专利名称：一种醋酸去氨加压素的制备方法
技术领域：
本发明涉及多肽类药物生产技术领域，尤其是涉及一种制备醋酸去氨加压素的方法。
背景技术：
醋酸去氨加压素,药物别名弥凝(Minirin),英文名称Desmopressin Acetate。是一种泌尿系统用药，主要用于中枢性尿崩症、夜间遗尿及血友病等，也用于肾尿液浓缩功能的测试，也可用作术后止血。
目前国内醋酸去氨加压素的制备方法主要由液相法和固相法。液相法产生较多废液，反应时间长，难纯化、后处理繁琐等问题，但在合适的浓度氧化成环效率极高，畐1J 产物较小。固相法合成 Mpa (trt)-Tyr (tBu)-Phe-Gln (trt)-Asn (trt)_Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AM Resin虽然高效简单,分子间成环肽产率极低，同时要求氨基树脂取代率较小等缺点。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明人提供了一种醋酸去氨加压素的制备方法。本方法具有高收率、低成本、环境友好、有利于规模化生产等优点。本发明的技术方案如下
一种醋酸去氨加压素的制备方法，具体制备方法如下
(1)制备Fmoc-Gly-AM Resin
Rink AM Resin用二氯甲烷浸泡至充分溶胀，用N，N-二甲基甲酰胺洗涤，然后用25%哌啶/N，N- 二甲基甲酰胺脱Fmoc保护基，洗涤后得到A产物；
取Fmoc-Gly-OH，I-羟基苯并三唑，N, N’ - 二异丙基碳二亚胺加入到无水N，N- 二甲基甲酰胺中，在(T5°C活化后加入A产物，在25 35°C反应2 4 h后洗涤，得到Fmoc-Gly-AMResin ；
(2)制备Mpa(trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AMResin
将步骤(I)所得Fmoc-Gly-AM Resin加入固相合成管中，用25%哌啶/N，N-二甲基甲酰胺脱Fmoc-Gly-AM Resin上的Fmoc保护基，，洗涤后得到B产物；
取Fmoc-D-Arg-OH，1_羟基苯并三唑，N，N’ - 二异丙基碳二亚胺加入到无水N，N-二甲基甲酰胺中，在(T5°C活化后加入B产物，在25 35°C反应广3 h后洗涤，得到Fmoc-D-Arg-Gly-AM Resin ；
重复上述过程，依次偶联 Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys (trt) -OH、Fmoc-Asn (trt) - OH、Fmoc-Gln (trt) -OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr (tBu) -OH、Mpa (trt) -OH,全部偶联完毕后，得到Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly -AM Resin ；
(3 )裂解 Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AM Resin
将三氟乙酸与苯甲硫醚按照质量比94:6混合配制成裂解液，取裂解液，加入步骤(2)制备好的 Mpa(trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-Cys(trt)-Pro-D-Arg- Gly-AMResin中，裂解初始温度为0 5°C，保持O. 5 lh，逐渐升到2(T30°C，保持2h，得到Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-CyS-Pro-D-Arg-Gly-NH3 ；
(4)氧化成环
将步骤(3)Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D_Arg-Gly-NH3 加入适量纯化水中，配制成2g/L溶液,加入氧化剂双氧水lml/L氧化液,反应I. 5^2. Oh,得到Mpa-Cys成环的Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH3 ;最后经过高效液相纯化和真空冻干得到高质量醋酸去氨加压素。本发明有益的技术效果在于
本发明操作简单，原料投料少，成本低，纯度高等优点，采用固-液结合的合成方法，具有固相合成法和和液相合成法高效，简单，同时也避免了二者的缺点相比于液相法减少了大量废液，同时没有固相环化带来的聚合副产物，极大地提高了纯度和收率。
具体实施例方式下面对本发明进行具体描述。步骤I :制备 Fmoc-Gly-AM Resin。称取Rink AM Resin (一种常见试剂,具体为一种带连接臂的氨基树脂)树脂10 g加入固相合成管中，用50 mL 二氯甲烷浸泡30 min，使树脂充分溶胀，依次用70 mL N，N-二甲基甲酰胺洗涤2次，依次用70 mL 25%哌啶/N，N- 二甲基甲酰胺在30°C脱Fmoc保护基2次,第一次5 min、第二次15 min,中间用70 mL无水N, N-二甲基甲酰胺洗漆一次。然后依次用70 mL无水N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺各洗涤2、1、1、2次。称取Fmoc-Gly-OH (N-荷甲氧轻基保护甘氨酸)4 g, I-轻基苯并三唑I. 5 g,N，N’- 二异丙基碳二亚胺1.8 mL加入到10 mL无水N，N-二甲基甲酰胺，在(T5°C活化5min。加入上述固相合成管在30°C反应3 h，反应终点以茚三酮法检测为准。依次用70 mL无水N, N- 二甲基甲酰胺洗漆2次,每次不少于I min,得到Fmoc-Gly-AM Resin。步骤 2 Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AM Resin的制备。将5 g Fmoc-Gly-AM Resin加入固相合成管中，依次用70 mL 25%哌啶/N，N-二甲基甲酰胺在30°C脱Fmoc-Gly-AM Resin上的Fmoc保护基2次,第一次5 min、第二次15 min,中间用70 mL无水N, N-二甲基甲酰胺洗漆一次,不少于I min。依次用70 mL无水N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺各洗涤2、1、1、2次，每次不少于lmin。称取Fmoc-D-Arg-OH 3. 5 g, I-轻基苯并三唑1.3 g, N, N’ - 二异丙基碳二亚胺1.5 mL加入到10 mL无水N，N-二甲基甲酰胺，在(T5°C活化5 min，加入上述固相合成管在30°C反应2 h，反应终点以茚三酮法检测为准。依次用70 mL无水N，N-二甲基甲酰胺洗涤2 次，每次不少于 I min,得 Fmoc- D-Arg-Gly-AM Resin。
