专利名称：一种阿维菌素B2a的提取制备方法
技术领域：
本发明涉及抗生素的提取制备方法，具体地说是一种阿维菌素B2a的提取制备方法。
背景技术：
阿维菌素是近20年来在我国发展起来的新型抗生素农药，属于微生物发酵产品，是目前替代有机磷高毒农药的最理想的农药产品。阿维菌素是由链霉菌中灰色链霉菌(Streptomyces avermitilis)发酵产物分离提取得到的一组结构类似的十六元大环内酯类抗生素，由一组结构相近的8个同系物组成，BI和B2是该同系物中的两大类组分。阿维菌素B类组分对线虫、昆虫、螨类具有极高的生物杀虫活性，但对不同靶标的杀虫能力Bla 和B2a又有显著的区别。BI组分对家畜消化道线虫的毒理活性最高，而B2对非消化道体外线虫的毒理活性则是BI组分的2倍，对玉米食根(甲)虫的毒力活性B2a是Bla的3倍。目前阿维菌素BI的生产制备方法已是一种比较成熟的技术，它通常包括以下步骤从阿维菌素发酵液中提出干燥菌丝体，浸提后浓缩、加萃取剂萃取，萃取液加入乙醇，升温至70°C左右后，降温至35— 25°C，进行结晶，然后再经抽滤，得到阿维菌素BI晶体粗品，再经提取，即可获得纯度可达95%以上的阿维菌素BI。在阿维菌素BI的生产过程中，抽滤所得到的母液通常是浓缩成油膏作为废弃物处理。阿维菌素B2a虽有已研究人员发现其具有与阿维菌素BI不一样的毒理活性，但因其不便于分离纯化，因此，至今未得到产业化应用。而追踪阿维菌素发酵液中不同阿维菌素同系物的含量，其中Bla和B2a两个组分的含量基本上相同，都达到了 40-45%，即阿维菌素B的含量占总阿维菌素总量的90%以上。可是按照现有的提取方法，从发酵液中仅可获得高纯度阿维菌素BI。由此可见，大量的阿维菌素B2a在提取分离阿维菌素BI的过程中被白白浪费。在如何解决提取、分离阿维菌素B2的问题上，CN201010192026. 2提出了一种从残留阿维菌素中分离提取阿维菌素中不同组分的方法。该方法是采用柱层析法，来实现回收阿维菌素结晶母液中的B2a、Bib、Bla、Ala、A2a的目的。该方法虽然能有效回收阿维菌素结晶母液的各个组分，但其不仅成本高，而且回收规模有限，不适于工业化生产。
发明内容
本发明的目的是要提供一种成产成本低、提取效果好、且易于工业化生产的阿维菌素B2a的提取制备方法。本发明的目的是这样实现的本发明所提供的阿维菌素B2a的提取制备方法，在一个总的发明构思框架下有以下两种方案第一种方法包括以下步骤a.将阿维菌素发酵液制成干菌丝体，加乙醇浸提、过滤，得浸提液；(本发明所述浸提是指通过乙醇浸泡菌丝体，使菌丝体中的阿维菌素溶解到乙醇中，从而使有效成分溶解至乙醇溶液中)。b.将浸提液浓缩后，加入甲苯、DMF、或乙酸乙酯中的任意一种萃取剂萃取，得到萃取液I ;萃取剂的加入量可参照现有阿维菌素有效成分提取方法中的加入量。一般可为被萃取物质质量的5 6倍。C.萃取液I过滤，除去萃取剂后，加入乙醇，升温至68-72°C后，降温至3525°C，进行结晶，然后再经抽滤，得到滤饼I为阿维菌素BI晶体粗品，得到的滤液为母液；d.将c步所获母液，浓缩成油膏；e.油膏中加入甲苯萃取剂萃取，得到萃取液II ；
f.在萃取液II中加入助滤剂(助滤剂的加入量没有特别限定，以能够达到助率效果为宜)，搅拌均匀后，降温至10 0°C，析出大量晶体后，养晶，抽滤；得到滤饼II，滤饼II中加甲苯溶解，升温至80 100°C，过滤，除去助滤剂，滤液再次降温至10 0°C，析出大量晶体后，养晶，抽滤；所得滤饼用0 10°C甲苯进行漂洗，得到阿维菌素B2a晶体粗品；；g.将阿维菌素B2a晶体粗品进行重结晶，抽滤，干燥，获得阿维菌素B2a晶体精品。该方法中f工序所述的助滤剂可选用硅藻土、玻化微珠、珍珠岩，其中珍珠岩安全性高、来源广泛、助滤效果好，故为优选。加入量为按萃取液II总料液质量计为1-2%为更优选。该方法中f工序所述的搅拌均匀后，降温条件优选10 0°C，在该条件下，所提取分离的阿维菌素B2a纯度更高。该方法中g工序所述的将阿维菌素B2a晶体粗品进行重结晶，是将f工序得到阿维菌素B2a晶体粗品加入5-7倍质量的甲苯以及质量分子为0. 