专利名称：一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法
技术领域：
本发明涉及一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法。
背景技术：
白藜芦醇(resveratrol, Res.),化学名称为3,4’，5_三轻基-二苯乙烯(3,4’，5-trihydroxystiIbene)。其别名为虎杖式元,又称苗三酹,分子式为C14H12O3,其相对分子质量为228. 25，纯品为无色针状结晶，熔点为256-258°C，在261°C以上易升华。目前，提取白藜芦醇的方法及报道很多，但都采用有机溶剂提取，萃取或者柱层析提纯工艺，生产成本高，产品收率低、不适用于工业化大生产。中国专利201010127142. 6 —种高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，采用先发酵 酶解，再有机混合溶剂提取，经浓缩、醇沉、水沉、过滤、醇溶、柱层析、纯化等步骤，精制得98%的产品。该方法生产周期长，由于发酵酶的不同选择，酶解那块就需4-10天时间，柱层析采用硅胶或者氧化铝，生产成本高，再者加入有机溶剂，增加生产安全风险，不适用于大生产。中国专利200310112538. 3虎杖苷和白藜芦醇的新制备方法，采用聚酰胺层析法分离纯化虎杖苷和/或白藜芦醇，此方法采用聚酰胺树脂进行分离，生产成本高，对生产设备要求高，再者因为没有对白藜芦醇苷进行转化，如生产白藜芦醇收率非常低，不适用于大生产。中国专利99115156. 9 一种从中药虎杖中提取白藜芦醇的工艺，采用在原料中加入复合酶在恒温下进行酶解反应4 8 7 2小时获得酶解原料；再用溶剂萃取、浓缩获得含白藜芦醇的半成品，再经精制即得。此发明利用溶剂进行萃取，白藜芦醇转化低，生产成本高，不适用于大生产。
发明内容
本发明为解决现在技术中的问题，提供一种生产成本低、生产周期短、产品收率高，且未加入任何有机溶剂，更适用于大规模生产的从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法。本发明采用以下技术方案予以实现
本发明一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，它包括以下步骤；
a.粉碎将原药材虎杖用药材粉碎机粉碎成5-20目的细小颗粒。b.酶解将步骤a粉碎好的虎杖颗粒加入其1-5倍重量的水润湿，并加入相当于原药材虎杖O. 1-1%重量的酶解物，充分搅拌均匀，于30-40°C下酶解24小时，所述酶解物为酵母、酿酒曲、植物水解酶、纤维素酶的一种或几种混合。C.提取将步骤b酶解好后的药材虎杖每次加入其4-10倍重量、浓度为50-90%的乙醇，加热回流提取I小时，提取三次，合并三次提取药液，经回收乙醇，浓缩至药液量为原药材重量的1-10倍，静置放冷。
d.离心将步骤c静置放冷后的药液经三足离心或者管式离心过滤，得滤液。e.上柱将步骤d的滤液直接上树脂柱，先用水洗脱干净，然后用3-10倍量树脂体积的浓度为40-90%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为原药材重量的O. 5-5倍，静置放冷，产生浅黄白色结晶。.干燥将步骤e的结晶体用水冲洗干净后，置于60°C真空干燥箱进行干燥1-5小时，干燥完后即得白色产品，白藜芦醇含量在90%以上。优选的，所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，所述步骤b为将步骤a粉碎好的虎杖颗粒加入5倍量水浸泡药材，并加入相当于原药材的O. 5%重量的酶解物，充分搅拌均匀，于35-40°C酶解24小时，最佳酶解温度为38°C，最佳酶解物为酿酒曲。
优选的，所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，所述步骤c为 将步骤b酶解好后的药材虎杖每次加入其重量的5-8倍量、浓度为60-80%的乙醇，力口
热回流提取I小时，提取三次，合并三次提取药液，经回收乙醇，浓缩至药液量为原药材重量的3-6倍，静置放冷。更优选的，所述步骤c中，乙醇浓度为75%，药液浓缩至药液量为原药材重量的5倍。本发明方案中，优选的步骤e为
将步骤d的滤液直接上树脂柱，当进完药液后，先用纯化水洗至无色透明，然后用4-7倍量树脂体积的浓度为50-70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为原药材重量的I. 5-3. 5倍，静置放冷，产生浅黄白色结晶，所述树脂为D-101，AB-8, XC-7 或 LX-17 中的一种。所述步骤e最佳为将步骤d的滤液直接上树脂柱，当进完药液后，用纯化水洗至无色透明后，用5倍量树脂体积的65%浓度乙醇解吸，收集65%乙醇洗脱液，经回收乙醇后，所述药液减压浓缩至药液量为原药材重量的2倍。所述树脂最佳为XC-7大孔吸附树脂。本发明一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，最佳具体方案为以下步骤 取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入
相当于原药材重量O. 5%的酿酒曲，温度控制在38°C，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为75%的乙醇回流提取三次，每次提取I小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的XC-7大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%的乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为200公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60°C真空干燥箱，干燥4小时，得产品白藜芦醇。本发明与现有技术相比具有以下显著的优点
