专利名称：一种从长柄石杉中提取石杉碱甲的新方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体是以贵州省六枝地区产的长柄石杉为原料首次分离到生物碱石杉碱甲的制备方法。石杉碱甲易透过血脑屏障，对脑内乙酰胆碱脂酶(AchE)具有强效抑制作用，明显提高脑内乙酰胆碱水平，促进学习、记忆过程或明显改善记忆障碍的作用。
背景技术：
长柄石杉//uperziaserrata f. Iongipetiolata (Spring) Ching 系石杉科石杉属蕨类植物蛇足石杉的一变种。分布于我国西南地区贵州、四川、重庆、云南等地海拔300-1900米的山坡、河谷、溪边、林下、林缘或灌丛下。具散瘀消肿、止血生肌、清热解毒功效，民间用于灭虱、灭臭虫和治疗蛇咬伤等。[《贵州药用蕨类植物》.[M],贵州贵阳贵 州科技出版社，2012，32·]。石杉碱甲(Huperzine A)，又称福定碱，为我国科学家从民间草药“千层塔”[蛇足石杉，Huperzia serrata (Thunb. ex Murray) Trev]中分离得到的石松生物喊。该化合物是一种强效、高选择性并具有可逆性的乙酰胆碱酯酶抑制剂，对早老性痴呆、单纯性记忆障碍及重症肌无力等症状具有显著的疗效，现已广泛应用于临床。目前，虽然石杉碱甲可以通过化学合成的方法获得，但其效率低、毒性大、成本高。因此，石杉碱甲仍主要从自然资源中获得。石杉喊甲(HuperzineA):化学名为(5R, 9R, 11E) _5_ 氨基-11 亚乙基 _5，8,9，10-四氢-7-甲基-5，9亚甲基环辛四烯并[幻吡啶-2 (IH)-酮，分子式为C15H18N2O,其化学结构式为
权利要求
1.一种从长柄石杉中提取石杉碱甲的新方法，其特征是依次按下列步骤制备 (1)提取液的制备 将自然干燥的长柄石杉样品粉碎后，用乙醇水加热回流提取，重复提取数次，收集提取液； (2)提取液的净化 将提取液减压浓缩回收乙醇，浓缩液用HCl水溶液调pH至2-3，用乙酸乙酯数次萃取，除去杂质；有机相乙酸乙酯弃去或回收，酸水相即为净化提取液； (3)长柄石杉总生物碱的制备 将净化提取液用氨水调PH至9-10，用氯仿萃取数次，合并氯仿萃取液，减压蒸馏除去氯仿得长柄石杉总生物碱； (4)石杉碱甲粗品的制备 将长柄石杉总生物碱用MPLC (RP-18)法，以甲醇水为溶剂系统进行洗脱，先用水洗脱，除去水溶性成分,再用5-30%v/v的甲醇水洗脱，通过HPLC检测合并含有石杉碱甲的组分，浓缩、真空干燥得淡黄色固体，即为石杉碱甲粗品； (5)高纯度石杉碱甲的制备 加适量丙酮或乙醇于上述石杉碱甲粗品中，加热使其溶解并趁热过滤，滤液于室温下结晶，如此反复重结晶数次，使石杉碱甲纯度为98-99%。
2.根据权利要求I所述的一种从长柄石杉中提取石杉碱甲的新方法，其特征是各步骤工艺条件是 (1)提取液的制备 将自然干燥的长柄石杉样品粉碎至20-80目，加入10-20倍重的20-60% v/v乙醇水，75°C加热回流提取3-5小时，重复提取3-4次，收集提取液备用； (2)提取液的净化 将提取液减压浓缩至原体积的8-15%，浓缩液用5%。