5-2%的活性炭，搅拌后升温至80— 100°C，待阿维菌素B2a晶体粗品融化，过滤，除去溶液中的助滤剂及活性炭，回收滤液至结晶罐，搅拌，同时降温至10 0 °C，待晶体大量析出后，保温20— 30分钟，抽滤。由此也可获得给更纯、更好的阿维菌素B2a晶体。本发明所提供的第二种阿维菌素B2a的提取制备方法，包括以下步骤a.将阿维菌素发酵液制成干菌丝体，加乙醇浸提、过滤，得浸提液；b.将浸提液浓缩后，加入甲苯萃取剂萃取，得到萃取液I ;c.在萃取液I中加入助滤剂，搅拌均匀后，降温至10 0°C，析出大量晶体后，抽滤；得到滤饼II，滤饼II中加甲苯溶解，升温至80 100°C，过滤，除去助滤剂，滤液再次降温至10 (TC，析出大量晶体后，养晶，抽滤；所得滤饼用0 10°C甲苯进行漂洗，得到阿维菌素B2a晶体粗品；d.将阿维菌素B2a晶体粗品进行重结晶，干燥，获得阿维菌素B2a晶体精品。同前所述，该方法中c工序所述的助滤剂优选珍珠岩助滤剂，其加入量按萃取液II总料液质量计为1_2%。该方法中c工序所述的搅拌均匀后，降温条件优选至10 0°C。该方法中d工序所述的阿维菌素B2a晶体粗品重结晶，优选将c工序得到阿维菌素B2a晶体粗品加入5-7倍质量的甲苯以及质量分子为0. 5-2%的活性炭，搅拌后升温至80-100°C，待阿维菌素B2a晶体粗品融化，过滤，回收滤液至结晶罐，搅拌，同时降温至10 O0C，待晶体大量析出后,保温20-30分钟，抽滤。
本发明方法可将阿维菌素B2a从阿维菌素发酵液中有效分离出来，其提取率高、提取效果好，为阿维菌素B2a产业化应用提供了技术保障。本发明方法工艺简单，流程易控制，生产成本低，尤其是其还可充分利用阿维菌素BI生产过程中的废弃物，由此进一步提高了阿维菌素发酵液的整体利用水平，大大降低了生产成本，提高了收益率。
图I是本发明的流程图。图2是按照本发明方法提取制备的阿维菌素B2a组分的液相色谱图。以下结合附图及具体实施例对本发明作进一步的说明。
具体实施例方式实施例I参照流程图I，具体步骤为a、采用阿维菌素发酵液为起始原料，用泵打入板框进行过滤。为提高滤速，阿维菌素发酵液中可加入适量助滤剂，也可将发酵液升温至80°C 90°C。过滤后得到菌丝体，然后烘干，得到干菌丝体。将干菌丝体放置在反应罐中，加入乙醇浸泡提取(简称浸提)。乙醇的加入量以能够完全浸没菌丝体为宜，乙醇的浓度可按照以常规浸提方法所示范围选择，本发明以75-95%为优选。干菌丝体经乙醇浸泡2-5小时后，收集浸提液，备用；滤渣可用乙醇重复浸提2-3次，收集浸提液，合并后备用；b、将浸提液打入蒸发罐内，用夹层蒸汽加热将浸提液浓缩，然后测定浸提浓缩液中阿维菌素BI的含量，加入5倍于阿维菌素BI质量的甲苯，和I倍阿维菌素BI重量的水，搅拌30min 40min，静置，排放出底部的水溶液，收集有机溶液，得到萃取液I。C、在萃取液I蒸除甲苯后所得料液中，加入2-5倍质量的乙醇，搅拌30min 40min,转入结晶罐中，升温至70°C左右后，然后降温至28_25°C，进行结晶，然后再经抽滤，得到滤饼I为阿维菌素BI晶体粗品。所得阿维菌素BI晶体粗品可按照现有提取制备阿维菌素BI的方法进行再次重结晶，从而获得纯度为95%以上的阿维菌素BI精品；抽滤得到的滤液为母液；d、将c步所得母液中的乙醇回收后，浓缩成油膏。以上部分提取得到的有效组分是阿维菌素BI，在所得油膏中含有大量的阿维菌素B2。e、对油膏中加入适量甲苯(能够使其溶解即可)，进行萃取，得到萃取液II ；f、在萃取液II中加入2%的珍珠岩助滤剂(100公斤萃取液II总料液，加入2公斤珍珠岩)，搅拌均匀后，降温至10 (TC，待析出大量晶体后，放置20-30分钟(养晶)，真空抽滤，得到滤饼II (含有助滤剂)。滤饼II再加入甲苯，加热至80-100°C，使之全部融化后，过滤，滤除助滤剂，回收滤液，滤液再次降温至10 0°C，待析出大量晶体后，养晶，真空抽滤，所得滤饼用0-10°C的甲苯漂洗至颜色发白后，烘干，得到的白色结晶粉末经检测为阿维菌素B2a粗品。g、阿维菌素B2a粗品可再加入甲苯，升温至80-100°C，使之溶解，(此刻也可加入活性炭，进行除色处理)，过滤，回收滤液，滤液再次降温至10 o°c，待析出大量晶体后，养晶，真空抽滤，所得滤饼用o-io°c的甲苯漂洗至颜色发白后，烘干，得到经过重结晶的阿维菌素B2a。如此反复重结晶3次，即得到纯度达89. 7%的阿维菌素B2a精品。收率为95%。其检测参数见表1，检测结果见附图2、表2。表I :
