专利名称：一种制备高纯枸杞酸的方法
技术领域：
本发明涉及植物药提取制备方法,具体涉及一种从枸杞(Lyciumchinense)提取制备高纯度枸杞酸的方法。
背景技术：
枸杞是作为对 人的健康有很多益处的食品，已被广泛应用。随着人们生活水平的日益提高，近年来相关枸杞的深加工产品也日益增多。但是，枸杞的原料产地来源多，质量也有较大的区别，进一步对制备枸杞提取物带来影响，导致深加工产品质量无法控制。目前，对于枸杞提取物的要求，只是以枸杞提取物中的多糖成分作为质量指标。而实际上除此之外，还有一些其它成份，例如黄酮，枸杞酸，牛磺酸，甜菜碱等等，它们都有可能会影响枸杞提取物的质量。本发明人根据文献报道[I] “枸杞酸”是一种目前仅在枸杞中发现的独有的抗氧化有效成分，它是一种抗坏血酸的β葡萄糖苷，其化学名2-0-(β -D-glucopyranosyl)ascorbic acid (AA-2 β G)枸杞酸是枸杞中特有的标志性成分，检测枸杞酸含量可以对枸杞原料质量进行鉴别同时也希望以此为基础建立新的针对枸杞提取物的质量标准。由于目前未见枸杞酸有市售品，为此有必要以专利形式公布一种全新的制备方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服上述的不足之处，研究设计从枸杞(Lycium chinense)提取制备高纯度枸杞酸的方法。本发明提供了一种制备高纯枸杞酸的方法，该方法包括下列步骤( I)提取将枸杞原料用溶剂冷浸或加热提取；(2)离心结合平板过滤将上述浸泡物料使用高速离心机去掉植物渣，再经板框过滤机滤得清液；(3)浓缩所得清液真空浓缩至不含有机溶媒；(4)大孔树脂除杂浓缩液以I个柱体积量/小时的流量通过大孔吸附树脂柱，收集全部通过的液体；(5)通过离子交换纤维将步骤(4)料液以I个柱体积量/小时的流速通过强碱性阴离子交换纤维，用反渗透纯水洗至中性，交换纤维再用两个柱体积O. 5%的甲酸溶液洗脱，以O. 5个柱体积量/小时的流速操作；(6)浓缩收集全部两个柱体积的洗脱液真空浓缩并经加水再浓缩直至浓缩液中无甲酸(pH 7)；(7)中压层析取上述浓缩液，上于中压层析柱上，采用乙腈、甲醇，乙醇、丙醇或丙酮的水溶液作为洗脱剂，洗脱液用HPLC检测，收集枸杞酸相对集中的馏分；(8)浓缩真空浓缩经HPLC检测为枸杞酸相对集中的层析馏分；(9)将上述浓缩物重复步骤(7)进行再一次层析，收集枸杞酸高度集中的馏分；
(10)浓缩干燥真空浓缩上述枸杞酸高度集中的层析馏分至干即得。通过本发明方法制得的枸杞酸经HPLC鉴别纯度达到959Γ97%。本发明可用中国宁夏、新疆、甘肃和河北等地产的枸杞为原料。本发明方法步骤(I)用于提取的溶剂可以是水、甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮或是水与甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮的(Γιοο%的混合液，优选纯甲醇或者纯乙腈。溶剂与枸杞的重量配比为1:8 1:16，优选1:14。冷浸温度和时间是4 90V和Γ14小时，优选25°C和8小时。步骤(2)用转速在8000转/分钟的高速离心机除去植物渣。步骤(4)中的除杂所用的大孔树脂为非极性或低极性的D-101、AB-8、ADS-17或HP-20，优选 D-101。步骤(5)通过的强碱性阴离子交换纤维是ZB-2强碱性阴离子交换纤维。步骤(7、9)中所述的中压层是指使用DIOL或RP8中压层析预制柱为MERCKLiChroprep DIOL和MERCK LiChroprep RP8。层析流动相采用乙腈或者甲醇与水配制的梯度洗脱系统，梯度从甲醇与水的比例为1% (1:99V/V)起逐渐升高比例到50% (50:50V/V)止，流量为20毫升/分钟。以紫外在线检测器信号为准收集260nm监测下的枸杞酸出峰部位，自动收集仪收集枸杞酸高度集中的馏分。本发明方法制备的枸杞酸经光谱鉴定与抗坏血酸的β葡萄糖苷完全一致。高分辨质谱数据显示Q-Tofu分子量是361. 0741，计算得出枸杞酸含钠离子的分子式为Ci2H180nNa。那么枸杞酸的分子量应该是338,分子式是C12H18O1115再结合枸杞酸的核磁共振光谱碳氢数据的解读推定枸杞酸的分子结构与已知的2-0-( β -D-glucopyranosyl)ascorbic acid 一致。
Η% Η
HOOrn^l/\4’
6 H M0H
Ho^Vf。入。)
I Rho
HO碳氢数据
