专利名称：一种制备高纯度牻牛儿素的方法
技术领域：
本发明涉及一种植物活性成分的制备方法，具体地是一种从重阳木叶中制备栊牛儿素的方法。
背景技术：
物牛儿素，属鞋质类物质，分子式为C41H28O27,分子量为952. 656,存在于大戟科重阳木的叶中，含量高达1.8%，且其资源丰富。现代研究表明，栊牛儿素具有保肝活性、5-脂氧化酶抑制作用、清除游离基活性、ACE抑制剂作用、抑制逆转录酶活性、抑制突变活性、抗病毒活性、抗菌活性、抗HIV复制活性等生物活性。目前，国内对栊牛儿素的研究较少，尚处于起步阶段。中国专利“一种栊牛儿素的制备方法”(申请号为201010535328. 5)，该专利公开的方法是取老鹤草鲜茎叶，加水浸泡，压榨过滤，滤液通过活性炭柱和大孔树脂柱分离，甲醇结晶即得栊牛儿素，该方法所获得的产品含量不能达到对照品要求。因此，研究出一种制备高纯度栊牛儿素的方法是非常必要的，对于扩大药源以及重阳木叶的综合利用具有很重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简单，产品纯度较高的栊牛儿素一种制备高纯度栊牛儿素的方法。为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案
(1)超临界二氧化碳流体萃取重阳木叶中的油脂类物质，残留物用乙醇超声提取后得到提取液；
(2)提取液浓缩，加入明胶溶液，离心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，滤除明胶，得到初步纯化液；
(3)上大孔树脂纯化，水和乙醇水溶液洗脱，洗脱液减压回收乙醇，得到浓缩液；
(4)浓缩液通过凝胶柱层析分离，用50%-70%丙酮溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，静置析晶，重结晶即得栊牛儿素。所述超临界萃取温度为30-45°C，压力为20-30MPa，时间为50_120min。所述乙醇为70-90%的乙醇溶液溶液，用量为5-10倍量(V/W)，超声频率为25-40KHZ，提取 2-3 次，每次 l_2h。所述明胶溶液浓度为3-6%，丙酮水溶液浓度为50-90%。
所述大孔树脂可选HPD-400或ADS-17型，洗脱剂为70%的乙醇水溶液。所述重结晶溶剂为80%乙醇溶液。综上所述，本发明存在以下优点本工艺采用超临界二氧化碳萃取技术脱除油脂类成分，能有效脱除叶中大部分油脂类杂质，条件温和；萃取超声波提取的方法提取栊牛儿素，提高了提取效率；70-90%的乙醇溶液作为提取溶剂，减少了多糖的溶出；采用大孔树脂和凝胶柱分离栊牛儿素，成本低，分离效果好；本发明的方法在50°C以下进行，避免了鞣质类成分在常规热回流提取过程中因温度过高所引起的化学和结构的改变，因此本方法可得到纯度较高的栊牛儿素，产品含量大于98%，且本方法提取周期短，方法安全，适合于工业化生产。下面将结合具体实施方式
对本发明做进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例I
重阳木干燥叶粉碎，取1kg，放入超临界萃取装置中，在温度为35°C，压力为20MPa下萃取lOOmin，残留物加8L80%的乙醇溶液进行超声提取，超声频率为25KHz，提取3次，每次lh，过滤，合并提取液，浓缩，加入浓度为3%明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀，离心，沉淀物用50%丙酮水溶液溶解，滤除明胶，得到初步纯化液，上1LHPD-400大孔树脂柱，吸附完成后，先用4L水洗脱，再用4L70%乙醇溶液洗脱，控制流速为3ml/min，收集富含栊牛儿素的洗脱液，浓缩，浓缩液加水分散，上Toyopearl HW-40柱，用55%丙酮溶液洗脱，洗脱液回收丙酮，浓缩，静置析晶，80%乙醇重结晶，得栊牛儿素13. 9g J^HPLC检测，其含量为98. 3%。实施例2
重阳木干燥叶粉碎，取1kg，放入超临界萃取装置中，在温度为45°C，压力为30MPa下萃取50min，残留物加5L70%的乙醇溶液进行超声提取，超声频率为35KHz，提取2次，每次Ih,过滤，合并提取液，浓缩，加入浓度为6%明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀，离心，沉淀物用90%丙酮水溶液溶解，滤除明胶，得到初步纯化液，上1LHPD-400大孔树脂柱，吸附完成后，先用5L水洗脱，再用5L70%乙醇溶液洗脱，控制流速为4. 5ml/min,收集富含栊牛儿素的洗脱液，浓缩，浓缩液加水分散，上Toyopearl HW-40柱，用50%丙酮溶液洗脱，洗脱液回收丙酮，浓缩，静置析晶，80%乙醇重结晶，得栊牛儿素18. 7g J^HPLC检测，其含量为98. 7%。实施例3
