专利名称：一种水溶性丝素多肽食品防腐剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及了蚕丝丝素水解最佳方法及其水解后的抑菌作用，特别涉及一种水溶性丝素多肽食品防腐剂。
背景技术：
食品防腐剂是为了防止因微生物繁殖引起的变质而使用的食品添加剂，目前，国际上允许使用的食品防腐剂已有四五十种，多为人工合成的化学品。由于其毒性(叠加效应)，近几年来，国内外食品行业有逐渐减少其使用的趋势。包括抗菌肽(antimicrobialpeptides，如乳链菌肽、丝素肽等)在内的天然防腐剂会是今后防腐剂市场的主要方向，它们基本不对真核细胞起作用。但除了丝素多肽外，目前天然类食品防腐剂价格昂贵，大多数食品生产企业难以承受。我国是产蚕丝大国，用于制取丝素多肽的资源丰富。与其它多肽相比，丝素多肽还具有下列保健功能(I)降低血液中胆固醇，防止高血压和脑血栓。(2)预防“老年性中风”和痴呆症。(3)促进胰岛素的分泌。(4)解酒保肝。丝素多肽是一种用于实现食品保健功能的理想营养药品(nutraceuticals)。此外,还可研发丝素肽制成的食品保鲜包装材料。
发明内容
本发明的目的是提供了一种水溶性丝素多肽食品防腐剂及其制备方法，本发明的水溶性丝素多肽食品防腐剂制备方法包括以下步骤一种水溶性丝素多肽食品防腐剂的制备方法，称取蚕茧，用清水浸泡清洗数次，晾干后投入到质量浓度为O. 5%的碳酸钠水溶液中，浴比为I : 50(w/w)，煮沸O. 5小时，用自来水冲洗，完成第一次脱胶，把经过第一次脱胶的蚕茧投入到质量浓度为O. 5%碳酸钠中，浴比为I : 50 (w/w),反应温度为80°C,时间为O. 5小时,然后用去离子水清洗,最后放入烘箱80°C烘干，得到脱胶丝，即丝素；称取丝素，用85%的磷酸溶液溶解，浴比为I : 4(w/w)，温度为130°C，反应时间4个小时，反应结束后，用氧化钙进行中和反应，控制pH值在7左右，搅拌并放置3个小时，然后用布氏漏斗抽滤，得到丝素肽溶液；向滤液中加入滤液重量1%的活性炭，80°C搅拌I. 5个小时，然后用抽滤器趁热过滤，将滤渣冲洗3-4次，合并滤液除去活性炭；将滤液倒入圆底烧瓶，在电热套中煮沸至不糊时，放入恒温烘箱中80 V烘干。从丝素多肽的抑菌试验中观察到加入丝素多肽的细菌(金黄色葡萄球菌或者乳酸菌)培养基中的菌落直径小于未加丝素肽的菌落直径，随着丝素肽溶液浓度的增加，其菌落直径愈小。
图I :未加丝素多肽的金黄色葡萄球菌培养基；图2 :加入O. 3% (重暈比例，下同)丝素多肽的金黄色葡萄球菌培养基；图3 :加入O. 6%丝素多肽的金黄色葡萄球菌培养基；
图4 :加入O. 9%丝素多肽的金黄色葡萄球菌培养基图5 :未加入丝素多肽的乳酸菌培养基；图6 :加入O. 3%丝素多肽的乳酸菌培养基；图7 :加入O. 6%丝素多肽的乳酸菌培养基；图8 :加入O. 9%丝素多肽的乳酸菌培养基。
具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。实施例I
称取一定量的蚕茧，用清水浸泡清洗数次，晾干后投入到质量浓度为O. 5%碳酸钠中，浴比为I : 50(w/w)，煮沸O. 5小时，用自来水冲洗，完成第一次脱胶，把经过第一次脱胶的蚕茧投入到质量浓度为O. 5%碳酸钠中，浴比为I : 50( / )，反应温度为801，时间为O. 5小时，然后用去离子水清洗，最后放入烘箱80°C烘干，得到脱胶丝，即丝素。称取丝素2. 20g,用85%的磷酸溶液溶解,浴比为I : 4 (w/w),温度为130°C,反应时间4个小时。反应结束后，用氧化钙进行中和反应，控制PH值在7左右，反应生成磷酸钙沉淀，使残留的磷酸根离子的量降到最低。搅拌并放置3个小时，让充分反应，然后用布氏漏斗抽滤，得到丝素肽溶液。向滤液中加入滤液重量I %的活性炭，80°C搅拌I. 5个小时，然后用抽滤器趁热过滤，将滤渣冲洗3-4次，合并滤液除去活性炭。将滤液倒入圆底烧瓶,在电热套中煮沸至不糊时，放入恒温烘箱中烘干(温度为80°C)。经称量得到I. 06g干燥的丝素肽固体，经计算，产率约为48. 2%。实施例2称取丝素2. 20g,用85%的磷酸溶液溶解,浴比为I : 4 (w/w),温度为130°C,反应时间8个小时。反应结束后，用氧化钙进行中和反应，控制PH值在7左右，反应生成磷酸钙沉淀，使残留的磷酸根离子的量降到最低。