NuH-NMR (ppm D20)C-NMR (ppm D20)---
I------------178.29
权利要求
1.一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，该方法包括下列步骤 (1)提取将枸杞原料用溶剂冷浸或加热提取； (2)离心结合平板过滤将上述浸泡物料使用高速离心机去掉植物渣，再经板框过滤机滤得清液； (3)浓缩所得清液真空浓缩至不含有机溶媒； (4)大孔树脂除杂浓缩液以I个柱体积量/小时的流量通过大孔吸附树脂柱，收集全部通过的液体； (5)通过离子交换纤维将步骤(4)料液以I个柱体积量/小时的流速通过强碱性阴离子交换纤维，用反渗透纯水洗至中性，交换纤维再用两个柱体积O. 5%的甲酸溶液洗脱，以O.5个柱体积量/小时的流速操作； (6)浓缩收集全部两个柱体积的洗脱液真空浓缩并经加水再浓缩直至浓缩液中无甲酸 pH 7 ; (7)中压层析取上述浓缩液，上于中压层析柱上，采用乙腈、甲醇，乙醇、丙醇或丙酮的水溶液作为洗脱剂，洗脱液用HPLC检测，收集枸杞酸相对集中的馏分； (8)浓缩真空浓缩经HPLC检测为枸杞酸相对集中的层析馏分； (9)将上述浓缩物重复步骤(7)进行再一次层析，收集枸杞酸高度集中的馏分； (10)浓缩干燥真空浓缩上述枸杞酸高度集中的层析馏分至干即得。
2.根据权利要求I所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，步骤(I)用于提取的溶剂为水、甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮或是水与甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮的(Γιοο%的混合液，优选纯甲醇或者纯乙腈；溶剂与枸杞的重量配比为1:8 1:16，优选1:14。
3.根据权利要求I所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，所述步骤(I)冷浸温度和时间为4 90。。，4 14小时；优选25°C，8小时。
4.根据权利要求I所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，所述步骤(2)用转速在8000转/分钟的高速离心机除去植物渣。
5.根据权利要求I所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的除杂所用的大孔树脂为非极性或低极性的D-101、AB-8、ADS-17或HP-20，优选D-101。
6.根据权利要求I所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，所述步骤(5)通过的强碱性阴离子交换纤维为ZB-2强碱性阴离子交换纤维。
7.根据权利要求I所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，所述步骤(7)或(9)中所述的中压层是指使用DIOL或RP8中压层析预制柱为MERCK LiChroprep DIOL或MERCK LiChroprep RP8 ;层析流动相采用乙腈或者甲醇与水配制的梯度洗脱系统，梯度从甲醇与水的比例为1%1:99V/V起逐渐升高比例到50%50:50V/V止，流量为20毫升/分钟；以紫外在线检测器信号为准收集260nm监测下的枸杞酸出峰部位，自动收集仪收集枸杞酸高度集中的馏分。
8.根据权利要求I所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，制得的枸杞酸经HPLC鉴别纯度达到95% 97%。
全文摘要
本发明公开了一种高纯枸杞酸制备方法。包括将枸杞原料用溶剂冷浸或加热提取、过滤、浓缩、大孔树脂除杂、通过离子交换纤维富集以及两次中压层析。通过本发明方法制备得到高纯枸杞酸，由高效液相色谱检测枸杞酸含量可达95%以上。本发明公开的枸杞酸是枸杞中独有的标志性成分，可作为枸杞深加工产品的真伪鉴别指标，若同时对枸杞酸进行含量测定又可以起到保证枸杞深加工产品质量的作用。本发明将对枸杞提取物加工品质的提高，对造福于人类健康具有积极作用。
文档编号C07H1/08GK102942606SQ201210532800
公开日2013年2月27日 申请日期2012年12月11日 优先权日2012年12月11日
发明者殷梦龙, 杨延超, 董慧燕, 李旭孟 申请人:上海诺德生物实业有限公司