(I)本发明纯化工艺简单，一改以前需要反复结晶或者高成本的柱层析，一次上柱就能得到高含量的白藜芦醇，既提高了产品收率，又降低了生产成本。(2)本发明采用酿酒曲对原料进行酶解，24小时就能酶解完全，大大缩短了生产周期。(3)所用溶剂为乙醇和水，无污染，生产安全。(4)且未加入任何有机溶剂，更适用于大规模生产。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。实施例I
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加300公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材O. 5%的酵母，温度控制在35°C，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤浓度为65%的乙醇回流提取三次，每次提取I小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为400公斤，静置放冷后，经三足离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的XC-7大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%的乙醇洗脱干净，收集65%乙醇洗脱液，经回收乙醇 后，减压浓缩至药液量为200公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60°C真空干燥箱，干燥4小时，称重得产品I公斤，白藜芦醇含量为90. 52%。实施例2
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成15目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材重量O. 5%的酿酒曲，温度控制在38°C，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为75%的乙醇回流提取三次，每次提取I小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的XC-7大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%的乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为200公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60°C真空干燥箱，干燥3小时，得，称重得产品I. I公斤，白藜芦醇含量为92. 68%。实施例3
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材O. 5%的酿酒曲，温度控制在39°C，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为80%的乙醇回流提取三次，每次提取I小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的AB-8大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为100公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60°C真空干燥箱，干燥4小时，称重得产品I. I公斤，白藜芦醇含量为85. 12%。实施例4
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成18目粗粉，加300公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材O. 5%的酵母，温度控制在35°C，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为60%的乙醇回流提取三次，每次提取I小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的D-101大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为100公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60°C真空干燥箱，干燥2小时，称重得产品O. 9公斤，白藜芦醇含量为86. 12%。
实施例5
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材O. 5%的纤维素酶，温度控制在35°C，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为70%的乙醇回流提取三次，每次提取I小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的LX-17大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为100公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60°C真空干燥箱，干燥4小时，称重得产品I. O公斤，白藜芦醇含量为90. 52%。实施例6
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材O. 5%的植物水解酶，温度控制在40°C，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为85%的乙醇回流提取三次，每次提取I小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的XC-7大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为100公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60°C真空干燥箱，干燥5小时，称重得产品I. I公斤，白藜芦醇含量为91. 65%。本发明的方案中，所述酶解物优选为酿酒曲，用不同酶解物对虎杖原药材进行对比酶解实验，结果表明，在24小时内酶解最完全的为酿酒曲，见表I。表I不同酶解物酶解情况