重阳木干燥叶粉碎，取1kg，放入超临界萃取装置中，在温度为40°C，压力为30MPa下萃取60min，残留物加10L70%的乙醇溶液进行超声提取，超声频率为40KHz，提取2次，每次2h,过滤，合并提取液，浓缩，加入浓度为5%明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀，离心，沉淀物用70%丙酮水溶液溶解，滤除明胶，得到初步纯化液，上1LADS-17大孔树脂柱，吸附完成后，先用3L水洗脱，再用6L70%乙醇溶液洗脱，控制流速为3. 5ml/min，收集富含栊牛儿素的洗脱液，浓缩，浓缩液加水分散，上MCl-gel CHP-20P柱柱，用70%丙酮溶液洗脱，洗脱液回收丙酮，浓缩，静置析晶，80%乙醇重结晶，得栊牛儿素15. 4g J^HPLC检测，其含量为98. 0%。实施例4
重阳木干燥叶粉碎，取1kg，放入超临界萃取装置中，在温度为30°C，压力为30MPa下萃取50min，残留物加7L80%的乙醇溶液进行超声提取，超声频率为35KHz，提取3次，每次Ih,过滤，合并提取液，浓缩，加入浓度为5%明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀，离心，沉淀物用50%丙酮水溶液溶解，滤除明胶，得到初步纯化液，上1LHPD-400大孔树脂柱，吸附完成后，先用6L水洗脱，再用3L70%乙醇溶液洗脱，控制流速为4ml/min，收集富含栊牛儿素的洗脱液，浓缩，浓缩液加水分散，上S印hadex LH-20柱，用60%丙酮溶液洗脱，洗脱液回收丙酮，浓缩，静置析晶，80%乙醇重结晶，得栊牛儿素12. 2g J^HPLC检测，其含量为98. 1%。
实施例5
重阳木干燥叶粉碎，取1kg，放入超临界萃取装置中，在温度为35°C，压力为20MPa下萃取120min，残留物加6L90%的乙醇溶液进行超声提取，超声频率为30KHz，提取2次，每次2h，过滤，合并提取液，浓缩，加入浓度为6%明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀，离心，沉淀物用70%丙酮水溶液溶解，滤除明胶，得到初步纯化液，上1LHPD-400大孔树脂柱，吸附完成后，先用3L水洗脱，再用4L70%乙醇溶液洗脱，控制流速为2. 5ml/min，收集富含栊牛儿素的洗脱液，浓缩，浓缩液 加水分散，上Toyopearl HW-40柱，用65%丙酮溶液洗脱，洗脱液回收丙酮，浓缩，静置析晶，80%乙醇重结晶，得栊牛儿素18. 2g J^HPLC检测，其含量为99. 1%。
权利要求
1.一种制备高纯度栊牛儿素的方法，其特征在于包括以下步骤 (1)超临界二氧化碳流体萃取重阳木叶中的油脂类物质，残留物用乙醇超声提取后得到提取液； (2)提取液浓缩，加入明胶溶液，离心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，滤除明胶，得到初步纯化液； (3)上大孔树脂纯化，水和乙醇水溶液洗脱，洗脱液减压回收乙醇，得到浓缩液； (4)浓缩液通过凝胶柱层析分离，用50%-70%丙酮溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，静置析晶，重结晶即得栊牛儿素。
2.如权利要求I所述一种制备高纯度栊牛儿素的方法，其特征在于步骤(I)中所述超临界萃取温度为30-45°C，压力为20-30MPa，时间为50_120min。
3.如权利要求I所述一种制备高纯度栊牛儿素的方法，其特征在于步骤(I)中所述乙醇为70-90%的乙醇溶液溶液，用量为5-10倍量(V/W)，超声频率为25-40KHZ，提取2_3次，每次l-2h。
4.如权利要求I所述一种制备高纯度栊牛儿素的方法，其特征在于步骤(2)中所述明胶溶液浓度为3-6%，丙酮水溶液浓度为50-90%。
5.如权利要求I所述一种制备高纯度栊牛儿素的方法，其特征在于步骤(3)中所述大孔树脂可选HPD-400或ADS-17型，洗脱剂为70%的乙醇水溶液。
6.如权利要求I所述一种制备高纯度栊牛儿素的方法，其特征在于步骤(4)中所述重结晶溶剂为80%乙醇溶液。
全文摘要
本发明公开了一种制备高纯度牻牛儿素的方法。本方法是采用重阳木干燥叶为原料。该工艺流程主要分为四部分(1)超临界二氧化碳流体萃取重阳木叶中的油脂类物质，超声提取后得到提取液；(2)提取液浓缩，加入明胶溶液，离心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，滤除明胶，得到初步纯化液；(3)上大孔树脂纯化，水和乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩；(4)浓缩液通过凝胶柱层析分离，用50%-70%丙酮溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，静置析晶，重结晶即得牻牛儿素。本发明将为牻牛儿素的药理活性及药物制剂的深入研究奠定基础。
文档编号C07H13/08GK102643311SQ20121011955
公开日2012年8月22日 申请日期2012年4月23日 优先权日2012年4月23日
发明者万冬梅, 刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司