统制备保留时间为17_22min的分离产物(HPLC如图3)，通过优化RP-HPLC分离条件(表2)将收集到的，分离组分进行分离，洗脱梯度调整为45min内流动相B浓度由1%上升至10%时分离效果最好(如图4，中华绒螯蟹脑组织粗提液初次分离后所得保留时间为19-20min第7号峰再经RP-HPLC分离的色谱图)，收集保留时间25-40min的分离产物，每30秒收集一管，收集组分浓缩至100微升后进行免疫斑点印迹实验检测，实验结果表明28-28. 5min、28. 5-29min、29_29. 5min三个分离组分(即方框内的3 5号峰)免疫反应呈阳性(免疫印迹实验结果图5)，可能含有GnRH类似物。表2 : RP-HPLC实验参数 10060权利要求
1.中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物，其特征在于，氨基酸序列如序列表SEQID No. I或 SEQ ID No. 2 所示。
2.权利要求I所述中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)取中华绒螯蟹的脑组织粗提液，用RP-HPLC法分级分离，采用二元流动相梯度洗脱法洗脱，收集章鱼GnRH免疫反应呈阳性的组分；其中流动相A为lwt%。三氟乙酸水溶液；流动相B为lwt%。三氟乙酸乙腈溶液，且O 45分钟内流动相B在流动相中体积含量从5%线性增加至35% ;RP-HPLC流量lml/ml，柱温25°C ； (2)取步骤(I)产物，用RP-HPLC法进行第二次分级分离，采用二元流动相梯度洗脱法洗脱，收集章鱼GnRH免疫反应呈阳性的组分；其中流动相A为lwt%。三氟乙酸水溶液；流动相B为lwt%。三氟乙酸乙腈溶液，且O 50分钟内流动相B在流动相中体积含量从1%线性增加至10% ;RP-HPLC流量lml/ml，柱温25°C ； (3)取步骤(2)产物，用RP-HPLC法进行第三次分级分离，采用二元流动相梯度洗脱法洗脱，收集章鱼GnRH免疫反应呈阳性的组分；其中流动相A为lwt%。三氟乙酸水溶液；流动相B为lwt%。三氟乙酸乙腈溶液，且0 50分钟内流动相B在流动相中体积含量从0%线性增加至10% ;RP-HPLC流量lml/ml，柱温25°C。
3.权利要求2所述中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物的制备方法，其特征在于，所述中华绒螯蟹的脑组织粗提液制备方法包括如下步骤 取雌性性成熟健康中华绒螯蟹脑组织，加入lwt%。三氟乙酸水溶液0 4°C匀浆，12000 18000rpm离心2015 20min，取上清液。
4.权利要求2所述中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物的制备方法，其特征在于，步骤(I)中收集第17 22min分离组分；步骤(2)中收集第28 29. 5min分离组分；步骤(3)中收集第33 35min分离组分。
5.权利要求I所述中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物在人工催熟蟹类卵母细胞方面的应用。
全文摘要
本发明涉及分子生物学和生物技术领域，公开了中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物，氨基酸序列分别为QSYHFSHGWKP与QAYHFSHGWKP。这两种亚型的中华绒螯蟹的促性腺释放激素类似物与其他物种GnRH进行进行氨基酸序列比对，结果显示，具有相似的氨基酸保守位点，序列结构与无脊椎动物GnRH相类似；并且具有与脊椎动物的GnRH相似的功能，可以刺激卵母细胞生发泡破裂，对蟹卵母细胞最终成熟有显著促进作用，对于中华绒螯蟹人工催熟具有重要应用价值。
文档编号C07K7/23GK102627687SQ20121008154
公开日2012年8月8日 申请日期2012年3月23日 优先权日2012年3月23日
发明者丘高峰, 宋亚楠, 李 真, 王承志 申请人:上海海洋大学