酶解物 j酶解时间j酶解温度j酶解后原药材中虎杖苷含量 I酶解后原药材中白藜芦醇含量酵母24 小时 38°C 一 0.25%I. 12%
酿酒曲 24 小时 38°C 一 0.03%1.23%
纤维素酶 24小时 38°C —0.85%0.82%
植物水解酶丨24小时 !38°C |θ. 54%I 0.96%
在本发明的方案中，所述的吸附树脂优选为XC-7大孔吸附树脂。用不同树脂对虎杖提取药液中白藜芦醇的除杂纯化比较，结果表明，XC-7大孔吸附树脂对白藜芦醇纯化最好，结果见表2。表2不同树脂对白藜芦醇纯化结果
琢If型号I药液量I树脂体积I上柱流速I白藜芦醇含f
D-101 500ml 100ml2BV/h 28.25%_
AB-8 ~ 500ml Tooml2BV/h~ 17%
XC-7 ~ 500ml ToQinl2BV/h~5θ! 58%
LX-17 1500ml 1100ml|2BV/h丨20·46%
权利要求
1.ー种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，它包括以下步骤； a.粉碎将原药材虎杖用药材粉碎机粉碎成5-20目的细小颗粒； b.酶解将步骤a粉碎好的虎杖颗粒加入其1-5倍重量的水润湿，并加入相当于原药材虎杖O. 1-1%重量的酶解物，充分搅拌均匀，于30-40°C下酶解24小时，所述酶解物为酵母、酿酒曲、植物水解酶、纤维素酶的ー种或几种混合； c.提取将步骤b酶解好后的药材虎杖每次加入其4-10倍重量、浓度为50-90%的こ醇，加热回流提取I小时，提取三次，合并三次提取药液，经回收こ醇，浓缩至药液量为原药材重量的1-10倍，静置放冷； d.离心将步骤c静置放冷后的药液经三足离心或者管式离心过滤，得滤液； e.上柱将步骤d的滤液直接上树脂柱，先用水洗脱干净，然后用3-10倍量树脂体积的浓度为40-90%こ醇洗脱，收集こ醇洗脱液，经回收こ醇后，减压浓缩至药液量为原药材重量的O. 5-5倍，静置放冷，产生浅黄白色结晶； f.干燥将步骤e的结晶体用水冲洗干净后，置于60°C真空干燥箱进行干燥1-5小时，干燥完后即得白色产品白藜芦醇。
2.如权利要求I所述的ー种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述步骤b为将步骤a粉碎好的虎杖颗粒加入5倍量水浸泡药材，并加入相当于原药材的O. 5%重量的酶解物，充分搅拌均匀，于35-40°C酶解24小时。
3.如权利要求2所述的ー种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述酶解温度为38で。
4.如权利要求2所述的ー种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述酶解物为酿酒曲。
5.如权利要求I所述的ー种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述步骤c为 将步骤b酶解好后的药材虎杖每次加入其重量的5-8倍量、浓度为60-80%的こ醇，カロ热回流提取I小时，提取三次，合并三次提取药液，经回收こ醇，浓缩至药液量为原药材重量的3-6倍，静置放冷。
6.如权利要求5所述的ー种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是， 所述步骤c中，こ醇浓度为75%，药液浓缩至药液量为原药材重量的5倍。
7.如权利要求I所述的ー种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述步骤e为 将步骤d的滤液直接上树脂柱，当进完药液后，先用纯化水洗至无色透明，然后用4-7倍量树脂体积的浓度为50-70%的こ醇洗脱，收集こ醇洗脱液，经回收こ醇后，减压浓缩至药液量为原药材的1.5-3. 5倍，静置放冷，产生浅黄白色结晶，所述树脂为D-101，AB-8,XC-7或LX-17中的ー种。
8.如权利要求7所述的ー种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述步骤e为 将步骤d的滤液直接上树脂柱，当进完药液后，用纯化水洗至无色透明后，用5倍量树脂体积的65%浓度こ醇解吸，收集65%こ醇洗脱液，经回收こ醇后，所述药液减压浓缩至药液量为原药材重量的2倍。
9.如权利要求7或8所述的ー种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述树脂为XC-7大孔吸附树脂。
10.如权利要求I所述的ー种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，它还可以具体为以下步骤 取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材重量O. 5%的酿酒曲，温度控制在38°C，酶解24小吋，酶解完后，加入500公斤、浓度为75%的こ醇回流提取三次，每次提取I小时，合并三次提取液，经回收こ醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的XC-7大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%的こ醇洗脱干净，收集浓度为65%的こ醇洗脱液，经回收こ醇后，减压浓缩至药液量为200公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60°C真空干燥箱，干燥4小时，得白藜芦醇产品。
全文摘要
本发明涉及一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，它具体包括将原药材虎杖粉碎、酶解、提取、离心、上柱和干燥等步骤制得白藜芦醇产品，本发明纯化工艺简单，克服了以前需要反复结晶或者高成本的柱层析，一次上柱就能得到高含量的白藜芦醇，既提高了产品收率，又降低了生产成本，此外，本发明采用酿酒曲对原料进行酶解，24小时就能酶解完全，大大缩短了生产周期，并且所用溶剂为乙醇和水，无污染，生产安全。
文档编号C07C37/70GK102838455SQ201210343348
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月17日 优先权日2012年9月17日
发明者徐月灿 申请人:湖南希尔天然药业有限公司