权利要求
1.一种阿维菌素B2a的提取制备方法，其特征在于它包括以下步骤 a.将阿维菌素发酵液制成干菌丝体，加乙醇浸提、过滤，得浸提液； b.将浸提液浓缩后，加入甲苯、DMF或乙酸乙酯中的任意一种萃取剂萃取，得到萃取液I ； C.萃取液I除去萃取剂后，加入乙醇，升温至68-72°C后，降温至35—25°C，进行结晶，然后再经抽滤，得到滤饼I为阿维菌素BI晶体粗品，得到的滤液为母液； d.将c步所获母液,浓缩成油膏； e.油膏中加入甲苯，得到萃取液II； f.在萃取液II中加入助滤剂，搅拌均匀后，降温至10 (TC，析出大量晶体II后，养晶，抽滤；得到滤饼II，滤饼II中加甲苯溶解，升温至80 100°C，过滤，除去助滤剂，滤液再次降温至10 (TC，析出大量晶体后，养晶，抽滤；所得滤饼用O 10°C甲苯进行漂洗，得到阿维菌素B2a晶体粗品； g.将阿维菌素B2晶体粗品进行重结晶，抽滤，干燥，获得阿维菌素B2a晶体精品。
2.根据权利要求I所述的阿维菌素B2a的提取制备方法，其特征在于f工序中所述的助滤剂为珍珠岩助滤剂，其加入量按萃取液II总料液质量计为I 2%。
3.根据权利要求I所述的阿维菌素B2a的提取制备方法，其特征在于f工序所述的搅拌均匀后，降温至10 o°c。
4.根据权利要求I所述的阿维菌素B2a的提取制备方法，其特征在于g工序所述将阿维菌素B2a晶体粗品进行重结晶，是将f工序得到阿维菌素B2a晶体粗品加入5_7倍质量的甲苯以及质量分数为O. 5 2%的活性炭，搅拌后升温至80-100°C，待阿维菌素B2a晶体粗品融化，过滤，回收滤液至结晶罐；然后，降温至10 0°C，待晶体大量析出后，保温20 30分钟，抽滤。
5.一种阿维菌素B2a的提取制备方法，其特征在于它包括以下步骤 a.将阿维菌素发酵液制成干菌丝体，加乙醇浸提、过滤，得浸提液； b.将浸提液浓缩后，加入甲苯、DMF或乙酸乙酯中的任意一种萃取剂，得到萃取液I; C.萃取液I，加入助滤剂，搅拌均匀后，降温至10 0°C，析出大量晶体II后，养晶，抽滤；到滤饼II，滤饼II中加甲苯溶解，升温至80 100°C，过滤，除去助滤剂，滤液再次降温至10 (TC，析出大量晶体后，养晶，抽滤；所得滤饼用O 10°C甲苯进行漂洗，得到阿维菌素B2a晶体粗品； d.将阿维菌素B2a晶体粗品重结晶，抽滤，干燥，获得阿维菌素B2a晶体精品。
6.根据权利要求5所述的阿维菌素B2a的提取制备方法，其特征在于c工序中所述的助滤剂为珍珠岩助滤剂，其加入量按萃取液II总料液质量计为I 2%。
7.根据权利要求I所述的阿维菌素B2a的提取制备方法，其特征在于g工序所述的阿维菌素B2a晶体粗品重结晶，是将c工序得到阿维菌素B2a晶体粗品加入5_7倍质量的甲苯以及质量分子为O. 5 2%的活性炭，搅拌后升温至80— 100°C，待阿维菌素B2a晶体粗品融化，过滤，回收滤液至结晶罐，然后，降温至10 0°C，待晶体大量析出后，保温20 30分钟，抽滤。
全文摘要
本发明公开了一种阿维菌素B2a的提取制备方法，它包括将阿维菌素发酵液制成干菌丝体，浸提；浸提液浓缩、加入甲苯等萃取剂萃取；萃取液Ⅰ进行结晶处理；所获母液浓缩成油膏；油膏中加入甲苯，得到萃取液Ⅱ；萃取液Ⅱ中加入助滤剂，搅拌、降温、析晶后，养晶，抽滤；得到滤饼加甲苯溶解，升滤液再次降温、析晶后，养晶，抽滤；得到阿维菌素B2a晶体粗品；阿维菌素B2a晶体粗品重结晶，获得阿维菌素B2a晶体精品。本发明方法可将阿维菌素B2a从阿维菌素发酵液中有效分离出来，其提取率高、提纯效果好。
文档编号C07H17/08GK102977168SQ201210548729
公开日2013年3月20日 申请日期2012年12月17日 优先权日2012年12月17日
发明者张海航, 王琳慧, 暴连群, 侯东伟, 刘现伟 申请人:石家庄市兴柏生物工程有限公司