专利名称：一种提取异轮生丰花草碱的方法
技术领域：
本发明属于中药化学领域，涉及ー种提取异轮生丰花草碱的方法。
背景技术：
异轮生丰花草碱(Isoborreverine),棕色无定形固体,是一种卩引哚类生物碱。分子式 C32H40N4，分子量为 480. 7。UV λ max (EtOH) nm (Ig ε ) :226(4. 28), 287 (4. 10), 294(4. OO) ο异轮生丰花草碱来源于菌草科(Rubiaceae)轮生丰花草iferreria verticillata (L.)G. F. ff. Meyer地上部分。具有抗微生物活性和细胞毒活性。其对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、偶发分枝杆菌、肺炎球菌、绿色链球菌、淋病柰瑟球菌等有广谱抗微生物作用。当其浓度在3 6 μ g/mL吋，具有高的细胞毒作用。
目前国内外尚未见制备异轮生丰花草碱的方法报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效快速、从赤非夾竹桃木中提取异轮生丰花草碱的方法。为达到上述目的，本发明采用以下技术方案
将轮生丰花草的地上部分破碎，用4-10倍量的酸醇回流提取2-4次，合并提取液浓缩后加于阳离子树脂柱上，先以水洗脱除杂，再用2-5%氯化钠水溶液洗脱，收集氯化钠洗脱液直至生物碱反应阴性，经脱盐处理，浓缩得总生物碱浸膏，将浸膏与氧化铝粉混合均匀上氧化铝柱，用不同配比的混合有机溶剂分段洗脱井分段收集，收集异轮生丰花草碱高含量流分，合并后减压浓缩，最后采用高速逆流色谱法分离纯化，得到高含量异轮生丰花草碱产品O所述酸醇溶液为20%_80%的こ醇或甲醇溶液，盐酸调节醇溶液pH至3-5. 5。所述阳离子树脂可以是大孔型或凝胶型强酸性阳离子交换树脂，树脂柱径高比为1:5-10。所述阳离子树脂柱的上柱液浓度为每Iml相当于生药l_5g，上样速度为2_5BV/h，洗脱速度为l_3BV/h。所述氧化铝柱填料为中性或碱性氧化铝，粒度为100-400目，混合有机溶剂为氯仿-こ酸こ酷-甲醇，体积比为4:2: f 1:2:4。所述高速逆流色谱分离条件己烷-氯仿-甲醇-水溶剂系统比例为(3-6)(20-25) :(30-42) :(15-20)，上相为固定相，下相为流动相，流速为l_3ml/min，正向转速700-1000r/mino本发明的有益效果是本发明步骤少、得率高、操作简便，易于エ业化生；离子交换树脂结合高速逆流色谱法用于异轮生丰花草碱的分离纯化也属首次，本发明为异轮生丰花草碱的进一步开发利用提供了药理原料、理论和实践支持。下面将结合具体实施方式
进ー步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式 实施例I:
取IOkg轮生丰花草的地上部分破碎，用10倍量20%甲醇溶液(pH3)回流提取4次，合并提取液浓缩至每Iml相当于生药lg，将浓缩液加于大孔型强酸性阳离子交换树脂上，上样速度为5BV/h，先以水洗脱除杂，再用5%氯化钠水溶液洗脱，洗脱速度为3BV/h，收集氯化钠洗脱液直至生物碱反应阴性，经脱盐处理，浓缩得总生物碱浸膏，将浸膏与碱性氧化铝粉(400目)混合均匀上氧化铝柱，用氯仿-こ酸こ酷-甲醇(4:2:广1:2:4)分段洗脱井分段收集，收集异轮生丰花草碱高含量流分，合并后减压浓缩得样品溶液。取己烷-氯仿-甲醇-水按(3) :(20):(30) :(15)比例量取，置于分液漏斗中混合均匀，静止分层，分离上下相，以上相为固定相，以下相为流动相，取上述粗提物适量溶于下相中待用，开启制备型高速逆流色谱仪制备，以lml/min流速泵入流动相，当流动相流出，开始连续进样，首尾洗脱，转速控制为lOOOr/min，通过检测器收集，浓缩干燥得到高含量异轮生丰花草碱产品 I. 42g。实施例2
取IOkg轮生丰花草的地上部分破碎，用4倍量80%的こ醇溶液(pH5. 5)回流提取2次，合并提取液浓缩至每Iml相当于生药5g，将浓缩液加于凝胶型强酸性阳离子交换树脂上，上样速度为2BV/h，先以水洗脱除杂，再用2%氯化钠水溶液洗脱，洗脱速度为lBV/h，收集氯化钠洗脱液直至生物碱反应阴性，经脱盐处理，浓缩得总生物碱浸膏，将浸膏与中性氧化铝粉(100目)混合均匀上氧化铝柱，用氯仿-こ酸こ酷-甲醇(4:2: f 1:2:4)分段洗脱井分段收集，收集异轮生丰花草碱高含量流分，合并后减压浓缩得样品溶液。取己烷-氯仿-甲醇-水按(6) :(25) :(42) :(20)比例量取，置于分液漏斗中混合均匀，静止分层，分离上下相，以上相为固定相，以下相为流动相，取上述粗提物适量溶于下相中待用，开启制备型高速逆流色谱仪制备，以3ml/min流速泵入流动相，当流动相流出，开始连续进样，首尾洗脱，转速控制为700r/min，通过检测器收集，浓缩干燥得到高含量异轮生丰花草碱产品I. ISgo实施例3:
