专利名称：一种从猪血中提取免疫球蛋白g的工业化生产方法
技术领域：
本发明涉及一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法。
背景技术：
猪血由红细胞和血清组成，血浆蛋白约占血液总量的4. 6%，血浆蛋白中含量最高的是白蛋白，其次为免疫球蛋白，免疫球蛋白G的相对分子量约为160000道尔顿，约占血浆蛋白的16. 3%，占血清蛋白总量的17. 0%，全血的0. 75%，猪血清的I. 5-1. 8%，血清中免疫球蛋白总量的75-80%。我国猪血资源十分丰富，但目前我国猪血资源利用的深度和广度都很低，主要是用于生产饲料用猪血浆蛋白粉和血球蛋白粉，并未得到很好地利用。为实现猪血的“变废为宝”，因此将猪血中的免疫球蛋白G进行提取纯化选择合适的生产工艺进行工业化生产具有·重要意义。现有的从动物血液中提取免疫球蛋白G的工艺仍然停留在实验室的研究和运用阶段，尤其是以猪血为原料提取免疫球蛋白G的方法中，对血液的质量有很高的要求。而在实际生产中，因为采血条件、储存条件和物流运输的原因，会导致原血质量有在一定程度上的降低，血液中会含有一定量的杂质，因此很难获得高质量的血浆。并且，现有的实验室工艺对设备和实验条件要求太高并不适宜于工业化连续生产。提取分离免疫球蛋白G的方法有硫酸铵晶体沉淀法、乙醇分离法、柱色谱分离法(包括离子交换法、凝胶过滤法、亲合色谱法)及超滤法。其中采用沉淀法与超滤法相结合，分离出的纯度高、产量大、操作简便、适合规模化生产。
发明内容
本发明的目的就在于克服上述现有技术中存在的不足，而提供一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法，该方法采用硫酸铵晶体沉淀法与超滤法相结合的方法，分离出的免疫球蛋白G纯度高、产量大，并且生产方法操作简便、适合规模化生产。如上构思，本发明的技术方案是一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法，其特征在于以猪血血浆液为原料，通过硫酸铵晶体分步盐析法获得免疫球蛋白G固形物，再将免疫球蛋白G固形物溶解后进行超滤浓缩和低温喷雾干燥获得免疫球蛋白G的喷干粉。上述硫酸铵晶体分步盐析法的具体步骤为第一步盐析向猪血浆液中缓慢均匀加入硫酸铵晶体至血浆液硫酸铵饱和度为20±2%，将pH调至5. 5±0. 3，处理20_40min，经过离心后收集上清液；第二步盐析向上清液中缓慢均匀加入硫酸铵晶体至上清液硫酸铵饱和度为35±2%，将pH调至7. 4±0. 2，处理20_40min，经过离心后收集沉淀；第三部盐析向沉淀中加入纯净水使得免疫球蛋白G完全溶解，再缓慢均匀加入硫酸铵晶体至硫酸铵饱和度为35±2%，将pH调至7. 4±0. 2，处理20_40min，经过离心后收集沉淀。上述猪血血浆液的选取条件为原血使用柠檬酸钠作为抗凝剂，柠檬酸钠的添加量为原血的6-8%。，储存时制冷温度为6-10°C，储存时间不超过3天，分离后立即进行提取。上述超滤浓缩是在中空纤维膜设备中进行的，截留分子量为80000-100000道尔顿，操作压力为0. 05-0. IOMpa0上述低温喷雾干燥的进口温度为160_180°C，出口温度为75_85°C。
上述硫酸铵晶体分步盐析法中在猪血血浆中均匀加入硫酸铵晶体时的持续搅拌转速为20-30转/分钟。上述硫酸铵晶体分步盐析法中离心使用管式固液分离机，其离心转速为15000-16000 转 / 分钟。本发明具有如下的优点和积极效果I、本发明使用硫酸铵晶体代替常规的硫酸铵饱和溶液，减少生产操作和生产成本，更加适宜于工业生产；2、本发明采用硫酸铵晶体分步盐析沉淀的方法并使用管式固液分离机进行离心，操作简单、生产成本低、原料利用率高；3、本发明使用中空纤维膜进行超滤浓缩、低温喷雾干燥，在提高免疫球蛋白G的纯度、保护免疫球蛋白G的活性的同时节约了生产成本；4、本发明中免疫球蛋白G的喷干粉免疫球蛋白纯度在65%以上，粗蛋白达90%以上，得率在15g/kg以上，可以达到工业化生产的要求；5、本发明可以连续性加工生产，有利于工业化生产。
具体实施例方式实施例I :在IOOkg血浆液中缓慢均匀加入Ilkg硫酸铵晶体至血浆液硫酸铵饱和度为20 ±2%，并调节血浆液pH为5. 6，处理30min后通过管式离心机进行离心收集上清液；在上清液中缓慢均匀加入Ilkg硫酸铵晶体至上清液硫酸铵饱和度为35±2%，调节pH为7. 2处理30min后通过管式离心机进行离心收集沉淀；在沉淀中加入90kg纯水溶解，再加入硫酸铵晶体22kg至硫酸铵饱和度为35±2%，调节pH为7. 2处理30min后通过管式离心机进行离心收集沉淀；将沉淀加入90kg纯水溶解后进行超滤浓缩除盐，操作压力为0. 06MPa,浓缩至体积为15L进行低温喷雾干燥，喷雾干燥进口温度为170°C，出口温度为75°C，收集免疫球蛋白G喷干粉共1539g，相关指标见附表I。上述硫酸铵晶体分步盐析法中在猪血血浆中均匀加入硫酸铵晶体时的持续搅拌转速为20-30转/分钟。上述硫酸铵晶体分步盐析法中离心使用管式固液分离机，其离心转速为15000-16000转/分钟。实施例2 在5. Ot血浆液加入0. 6t硫酸铵晶体至血浆液硫酸铵饱和度为20土2%，并调节血浆液PH为5. 7，在血浆罐中反应20min后通过管式离心机进行离心收集上清液；在上清液中加入0. 5t硫酸铵晶体至上清液硫酸铵饱和度为35±2%，调节pH为7. 2在罐中处理20min后通过管式离心机进行离心收集沉淀；在沉淀中加入5. Ot纯水溶解，再加入硫酸铵晶体