重复上述过程，依次偶联Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys (trt) -ΟΗλ Fmoc-Asn (trt) - OH、Fmoc-Gln (trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr (tBu)-OH、Mpa (trt)-OH。全部偶联完毕后，得到 Mpa (trt) -Ty r (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly -AM Resin0步骤(3):裂解Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln-Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AM Resin。将三氟乙酸与苯甲硫醚按照质量比94:6混合配制成裂解液，取30ml该裂解液，加入 15g 步骤(2)制备好的 Mpa(trt)-Tyr (tBu) -Phe-Gly-Asn (trt) -Cys (trt) -Phe-D-Arg-Gly-AM Resin中，裂解初始温度为0 5°C，保持O. 5h，逐渐升到2(T30°C，保持lh，得到Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH30步骤(4):氧化成环。将步骤(3)Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D_Arg-Gly-NH3加入适量纯化水中，配制成2g/L溶液，加入氧化剂双氧水lml/L氧化液，反应I. 5^2. Oh，得到Mpal_Cys6 二硫健成环的Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH3 ;最后经过高效液相纯化和真空冻干
得到高质量醋酸去氨加压素。以上内容是醋酸去氨加压素合成路线最佳优选方案之一，以对本发明所做的进一步详细说明，但并不能认定本发明的具体实施只限于这些说明，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演及替换，都应当视为本发明保护范围。
权利要求
1.一种醋酸去氨加压素的制备方法，其特征在于具体制备方法如下(1)制备Fmoc-Gly-AM Resin Rink AM Resin用二氯甲烷浸泡至充分溶胀，用N，N-二甲基甲酰胺洗涤，然后用25%哌啶/N，N- 二甲基甲酰胺脱Fmoc保护基，洗涤后得到A产物； 取Fmoc-Gly-OH，I-羟基苯并三唑，N，N’ - 二异丙基碳二亚胺加入到无水N，N- 二甲基甲酰胺中，在(T5°C活化后加入A产物，在25 35°C反应2 4 h后洗涤，得到Fmoc-Gly-AMResin ；(2)制备Mpa(trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AMResin 将步骤(I)所得Fmoc-Gly-AM Resin加入固相合成管中，用25%哌啶/N，N- 二甲基甲 酰胺脱Fmoc-Gly-AM Resin上的Fmoc保护基，，洗涤后得到B产物； 取Fmoc-D-Arg-OH，I-羟基苯并三唑，N，N’ - 二异丙基碳二亚胺加入到无水N，N- 二甲基甲酰胺中，在(T5°C活化后加入B产物，在25 35°C反应广3 h后洗涤，得到Fmoc-D-Arg-Gly-AM Resin ； 重复上述过程，依次偶联 Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys (trt) -OH、Fmoc-Asn (trt) - OH、Fmoc-Gln (trt) -OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr (tBu)-OH、Mpa(trt)_0H，全部偶联完毕后，得到 Mpa(trt) -Tyr(tBu) -Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-Cys(trt)-Pro-D- Arg-Gly-AM Resin ；(3)裂解Mpa(trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AMResin 将三氟乙酸与苯甲硫醚按照质量比94:6混合配制成裂解液，取裂解液，加入步骤(2)制备好的 Mpa(trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-Cys(trt)-Pro-D -Arg-Gly-AMResin中，裂解初始温度为0 5°C，保持0. 5 lh，逐渐升到20 30°C，保持I 2h，得到Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH3； (4)氧化成环 将步骤(3)制备得到的 Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D_Arg-Gly-NH3 加入适量纯化水中，配制成2g/L溶液，加入氧化剂双氧水lml/L氧化液，反应I. 5^2. Oh，得到Mpa-Cys成环的Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D_Arg-Gly-NH3 ;最后经过高效液相纯化和真空冻干得到高质量醋酸去氨加压素。
全文摘要
一种醋酸去氨加压素的制备方法，属于多肽类药物生产技术领域，具体制备方法为将RinkAMResin和Fmoc-Gly-OH进行反应，生成Fmoc-Gly-AMResin，然后依次偶合Fmoc-D-Arg-OH等基团生成Fmoc-Mpa(trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-Cys(trt)-Pro-D-Arg-Gly-AMResin，脱Fmoc后裂解、氧化得到1-6成环的Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH3，最后纯化、真空冻干得到醋酸去氨加压素。本方法收率高、成本低、环境友好、有利于规模化生产。
文档编号C07K7/06GK102863513SQ20121033604
公开日2013年1月9日 申请日期2012年9月12日 优先权日2012年9月12日
发明者杨毅跃, 康国伟, 姚程成, 蒙相锋, 鲁尧 申请人:无锡市凯利药业有限公司