取IOkg轮生丰花草的地上部分破碎，用8倍量40%的こ醇溶液(pH4)回流提取3次，合并提取液浓缩至每Iml相当于生药3g，将浓缩液加于大孔型强酸性阳离子交换树脂上，上样速度为3BV/h，先以水洗脱除杂，再用3%氯化钠水溶液洗脱，洗脱速度为3BV/h，收集氯化钠洗脱液直至生物碱反应阴性，经脱盐处理，浓缩得总生物碱浸膏，将浸膏与中性氧化铝粉(300目)混合均匀上氧化铝柱，用氯仿-こ酸こ酷-甲醇(4:2: f 1:2:4)分段洗脱井分段收集，收集异轮生丰花草碱高含量流分，合并后减压浓缩得样品溶液。取己烷-氯仿-甲醇-水按(5) :(22):(35):(18)比例量取，置于分液漏斗中混合均匀，静止分层，分离上下相，以上相为固定相，以下相为流动相，取上述粗提物适量溶于下相中待用，开启制备型高速逆流色谱仪制备，以2ml/min流速泵入流动相，当流动相流出，开始连续进样，首尾洗脱，转速控制为800r/min，通过检测器收集，浓缩干燥得到高含量异轮生丰花草碱产品I. 53g。
实施例4:
取IOkg轮生丰花草的地上部分破碎，用6倍量50%的甲醇溶液(pH4. 5)回流提取4次，合并提取液浓缩至每Iml相当于生药4g，将浓缩液加于凝胶型强酸性阳离子交换树脂上，上样速度为4BV/h，先以水洗脱除杂，再用4%氯化钠水溶液洗脱，洗脱速度为2. 5BV/h,收集氯化钠洗脱液直至生物碱反应阴性，经脱盐处理，浓缩得总生物碱浸膏，将浸膏与中性氧化铝粉(200目)混合均匀上氧化铝柱，用氯仿-こ酸こ酷-甲醇(4:2: f 1:2:4)分段洗脱井分段收集，收集异轮生丰花草碱高含量流分，合并后减压浓缩得样品溶液。取己烷-氯仿-甲醇-水按(4) :(23) :(40) :(20)比例量取，置于分液漏斗中混合均匀，静止分层，分离上下相，以上相为固定相，以下相为流动相，取上述粗提物适量溶于下相中待用，开启制备型高速逆流色谱仪制备，以2. 5ml/min流速泵入流动相，当流动相流出，开始连续进样，首尾洗脱，转速控制为850r/min，通过检测器收集，浓缩干燥得到高含量异轮生丰 花草碱产品 I. 38g。
权利要求
1.ー种提取异轮生丰花草碱的方法，其特征在于包括以下步骤 将轮生丰花草的地上部分破碎，用4-10倍量的酸醇回流提取2-4次，合并提取液浓缩后加于阳离子树脂柱上，先以水洗脱除杂，再用2-5%氯化钠水溶液洗脱，收集氯化钠洗脱液直至生物碱反应阴性，经脱盐处理，浓缩得总生物碱浸膏，将浸膏与氧化铝粉混合均匀上氧化铝柱，用不同配比的混合有机溶剂分段洗脱井分段收集，收集异轮生丰花草碱高含量流分，合并后减压浓缩，最后采用高速逆流色谱法分离纯化，得到高含量异轮生丰花草碱产品O
2.如权利要求I所述的ー种提取异轮生丰花草碱的方法，其特征在于所述酸醇溶液为20%-80%的こ醇或甲醇溶液，盐酸调节醇溶液pH至3-5. 5。
3.如权利要求I所述的ー种提取异轮生丰花草碱的方法，其特征在于所述阳离子树脂可以是大孔型或凝胶型强酸性阳离子交换树脂，树脂柱径高比为1:5-10。
4.如权利要求I所述的ー种提取异轮生丰花草碱的方法，其特征在于所述阳离子树脂柱的上柱液浓度为每Iml相当于生药l_5g，上样速度为2-5BV/h，洗脱速度为l_3BV/h。
5.如权利要求I所述的ー种提取异轮生丰花草碱的方法，其特征在于所述氧化铝柱填料为中性或碱性氧化铝，粒度为100-400目，混合有机溶剂为氯仿-こ酸こ酷-甲醇，体积比为 4:2:1 1:2:4。
6.如权利要求I所述的ー种提取异轮生丰花草碱的方法，其特征在于所述高速逆流色谱分离条件:己烷-氯仿-甲醇-水溶剂系统比例为(3-6) :(20-25) :(30-42) (15-20)，上相为固定相，下相为流动相，流速为l_3ml/min，正向转速700_1000r/min。
全文摘要
本发明公开了一种提取异轮生丰花草碱的方法，其特征在于工艺步骤包括将轮生丰花草的地上部分破碎，用酸醇回流提取，提取液浓缩后加于阳离子树脂柱上，先以水洗脱除杂，再用2-5%氯化钠水溶液洗脱，收集氯化钠洗脱液直至生物碱反应阴性，经脱盐处理，浓缩得总生物碱浸膏，将浸膏与氧化铝粉混合均匀上氧化铝柱，用不同配比的混合有机溶剂分段洗脱并分段收集，收集异轮生丰花草碱高含量流分，合并后减压浓缩，最后采用高速逆流色谱法分离纯化，得到高含量异轮生丰花草碱产品。本发明提取分离异轮生丰花草碱快速、高效，产品含量高，并可有效降低成本和减少环境污染。
文档编号C07D487/04GK102690272SQ20121018452
公开日2012年9月26日 申请日期2012年6月7日 优先权日2012年6月7日
发明者刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司