搅拌并放置3个小时，让其充分反应，然后用布氏漏斗抽滤，得到丝素肽溶液。向滤液中加入滤液重量I %的活性炭，80°C搅拌I. 5个小时，然后用抽滤器趁热过滤，将滤渣冲洗3-4次，合并滤液除去活性炭。将滤液倒入圆底烧瓶，在电热套中煮沸浓缩至不糊时，放入恒温烘箱中烘干(温度为80°C)。经称量得到1.67g干燥的丝素肽固体，经计算，产率约为75. 9%。实施例3丝素多肽的抑菌试验(I)培养基的选择与配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，按培养基配方比例称取并溶化，调eiil 4-7. 6，然后分装，灭菌，最后进行无菌培养检查，无菌生长即可使用。(2)稀释涂布平板法I)首先倒平板，将已经灭菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基冷却至60°C，倒平板，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面，待冷凝。2)制备菌种稀释液，用灼烧过的接种环取一环菌种接种到IOmL的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在恒温培养箱中37°C培养10-12个小时，然后从中用移液器移取ImL放入盛有99mL的无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，振摇，使菌种与水充分混合，将细胞扩散，从中移取100 μ L到装有900 μ L的无菌水离心管中，充分混匀，然后再从中移取100 μ L到另一只装有900 μ L的无菌水离心管中，混合均,以此类推制成10—1，IO-2, IO-3, IO-4, IO-5,10_6不同稀释度的菌液，选出10_6为最佳稀释浓度。3)涂布，用移液器移取100 μ L小心滴在平板培养基表面中央，再拿无菌涂布器把菌液均匀涂布在培养基上。(3)培养将已涂布的平板培养基倒置,放于恒温培养箱中37°C培养24-48个小时，观察菌落直径的大小。具体图片见图I-图8，从试验中观察到加入丝素多肽的细菌(金黄色葡萄球菌或者乳酸菌)培养基中的菌落直径小于未加丝素多肽的菌落直径，随着丝素肽溶液浓度的增加，其菌落直径愈小。应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。·
权利要求
1.一种水溶性丝素多肽食品防腐剂的制备方法，其特征在于，蚕丝脱胶称取蚕茧，用清水浸泡清洗数次，晾干后投入到质量浓度为0. 5%的碳酸钠水溶液中，浴比为I : 50 (w/w)，煮沸0. 5小时，用自来水冲洗，完成第一次脱胶，把经过第一次脱胶的蚕茧投入到质量浓度为0. 5%碳酸钠中，浴比为I : 50(w/w),反应温度为80°C,时间为0. 5小时,然后用去离子水清洗，最后放入烘箱80°C烘干，得到脱胶丝，即丝素；称取丝素，用85 %的磷酸溶液溶解，浴比为I : 4(w/w),温度为130°C,反应时间4个小时,反应结束后,用氧化I丐进行中和反应，控制PH值在7左右，搅拌并放置3个小时，然后用布氏漏斗抽滤，得到丝素肽溶液；向滤液中加入滤液重量1%的活性炭，80°C搅拌I. 5个小时，然后用抽滤器趁热过滤，将滤渣冲洗3-4次，合并滤液除去活性炭；将滤液倒入圆底烧瓶，在电热套中煮沸至不糊时，放入恒温烘箱中80°C烘干。
2.根据权利要求I所述的方法制备得到的水溶性丝素多肽食品防腐剂。
全文摘要
本发明公开了一种水溶性丝素多肽食品防腐剂及其制备方法，蚕丝脱胶称取蚕茧，用清水浸泡清洗数次，晾干后投入到质量浓度为0.5％的碳酸钠水溶液中，浴比为1∶50(w/w)，煮沸0.5小时，用自来水冲洗，完成第一次脱胶，把经过第一次脱胶的蚕茧投入到质量浓度为0.5％碳酸钠中，浴比为1∶50(w/w)，反应温度为80℃，时间为0.5小时，然后用去离子水清洗，最后放入烘箱80℃烘干，得到脱胶丝，即丝素；丝素经降解即为丝素多肽。从丝素多肽的抑菌试验中观察到加入丝素多肽的细菌(金黄色葡萄球菌或者乳酸菌)培养基中的菌落直径小于未加丝素肽的菌落直径，随着丝素肽溶液浓度的增加，其菌落直径愈小。
文档编号C07K1/14GK102796188SQ20121028627
公开日2012年11月28日 申请日期2012年8月6日 优先权日2012年8月6日
发明者詹豪强, 张亚丽, 李林辉 申请人:西华师范大学