v/v的HCl水溶液调pH至2_3，用等体积乙酸乙酯萃取3-4次，除去杂质；有机相乙酸乙酯弃去或回收，酸水相即为净化提取液； (3)长柄石杉总生物碱的制备 将净化提取液用I :l(v/v)的氨水调PH至9-10，用等体积的氯仿萃取4-5次，合并氯仿萃取液，减压蒸馏除去氯仿得长柄石杉总生物碱； (4)石杉碱甲粗品的制备 将长柄石杉总生物碱用MPLC (RP-18)法，以甲醇水为溶剂系统进行洗脱，先用水洗脱，除去水溶性成分，再用5-30% v/v的甲醇水洗脱，通过HPLC检测合并含有石杉碱甲的组分，将甲醇水洗脱液浓缩、真空干燥得淡黄色固体，即为石杉碱甲粗品； (5)高纯度石杉碱甲的制备 加适量丙酮或乙醇于上述石杉碱甲粗品中，加热使其溶解并趁热过滤，滤液于室温下结晶，如此反复重结晶2-3次,使石杉碱甲纯度为98-99%。
3.根据权利要求2所述的一种从长柄石杉中提取石杉碱甲的新方法，其特征是各步骤工艺条件是 (I)提取液的制备将自然干燥的长柄石杉样品粉碎至40目，加入20倍重的20% v/v乙醇水，于75°C水浴加热回流提取提取3次，第I次5小时，第2次4小时，第3次4小时，合并3次提取液； (2)提取液的净化 上述提取液于50°C下减压浓缩至原体积的10%，浓缩液用5%。v/v的HCl水溶液调pH至2-3，用等体积乙酸乙酯萃取3次，除去杂质；有机相乙酸乙酯弃去或回收，酸水相即为净化提取液； (3)长柄石杉总生物碱的制备 将净化提取液用I :l(v/v)的氨水调PH至9-10，用等体积的氯仿萃取4次，合并氯仿萃取液，减压蒸馏除去氯仿得长柄石杉总生物碱； (4)石杉碱甲粗品的制备 将长柄石杉总生物碱用MPLC (RP-18)法，以甲醇水为溶剂系统进行洗脱，先用水洗脱，除去水溶性成分，再用5-30% v/v的甲醇水洗脱，通过HPLC检测合并含有石杉碱甲的组分，将甲醇水洗脱液浓缩、真空干燥得淡黄色固体，即为石杉碱甲粗品； (5)高纯度石杉碱甲的制备 加适量丙酮或乙醇于上述石杉碱甲粗品中，加热使其溶解并趁热过滤，滤液于室温下结晶，如此反复重结晶3次,使石杉碱甲纯度为98-99%。
4.根据权利要求1-3之一所述的一种从长柄石杉中提取石杉碱甲的新方法，其特征是步骤(3)-(5)所用试剂为分析纯AR，水为蒸馏水。
5.根据权利要求1-3之一所述的一种从长柄石杉中提取石杉碱甲的新方法，其特征是MPLC (RP-18)法所用的中压柱为江苏利穗(苏州)科技公司生产，编号S-1101-3000 ;柱规格内径 156mm、高度 410mm、体积 7800 (mm)3。
6.根据权利要求1-3之一所述的一种从长柄石杉中提取石杉碱甲的新方法，其特征是步骤(5)重结晶所用的溶剂为丙酮。
全文摘要
本发明涉及一种从蕨类植物长柄石杉Huperziaserrataf.longipetiolata(Spring)Ching中提取石杉碱甲的新方法，涉及医药技术领域。本发明依次采用下列技术方案(1)提取液的制备；(2)提取液的净化；(3)长柄石杉总生物碱的制备；(4)石杉碱甲粗品的制备；(5)高纯石杉碱甲的制备。以上方法得到石杉碱甲白色固体纯度98%-99%。上述技术提取石杉碱甲的优点(1)以新资源长柄石杉为原料，扩展了单一从蛇足石杉中提取石杉碱甲的药材来源及技术方法；(2)采用20%-60%乙醇水提取，对仪器设备损害小，毒副作用低；(3)通过反相MPLC法富集石杉碱甲，成本低、纯度高、得率高，易于规模化工业生产。
文档编号C07D221/22GK102863381SQ20121039694
公开日2013年1月9日 申请日期2012年10月18日 优先权日2012年10月18日
发明者张敬杰, 赵勤实, 吴兴德, 刘亚华, 李齐激, 潘炉台 申请人:贵阳中医学院