专利名称：用于检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂活性的探针、用途及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂活性的探针、用途及制备方法。
背景技术：
乙酰胆碱酯酶(AChE)活性快速检测技术的发展，对于促进人体健康以及环境保护
具有重大意义。目前用于治疗老年痴呆症的药物主要是乙酰胆碱酯酶抑制剂，通过抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)活性来控制患者体内乙酰胆碱含量，因此乙酰胆碱酯酶(AChE)活性检测剂的开发对于相关药物的筛选具有重要作用。此外，某些有机磷农药、氨基甲酸酯农药会对乙酰胆碱酯酶(AChE)活性产生抑制作用，因此乙酰胆碱酯酶(AChE)活性检测剂的研制对于检测环境中有机磷农药、氨基甲酸酯农药也能够发挥重要作用。传统乙酰胆碱酯酶(AChE)活性检测技术主要采用间接监控法，该方法采用硫代胆碱作为底物，乙酰胆碱酯酶(AChE)水解该底物生成硫代胆碱，后者与二硫代硝基苯甲酸(Ellman)反应生成黄色产物，通过吸收光谱监控黄色物质的生成速度来确定酶活性。但是，该方法在使用过程中往往会有背景干扰，且灵敏度较低。据发明人了解，应用荧光探针的检测方法具有良好的灵敏性，应当由此角度入手，研发更好的检测方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:克服现有技术存在的问题，提供一种用于检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂活性的探针、用途及制备方法。本发明技术构思如下:据发明人所知，氯化肉豆蘧酰胆碱(Myristoylcholinechloride)在乙酰胆碱酯酶(AChE)作用下裂解为酸和胆碱，只要制备出能与氯化肉豆蘧酰胆碱发生反应产生荧光的探针即可。本发明解决其技术问题的技术方案如下:本发明一种用于检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂活性的探针前体，其特征是，具有如式I所示的结构:
权利要求
1.一种用于检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂活性的探针前体，其特征是，具有如式I所示的结构:
2.一种制备权利要求1所述探针前体的方法，其特征是，包括以下步骤:第一步、将10，12-二炔二十五酸与氯化亚砜反应得到式II化合物；
3.根据权利要求2所述方法，其特征是，第一步的具体过程为:先将10，12-二炔二十五酸溶解于二氯甲烷、再加入氯化亚砜得到反应液，在氮气保护下持续搅拌该反应液直至反应结束；然后，减压蒸馏去除溶剂，即得式II化合物。
4.根据权利要求2所述方法，其特征是，第二步的具体过程为:先将式II化合物溶解于四氢呋喃中得到式II化合物溶液，再将式II化合物溶液加至含有三乙二醇的四氢呋喃溶液中、得到反应液，在氮气保护下持续搅拌该反应液直至反应结束；然后，减压蒸馏去除溶剂获得粗产物，并将粗产物以层析柱纯化，即得式I所示探针前体。
5.根据权利要求4 所述方法，其特征是，第二步中，在层析柱纯化过程中采用体积比100:2的二氯甲烷:甲醇为洗脱液。
6.一种用于检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂活性的囊泡探针，其特征是，由重量比为7:3的10，12-二炔二十五酸和式I化合物聚合而成。
7.一种制备权利要求6所述囊泡探针的方法，其特征是，包括以下步骤: 将10，12- 二炔二十五酸和式I化合物按重量比7:3溶解于二甲基亚砜得到DMSO溶液，将DMSO溶液加至温度为至少80°C的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中得到反应液，冷却反应液，以紫外光照射反应液进行聚合反应，即得囊泡探针。
8.根据权利要求7所述方法，其特征是，冷却反应液前，将反应液超声、并用滤器过滤。
9.根据权利要求7所述方法，其特征是，采用254nm紫外灯作为紫外光源。
10.权利要求6所述囊泡探针用于检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂活性的用途。
全文摘要
本发明涉及一种用于检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂活性的探针、用途及制备方法。该探针由重量比为7:3的10，12-二炔二十五酸和式Ⅰ化合物聚合而成，本发明的囊泡探针在4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中呈蓝色且无荧光，与氯化肉豆蔻酰胆碱发生反应后变为红色并发出荧光(荧光发射波长约550nm)，灵敏度高，易于操作，采用该探针的荧光检测方法在生物医药领域有极大的应用前景。
文档编号C07C69/606GK103073427SQ20121046177
公开日2013年5月1日 申请日期2012年11月16日 优先权日2012年11月16日
发明者陈小强, 周国栋, 王芳, 王惠琳 申请人:南京工业大学