I.It至硫酸铵饱和度为35 ±2%,调节pH为7. 2在罐中处理20min后通过管式离心机进行离心收集沉淀；将沉淀加入4. Ot纯水溶解后进行超滤浓缩除盐，操作压力为0. 06MPa,浓缩至体积为，I. Ot时进行低温喷雾干燥，喷雾干燥进口温度为175°C，出口温度为75°C，收集免疫球蛋白G喷干粉82. 7kg，相关指标见附表2。上述硫酸铵晶体分步盐析法中在猪血血浆中均匀加入硫酸铵晶体时的持续搅拌转速为20-30转/分钟。上述硫酸铵晶体分步盐析法中离心使用管式固液分离机，其离心转速为15000-16000转/分钟。附表I :实例I得到的免疫球蛋白G各项指标如下
指标(％)
粗蛋白质90. 58
免疫球蛋白G 69. 36 灰分2752
水分2.63
粗纤维(102
食盐oTTI
~oTTi ,丐oTTi附表2 实例2得到的免疫球蛋白G各项指标如下
指标(％)
粗蛋白质91.25
免疫球蛋白G67. 43
灰分3. 12
水分2^42
粗纤维003
食盐021
总磷0. 16
,丐o7T权利要求
1.一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法，其特征在于以猪血血浆液为原料，通过硫酸铵晶体分步盐析法获得免疫球蛋白G固形物，再将免疫球蛋白G固形物溶解后进行超滤浓缩和低温喷雾干燥获得免疫球蛋白G的喷干粉。
2.根据权利要求I所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法，其特征在于上述硫酸铵晶体分步盐析法的具体步骤为 第一步盐析向猪血浆液中缓慢均匀加入硫酸铵晶体至血浆液硫酸铵饱和度为20±2%，将pH调至5. 5±0. 3，处理20_40min，经过离心后收集上清液； 第二步盐析向上清液中缓慢均匀加入硫酸铵晶体至上清液硫酸铵饱和度为35±2%，将pH调至7. 4±0. 2，处理20-40min，经过离心后收集沉淀； 第三部盐析向沉淀中加入纯净水使得免疫球蛋白G完全溶解，再缓慢均匀加入硫酸铵晶体至硫酸铵饱和度为35±2%，将pH调至7. 4±0. 2，处理20_40min，经过离心后收集沉淀。
3.根据权利要求I所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法，其特征在于上述猪血血浆液的选取条件为原血使用柠檬酸钠作为抗凝剂，柠檬酸钠的添加量为原血的6-8%。，储存时制冷温度为6-10°C，储存时间不超过3天，分离后立即进行提取。
4.根据权利要求I所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法，其特征在于上述超滤浓缩是在中空纤维膜设备中进行的，截留分子量为80000-100000道尔顿，操作压力为O. 05-0. IOMpa0
5.根据权利要求I所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法，其特征在于上述低温喷雾干燥的进口温度为160-180°C，出口温度为75-85°C。
6.根据权利要求2所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法，其特征在于上述硫酸铵晶体分步盐析法中在猪血血浆中均匀加入硫酸铵晶体时的持续搅拌转速为20-30转/分钟。
7.根据权利要求2所述的一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法，其特征在于上述硫酸铵晶体分步盐析法中离心使用管式固液分离机，其离心转速为15000-16000 转 / 分钟。
全文摘要
一种从猪血中提取免疫球蛋白G的工业化生产方法，以猪血血浆液为原料，通过硫酸铵晶体分步盐析法获得免疫球蛋白G固形物，再将免疫球蛋白G固形物溶解后进行超滤浓缩和低温喷雾干燥获得免疫球蛋白G的喷干粉。本发明采用硫酸铵晶体沉淀法与超滤法相结合的方法，分离出的免疫球蛋白G纯度高、产量大，并且生产方法操作简便、适合规模化生产。
文档编号C07K16/06GK102796195SQ20121025774
公开日2012年11月28日 申请日期2012年7月24日 优先权日2012年7月24日
发明者邹国庆, 吴明文, 卢进峰, 徐宝海, 姚远新 申请人:安徽宝迪肉类食品有限公司